2010年 · 第48卷第12期

目的 初步探讨GNB3C825T基因多态性与小儿血管迷走性晕厥(vasovagal syncope，VVS)的相关性。 方法 晕厥组为不明原因晕厥患儿54例，其中男18例，女36例，平均11.8岁；对照组为同期健康体检儿童54名，其中男20名，女34名，平均11.2岁；入选病例均行直立倾斜试验(head-up tilt test，HUTT)，根据HUTT试验结果，分HUTT阳性组即VVS组和HUTT阴性组，各组病例均抽取外周血，应用聚合酶链反应(polymerase chain reaction，PCR)和基因测序的方法检测GNB3C825T基因多态性。 结果 晕厥组54例患儿，HUTT阳性者30例，其中血管抑制型15例(50.0%)、混合型9例(30.0%)和心脏抑制型6例(20.0%)，对照组皆为阴性； GNB3C825T等位基因T在对照组的频率低于晕厥组(18.5% vs 34.3%)，两组比较差异有统计学意义(χ2＝6.888，P<0.05); GNB3C825T等位基因T在VVS组的频率高于HUTT阴性组(38.3% vs 18.7%)，两组比较差异有统计学意义(χ2＝4.905，P<0.05); VVS组各临床分型间的等位基因频率的比较差异无统计学意义(χ2＝0.658，P>0.05)。 结论 GNB3C825T等位基因频率与VVS有相关性，可考虑作为小儿VVS的候选易感基因，提供临床早期筛查。

目的 发现我国动脉导管未闭(patent ductus arteriosus，PDA)患儿分子遗传方面缺陷，为PDA早期预防及遗传咨询提供支持。 方法 收集100例单纯性PDA患儿的临床资料和外周静脉血样本，以100名健康儿童为对照。应用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction，PCR)扩增TFAP-2B基因的全部外显子和外显子两侧部分内含子，并对扩增片段进行双向测序。应用BLAST程序将所测TFAP-2B基因序列与GeneBank中的已知序列进行对比以检测基因突变。采用逆转录聚合酶链式反应(reverse transcription polymerase chain reaction, RT-PCR)对1例家族史阳性患儿及其家属共16人TFAP-2B部分cDNA片段进行扩增，扩增产物直接进行双向序列测定。 结果 基因分析显示，在1例家族史阳性患儿及其患病亲属中，TFAP-2B第3内含子剪接位点＋5位发生突变[intron3(＋5)G>A]，患儿TFAP-2B基因部分cDNA巢式PCR扩增结果提示3号外显子完全缺失。此外，还发现了一个新的单核苷酸多态性，即转录起始点上游第34位的鸟嘌呤变为腺嘌呤，这个多态在PDA患者和健康对照组的频率分布差异有统计学意义(Z＝-2.513，P＝ 0.012)。 结论 TFAP-2B基因突变能够导致家族型PDA。

目的 构建叶酸缺乏斑马鱼模型，观察叶酸缺乏胚胎的心血管发育异常表型，探寻预防叶酸缺乏导致心脏发育异常的最佳补充叶酸时期，并初步探讨叶酸缺乏导致心脏发育异常的机制。 方法 利用二氢叶酸还原酶抑制剂甲氨蝶呤(MTX)以及使二氢叶酸还原酶基因(dhfr)表达阻抑两种方法构建叶酸缺乏斑马鱼模型。并进行四氢叶酸挽救实验。在叶酸缺乏组胚胎发育不同阶段给予叶酸。观察并统计胚胎的心脏发育异常百分比、心脏发育异常表型、心率、心室收缩指数(VSF)；利用荧光显微造影的方法探查心脏流出道发育状况。采用原位杂交以及Real-time PCR的方法检测各组胚胎vmhc、amhc、tbx5和nppa的表达情况。 结果 与对照组相比，(78.00±3.74)%的MTX处理组胚胎以及(68.00±6.32)%的dhfr表达阻抑组胚胎存在心脏发育异常，包括心脏形态异常、心率和VSF下降以及心脏流出道发育畸形。给予四氢叶酸可挽救叶酸缺乏组胚胎的异常表型。在受精后8~12 h给予叶酸后，MTX处理组(20.20%±3.77%)以及dhfr表达阻抑组(43.40%±4.51%)胚胎的心脏发育异常百分比降低最显著，心脏发育异常状况改善最明显。MTX处理组胚胎以及dhfr表达阻抑组胚胎的vmhc和amhc表达水平正常；tbx5及nppa的表达水平明显下降。给予外源性叶酸后，tbx5和nppa的表达在MTX处理组胚胎以及dhfr表达阻抑组胚胎中增强。 结论 本实验构建的叶酸缺乏模型中存在四氢叶酸水平下降。在胚胎发育早期中段给予补充适量的叶酸可以最有效预防叶酸缺乏导致的心脏发育异常。叶酸缺乏对心室以及心房肌球蛋白的分化无干扰作用。叶酸缺乏导致胚胎心脏发育异常与tbx5和nppa的表达水平下调有关。

目的 用串联质谱测定不同年龄儿童血中游离肉碱和各种酰基肉碱浓度，为诊断肉碱缺乏和各种有机酸和脂肪酸代谢病奠定基础。 方法 研究对象是围产期新生儿1376例，大于1周的新生儿49例，小于1岁的婴幼儿64例，1~15岁儿童401例。围产期新生儿是无选择的产院出生儿，包括了少量早产儿和低出生体重儿。其余主要是排除了发热、腹泻、肝病、严重疾病等影响脂肪代谢的门诊小手术的体检儿童。用非衍生法前处理滤纸血片，串联质谱测定其中游离肉碱和30种酰基肉碱浓度。 结果 游离肉碱(C0)、短链酰基肉碱(C2、C3、C4、C5)、中链酰基肉碱(C6、C8、C10)及其烯酰基、羟基、二酰基肉碱和总肉碱水平新生儿阶段较低，1~3个月时最高，之后降低，2~15岁在相同水平维持。长链酰基肉碱(C12、C14、C16、C18)及其烯酰基肉碱、羟基酰基肉碱及其总和新生儿阶段最高，逐渐降低，2~15岁在相同水平维持。游离肉碱浓度(23.387±7.702) μmol/L, (30.064±8.252)μmol/L, (25.021±6.630)μmol/L,总长链酰基肉碱浓度(4.998±1.557) μmol/L, (2.854±0.821) μmol/L, (2.459±0.553) μmol/L,肉碱酰基肉碱总浓度(43.497±12.632) μmol/L，(49.013±12.497) μmol/L, (39.656±9.257) μmol/L在新生儿组、小于1岁组和大于1岁组差异有统计学意义(P<0.01)。围产期新生儿男婴组肉碱(24.115±7.715) μmol/L和肉碱和酰基肉碱总和(43.65±5.252) μmol/L分别高于女婴(22.696±7.246) μmol/L和(41.90±5.038) μmol/L(P<0.05)。新生儿组游离肉碱占总肉碱比值(54.0%±7.1%)明显小于非新生儿组(62.1%±6.1%，P<0.05)，而长链(33.5%±6.0%)、中链(1.3%±0.3%)和短链脂酰基肉碱(11.6%±2.5%)与总肉碱比值分别高于非新生儿组(30.1%±4.9%; 0.9%±0.6%; 6.5%±2.3%, P<0.05)。 结论 1岁以内血中肉碱和酰基肉碱水平和构成变化较大，在评价肉碱营养状态和诊断有机酸和脂肪酸代谢病时要考虑年龄因素。围产期新生儿男婴肉碱和酰基肉碱略高于女婴。

目的 探讨小儿原发性局灶节段性肾小球硬化(FSGS)的临床表现、肾脏病理和治疗的疗效特点，以减少或延缓终末期肾病(ESRD)。 方法 对近10年病理确诊的原发性FSGS患儿212例进行了回顾性分析，依据2004年D′Agati原发FSGS组织病理学新分型标准，将患儿分为非特异型、门部型、细胞型、顶部型、塌陷型共5个亚型，比较不同病理分型与其临床表现、实验室指标及治疗的疗效、分析评估病理类型与预后的关系。 结果 原发FSGS临床诊断以肾病综合征最多178例(83.9%)[其中单纯型97例(45.8%)，肾炎型81例(38.2%)]；肾病水平蛋白尿14例(6.6%)；蛋白尿或伴镜下血尿20例(9.4%)。肾组织病理学分型以非特异型最多86例(40.6%)，门部型25例(11.8%)，细胞型58例(27.4%)，顶部型31例(14.6%)，塌陷型12例(5.6%)。其临床病理的相关性表明，顶部型多呈单纯型肾病，塌陷型多呈肾炎型肾病，此两种亚型之间差异有统计学意义(P<0.05)，细胞型多为小婴儿，临床类型介于两者之间。本组患儿对激素的反应较差，顶部型及非特异型激素初治可敏感，但后多为频复发、依赖或转为耐药的病例；塌陷型、门部型和细胞型多为原发耐药的病例；顶部型与塌陷型两者差异有统计学意义(P<0.05)。激素联合免疫抑制剂治疗，50%以上获得完全缓解。塌陷型2年肾存活率为67%，3年肾存活率为41%。 结论 原发FSGS病理分5种亚型，临床主要表现为不同程度的蛋白尿、部分伴有血尿和肾功能不全；顶部型治疗反应较好，塌陷型治疗反应及预后较差。

目的 乙型肝炎病毒相关性肾炎(HBV-GN)所引起的膜性肾病与原发膜性肾病有所区别，其肾组织中攻膜复合物(C5b-9)阳性率显著低于原发膜性肾病，说明在乙型肝炎病毒相关性膜性肾病(HBV-MN)中补体的活动受到某种抑制，产生这种差异的机制尚不清楚。本研究旨在探讨乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)是否影响足细胞补体调节蛋白CD59和Crry表达，从而抑制补体活化。 方法 培养的小鼠足细胞分为腺病毒载体乙型肝炎病毒X基因(Ad-HBx)转染组(Ad-X组)、空白足细胞组(B组)和腺病毒空载体转染组(Ad组)，P38、PI-3K、ERK1/2通路抑制剂(SB203580，LY294002，U0126)及二甲基亚砜(DMSO)干预组分别标记为SB组、LY组、U0126组和DMSO组。RT-PCR和流式细胞术检测Ad-HBx转染对CD59和Crry基因和蛋白的表达，MTT法检测其对补体激活的影响；观察P38、PI-3K、ERK1/2通路抑制剂及DMSO对足细胞CD59和Crry表达的影响。 结果 B组、Ad组和Ad-X组CD59表达率分别为(17.71±3.81)%、(18.29±3.36)%和(45.7±9.01)%；B组、Ad组和Ad-X组Crry蛋白表达率分别为(18.00±2.31)%、(21.78±2.01)%和(47.45±9.95)%，Ad-X组CD59和Crry蛋白表达率显著高于B组和Ad组(P值均<0.005)；Ad-X组CD59和Crry mRNA光密度明显强于B组和Ad组；SB组、LY组、U0126组和DMSO组CD59表达率分别为(17.35±1.24)%，(46.19±9.77)%，(43.03±6.83)%和(40.04±6.39)%；Crry蛋白表达率分别为(18.14±3.56)%，(31.95±1.68)%，(31.95±1.69)%和(37.14±3.92)%，与Ad-X组比较，SB组CD59和Crry蛋白表达率明显降低(P值均<0.05), MTT法提示在各个血清稀释点上，Ad-X组细胞裂解抑制率均明显高于B组和Ad组(P值均<0.05)。 结论 HBx可能通过活化P38MAPK通路上调小鼠足细胞CD59和Crry蛋白和基因的表达，抑制补体介导的足细胞裂解，这可能导致HBV在足细胞潜伏感染，不易被清除，从而在HBV-GN发生中发挥作用。

目的 对临床诊断的Angelman综合征(AS)患儿进行遗传学诊断和临床特点分析。 方法 利用MS-PCR、STR家系连锁分析和染色体核型分析，对17例临床诊断AS的患儿(其中男7例，女10例，年龄8个月~5岁)进行遗传学诊断。依据国际诊断标准，分析15q11-13缺失型AS患儿的相关表型特点。 结果 (1)17例确诊为15q11-13缺失型AS。(2)患儿出生情况无明显异常。所有的患儿均有不同程度的运动和语言发育迟缓，以语言发育落后更为显著，并伴有特征性的快乐行为。(3)AS的经常性表现：癫癎(15例)，异常脑电图(14例)，发生率约80%~90%，只有35%的患儿(6例)存在小头畸形。(4)与AS较为关联的表现：平枕/枕骨凹陷(12例)，下颌突出(10例)，宽嘴和齿缝稀疏(13例)，频繁流口水(8例)，过多的嘴部动作(9例)，肤色及发色浅淡(13例)，运动时屈曲手臂(9例)，睡眠障碍(9例)等，发生率47%~77%。>2岁年龄组患儿的AS相关性表现的发生率均高于≤2岁年龄组患儿。 结论 联合应用MS-PCR、STR连锁分析和染色体核型分析，确诊17例患儿为15q11-13缺失型AS。我国15q11-13缺失型AS患儿的临床表现与国际诊断标准基本一致，惟小头畸形比率低于白种人，可能存在人种表型差异。随着年龄的增长AS相关性表现更为明显。

目的 分析探讨单纯性生长激素缺乏ⅠA型(IGHDⅠA)患者应用重组人生长激素(rhGH)长程治疗的疗效及副作用，追踪患者发育、妊娠及子女情况，评估患者成人期生活质量。 方法 总结2例IGHDⅠA同胞姐妹(姐姐为例1，妹妹为例2)经rhGH长程治疗的病例资料，随访其身高、体重、血压、发育及婚育状况；检测空腹血脂、糖、胰岛素、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)及胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)；调查其学历职业、目前生活状况等。 结果 例1、例2接受长程rhGH治疗年限分别为6年3个月、7年4个月，身高由初诊的-7.8 SDS、-8.8 SDS最终分别追至-2.6 SDS及-1.3 SDS，无明显不良反应发生，其性发育正常且婚育状况较满意。目前体内生长因子水平均仍低下，例1的IGF-1及IGFBP-3分别为46.6 μg/L、2460 μg/L；例2分别为52.4 μg/L、2430 μg/L。暂无血脂异常、糖尿病及肥胖出现。 结论 长期rhGH治疗明显改善IGHDⅠA型患者终身高；两姐妹均可正常生育；尚无代谢综合征发生。

目的 探讨2009甲型H1N1流感(以下简称"甲流")患儿免疫功能及可能的免疫发病机制。 方法 深圳市儿童医院2009年11月1日-2010年1月10日甲流住院患儿60例，轻症35例(轻症肺炎)，重症25例(重症肺炎或甲流相关性脑病，死亡3例)，同年龄正常对照组20例。采用real-time PCR、流式细胞术及ELISA检测外周血单个核细胞胞浆模式识别受体(PRRs)维甲酸诱导基因I/黑色素瘤分化相关基因5(RIG/MDA5)、胞膜PRRs Toll样受体(TLRs)分子及其信号途径传导分子、细胞因子/趋化因子及负性调节因子变化；T、B及NK细胞凋亡及凋亡相关基因TRAIL和CASPASE-3表达。 结果 (1)甲流患儿RIG/MDA5表达、TLR2、TLR4表达明显高于正常对照组[TLR2(9.69±3.15)×10-2 vs. (3.96±0.83)×10-2，t＝10.16，P<0.05；TLR4 (10.23±2.85)×10-2 vs. (7.46±2.18)×10-2，t＝3.76，P<0.05]，以重症甲流患儿增高为著， RIG/MDA5表达增高最为明显；TLRs途径信号传导分子MyD88、TRAM等表达明显高于轻症甲流患儿。(2)甲流患儿CD3＋[(1.22±0.38)×109/L vs.(3.59±1.10)×109/L，t＝9.21，P<0.05]、CD4＋、CD8＋ T细胞及NK细胞绝对计数明显低于正常对照组，B细胞无明显改变。(3)轻症甲流患儿TNF-α、IL-6、IL-1β等炎症细胞因子血浓度或基因高于正常对照组，重症患儿炎症细胞因子TNF-α[(6.42±1.76)×10-2 vs.(9.05±2.51)×10-2，t＝4.55，P<0.05]明显低于正常对照组。IFN-α/β表达持续高于正常对照组，尤以重症甲流患儿为著；IFN-I诱导基因IP-10[(20.52±6.09)×10-2 vs.(1.18±0.34)×10-2，t＝18.74，P<0.05]、RANTES或iNOS轻症患儿表达高于正常对照组，重症患儿表达则趋于减少。(4)甲流患儿CD3＋[(32.90±7.66)% vs.(20.21±6.58)%，t＝6.21，P<0.05]、CD4＋、CD8＋ T细胞、NK细胞凋亡高于正常对照组，以重症患儿更为显著。凋亡相关基因TRAIL和CASPASE-3表达明显高于正常对照组。(5)重症患儿PRRs负性调节因子SOCS1、SOCS3、IRAK-M、TRAF4及FLN29表达明显高于轻症患儿，抗炎细胞因子IL-10及IL-10/TNFα比值随病情加重增高。 结论 甲流患儿机体免疫功能紊乱，轻症患儿处于全身免疫激活状态，重症患儿同时存在免疫激活/免疫抑制反应。