2010年 · 第48卷第11期

目的 从北京患急性呼吸道感染患儿的临床标本中分离人偏肺病毒(HMPV)，推动对该病毒的深入研究。 方法 2008年5月至2009年4月收集门诊和病房因急性呼吸道感染患儿的标本，经逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测核酸和直接免疫荧光法检测抗原筛选到HMPV阳性标本后接种传代的恒河猴肾细胞(LLC-MK2)，经37 ℃和33 ℃孵育后用直接免疫荧光法检测细胞内的HMPV抗原，得到阳性结果后经RT-PCR进一步确定基因型。 结果 从1092例病房和门诊收集的急性呼吸道患儿标本中用RT-PCR技术检测到81例为HMPV阳性，总阳性率为7.4%(81/1092)。取其中33例接种到LLC-MK2细胞进行HMPV分离，有5份标本的接种细胞中可检测到HMPV抗原，并经RT-PCR检测进一步证实，分离株与常见的呼吸道病毒抗体无交叉反应。24 h内新鲜接种的标本更易分离到病毒。分离到的毒株有4株为A基因型，1株为B基因型。 结论 从北京急性呼吸道感染患儿的标本中分离到两种基因型的HMPV，将进一步推动对该病毒的研究。

目的 研究年龄与发育进程问卷中文版(ASQ-C)不同界值对婴幼儿发育筛查的效度及准确性。 方法 收集了3~31个月婴幼儿269例。由父母/照看人完成婴幼儿月龄相应的ASQ-C，由专业人员用贝利婴儿发育量表第二版(BSID Ⅱ)测试婴幼儿。采用BSID Ⅱ平均值()-2标准差(s)为发育迟滞的界值、 -s为可疑发育迟滞和发育迟滞的界值，检验不同ASQ-C界值的效度及准确性。 结果 BSID Ⅱ为-2 s时，ASQ-C为-2 s的一致百分率为83.64%，敏感度及特异度都在80%以上、ROC下面积为0.86；ASQ-C为-1.5 s的一致百分率为71.75%，敏感度为100.00%、特异度为68.72%、ROC下面积为0.84；ASQ-C为-s的一致百分率为55.02%，敏感度为100.00%、特异度为50.21%、ROC下面积为0.75。BSID Ⅱ为-s时，ASQ-C为-2 s的一致百分率为85.87%，敏感度为68.57%，特异度为91.96%、ROC下面积为0.77；ASQ-C为-1.5 s的一致百分率为80.67%，敏感度及特异度都在70%以上、ROC下面积为0.82；ASQ-C为-s的一致百分率为68.40%，敏感度为94.29%、特异度为59.30%、ROC下面积为0.80；BSID Ⅱ为-(1~2) s时，ASQ-C为-2 s、-1.5 s及-s的识别率分别为56.82%、77.27%及90.91%。 结论 识别婴幼儿发育迟滞，ASQ-C的-2 s效度最好，准确性最高；识别婴幼儿可疑发育迟滞和发育迟滞，ASQ-C的-1.5 s敏感度及特异度都比较适宜，准确性最高；识别婴幼儿可疑发育迟滞，ASQ-C的-s识别率最高。

目的 了解早产儿ROP发病状况，探索早产儿ROP筛查的临床策略。 方法 按照"早产儿治疗痒和视网膜病变防治指南"中的ROP筛查标准用间接眼底镜对浙江两家医院新生儿监护室(NICU)住院的早产儿进行ROP筛查。 结果 2005年3月至2008年11月间共筛查1225例住院早产儿，发生ROP132例(10.8%)，高风险阈前ROP12例(0.98%)，阈值ROP4例(0.3%)；其中未吸氧的早产儿65例，发生低风险阈前ROP1例(1.5%)；两者差异有极显著性意义(χ2＝5.115，P<0.01)。有与无ROP组出生体重或胎龄的比较，差异均有极显著意义(分别F＝26.39，19.73，P<0.001)；与出生体重或胎龄呈负相关(r＝-0.145, -0.126, P<0.000)。不同出生体重或胎龄的早产儿发生ROP的比较，差异亦有极显著意义(χ2＝39.53，31.40，P<0.001)；体重≤1000 g的早产儿发生ROP是体重>1000 g的3倍多，胎龄≤28周的早产儿发生ROP是>28周的2.5倍。性别和多胎与ROP无明显相关性，差异无统计学意义(χ2＝0.279，3.449，P>0.05)。高风险阈前和阈值ROP与患儿反复呼吸暂停、多次窒息抢救及当地用氧抢救史相关(r＝0.54，0.57，0.57，P<0.05)。阈值ROP患儿均有氧依赖、反复呼吸暂停及窒息。 结论 ROP的发生与出生体重和胎龄负相关，体重≤1000 g或胎龄≤28周的有吸氧史的早产儿在筛查中要予以特别关注；通过筛查， ROP及时发现并在阈值期得到治疗，减少了盲童。

目的 探讨锁骨颅骨发育不全(CCD)二家系的临床和影像学特点，并检测其致病基因CBFA1的突变情况。 方法 首先对2个CCD家系先证者及其成员进行详细的病史采集和体格检查，并利用X线及CT检查全面了解患者的全身骨骼发育情况；然后收集受试者外周静脉血，提取基因组DNA，PCR扩增CBFA1基因的全部外显子及其剪接区，检测上述2个CCD家系CBFA1基因突变。 结果 (1)锁骨颅骨发育不全的临床表现有囟门闭合延迟或不闭合，颅面特殊，牙萌发过迟、多生牙以及肩窄等；X线及CT表现主要为：颅顶膨隆或下陷，囟门未闭，颅缝增宽，多发缝间骨，颅底相对较窄，蝶骨短、蝶窦小，锁骨发育不全，牙齿发育不良以及其他骨骼发育不全表现；(2)在家系1患病成员CBFA1基因第7外显子发现了一个新的错义突变即c.1259C>T[p.T420I]；在家系2患病成员CBFA1基因第2外显子发现了一个无义突变即c.577C>T[p.R193X]，该突变在中国CCD患者中首次检出。 结论 (1)CCD的临床及影像学特点为囟门闭合迟缓或不闭合，特殊的颅面特征，锁骨发育不良以及牙齿发育不良，等；(2)发现了一个新的CBFA1基因突变和一个在中国CCD患者中首次检出的CBFA1基因突变，为CCD致病基因的突变位点数据库增添了新的内容。

目的 将重组AdCTLA4Ig/Adα4β7诱导的耐受性树突细胞(DC)回输于卵清蛋白(OVA)致敏小鼠体内，观察其对食物过敏小鼠的治疗效果，为临床治疗儿童食物过敏提供新的思路。 方法 建立BALB/c小鼠食物过敏模型。BALB/c雌鼠24只，分为3组：肠道激发4 h后回输耐受性DC为治疗组，回输生理盐水为阴性对照组和OVA过敏小鼠为阳性对照组。ELISA测定各组血清中OVA特异性IgE水平；HE染色观察空肠形态；免疫组化法检测小鼠小肠组织中白介素10(IL-10)；免疫荧光法检测转化生长因子β(TGF-β)表达水平。 结果 ELISA法检测小鼠血清中OVA特异性IgE水平阳性对照组为(0.25±0.05)、阴性对照组为(0.14±0.04)、治疗组为(0.17±0.03)。治疗组较阴性对照组小鼠差异无统计学意义(P>0.05)，而较阳性对照组过敏小鼠明显降低，差异有统计学意义(P<0.05)。HE染色可见治疗组小肠绒毛中上皮细胞局灶性坏死、脱落，固有层炎症细胞浸润现象明显改善；IL-10表达增高。各组TGF-β表达无差异。 结论 AdCTLA4Ig/Adα4β7修饰的耐受性DC对卵清蛋白过敏小鼠具有治疗作用，可以减轻肠道炎症反应，促进免疫耐受形成。

目的 利用RNA干扰(RNAi)技术，以survivin为靶基因，设计针对survivin的siRNA，通过Hiperfect介导转染K562细胞，研究survivin基因在白血病发生发展中的作用，为以survivin为靶点的白血病治疗奠定基础。 方法 体外化学合成抑制survivin基因的siRNA片段，通过Hiperfect转染到K562细胞内，以无关siRNA、Hiperfect和未转染的细胞为对照，采用SYBR Green荧光染料Ⅰ的实时荧光定量RT-PCR方法检测siRNA的抑制效果，利用流式细胞仪AnnexinⅤ-FITC/PI法检验细胞凋亡率，用四氮唑盐(MTT)法观察转染后48 h，72 h对细胞增生的影响。 结果 siRNA转染K562细胞后， SYBR Green荧光染料Ⅰ的实时荧光定量RT-PCR结果显示survivin mRNA的表达量48 h、72 h分别比空白组下降了85.21%、94.35%，细胞生长受抑制，增殖能力减弱，其增殖抑制率于转染后48 h、72 h分别为45.02%和50.88%，细胞的凋亡率升高，分别为12.28%、21.55%。 结论 靶向survivin的siRNA能特异性下调目的基因的表达、并能在体外抑制白血病细胞株的生长。survivin将成为白血病基因治疗的一个新靶点。

目的 研究米诺环素(minocycline, MN)对未成熟新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage, HIBD)的作用。 方法 生后2 d(P 2) Sprague-Dawley (SD)大鼠192只，随机分成正常对照组、假手术组、HIBD组、HIBD＋MN组，每组48只。通过结扎左侧颈总动脉及8%氮氧混合气缺氧4 h，制作未成熟新生大鼠缺氧缺血性脑损伤模型。假手术组只分离左侧颈总动脉，正常组未予任何处理。HIBD＋MN组动物于HI后腹腔注射米诺环素45 mg/kg，此后2 d每24小时腹腔注射1次。HI后3 d，1、2、4周，行常规HE染色及病理评分，HI后3 d及2周，行抗O4、抗O1免疫组化及髓鞘脂碱性蛋白(MBP)免疫组化。HI后4周行神经行为学检测。 结果 HIBD组病理可见脑室周围白质损伤，HIBD＋MN组病变较轻；O4阳性细胞计数：HIBD＋MN组与正常组差异无统计学意义， P>0.05，而HIBD组较正常组，假手术组、HIBD＋MN组减少，差异有统计学意义(23.67±12.00 vs 52.89±10.68，39.28±11.78，41.63±8.41, P<0.05)；O1阳性细胞计数：正常组，假手术组、HIBD组、HIBD＋MN组组间差异无统计学意义，P＝0.093；MBP阳性纤维束计数：HIBD＋MN组与正常组、假手术组差别有统计学意义，P<0.05，而HIBD组较正常组、假手术组、HIBD＋MN组减少，差异有统计学意义(14.71±7.42 vs 36.67±6.50，35.50±3.24，26.33±5.92，P<0.05)；HIBD组HI后4周出现明显远期行为学异常，在斜坡试验、悬吊试验及Cylinder试验中，HIBD＋MN组与正常组、假手术组差别无统计学意义，P>0.05；HIBD组与正常组、假手术组及HIBD＋MN组差异有统计学意义，P<0.05；在旷场试验中，HIBD＋MN组与HIBD组差异无统计学意义，P＝0.772，两组与正常组，假手术组差异均有统计学意义，P<0.05。 结论 米诺环素对未成熟新生大鼠缺氧缺血性脑损伤有早期及远期保护作用。

目的 肾小球滤过率(GFR)是评价肾功能的最好指标，可用直接检测法和公式估算法获得GFR，后者在临床实践中尤为常用，如24 h内生肌酐清除率、Schwartz公式以及Filler公式，但少有对这些计算方法在我国儿童慢性肾脏病(CKD)患者的适用性的研究。 方法 选择2002年至2005年在我院住院、且符合入选标准和排除标准的CKD患儿为研究对象。将24 h内生肌酐清除率、Schwartz公式以及Filler公式估算的GFR(eGFR)与99mTc-DTPA肾动态显像(Gates法)测得的GFR(rGFR)进行比较。 结果 入选30例患儿(男18例、女12例)，平均年龄为9.4岁。CKD1期13例、CKD2期8例、CKD 3期8例、CKD4期1例。CKD病因包括结构异常、肾小球肾炎、血管性疾病、肾病综合征和泌尿系结核。Bland-Altman分析显示24 h内生肌酐清除率的eGFR与rGFR的一致性相对最好；由24 h肌酐清除率和Schwartz公式得出的eGFR的准确性较Filler公式好。CKD1期时，由24 h内生肌酐清除率和Schwartz公式得出的eGFR过高估计rGFR，而由Filler公式得出的eGFR过低估计rGFR；CKD2期时，由24 h内生肌酐清除率得出的eGFR过低估计rGFR，而由Schwartz公式和Filler公式得出的eGFR过高估计rGFR。 结论 3种公式获得的GFR的估计值与标准方法测得的GFR值之间存在显著差异，有待于今后开发更适用于我国儿童的肾功能估算方法。

目的 分析儿童2009甲型H1N1流感危重症的临床特征。 方法 对2009年10月1日至12月25日，我院儿科重症监护病房(PICU)14例2009甲型H1N1流感危重症患儿的临床特征及其预后进行分析。 结果 14例平均年龄(4.91±4.14)岁，男女各7例，发病到入院时间为(3.09±1.30) d，从入院到入PICU时间为(0.95±0.96) d，所有患儿均表现出明显的低氧血症，入ICU时平均PaO2/FiO2 (氧合指数)为(191.27±80.58) mm Hg(1 mm Hg＝0.133 kPa)，11例(78.6%)出现ARDS, 10例(71.4%)行机械通气，平均通气时间为(12.51±10.03) d，平均ICU住院时间为(12.58±10.65) d，平均rRT-PCR检测甲型H1N1核酸呈阳性时间(17.27±5.57) d；8例(57.1%)患儿有缺铁性贫血、脑瘫和先天性心脏病等基础疾病；CK(肌酸激酶)、CK-MB(肌酸激酶同工酶)、cTnI(肌钙蛋白)和LDH(乳酸脱氢酶)在这些患儿中都有不同程度的升高；入院时第3代死亡危险评分(PRISM Ⅲ)较高和危重病例评分(PCIS)较低的患儿机械通气时间和ICU住院时间较长(P<0.05)。 结论 苏州地区儿童2009甲型H1N1流感危重症病情进展快，短时间内即出现显著的低氧血症，甚至ARDS，并伴有不同程度的心肌损害，早期发现不利因素加以干预，是治疗成功的关键。