2007年 · 第45卷第07期

目的 Alport综合征(AS)是最常见的遗传性肾脏疾病，预后较差，无特异有效的治疗。X连锁显性(XLAS)是其主要遗传方式，因COL4A5基因突变或COL4A5和COL4A6两个基因突变所致。通过对两个XLAS家系进行遗传咨询和基因诊断，并对其中一个家系实施产前基因诊断，探讨AS产前基因诊断的方法及临床应用价值。 方法 对两个XLAS家系进行详细的遗传咨询后，采用巢式PCR扩增外周血淋巴细胞COL4A5 mRNA的整个编码区序列筛查两个家系的基因突变，然后扩增COL4A5相应的外显子从基因组DNA水平进一步证实突变。产前基因诊断通过羊水细胞cDNA和DNA两个水平来检测胎儿突变情况，通过PCR扩增Y染色体性别决定基因SRY联合核型分析检测胎儿性别，通过三个X染色体微卫星标记(AR、DXS6797和DXS6807)连锁分析除外羊水中母体细胞污染的可能。 结果 突变筛查显示家系一为新发突变，先证者COL4A5第2696~2705位缺失GTATGATGGG共10个碱基，但母亲外周血基因组DNA不携带该缺失突变，通过遗传咨询，该家系未进行羊水穿刺和产前基因诊断。家系二COL4A5基因第4271位G被A取代，1424位G>E，家系其他患者包括孕母均携带该突变。对家系二孕母进行了羊水穿刺和产前基因诊断。羊水细胞cDNA和DNA水平检测均显示胎儿无突变，PCR扩增SRY基因和羊水细胞核型分析均显示胎儿为男性。连锁分析显示羊水细胞中无母体细胞污染，且间接提示胎儿从母体遗传了携带正常COL4A5等位基因的X染色体。 结论 基于外周血淋巴细胞cDNA水平的COL4A5基因突变检测技术可快速用于XLAS产前基因诊断时家系基因突变筛查，有利于客观进行遗传咨询；产前基因诊断时联合cDNA和DNA两个水平检测胎儿基因突变情况更准确可信，PCR扩增SRY基因可以快速鉴定胎儿性别，X染色体微卫星标记连锁分析不但可以排除羊水中母体细胞污染，而且可以间接证明胎儿是否携带致病等位基因。

目的 探讨核心蛋白聚糖对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)转分化的影响。 方法 将体外培养的HK-2细胞分为6组：阴性对照组(A组)；10 ng/ml TGF-β1组(B组)；10 ng/ml核心蛋白聚糖组(C组)；100 ng/ml核心蛋白聚糖组(D组)；10 ng/ ml TGF-β1＋10 ng/ml核心蛋白聚糖组(E组)；10 ng/ml TGF-β1 ＋100 ng/ml核心蛋白聚糖组(F组)。倒置显微镜下观察加入刺激因子48 h后，各组细胞形态学变化；应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测核心蛋白聚糖对TGF-β1诱导的HK-2细胞内α平滑肌肌动蛋白(α- SMA)、波形蛋白、角蛋白mRNA表达的影响。 结果 B组与A组相比较，细胞形态发生明显变化，大部分细胞拉长呈梭形，似成纤维细胞；E组和F组比B组梭形样细胞明显减少，尤其是F组梭形样细胞减少更明显；C组和D组与A组细胞形态无明显区别，为椭圆形；B组与A组比较，波形蛋白、α- SMA mRNA表达明显提高，角蛋白mRNA表达减少。B组平均值分别为(0.828±0.297)、(0.332±0.025)、(0.075± 0.040)，A组平均值分别为(0.033±0.060)、(0.003± 0.000)、(0.348± 0.012)，差异有统计学意义(P<0.05)；E组和F组与B组相比，波形蛋白、α- SMA的表达有所下降，角蛋白的表达呈上升趋势(P<0.05)，平均值分别为E组(0.234± 0.313)、( 0.214 ±0.196)、(0.098± 0.056)，F组(0.155±0.053)、(0.122±0.130)、(0.215±0.122)。 C组和D组与A组比较差异无统计学意义(P>0.05)。 结论 TGF-β1能诱导正常人肾小管上皮细胞发生转分化；核心蛋白聚糖对TGF-β1诱导的HK-2细胞转分化具有抑制作用，且呈剂量依赖性。

目的 利用能够表达大鼠转化生长因子β1(TGF-β1)siRNA的绿色荧光蛋白融合表达质粒载体(pGEFP-C1)转染SD大鼠系膜细胞系、干扰TGF-β1的表达，观察系膜细胞纤维连接蛋白(FN)的相应变化，探讨防治肾脏纤维化的新途径。 方法 根据大鼠TGF-β1基因序列第538-556(A)和895-913(B)核苷酸序列，将A、B二段序列分别构建成小发夹结构，分别(A/B)或共同(A＋B)插入一个pGEFP-C1载体中，得到3个重组载体，能够分别或同时表达针对A或(和)B序列的siRNA，分别转染系膜细胞后，通过ELISA和RT-PCR动态观察系膜细胞TGF-β1、FN的mRNA和细胞培养上清中蛋白浓度的变化，探讨二者变化的相互关系。 结果 载体表达的siRNA与TGF-β1基因第538-556序列相同者，能够显著干扰48 h时间段TGF-β1 mRNA(RT-PCR)(P<0.01)和蛋白分泌(细胞上清ELISA)(P<0.01)，脂质体转染刺激系膜细胞FN分泌显著增加，表现为对照组和TGF-β1未被有效干扰组，FN分泌于24 h时段达到峰值，而TGF-β1被干扰的实验组，FN峰值被推迟到48 h才出现(P<0.01)。 结论 siRNA干扰系膜细胞TGF-β1的表达，能够减少FN的表达，但FN的表达可能并不完全依赖于TGF-β1。

目的 探讨儿童弥漫性泛细支气管炎的诊断和治疗。 方法 总结1例弥漫性泛细支气管炎患儿的临床、影像学表现以及病理改变，并复习相关文献。 结果 患儿临床表现为长期咳嗽、咯痰伴喘息，逐渐出现呼吸困难。双肺闻及较多细湿啰音及喘鸣音，杵状指可疑。胸部X线片：两肺透光度增强，左下肺见多发结节及网状影。胸部高分辨CT：两肺广泛分布小叶中心性细小结节影，左下肺局部小支气管壁增厚，双下叶和右中叶少许支气管轻微扩张。副鼻窦科瓦位提示副鼻窦炎。支气管镜肺活检病理提示支气管上皮破坏，管壁可见大量淋巴细胞、少量泡沫状组织细胞、中性粒细胞浸润，有淋巴滤泡形成，周围肺泡壁有少许淋巴细胞、组织细胞浸润，肺泡壁组织增生不明显，偶见局部纤维化并突入肺泡腔。常规肺功能提示混合性通气功能障碍，支气管舒张试验阳性。PaO2 65 mm Hg。根据临床、影像表现、病理改变以及目前弥漫性泛细支气管炎的诊断标准，确诊为弥漫性泛细支气管炎。给予小剂量红霉素[5~10 mg/(kg·d)]治疗，患儿病情明显好转。 结论 弥漫性泛细支气管炎可发生于中国儿童。主要诊断依据为慢性咳嗽、咯痰伴喘息，胸部CT表现为两肺弥漫性分布的小结节影，为细支气管中心性或小叶中心性，伴有副鼻窦炎。小剂量红霉素治疗可控制病情。

目的 探讨汉族儿童促甲状腺素受体(TSHR)基因失活突变与先天性甲状腺功能减低症(CH)的相关性。 方法 (1)选择79例CH汉族儿童(亚临床甲减14例，年龄1~5.5岁，男8例，女6例；甲减65例，年龄1.5~6岁，男27例，女38例)为研究对象；100名正常儿童(男40例，女60例，年龄1~8岁)作为对照组。(2)采用PCR和DNA测序技术检测TSHR基因失活突变。 结果 (1)79例CH患儿中有1例发生复合杂合子突变，其突变位点为(Pro52Thr /Val689Gly)。1例发生杂合子突变，其突变位点为(Gly245Ser)。30例患儿在第10外显子2181位核苷酸处发生C-G转换(GAC→GAG)，使727位密码子天冬氨酸被谷氨酸代替(Asp727Glu)。47例患儿在第7外显子561位核苷酸处发生T-C转换(AAT→AAC)，相应的187位氨基酸(Asn)不发生改变。(2)33例正常对照儿童在第10外显子2181位核苷酸处发生C-G转换；50例正常对照儿童在第7外显子561位核苷酸处发生T-C转换(AAT→AAC)。 结论 浙江汉族CH患儿TSHR基因有3个杂合子突变位点：(Pro52Thr)、(Gly245Ser)、(Val689Gly)，第10外显子2181位核苷酸处(GAC→GAG)及第7外显子561位核苷酸处(AAT→AAC)存在TSHR基因多态性。

目的 对57例甲基丙二酸尿症合并同型半胱氨酸血症患者进行回顾性研究。 方法 1996-2006年就诊的96例甲基丙二酸尿症患者中57例(59.4%)合并同型半胱氨酸血症，来自中国大陆16个省市，其中男32例，女25例，通过尿液、血液生化分析诊断，尿液有机酸测定采用GCMS分析技术，血清、尿液总同型半胱氨酸检测采用荧光偏振免疫测定法。 结果 57例患者尿中甲基丙二酸均显著增高，血清总同型半胱氨酸81.5~226.5 μmol/L(正常对照4.5~12.4 μmol/L)，尿液总同型半胱氨酸79.1~414.5 μmol/L(正常对照1.0~20.0 μmol/L)。其中13例(22.8%)于新生儿期发病，临床表现类似缺血缺氧性脑病；14例(24.6%)于1个月~1岁内发病，以神经系统损害为主要表现；9例(15.8%)于1岁~学龄前发病，以智力运动倒退为主要表现；18例(31.6%)于6~15岁发病，其中7例合并肝、肾、周围神经等多脏器损害。3例(5.3%)分别于16、24、34岁出现进行性智力运动倒退等异常。57例患者中11例(19.3%)死亡。46例(80.7%)接受维生素B12、叶酸、左旋肉碱、甜菜碱补充治疗，逐渐好转，11例(19.3%)完全康复。 结论 甲基丙二酸尿症合并同型半胱氨酸血症是中国人甲基丙二酸尿症的常见类型，患者个体差异大，可于新生儿期至成年各个时期发病，临床诊断困难。对于甲基丙二酸尿症患者应及早进行血浆、尿液总同型半胱氨酸测定，鉴别诊断，合理治疗。

目的 探讨低血糖脑损伤的临床表现与早期影像学特征，为诊断与预后判定提供依据。 方法 6例入院时血糖为0.48~1.70 mmol/L。胎龄35周＋5至40周，出生体重1545~3900 g。均无窒息史、败血症﹑颅内感染﹑遗传代谢及内分泌性疾病。在入院24~48 h完成T1WI、 T2WI和DWI磁共振扫描。 结果 6例均有明显的临床表现，以惊厥﹑萎靡最为常见，其次为呼吸暂停，4例血糖正常时仍有惊厥发生。5例低血糖发生在生后6~53 h，1例在生后12 d。低血糖持续时间[(47.7±38.8)(4~96)]h，最低值[(1.05±0.44)(0.48~1.70)]mmol/L。首次MRI检查1例在生后15 d，余在生后2~5 d，受累部位为枕叶(6例)和顶叶(3例)皮层及皮层下白质：DWI上表现为高信号6例，T1WI为低信号4例，T2WI高信号1例。3例在生后第2周接受第2次检查，1例DWI转为低信号，余信号正常；3例此时T1WI和T2WI分别表现为低信号和高信号，局部水肿明显减轻。1例3个月随访发育正常，未见顶枕部萎缩，但内囊后枝和视放射髓鞘化不良。 结论 枕顶叶是新生儿低血糖脑损伤的主要受累部位，DWI可以早期反映脑损伤的改变。

目的 通过检测不同程度缺氧时新生猪脑氧合的变化，研究脑缺氧程度-脑功能-脑损伤之间的规律。 方法 对15只新生猪检测脑组织血氧饱和度(Regional oxygen saturation，rSO2)，给新生猪机械通气吸入低浓度氧，造成脑rSO2不同进行分组。实验过程监测生理参数、脑电，脑损伤后72 h进行海马CA1区光镜及电镜检查。 结果 在缺氧至脑rSO2>40%的小猪组，缺氧后平均动脉压(Mean arterial pressure, MAP)为(56±0.00) mm Hg(1 mm Hg＝0.133 kPa)，血乳酸(2.3±1.2)mmol/L，脑电变化不明显，脑组织光镜、电镜无明显改变。在缺氧至脑rSO230%~40%时，MAP为(73±8) mm Hg，血乳酸增高至(8.2±3.9) mmol/L，脑电观察的脑功能发生改变，但缺氧后有所恢复，脑组织光镜有缺血性改变，电镜表现为海马CA1区神经元线粒体损伤。当缺氧至脑rSO2<30%时，MAP为(35±0.00)mmHg，血乳酸增高至(12±2) mmol/L，脑电观察脑功能受损，部分在缺氧后难以恢复，光镜下细胞有空泡形成，破碎，海马CA1区神经元线粒体严重损伤。 结论 在不同程度的缺氧下，当脑至rSO2 30%~40%时，新生猪出现脑损伤，当rSO2<30%，出现严重的脑损伤；rSO2越低，脑功能、脑损害越重；无创近红外光谱检测到的脑组织rSO2可以在脑缺氧过程中反映脑损伤及损伤的程度。

目的 探讨褪黑素(melatonin，MLT)对新生儿脐带血单个核细胞(cord blood mononuclear cells，CBMC)活化增殖的影响。 方法 运用相差显微镜及3H-TdR掺入法观察MLT对CBMC形态学的影响及增殖的调节，并与MLT对成人血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells，PBMC)的影响进行比较。 结果 CBMC的3H-TdR掺入率随培养基中MLT浓度(50 pg/ml~50 ng/ml)的增加而增加，在5 ng/ml效果最佳。在加入MLT(5 ng/ml)的培养基中，经72 h培养后，高倍光镜观察下见细胞较培养前明显密集，为较多体积增大的单个核细胞。CBMC培养基中分别加入不同刺激物MLT(5 ng/ml)、Interleukin-2(IL-2，50 ng/ml)、MLT＋ phytohemagglutinin(PHA，5 μg/ml)、MLT＋IL-2，其3H-TdR掺入率(cpm)分别为114 327±52 863、16 087±9006、118 360±59 207和17 682±7391。与细胞悬液组(14 133±8688)比较，MLT组和MLT＋PHA组CBMC的3H-TdR掺入率显著增加(t＝5.9143，P<0.001；t＝5.5078，P<0.001)，IL-2组、MLT＋IL-2组CBMC的3H-TdR掺入率无明显变化(t＝0.4983，P>0.05；t＝0.9839，P>0.05)；而MLT组或MLT＋PHA组CBMC的3H-TdR掺入率与培养基中仅加入PHA组(110 397±48 663)比较，差异无统计学意义(t＝0.1730，P>0.05；t＝0.3286，P>0.05)。各种刺激物加入培养基后，CBMC的3H-TdR掺入率均明显高于PBMC。 结论 MLT不但可诱导PBMC活化增殖，也可诱导CBMC的活化增殖，且其对CBMC的作用强于PBMC。

目的 观察宫内炎性预敏及生后高氧暴露对早产大鼠肺血管内皮生长因子(VEGF)及其受体表达的影响，探讨其与新型支气管肺发育不良(BPD)发病机制之间的关系。 方法 早产大鼠随机分为生理盐水＋高氧组、LPS＋高氧组、LPS组和正常对照组，于生后第1、7和14天随机取8只，行HE染色，观察肺组织形态学结构，做辐射状肺泡计数(RAC)采用Western blot和RT-PCR方法检测各组肺组织VEGF及其受体Flt-1和Flk-1蛋白及mRNA表达水平。 结果 (1)正常对照组和LPS组在生后1~14 d随鼠龄增加，RAC逐渐增多，但LPS组在生后第1~14天RAC均低于对照组(P分别＝0.029，0.013，0.009)；生理盐水＋高氧组和LPS＋高氧组则随鼠龄增加RAC逐渐下降，LPS＋高氧组至生后14 d RAC低于其他三组(P分别＝0.000，0.002，0.012)。(2) VEGF及其受体Flk-1蛋白的表达与其相应肺组织RAC变化规律基本一致。而Flt-1表达在四组中均随鼠龄增加而呈增高趋势。(3)VEGF及其受体mRNA表达规律与其蛋白表达强度变化规律基本一致。 结论 宫内炎性预敏及生后高氧暴露可能是导致新型BPD发生的重要因素。

目的 观察宫内炎性预敏及生后高氧暴露对早产大鼠肺血管内皮生长因子(VEGF)及其受体表达的影响，探讨其与新型支气管肺发育不良(BPD)发病机制之间的关系。 方法 早产大鼠随机分为生理盐水＋高氧组、LPS＋高氧组、LPS组和正常对照组，于生后第1、7和14天随机取8只，行HE染色，观察肺组织形态学结构，做辐射状肺泡计数(RAC)采用Western blot和RT-PCR方法检测各组肺组织VEGF及其受体Flt-1和Flk-1蛋白及mRNA表达水平。 结果 (1)正常对照组和LPS组在生后1~14 d随鼠龄增加，RAC逐渐增多，但LPS组在生后第1~14天RAC均低于对照组(P分别＝0.029，0.013，0.009)；生理盐水＋高氧组和LPS＋高氧组则随鼠龄增加RAC逐渐下降，LPS＋高氧组至生后14 d RAC低于其他三组(P分别＝0.000，0.002，0.012)。(2) VEGF及其受体Flk-1蛋白的表达与其相应肺组织RAC变化规律基本一致。而Flt-1表达在四组中均随鼠龄增加而呈增高趋势。(3)VEGF及其受体mRNA表达规律与其蛋白表达强度变化规律基本一致。 结论 宫内炎性预敏及生后高氧暴露可能是导致新型BPD发生的重要因素。