2004年 · 第42卷第07期

目的 研究人端粒酶反转录酶催化酶亚单位(hTERT)基因对肝母细胞瘤细胞株体外生物学特性的影响。 方法 体外将已构建好的正、反义hTERT真核表达载体转染HepG2肝母细胞瘤细胞株，经G418及聚合酶链反应(PCR)筛选鉴定获得分别转入了正、反义hTERT载体的抗性克隆细胞HepG2-s和HepG2-as。运用逆转录-PCR(RT-PCR)技术及TRAP-银染法对各组细胞内源性hTERT mRNA的表达及端粒酶的活性进行了检测；同时还采用MTT法、双层软琼脂克隆形成试验、流式细胞术观察和分析了反义hTERT对肝母细胞瘤细胞体外生长增殖活力的影响及是否能诱导瘤细胞的凋亡。 结果 与空白对照组、正义hTERT组相比，反义hTERT能显著降低HepG2细胞内源性hTERT mRNA的表达(n＝10，t＝7.61，P<0.01)和下调端粒酶活性。当各组细胞传至第20代后，与HepG2、HepG2-s比较，HepG2-as细胞的生长速度和集落形成能力明显地减慢和降低(n＝10，t＝4.54，P<0.01和n＝10，t＝3.96，P<0.01)，同时伴有凋亡率的显著增加(n＝10，t＝9.24，P<0.01和n＝10，t＝8.37，P<0.01)。 结论 反义hTERT体外可抑制肝母细胞瘤细胞的生长增殖能力，在抗肿瘤基因治疗中具有特异的靶向性和潜在应用的广谱性。

目的 探讨强烈化疗、自体造血干细胞移植及维甲酸对晚期神经母细胞瘤的治疗效果 方法 研究Ⅳ期神经母细胞瘤患儿6例，年龄4~8岁，发病时间1个月~1年；原发部位腹部5例、胸部1例，均有骨髓转移，1例有多发性骨转移及球后病变。成立多学科参与的治疗小组，采用术前化疗、手术切除、强烈化疗、局部放疗、自体外周血造血干细胞移植及维甲酸生物治疗等。 结果 经综合治疗造血干细胞移植前6例均达到完全缓解，骨髓中肿瘤细胞消失，骨转移及球后病变被控制。化疗中骨髓抑制明显，血象恢复较慢，达3~4周。感染明显，三分之一疗程后发热，用头孢他定(商品名复达欣)、亚胺培南(商品名泰能)等感染被控制。造血干细胞移植过程顺利。术后随诊4~18个月疾病处于完全缓解状态，心、肝、肾器官功能正常，骨髓恢复正常或在恢复中。 结论 强烈化疗、自体外周血造血干细胞移植及维甲酸是治疗Ⅳ期神经母细胞瘤的有效方法。

目的 探讨更昔洛韦(GCV)和黄芪对巨细胞病毒(CMV)感染所致脐血粒-巨噬系祖细胞(CFU-GM)、红系早、晚期祖细胞(CFU-E、BFU-E)、多向造血祖细胞(CFU-Mix)及巨核系祖细胞(CFU-Mk)体外增殖抑制的影响。 方法 采用造血祖细胞培养技术，培养、观察、计数巨细胞病毒AD169株(CMV-AD169)感染CFU-GM、CFU-E、BFU-E、CFU-Mix和CFU-Mk后各祖细胞集落、峰期及维持时间；用聚合酶链反应(PCR)检测集落细胞内CMV-DNA；根据细胞毒性实验结果，将GCV和黄芪作用于CMV感染的CFU-GM、CFU-E、BFU-E、CFU-Mix及CFU-Mk祖细胞，再分别计数集落、峰期及维持时间。 结果 (1)CMV感染组CFU-GM、CFU-E、BFU-E、CFU-Mix及CFU-Mk集落数较对照组明显减少(P<0.01)；集落维持时间CMV感染组较对照组明显缩短；(2)用PCR在感染组集落细胞内检测到CMV-DNA的存在；(3)黄芪和(或)GCV作用于CMV感染的祖细胞后，与病毒组比较集落维持时间明显延长，集落数和集落增殖率明显提高(P<0.01),黄芪组集落增殖率分别为27.2%、45.2%、49.1%、39.0%、11.9%；GCV组分别为37.4%、74.2%、71.7%、67.4%、38.9% ; GCV＋黄芪组分别为53.6%、83.8%、88.7%、87.8%、61.5% 。 结论 CMV-AD169在体外能明显抑制CFU-GM、CFU-E、BFU-E、CFU-Mix及CFU-Mk集落细胞的增殖；在体外GCV和黄芪均有抗CMV的活性，能有效对抗CMV感染所致造血祖细胞增殖抑制的发生。

目的 通过12-0-十四酰基咐哌醇-13-乙酸酯(TPA)诱导K562细胞分化，探讨白血病细胞早期生长反应基因(EGR-1)的表达及与细胞分化的关系。 方法 应用体外细胞培养技术通过细胞形态、细胞化学染色观察细胞分化的情况；用流式细胞术、逆转录-聚合酶链反应等技术检测细胞周期、细胞表面分化抗原CD33、CD14及EGR-1mRNA的表达。 结果 TPA作用后K562细胞形态趋向成熟分化，非特异性酯酶(NSE)染色阳性，多可被氟化钠抑制；多数细胞被阻滞在G0＋G1期，S期细胞减少；随处理时间的延长细胞表面抗原CD33表达有所减少，CD14表达逐渐增多；EGR1mRNA仅在TPA诱导K562细胞分化过程中表达。 结论 TPA可诱导K562细胞向单核或巨噬细胞分化；EGR1-mRNA在TPA诱导K562细胞分化过程中才有表达，它可能参与K562细胞向单核或巨噬细胞分化的过程，并在诱导和维持细胞分化方面可能发挥重要作用。

目的 探讨急性特发性血小板减少性紫癜(AITP)患儿骨髓巨核细胞表面CXCR4受体表达改变及其配体——基质细胞来源性因子1α(SDF-1α)水平变化的意义。 方法 收集28例AITP患儿及12例正常对照儿童的骨髓；用Percoll密度梯度及免疫磁珠法分离骨髓巨核细胞；采用ABC免疫细胞化学染色法检测巨核细胞受体CXCR4的表达水平；ELISA法检测骨髓上清液SDF-1α的含量；用统计学分析软件包SPSS10.0对实验数据进行统计学分析。 结果 28例初治AITP患儿骨髓CXCR4与SDF-1α水平均明显低于正常对照组；28例中10例大剂量丙种球蛋白(简称丙球)敏感组患儿治疗后CXCR4与SDF-1α水平均明显高于治疗前；另外28例中6例对丙球不敏感的患儿治疗前巨核细胞表面CXCR4的表达明显低于丙球敏感组治疗前患儿。 结论 初治AITP患儿骨髓巨核细胞成熟障碍与血小板生成障碍可能与骨髓CXCR4/SDF-1α体系水平下降有关；而丙球治疗AITP的作用机理可能与增强骨髓CXCR4/SDF-1α体系表达有关；巨核细胞表面CXCR4表达水平可能在预测丙球的治疗效果方面有意义。

目的 了解α1肾上腺素受体(α1-adrenergic receptor，α1-AR)三种亚型α1A-AR，α1B-AR和α1D-AR mRNA在大鼠肺组织的表达位置及缺氧性肺动脉高压发病过程中大鼠肺组织α1-AR亚型mRNA相对表达量的改变情况。 方法 采用雄性Wistar大鼠55只，随机分为正常对照组(n＝10)，缺氧2周组(n＝13)、缺氧4周组(n＝10)，生理盐水组(n＝10)，酚妥拉明组(n＝12)，应用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法，检测各组大鼠肺组织α1-AR三种亚型mRNA的相对表达量。应用组织原位杂交技术检测α1-AR三种亚型在正常大鼠肺组织中的表达部位。 结果 (1)随缺氧时间的延长，肺动脉压力升高。(2)各实验组大鼠肺组织中α1-AR亚型mRNA的表达均以α1A-AR为主，α1B-AR次之，α1D-AR含量最少。(3)随缺氧时间的延长，α1A-AR和α1B-AR两种亚型mRNA相对表达量升高，缺氧2、4周组与对照组差异有显著性，缺氧2、4周组间差异亦有显著性。(4)随缺氧时间的延长，α1D-AR mRNA的相对表达量增多，但缺氧组与对照组相比差异无显著性。(5)酚妥拉明组与生理盐水组比较，α1A-AR，α1B-AR和α1D-AR三种亚型mRNA的相对表达量差异均无显著性。(6)正常大鼠外周肺组织中三种α1-AR亚型的mRNA主要表达于肺小动脉和小静脉平滑肌细胞及内皮细胞。 结论 实验提示，α1肾上腺素受体亚型α1A-AR，α1B-AR可能参与了大鼠缺氧性肺动脉高压的形成，对α1肾上腺素受体亚型的深入研究对肺动脉高压的干预治疗有一定的临床意义。

目的 评价先天性甲状腺功能低下症(CH)新生儿的左心收缩和舒张功能变化，并探讨其与血甲状腺激素水平的相关性。 方法 对35例确诊为CH的新生儿和30例正常新生儿进行超声心动图检查，分别用M型超声心动图测量左室射血分数(LVEF)、左室短轴缩短率(LVFS)；脉冲多普勒(PWD)测量二尖瓣口血流舒张早期峰值速度(Em)、二尖瓣口血流舒张晚期峰值速度(A m)；定量组织速度成像(QTVI)测量二尖瓣环收缩期运动峰值速度(sm)、二尖瓣环舒张早期运动峰值速度(em)、二尖瓣环舒张晚期运动峰值速度(am)；组织追踪显像(TTI)测量收缩期二尖瓣环下移距离(MAD)，并对血甲状腺激素水平和心功能指标行相关性分析。 结果 两组间收缩功能指标LVEF、LVFS、sm、MAD及舒张功能指标Am、Em/Am、、em/am、、Em、em差异均有显著性意义(P<0.05)，其中两组间MAD、sm、Em、em差异有极显著性意义(P<0.001)。心脏收缩功能指标LVEF、sm、MAD及舒张功能指标Em、Am、em、em/am与TT3、TT4呈正相关(P<0.05)，与TSH呈负相关(P<0.05)，MAD、sm、Em、em与血TT4、TSH水平的相关性最好(P<0.001)。 结论 先天性甲状腺功能低下症新生儿常伴有左心收缩和舒张功能下降，血甲状腺激素水平可直接影响左心功能，QTVI和TTI较传统超声心动图更能敏感地反映CH新生儿的左心功能变化。

目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF)及受体(flt-1和flk-1)的表达规律与早产儿视网膜病(ROP)视网膜血管变化的关系。 方法 86例新生未成熟SD大鼠随机分为高氧组和对照组，各组再随机分为1、3、7及14天4个组。高氧组吸入75%的氧(7天后置入空气中饲养)建立ROP大鼠模型，对照组则在空气中饲养。取视网膜组织制作标本，HE染色及CD34标记血管内皮细胞观察视网膜血管改变，采用免疫组织化学方法测定VEGF、flt-1及flk-1在视网膜的表达。 结果 ①随着天数增加对照组毛细血管密度指数(RCDI)呈逐渐上升趋势(F＝21.589，P<0.01)，7天时高氧组RCDI最低，停氧7天(即14天)时增加，(F＝67.885, P<0.01)；②7天时VEGF及flk-1在对照组视网膜中表达最强，与第1天和第14天比较，表达强度差异均有显著意义(P<0.05)；③高氧组7天时与对照组比较，VEGF及flk-1的表达明显减弱，统计学处理差异有显著意义(P<0.05)；而高氧组14天VEGF及flk-1的表达增强，与对照组比较，差异有显著意义(P<0.05)；④flt-1随着血管的改变，其表达部位有所变化，但高氧组和对照组总体表达强度变化不明显，P>0.05。 结论 当未成熟的视网膜处于高氧状态时，VEGF及flk-1表达减弱，视网膜血管减少；当视网膜处于相对低氧状态时，VEGF及flk-1表达增强，视网膜血管出现了明显的增生。VEGF及flk-1在视网膜血管发育和ROP的血管改变过程中起着重要媒介作用，flt-1对ROP血管改变的调控作用较flk-1弱。

目的 了解小儿局灶节段性肾小球硬化(FSGS)的临床与病理特点。 方法 38例临床诊断为原发性肾病综合征(NS)或蛋白尿，病理确诊为原发性FSGS的患儿，进行回顾性分析、总结。 结果 FSGS年龄(8.9±3.7)岁，男∶女比为1.92，临床诊断为孤立蛋白尿3例，蛋白尿伴血尿1例，NS 34例(单纯型16例，肾炎型18例)。临床伴血尿24例(63%)，高血压11例(29%)，肌酐清除率降低7例(18%)。病理分型为门型17例，周围型14例，Tip型7例。38例FSGS中，21例伴有系膜细胞增生。临床疗效：34例NS中，激素初治敏感12例，观察期末对激素治疗敏感者6例。4例非NS中，3例激素治疗无效，1例不详。应用CTX共18例次，44%缓解或部分缓解；应用甲泼尼龙加环磷酰胺冲击或口服环孢霉素A治疗12例，83%缓解或部分缓解。 结论 小儿FSGS学龄儿童多见，临床多表现为NS，血尿常见，高血压及肾功能不全相对少见，病理可表现为多种病变，甲泼尼龙加环磷酰胺冲击或口服环孢霉素A治疗方案相对好。

目的 探讨树突状细胞(DC)在小儿哮喘发病中的可能作用及机制。 方法 以Thomas法，采用粒-巨噬细胞集落刺激因子，白细胞介素4(IL-4)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)联合培养诱导哮喘患儿外周血DC细胞，进而检测DC协同刺激分子B7-1(CD80)、B7-2(CD86)的表达，DC诱导自体T淋巴细胞的增殖反应，以及其分泌的IL-10、IL-12等水平的变化。 结果 哮喘患儿外周血DC诱导自体T淋巴细胞增殖反应明显高于对照组(cpm值分别为11 560±126和6539±126，t＝121.696)，差异有非常显著意义(P<0.01)；其分泌IL-10水平[(3.6±0.3) μg/L]明显低于对照组[(6.9±0.8 )μg/L]，差异有非常显著意义(t＝20.608，P<0.01)；分泌IL-12水平[(29.7±8.4 )ng/L]也明显低于对照组[(45.2±9.8 )ng/L]，差异有非常显著意义(t＝5.979，P<0.01)；同时，哮喘患儿外周血人类白细胞抗原DR(19.9±1.3)和协同刺激分子B7-2(CD86)的表达水平(36.3±14.0)明显高于对照组(10.6±1.5和24.7±8.5)，差异有非常显著意义(t分别＝23.301和3.314，P均<0.01)。 结论 DC可能通过诱导TH1/TH2细胞分化在小儿哮喘发作时起重要作用。其可能的机制系通过DC分泌的细胞因子而起作用。

目的 阐明秋水仙碱对体外培养人肾脏成纤维细胞(FB)产生炎症因子转化生长因子-β1(TGF-β1)、白细胞介素-1β(IL-1β)以及细胞外基质的影响。 方法 体外培养人胚胎肾脏FB，经不同浓度秋水仙碱(5.0 μmol/L、10.0 μmol/L、20.0 μmol/L、40.0 μmol/L)预处理1 h后，加入含10.0 μg/ml脂多糖(LPS)的FB完全培养液继续培养18 h，以未经LPS刺激也无秋水仙碱预处理的FB细胞为对照。实验终点收集细胞和上清。分别利用RT-PCR方法观察秋水仙碱对FB产生TGF-β1和IL-1β mRNA表达的影响；ELISA法测定细胞上清TGF-β1、IL-1β以及胶原COLⅢ、COLⅣ蛋白含量。 结果 (1)单纯10.0 μg/ml LPS刺激后，FB产生TGF-β1和IL-1β mRNA分别较未经刺激的正常对照组上调3倍(RI值分别为66.1±1.6、22.3±2.0，q＝590.5, P＝0.002)和4.7倍(RI值分别为22.0±2.2、 4.7±0.8，q＝106.8, P＝0.009)。细胞上清TGF-β1和IL-1β蛋白含量均明显高于基础含量[TGF-β1分别为：(516±14)pg/ml和(420±5)pg/ml(q＝80.3, P＝0.012), IL-1β分别为：(3.4±0.3) pg/ml和(0.3±0.1)pg/ml(q＝297.9, P＝0.003)]。(2)秋水仙碱明显抑制FB之TGF-β1 mRNA以及蛋白表达，而对IL-1β mRNA以及蛋白表达水平均具有明显促进效应。(3) LPS不影响FB分泌COLⅢ和COLⅣ蛋白，不同浓度秋水仙碱干预后FB分泌COLⅢ和COLⅣ蛋白均明显减少并呈剂量依赖性。 结论 (1)秋水仙碱对人肾脏FB产生和分泌TGF-β1具有显著抑制效果，而对其产生和分泌IL-1β具有促进作用。(2)秋水仙碱能够明显抑制人肾脏FB分泌COLⅢ、COLⅣ等细胞外基质。