2008年 · 第46卷第06期

目的 建立以人工合成荧光底物测定乙酰肝素N-硫酸酯酶(SGSH), α-N-乙酰葡萄糖苷酶(NAGLU)活性的方法，应用这两种方法对黏多糖贮积症Ⅲ型中的A、B亚型(MPS ⅢA和ⅢB)病例进行鉴别诊断，并对MPSⅢB高危妊娠的孕妇进行了产前诊断，同时从分子遗传学方面对MPSⅢA患儿进行了SGSH基因分析。 方法 采用人工合成的荧光底物(4-甲基伞形酮-α -D-N-硫酸葡萄糖苷4-methylumbelliferyl-α-D-N-sulphoglucosaminide.Na，4-甲基伞形酮-N-乙酰-α-葡萄糖苷4-methylumbelliferyl-α-N-acetylglucosaminide)测定疑似患儿白细胞和血浆中SGSH及NAGLU活性，在收集的12例患儿中，女4例，男8例，年龄3~10岁。来自10个无相关的家庭。用MPSⅢA的患儿外周血白细胞DNA进行SGSH基因的外显子PCR扩增，并通过的序列测定确定突变位置。用绒毛或经培养的羊水细胞为检材，对MPSⅢB高危妊娠的孕妇进行产前诊断。 结果 获得中国正常人白细胞中SGSH活性正常值4.4~8.1 nmol/(17 h·mg蛋白)，各种组织中NAGLU活性正常值：血浆中为33.3~62.4 nmol/(4 h·ml)，绒毛组织为44.9~91.7 nmol/(17 h·mg蛋白)，经培养的羊水细胞为53.2~82.2 nmol/(17 h·mg蛋白)；在12例疑似患儿中确诊了7例MPS ⅢA(其中两例为同胞)，5例MPS ⅢB患者(其中2例为同胞), SGSH基因分析发现6种突变类型，已知突变5种(G191R，D235N，R377C，E447K和R233X)，插入突变1种(D219Wfs264X)，此插入突变为新生突变。3例MPSⅢB产前诊断中，2例胎儿正常，1例胎儿受累。 结论 应用荧光法测定SGSH和NAGLU酶活性是敏感、可靠、快速的方法，可用于MPSⅢA和ⅢB病例的鉴别诊断及产前诊断；SGSH基因分析方法成本低，突变检出率高，可用于MPSⅢA的诊断和产前诊断。

目的 探讨中国citrin缺陷导致的新生儿肝内胆汁淤积症(NICCD)SLC25A13基因的新突变类型，并建立其分子诊断方法。 方法 从分别来自中国台湾、广东和河北三省的3例NICCD患者的血样中提取基因组DNA标本，对SLC25A13基因的18个外显子及其侧翼序列进行直接测序，以寻找新的突变类型。新突变的PCR扩增片段用相应的限制性内切酶消化后再进行琼脂糖凝胶电泳。 结果 在3例NICCD患儿的SLC25A13基因中分别发现了3个新突变，即剪接异常突变IVS7-2A>G,错义突变A541D和无义突变R319X。上述突变的PCR扩增片段分别用限制性内切酶Msp Ⅰ，Hpy188Ⅰ和Taq Ⅰ消化后，琼脂糖凝胶电泳均得到了分离清晰的突变特异性条带。 结论 从中国的NICCD患者中发现了SLC25A13基因的3个新突变，并建立了相应的PCR-RFLP诊断方法。

目的 研究丙酸血症患儿丙酰辅酶A羧化酶PCCA和PCCB基因突变情况。 方法 应用PCR扩增和直接测序对11例丙酸血症患儿PCCA和PCCB基因的各个外显子及其两侧侧翼序列进行突变检测，并对部分患儿父母进行相应突变基因检测。 结果 6例为PCCA突变，5例为PCCB突变。共发现13种突变，其中10种突变未见文献报道，突变类型包括错义突变、缺失突变、剪切位点突变和复杂型插入缺失突变，错义突变为最常见类型。167-179del13ins1复杂型插入缺失突变在2例中为纯合突变。 结论 在11例丙酸血症患儿中检测到13种突变，其中10种为新突变类型，为今后有关丙酸血症的发病机制研究提供理论依据。

目的 探讨血管紧张素转化酶(angiotensin converting enzyme，ACE)基因插入/缺失(insertion/deletion，I/D)多态性及β3-肾上腺素能受体(β3-adrenalgic receptor, β3-AR)基因Trp64Arg多态性对胎儿宫内发育和新生儿胰岛素敏感性的影响。 方法 将入选296例新生儿分为2组，适于胎龄儿组222例，小于胎龄儿组74例，于生后3 d哺乳前检测血糖、胰岛素，计算HOMA-IR值评估胰岛素敏感性，应用PCR-RFLP方法分析β3-AR基因Trp64Arg多态性及ACE基因I/D多态性(202例)，比较不同基因型组的孕周、出生体重、出生体重百分位及胰岛素敏感性，应用SPSS 10.0软件进行统计学处理。 结果 小于胎龄儿组HOMA-IR值(Ln对数转换后)为0.217±0.367，高于适于胎龄儿组0.001±0.378，差异有统计学意义(P<0.001)。小于胎龄儿组β3-AR基因Arg64等位基因携带者HOMA-IR值(Ln对数转换后)为0.371±0.338，高于Trp64Trp组0.143±0.360，差异有统计学意义(P＝0.011)。ACE基因DD基因型HOMA- IR值(Ln对数转换后)为0.51±1.01，高于II基因型及ID基因型组(分别为0.02±0.93及0.05±0.91)，差异有统计学意义(P均<0.01)。而同时具有ACE基因DD基因型及β3-AR Arg64等位基因者HOMA- IR值(Ln对数转换后)为1.042±1.315，显著高于其他各组(P<0.05)。 结论 小于胎龄儿新生儿期胰岛素敏感性降低。β3-AR基因Trp64Arg多态性及ACE基因I/D多态性可能是联系宫内发育迟缓(IUGR)与成人代谢综合征的重要遗传基础之一。

目的 探讨肺炎支原体荧光定量PCR在小儿肺炎支原体感染中的诊断价值。 方法 2003年12月-2006年5月收治入院诊断为肺炎，且采用肺炎支原体荧光定量PCR方法检测其深部呼吸道分泌物中肺炎支原体DNA呈阳性的患儿(阳性阈值1.0×103 copy/ml)256例。记录患儿年龄、性别、病程等一般临床资料，进行血清学肺炎支原体特异性抗体(Mp-IgM)检测，用定量资料受试者工作特征曲线下面积，评价肺炎支原体荧光定量PCR的诊断价值。 结果 (1)肺炎支原体荧光定量PCR诊断方法在受试者工作特征曲线下面积＝0.641；(2)Mp-IgM阳性组的PCR拷贝数[log(Mp-DNAcopy/ml)]为(5.42±1.26)，阴性组为(4.87±1.29)(P<0.05)；(3)Mp-IgM阳性组患病年龄为65 (26.2~96.5)个月，阴性组患病年龄为7(2.0~41.5)个月(P<0.001)；(4)Mp-IgM阳性组病程为7(5~13) d，阴性组病程为7(5~10.75) d，两组差异无统计学意义(P>0.05)。 结论 肺炎支原体荧光定量PCR单独用于诊断肺炎支原体感染准确性较低，但是对于免疫系统尚未发育完善的婴幼儿具有一定的诊断价值，且荧光定量PCR的拷贝数越大，越支持肺炎支原体感染的诊断。

目的 研究抗甲状腺药物甲巯咪唑(MMI)与抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)阳性血管炎的关系。 方法 对33例Graves病患儿在服药前及服药后检测血ANCA。同时对我院近年来诊治的2例毒性弥漫性甲状腺肿(Graves病)患儿在服用MMI期间出现ANCA阳性血管炎进行临床病理分析。 结果 2例患儿在服用MMI第5~6年出现抗中性粒细胞胞浆抗体阳性血管炎，临床出现血尿、肾功能减退，肾活检示肾血管炎改变，急性肾血管坏死伴新月体形成。经免疫抑制剂等治疗临床缓解；33例Graves病患儿服药前血ANCA均为阴性。有3例患儿分别在服用MMI第2、3个月及2年时出现ANCA阳性，阳性率9%(3/33)。临床出现镜下血尿，服药后ANCA阳性率高于服药前(χ2＝5.3，P<0.05)。3例患儿经对症治疗后镜下血尿消失，血ANCA复查转阴性。 结论 MMI与ANCA阳性血管炎可能有关，可产生从轻到重的肾脏受累临床表现，采用不同的治疗方法可使症状消失。

目的 分析小儿周期性呕吐综合征(CVS)的临床特点及诊治经验。 方法 对1994至2007年确诊为CVS的41例患儿的临床资料、诊断治疗及随访结果进行分析。 结果 本组41例，男21例，女20例，平均年龄8岁，平均发病年龄4岁，平均病程4年。呕吐可持续数天，间有完全健康的间歇期。重症发作高峰时呕吐次数>6次/h。全组发作期有精神萎靡、不能交流、顽固恶心、不能进食、发作呈突发突止的刻板形式，此为小儿CVS特征表现。1994至2000年随访8例，3例用多虑平和阿普唑仑治疗后2.2年(1.0~4.0年)痊愈；5例未按医嘱预防性治疗者，就诊后7.7年(4~10年)痊愈。2001至2007年随访>1年的14例，9例用丙戊酸钠、多塞平、塞庚啶联合治疗后2.3年(1~4年)痊愈；5例未按医嘱预防性治疗者，就诊后1.9年(1~3年)痊愈。 结论 小儿CVS的诊断应根据发作期特征性表现，有完全健康间歇期，并排除器质性呕吐病因。大多数CVS患儿症状随年龄增长而减轻。对发作频率≥1次/月，并影响生长发育的重症患儿，应给予精神安定剂、抗抑郁剂、抗偏头痛剂等长期预防性治疗；对轻症患儿，则采用发作期抗呕吐、输液等对症综合治疗。

目的 评价盐酸伐昔洛韦分散片治疗儿童水痘的疗效和安全性。 方法 本组260例，为复旦大学附属儿科医院、浙江大学附属儿童医院、南京医科大学附属儿童医院、华中科技大学同济医学院附属同济医院儿科及重庆医科大学附属儿童医院门诊就诊的水痘患儿，年龄>3岁且无并发症，分为盐酸伐昔洛韦分散片治疗组(伐昔洛韦组)128例，利巴韦林组132例，2组治疗时间均为5 d，口服用药，观察2组治疗水痘的疗效。 结果 (1)治疗第4天疗效指数伐昔洛韦组(0.80±0.24)高于利巴韦林组(0.59±0.37)(t＝5.42，P<0.01)；治疗结束2组疗效指数分别为0.86±0.14和0.70±0.30(t＝5.43，P<0.01)。(2)第4天伐昔洛韦组有效率94.5%，利巴韦林组有效率72.7%(χ2＝22.38，P<0.01)，差异有统计学意义；第4天2组痊愈率分别为33.6%和25.0%(χ2＝2.32，P>0.05)，差异无统计学意义。治疗结束时伐昔洛韦组有效率99.2%，利巴韦林组有效率88.6%(χ2＝12.60，P<0.01)，差异有统计学意义；伐昔洛韦组痊愈率33.6%，利巴韦林组痊愈率25.0%(χ2＝2.32，P>0.05)，差异无统计学意义。(3)治疗期间2组均无严重药物不良反应发生。 结论 盐酸伐昔洛韦分散片治疗小儿水痘疗效可靠，用药方便，安全性好。

目的 慢性肺疾病(Chronic lung disease, CLD)的特征性病理改变是肺发育受阻和肺间质纤维化，因此胶原等细胞外基质(extracellular matrix，ECM)重塑在肺纤维化形成中的作用已成为当今的研究热点。纤溶系统也是调节ECM降解和基质金属蛋白酶(MMPs)活性的重要因素。这里我们制备了吸入高浓度氧(高氧)致新生大鼠CLD的模型，探讨尿激酶型纤溶酶原激活因子(urokinase-plasminogen activator，u-PA)和纤溶酶原激活物抑制因子(plasminogen activator inhibitor-1，PAI-1)在新生大鼠CLD中的动态变化和意义。 方法 足月新生大鼠生后12 h内，分别于0.90~0.95氧和空气中持续暴露，于1、3、7，14、21 d光镜下观察不同时间点的病理改变，应用Western Blotting和RT-PCR的方法分别检测肺组织u-PA、PAI-1蛋白及mRNA表达的动态改变。 结果 (1)病理改变：3 d时高氧组可见炎性反应；7 d时肺发育障碍，间隔增宽，胶原纤维沉积。(2)u-PA表达：高氧暴露3 d时，蛋白表达较对照组明显升高(115.52±7.10 vs 96.51±6.33)，P<0.01；高氧组在7~21 d(97.66±7.98，99.91±7.60，103.23±6.24)与对照组比较(112.43±6.01，123.25±8.35，103.23±6.24)降低，P值分别为<0.05，<0.01，<0.01。mRNA表达在高氧暴露3 d时较对照组明显升高(1.18±0.07 vs 0.99±0.05)，P<0.01，7 d至21 d(1.01±0.06，1.10±0.12，1.27±0.06)与对照组比较(1.15±0.08，1.51±0.32，1.60±0.24)降低，P均<0.01。(3)PAI-1表达：高氧暴露后7~21 d，蛋白表达(147.83±12.27，149.07±11.17，161.42±13.08)明显高于同期对照组(116.18±10.67，113.73±15.58，126.60±8.59)，P值分别<0.01，<0.05，<0.01；mRNA表达在7~21 d (1.49±0.28，1.46±0.31，1.51±0.33)也高于同期对照组(0.94±0.01，0.94±0.03，0.98±0.03)，P<0.05，<0.01和<0.05。 结论 新生大鼠高氧暴露早期，肺组织u-PA / PAI-1mRNA及蛋白表达增强，纤溶和降解活性增强；高氧暴露中晚期，u-PA / PAI-1mRNA及蛋白表达降低，纤溶和降解活性降低，与肺纤维沉积平行，提示u-PA/PAI-1失衡参与了高氧致CLD的纤维化形成过程。

目的 探讨ATP敏感性钾通道(KATP)激动剂Cromakaliam(CRK)对离体豚鼠心室肌细胞瞬间内向电流(Transient Inward Current，Iti)的作用，Iti和KATP在特发性室性心动过速中的作用机制。 方法 采用全细胞膜片钳及玻璃微电极记录方法，分别记录对照组、哇巴因组、CRK组、哇巴因加CRK组及哇巴因加CRK加格列本脲组对豚鼠乳头肌动作电位及心室肌细胞Iti和KATP电流的影响。 结果 (1)哇巴因0.5 μmol/L灌流豚鼠心室乳头肌使动作电位延长，以动作电位复极20%、50%及90%的动作电位时程为著，可诱发延迟后除极(DAD)及触发激动(TA)。还可以诱发Iti(126.9±10.8)pA，滞后时间为(1173.0±70.9)ms，与对照组相比有统计学意义(P<0.01)。(2)CRK 10 μmol/L灌流心室乳头肌后可以缩短APD，使DAD幅度降低，偶联间期延长。CRK可以有效的抑制Iti。(3)CRK 50 μmol/L灌流豚鼠心室肌细胞后，KATP电流高至(342±89)pA，与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01)。ATP敏感性钾通道阻滞剂格列本脲10 μmol/L灌流豚鼠心室肌细胞，可拮抗CRK对APD和离子流的作用。 结论 CRK可以减弱哇巴因对心肌细胞的毒性作用，使APD缩短，中止DAD及触发激动对心肌细胞具有保护作用。CRK的作用与抑制Iti电流、增加KATP电流有关。