2008年 · 第46卷第08期

目的 探讨中国汉族人群中注意缺陷多动障碍(ADHD)与突触体联系蛋白25(SNAP-25)基因微卫星(STR)和单核苷酸多态性(SNP)的关系。 方法 本组100例，均为学龄期的ADHD患儿，通过唾液取样获取他们及其父母的DNA样本。同时选取符合年龄段的正常儿童97名作为对照组，DNA样本从血液中提取。检测100个ADHD核心家系和97个对照的SNAP-25基因STR，同时对rs363006和rs362549两段SNP进行基因分型，并进行病例对照的关联分析和传递不平衡检验(TDT)。 结果 STR病例对照分析结果显示ADHD组和对照组(TAAA)n的等位基因频率和基因型频率差异无统计学意义(P均>0.05)；rs363006和rs362549两段SNP的家系TDT研究表明，SNAP-25基因和ADHD之间不存在关联(P均>0.05)。按照亚型分组后，rs362549在注意缺陷型中有优先传递等位基因A的趋势(χ2＝8.00，P<0.01)，而在混合型中有优先传递等位基因G的趋势(χ2＝4.122，P<0.05)。 结论 SNAP-25基因STR和上述两段SNP和ADHD之间也许不存在关联，但rs362549这段SNP的多态性和ADHD亚型可能存在关联，尚需扩大样本进一步验证才能得出确切结论。

目的 总结眼球阵挛-肌阵挛综合征(OMS)的临床特征及治疗经验，以提高诊疗水平。 方法 对北京大学第一医院儿科2006至2007年收治的6例OMS患儿的临床、实验室资料及治疗情况进行分析。 结果 6例中男1例，女5例，发病年龄12~26个月(平均21个月)，其中4例病前有前驱感染史。就诊时主要症状为眼球阵挛、肌阵挛、共济失调、睡眠障碍、行为改变(6例)。1例尿检3-甲氧基-4-羟基-苦杏仁酸(VMA)阳性，4例患儿腹部B超提示肝脏轻度增大，3例脑电图背景活动减慢，所有患儿均未见样放电。头颅MRI检查1例示内侧纵束、顶盖脊髓束T2高信号，1例腹部CT示L3-4蛛网膜囊肿，余患儿胸腹部CT未见异常。6例均给予促肾上腺皮质激素(ACTH)治疗，急性期有效。2例在随访过程中复发。 结论 OMS是一种罕见的神经系统疾病，临床表现为眼球阵挛，并伴肌阵挛、共济失调、睡眠障碍和行为改变，容易复发且神经系统后遗症明显。ACTH治疗有效。

目的 探讨7种常用的抗癫药对周围神经的损伤作用及其可能机理。 方法 7日龄婴幼期和成年SD大鼠各128只，各分为8组(n＝16)：苯妥英[PHT, 62.5 mg/(kg·d)] 、苯巴比妥[PB，30.0 mg/(kg·d)]、丙戊酸钠[VPA，312.5 mg/(kg·d)]、氯硝西泮[CZP，1.25 mg/(kg·d)]、卡马西平[CBZ，187.5 mg/(kg·d)]、托吡酯[TPM ，40 mg/(kg·d)]和奥卡西平[OXC，312.5 mg/(kg·d)]用药组，及空白对照组。用药后4周每组随机取8只采集坐骨神经和血清标本，血清用作氧化-抗氧化指标检测，包括总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)。坐骨神经用于组织病理(包括原纤维分离、半薄切片和电镜观察)和氧化-抗氧化指标检测。免疫组化检测脊髓前角神经元Bcl-2和Bax蛋白表达，TUNEL检测神经元凋亡。余下一半动物停药后4周处死取坐骨神经检测上述组织病理指标。 结果 ①除TPM外，其余6种抗癫药(AEDs)均同时引起成年和婴幼大鼠程度不同的显著神经原纤维病变(7.2%~20.2%)。尤以PHT最明显，其后依次是PB(成年鼠)或VPA(婴幼鼠)、CBZ、CZP和OXC等。病变性质以髓鞘脱失为主。② 2年龄组间原纤维病变率没有明显差异，停药后原纤维病变恢复都很慢，但婴幼鼠较成年鼠快(P<0.01)。③婴幼鼠PB、CZP和VPA给药组脊髓前角Bax蛋白表达和Bax/Bcl-2比值较同龄对照组高(P<0.05)。仅在PB、CZP和VPA婴幼鼠组见脊髓前角TUNEL阳性神经元显著增多。④ PHT、CZP、CBZ和OXC均可导致成年和婴幼大鼠血清与坐骨神经T-AOC不同程度降低。PHT、PB、CZP、CBZ和OXC等5种AEDs同时引起成年与婴幼大鼠血清和坐骨神经SOD活力一致性下降。PHT、PB、VPA、CZP、CBZ和OXC同时导致成年和婴幼鼠血清GSH-PX活性显著下降，PHT、PB、CBZ和OXC同时引起2个年龄组坐骨神经GSH-PX活性降低。 结论 ① PHT、PB、CBZ、VPA、CZP、OXC都存在诱发周围神经损伤的不同程度可能性，主要表现为髓鞘脱失。除PHT外，其他AEDs的原纤维病变率均≤20%，因而不易出现明显瘫痪症状；②婴幼鼠具有与成年鼠相同发生率和几乎一致的敏感性，停药后恢复均较缓慢，但停药后4周，婴幼鼠较成年鼠有更大程度恢复；③大鼠所发生的AEDs周围神经损伤与其脊髓神经元受损并不存在因果关系；④ PHT、PB、VPA、CZP、CBZ和OXC所致周围神经损伤与这些药物破坏体内、尤其神经组织内超氧化-抗氧化平衡关系密切。

目的 了解合闭眼状态对儿童癫样放电的诱导作用及合闭眼敏感性与光敏感性的关系。 方法 录像EEG监测时，对癫患儿进行反复睁闭眼试验及不同眼状态下间断闪光刺激(intermittent photic stimulation，IPS)。将眼状态分为睁眼(eyes opened)、合眼(eyes closure，睁眼后合上眼的最初3 s内)及闭眼(eyes closed，保持闭眼3 s以上直至睁眼之前)。合眼或闭眼时诱发癫样放电现象称为合眼敏感性或闭眼敏感性。从135例中筛选出具有合眼敏感性或闭眼敏感性的13例患儿，对其临床、合闭眼敏感性及其与光敏感性的关系进行分析。 结果 13例中女8例，男5例，平均就诊年龄为11岁，平均起病年龄为9岁。相关的癫及癫综合征诊断包括反射性癫中的特发性光敏感性枕叶癫2例；早发型良性儿童枕叶癫3例；晚发型儿童枕叶癫1例；少年肌阵挛癫2例；眼睑肌阵挛伴失神1例；仅有全身强直-阵挛发作的反射性癫1例；癫伴觉醒期大发作1例；症状性枕叶癫及症状性全身性癫各1例。13例中合眼敏感性10例，8例伴光敏感性，其中6例合眼状态下IPS阳性，6例中4例闭眼状态下IPS亦阳性、2例阴性；闭眼敏感性3例，2例伴光敏感性，其中1例合眼和闭眼状态下IPS均阳性。合眼和闭眼诱发的EEG放电图形和部位未见特征性区别，均与癫发作类型相关性更强。不同眼状态下光敏感的阳性检出率及阳性频率范围有一定的差异。4例给予丙戊酸钠治疗后复查EEG发现合闭眼敏感性及光敏感性均有改善，且光敏感性可先于合闭眼敏感性好转。 结论 合闭眼敏感性较常见于女性患儿，可涉及多种癫综合征。合闭眼敏感性与光敏感性可共存亦可独立存在。录像EEG监测时对癫儿童常规进行合闭眼状态测试及不同眼状态下IPS测试，有助于发现癫样放电，并协助临床诊断及治疗。

目的 探讨肾上腺髓质素(ADM)及肾上腺升压素(ADT)在左向右分流肺血管重构中的变化及作用途径。 方法 健康雄性Wistar大鼠21只，分为实验组(n＝9)和对照组(n＝12)，实验组大鼠右侧颈总动脉与颈外静脉用套管连接，对照组行假手术。术后12周，测取大鼠肺动脉平均压(mPAP)，右心室/(室间隔＋左心室)[RV/(LV＋SP)]重量比，中等肺动脉壁厚度所占管径百分比(MT%)。免疫组化和Western blotting测定ADM、ADT在大鼠肺组织的分布及相对含量。RT-PCR检测大鼠肺组织ADM、ADT、应力活化蛋白激酶(SAPK)、细胞外信号调节激酶(ERK1)基因表达。 结果 ①实验组大鼠术后mPAP、RV/(LV＋SP)和MT%比例明显高于对照组(P均<0.001)。②累积光密度(A)结果显示实验组大鼠肺内ADM含量高于对照组而ADT含量低于对照组(P均<0.001)。③实验组大鼠肺组织ADM、SAPK、ERK1mRNA表达高于对照组(P<0.01和P<0.001)，ADTmRNA表达低于对照组(P<0.001)。 结论 ①左向右分流肺血管重构过程中存在来自同一前体的ADM与ADT之间的分子内调控现象；②左向右分流肺血管重构中激活了丝裂原活化蛋白激酶信号途径，ADM可能通过抑制丝裂原活化蛋白激酶信号途径来延缓肺动脉高压的形成和发展。

目的 分析中国南方汉族人家族性激素耐药型肾病综合征(SRNS)家系NPHS2基因突变及其特点。 方法 研究对象为A、B、C3个南方汉族人SRNS家系先证者及其姐和父母，50例尿检正常的南方汉族成年人作为对照人群。取所有研究对象外周静脉血3 ml，提取基因组DNA，PCR扩增NPHS2全部8个外显子及其周围的部分内含子和启动子全长序列，对PCR产物直接进行DNA序列测定。 结果 对3个南方汉族人SRNS家系先证者NPHS2全部8个外显子及其周围的部分内含子进行突变分析，未发现NPHS2突变，仅在外显子8上检测到1个NPHS2基因多态性(954T>C)。在3个家系的先证者及其姐和父母的NPHS2启动子上检测到6个变异：-1715A>G、-1709G>A、-1000A>T、-670C>T、-116C>T和-51G>T。其中5个变异(-1709G>A、-1000A>T、-670C>T、-116C>T和-51G>T)在100条正常染色体中也有检出，它们在SRNS患者中的等位基因频率分别与在对照人群中的等位基因频率比较差异均无统计学意义(P>0.05)；另1个变异(-1715A>G)在家系C的先证者及其母亲(尿检正常)中检出，为杂合变异，而在100条正常染色体中未发现。-1000A>T为新发现的NPHS2基因多态性，-1715A>G为新发现的NPHS2变异。 结论 NPHS2基因突变不是本研究3个南方汉族人家族性SRNS家系的主要致病原因。

目的 提高对腺苷脱氨酶(ADA)缺陷重症联合免疫缺陷(SCID)及疫苗接种后播散性水痘感染的认识。 方法 结合1例ADA缺陷SCID伴疫苗接种后播散性水痘感染的临床资料和文献复习，探讨ADA缺陷SCID背景知识、临床表现、诊断和治疗。 结果 患儿存在生长停滞情况，以发热、皮疹3周余入院，出皮疹前两周曾接种水痘疫苗，水痘直接免疫荧光试验阳性，血液常规检查淋巴细胞比例和绝对值(105×106/L)明显降低，IgG(1520 mg/L)、IgM(250 mg/L)和IgA(102 mg/L)显著降低，淋巴细胞亚群CD3、CD4、CD8和CD19的相对比例和绝对值均显著降低，CD56比例升高，但其绝对值显著降低。红细胞ADA值明显降低，脱氧核苷酸腺苷明显升高。 结论 ADA缺陷SCID存在特征性改变，目前的治疗方法包括造血干细胞移植、酶替代治疗和基因治疗。对生长发育停滞儿童需重视免疫功能评估，对免疫缺陷病患儿需加强疫苗接种管理。

目的 分析一例白介素12受体β1(IL-12Rβ1)缺陷基因突变合并卡介苗感染患儿的临床特征、基因分析和蛋白表达。 方法 根据典型的临床表现及免疫学筛查实验排除常见原发性免疫缺陷病(PID)，用单克隆抗体流式细胞术检测患者和母亲EB病毒(EBV)永生化的B细胞上IL-12Rβ1蛋白表达，同时，用正向、反向引物分别对患儿和其父、母的IL-12Rβ1基因进行PCR扩增并测序，患儿弟弟产前、产后均已作IL-12Rβ1基因分析。 结果 患儿有严重、播散性卡介苗接种病，其永生化的B细胞上IL-12Rβ1蛋白表达呈阴性，母亲有部分蛋白表达。患儿为IL-12Rβ1基因纯合单核苷酸替换突变，其第9外显子853位核苷酸(C→T)发生无义突变，使第285位谷氨酸突变为终止密码(Q285X)，其父、母亲均为该异常基因的携带者，患儿弟弟产前产后IL-12Rβ1基因正常。 结论 鉴定出一例新型IL-12Rβ1基因突变(Q285X)患者，发现此基因突变患者的IL-12Rβ1蛋白缺乏，确定此基因突变是引起患者发生播散性卡介苗接种病的根本原因；明确家庭成员携带情况，为产前诊断提供依据。

目的 在真核细胞中表达Zhejiang Children′s Hospital (ZCH)-7-2F9(简称2F9)单链抗体(scFv2F9)以获得高活性的目的蛋白，为2F9其他类型的基因工程抗体及其免疫毒素的研究奠定基础。 方法 根据pSectag2A多克隆位点、(G4S)3及scFv2F9基因序列，设计含有SfiI、EcoRI酶切位点、6×His以及终止密码TGA的引物，采用高保真的Taq酶，通过重叠延伸拼接法(splicing by overlap extension，SOE)扩增克隆到scFv2F9基因，将扩增到的目的基因片段克隆到pGEM T-easy载体，测序核实后再克隆到pSectag2A真核分泌型表达载体中。阳性重组质粒pSectag2A/scFv2F9转染中华仓鼠卵巢(CHO)细胞进行目的蛋白的瞬时表达，将培养上清浓缩后，流式细胞术观察其对亲本单抗的阻滞效果。 结果 真核分泌型表达载体pSectag2A/scFv2F9在CHO细胞中获得成功表达，其相对分子质量为31 000。亲本直标单抗2F9-FITC被真核细胞表达的scFv2F9阻滞后其阳性细胞百分数、平均荧光强度和最高峰值分别下降了90.02%、63.30%和63.38%。 结论 克隆到的2F9VH和2F9VL基因及构建的真核分泌型表达载体pSectag2A/scFv2F9是正确的，scFv2F9在CHO细胞中获得成功的表达，且有较高的识别和结合人CD14抗原的功能。

目的 在真核细胞中表达Zhejiang Children′s Hospital (ZCH)-7-2F9(简称2F9)单链抗体(scFv2F9)以获得高活性的目的蛋白，为2F9其他类型的基因工程抗体及其免疫毒素的研究奠定基础。 方法 根据pSectag2A多克隆位点、(G4S)3及scFv2F9基因序列，设计含有SfiI、EcoRI酶切位点、6×His以及终止密码TGA的引物，采用高保真的Taq酶，通过重叠延伸拼接法(splicing by overlap extension，SOE)扩增克隆到scFv2F9基因，将扩增到的目的基因片段克隆到pGEM T-easy载体，测序核实后再克隆到pSectag2A真核分泌型表达载体中。阳性重组质粒pSectag2A/scFv2F9转染中华仓鼠卵巢(CHO)细胞进行目的蛋白的瞬时表达，将培养上清浓缩后，流式细胞术观察其对亲本单抗的阻滞效果。 结果 真核分泌型表达载体pSectag2A/scFv2F9在CHO细胞中获得成功表达，其相对分子质量为31 000。亲本直标单抗2F9-FITC被真核细胞表达的scFv2F9阻滞后其阳性细胞百分数、平均荧光强度和最高峰值分别下降了90.02%、63.30%和63.38%。 结论 克隆到的2F9VH和2F9VL基因及构建的真核分泌型表达载体pSectag2A/scFv2F9是正确的，scFv2F9在CHO细胞中获得成功的表达，且有较高的识别和结合人CD14抗原的功能。

目的 通过检测健康新生儿脐带血、正常儿童以及成人血清甘露聚糖结合凝集素(MBL)水平，了解汉族血清MBL的分布范围。 方法 采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测重庆、武汉、乌鲁木齐268例汉族足月顺产健康新生儿脐带血、重庆地区470例0~6岁正常儿童血清MBL水平，并以87例成人作为对照。 结果 儿童(28 d~6岁)血清MBL值呈非正态分布，且无年龄、性别差异。根据不同年龄组分析，新生儿血清(884~1825 μg/L，中位数1597 μg/L)、新生儿脐带血的MBL水平最低(0~4604 μg/L，中位数1462 μg/L)，与其他年龄组(儿童组0~7860 μg/L，中位数2536 μg/L；成人组98~6495 μg/L，中位数2920 μg/L)比较差异有统计学意义(P<0.01)。而28 d~组(214~4195 μg/L，中位数2299 μg/L)、6个月~组(5~4637 μg/L，中位数2622 μg/L)及2~6岁组(198~7860 μg/L，中位数2585 μg/L)组间MBL水平比较差异无统计学意义(P>0.1)。分析28 d~6岁儿童血清MBL水平数据得出中位数为2563 μg/L，P2.5~P97.5为171~5079 μg/L。 结论 28 d~6岁儿童血清MBL水平呈非正态分布，无性别、年龄差别；28 d~6岁的正常儿童血清MBL水平95%的可信区间为171~5079 μg/L。

目的 应用实时荧光聚合酶链反应(PCR)方法检测流感病毒，并对2006年广州地区儿童感染流感病毒进行流行病学分析。 方法 以流感病毒的NP基因序列为参考，综合分析GenBank上的NP基因序列，使用引物和探针设计软件Primer Express设计A/B型流感病毒及A亚型流感病毒各1对特异性引物和1条TaqMan荧光探针，用于分别检测A/B型流感病毒及A亚型流感病毒，建立实时荧光PCR方法，进行灵敏度和特异性检测。采用实时荧光PCR方法，对来自2006年门诊或住院呼吸道感染患儿的12 301份咽拭子或鼻腔抽洗液样本进行检测，并与病毒分离方法进行对照。 结果 实时荧光PCR方法共检出1687份阳性样本，总阳性率为13.71%，其中A型773份(45.8%)，全部为H1N1型；B型914份(54.2%)。1-4月份检出流感病毒阳性525例，其中B型流感病毒455例(86.7%)，A型(H1N1)流感病毒70例(13.3%)；5-8月份检出流感病毒阳性1118例，其中B型流感病毒419例(37.5%)，A型(H1N1)流感病毒699例(62.5%)。病毒培养分离阳性为1380份，均为实时荧光PCR方法阳性，占实时荧光PCR方法阳性者的81.80%。 结论 实时荧光PCR方法应用于流感病毒的检测具有简便快捷、特异、敏感的特点，2006年广州地区儿童流行性感冒病毒的流行1-4月份以B型流感病毒为主，5-8月份以H1N1亚型流感病毒为主。

目的 系统性研究儿童原发性纤毛运动障碍(primary ciliary dyskinesia, PCD)的临床特点，探讨PCD的诊断和鉴别诊断流程。 方法 对PCD患儿的临床资料进行分析。 结果 确诊PCD患儿26例，男11例，女15例。来自25个家族，1个家族诊断2例Kartagener综合征同胞姐弟。起病年龄为生后第2天~15岁，确诊时病程中位数为3.5年。所有患儿有咳嗽症状，24例有咯痰，7例有体格发育落后。23例接受支气管黏膜和(或)鼻黏膜的电镜检查，可见纤毛动力臂缺失6例，动力臂数目减少、微管排列紊乱、外周微管和(或)中央微管异常各4例，1例纤毛结构正常。经胸部CT证实，支气管扩张症8例，肺实变6例。20例存在鼻窦炎。15份痰或支气管肺泡灌洗液培养阳性标本中，铜绿假单胞菌8份，肺炎链球菌5份，白色念珠菌2份。其中1例培养出2种微生物。肺功能检查的16例中9例为阻塞性通气功能障碍。4例听力检测中3例异常，食管24 h pH值测定的5例患儿中3例有胃食管反流。 结论 PCD起病年龄从新生儿期到青春期，呈慢性病程。主要临床表现为咳嗽、咯痰，可出现体格发育落后。PCD患儿中最多见的纤毛结构异常是动力臂缺失。部分患儿纤毛结构正常。影像学异常包括肺实变、支气管扩张症和鼻窦炎。常见的细菌病原为铜绿假单胞菌、肺炎链球菌，并可能存在混合感染。PCD患儿肺功能异常主要为阻塞性通气功能障碍，听力损害、胃食管反流出现率较高。