2007年 · 第45卷第06期

目的 探讨一个来自中国的Citrin缺陷导致的新生儿肝内胆汁淤积症(NICCD, MIM#605814)家系的基因诊断过程。 方法 从先证者及其所在家系其他9名成员的血样中提取DNA，PCR扩增后行琼脂糖凝胶电泳，初步发现2个突变，并用本实验室建立的基因扫描法进一步证实，然后行DNA测序，最终确定突变位置和性质。 结果 先证者为851-854del和1638-1660dup两种突变的复合杂合子，两种突变分别位于SLC25A13基因外显子9和外显子16。母亲及哥哥为851-854del携带者，父亲、一个姑姑及其子为1638-1660dup携带者。 结论 该家系中SLC25A13基因外显子9和16分别发生了缺失突变851-854del和插入突变1638-1660dup。

目的 建立检测Duchenne型肌营养不良症(Duchenne muscular dystrophy, DMD)致病基因dystrophin突变的快速、敏感的微小突变筛查系统。 方法 选择经多重PCR检测未发现dystrophin基因大尺度缺失的DMD患儿20例，年龄在2~10岁，以其基因组DNA为模板，通过PCR反应，分别扩增dystrophin基因外显子及侧翼序列，采用变性高效液相色谱(DHPLC)技术进行突变筛查，对DHPLC峰形变异的外显子片段行PCR产物直接测序，确定突变的具体位点和类型。 结果 筛查了包括2个缺失热点区dystrophin基因的68个外显子和3′UTR部分片段，分别在4例患儿中检测出该基因的4种致病突变：c.6808_6811delTTAA，c.4959_4960insA，c.8656C>T和c.8608C>T。前两例引起移码突变分别导致p.Leu2270MetfsX9和p.Ser1654LysfsX5，后两例为无义突变分别导致p.R2886X和p.R2870X。其中c.6808_6811delTTAA，c.4959_4960insA和c.8656C>T为文献未曾报道的新突变。 结论 DHPLC可以作为有效地筛查DMD微小突变的检测方法。

目的 了解北京市6~18岁超重、肥胖儿童青少年中代谢综合征(MS)的流行现状和临床表型特征；比较美国国家胆固醇教育计划和国际糖尿病联盟定义的标准诊断儿童青少年MS的差异。 方法 以2004年北京儿童青少年MS调查中筛查出的超重和肥胖儿童为研究对象，并选取一组正常体重儿童为对照组，检测空腹血浆葡萄糖和胰岛素、血清甘油三酯和高密度脂蛋白胆固醇水平，采用稳态模式评估法计算胰岛素抵抗指数。符合以下5项指标中3项及以上者为MS：腹型肥胖(腰围≥P90)、高血压(≥P90)、低高密度脂蛋白胆固醇[<1.03 mmol/L(40 mg/dl)]、高甘油三酯[≥1.24 mmol/L(110 mg/dl)]和空腹血糖升高[≥5.6 mmol/L(100 mg/dl)]。 结果 (1)采用美国国家胆固醇教育计划定义，MS检出率分别为，对照组0.9%，超重组7.6%，肥胖组29.8%，高于国际糖尿病联盟定义的检出率(0.1%，5.2%，28.6%)；两定义标准诊断的MS检出率均呈现随体重指数升高而增加的趋势(趋势检验，P<0.001)；(2)肥胖儿童中MS单项异常检出率依次为：腹型肥胖81.6%，高血压47.7%，高甘油三酯35.6%，低高密度脂蛋白胆固醇16.9%，高空腹血糖13.4%；超过四分之一的超重儿童具有高血压(29.8%)、腹型肥胖(27.4%)和高甘油三酯(26.0%)；随体重指数增加，MS指标多项异常者和胰岛素抵抗者呈增加趋势(P<0.001)。 结论 北京市肥胖儿童青少年中MS已呈现严重流行趋势；腹型肥胖、高血压、高甘油三酯是超重肥胖儿童最常见的代谢异常。采用美国国家胆固醇教育计划定义的儿童MS检出率高于国际糖尿病联盟定义的检出率。

目的 报告1例Allgrove综合征，并对患儿及其父母的AAAS基因进行分析。提请医生认识和正确诊断该疾病。 方法 描述患儿临床特征和遗传特征，进行生化、内分泌激素、影像学、神经电生理、眼底及泪腺检查。提取基因组DNA，特异性片段扩增、测序进行基因分析。 结果 7岁女童，因呕吐9个月且渐加重而再次住院。5岁时以低血糖昏迷，皮肤发黑而就诊，诊断为爱迪生病并接受治疗。因频繁呕吐9个月再入院。具有四肢肌腱反射明显亢进，视乳头萎缩、无泪症和贲门失弛缓症。患儿父母为三代以外的姨表亲缘关系。基因分析显示：患儿为纯合子AAA基因第8外显子771位硷基G缺失突变，导致ALADIN蛋白移码突变p.R258GfsX33。患儿父母各携带一条正常和一条异常基因。 结论 Allgrove综合征临床诊断明确。疾病遗传符合常染色体隐性遗传方式。ALADIN蛋白功能对这一综合征非常重要。临床表型与基因突变位点无显著相关性。

目的 评估复旦大学附属儿科医院肝移植患儿术后疗效。 方法 回顾性分析2002年10月至2005年5月期间8例小儿肝移植术后的临床效果和生活质量。本组男4例，女4例，肝移植年龄4~67个月，体重6~19 kg。6例亲体活体肝移植，1例劈裂式肝移植，1例减体积肝移植。 结果 围手术期死亡1例，手术存活率87.5%；手术成功患儿中1例于术后8个月死于消化道出血，1年生存率为75.0%，其他6例存活至今，最长生存期43个月。术后并发症：急性排斥反应2例；远期感染：巨细胞病毒感染2例，Epstein-Barr病毒感染1例，乙型肝炎病毒感染1例；低蛋白血症3例。远期外科并发症：门静脉血栓1例，下腔静脉和肝静脉狭窄1例。他克莫司(FK506)的副作用：高血压3例，肾脏损害1例，肝脏损害1例，腹泻1例。所有存活患儿无心理异常；1例术前体格发育落后者，术后发生了生长追赶。 结论 肝移植改善了小儿终末期肝病的预后。儿童肝移植后并发症多见。周密的术后随访与管理有助于发现各种内外科并发症和保证术后生活质量。

目的 初步分析重庆地区0~6岁儿童血清人偏肺病毒(hMPV)中和活性及与hMPV IgG抗体水平的关系，为进一步大样本的血清流行病学研究奠定基础。 方法 0~3岁儿童血清来自因外科疾患住院的儿童，3~6岁儿童血清来自托幼儿童体检血清。采用微量中和实验检测上述血清中hMPV中和活性，分析血清中和活性水平及其与hMPV IgG抗体水平的相关性。 结果 在抽取的50份血清标本中，此前通过间接酶联免疫吸附试验检测为阴性的8份标本均未显示中和活性，而42份hMPV IgG抗体阳性血清标本中和活性均显阳性，平均中和滴度为1∶129。其中0~5个月组中和滴度均值1∶160，6~11、12~23、24~35个月和3~6岁组中和滴度均值分别为1∶58.9、1∶114.9、1∶172.8、1∶160。血清中抗hMPV IgG水平和中和活性具有显著相关性，r＝0.668，但hMPV IgG水平与中和活性并不平行。 结论 0~6岁儿童血清中多具hMPV中和活性，但其是否足以预防不同亚型hMPV感染尚待进一步研究。

目的 调查NICU院内感染的发生情况，探讨其危险因素，为院内感染的防控提供依据。 方法 对我科2003年5月至2004年12月，住院的638例新生儿进行院内感染的监控，并进行分析和总结。 结果 638例新生儿中74例发生88次院内感染，发生率为11.6%；住院日相关的院内感染率为14.9/1000NICU病例-天；导管相关血行感染率为18/1000血管内导管-天(2/111)；呼吸机相关肺炎发生率为63.3/1000机械通气-天(15/237)；平均开始出现感染时间(7.98±4.58) d。发生院内感染者比未感染者的胎龄及出生体重低、住院时间延长。新生儿发生院内感染的危险因素包括胃肠外营养、出生体重≤1500 g及呼吸机治疗等(P<0.05)。感染部位中，以肺炎占首位(45.4%)。院内感染病死率为4.1%。入院后有细菌定植者较无定植者院内感染率高(χ2＝79.7，P<0.001)。 结论 充分了解NICU中新生儿发生院内感染的高危因素、尽量减少肠外营养及侵袭性操作的次数和时间、明确NICU中患儿个体细菌的定植情况将有助于控制院内感染并对临床合理用药提供参考。

目的 探讨新生儿痰真菌生长的临床意义及相关因素。 方法 回顾性分析149例诊断为新生儿肺炎且痰培养结果阳性住院新生儿的临床资料，根据痰培养结果将患儿分为真菌组、混合组和细菌组，运用χ2检验及方差分析等统计学方法，比较三组的临床资料。 结果 (1)真菌组40例、混合组30例和细菌组79例，痰真菌生长占47.0% (70/149)。 (2)三组间白细胞数分别为(10.3±3.5)×109/L、(11.7±5.2)×109/L和(14.4±10.5)×109/L，F＝3.78，P＝0.03；中性粒细胞数分别为(5.1±3.3)×109/L、(7.4±4.7)×109/L、(9.0±7.4)×109/L，F＝5.50，P＝0.01；下列因素所占比例，三组分别为：早产儿32.5%(13/40)、20%(6/30)和12.7%(10/79)，χ2＝6.68，P＝0.04；母产前使用糖皮质激素10.0%(4/40)、6.7%(2/30)和0%(0/79)，P＝0.01；使用三联抗生素治疗10.0%(4/40)、16.7%(5/30)和2.5%(2/79)，P＝0.02；碳青霉烯类药物治疗32.5%(13/40)、63.3%(19/30)和17.7%(14/79)，χ2＝21.26，P＝0.00。上述6个因素三组间差异均有显著统计学意义。(3)以痰真菌生长作为因变量进行Logistic回归分析，共2个变量进入最佳回归方程：碳青霉烯类药物(克倍宁或泰能)治疗(X1)、早产儿(X2)，建立影响痰真菌生长的主效应模型Logistic(SCF)＝β0(0.12)＋1.63X1＋1.20X2 (χ2＝43.04, P<0.05)。(4)仅一次痰真菌生长，抗真菌治疗与否未愈率分别为10.0%(2/22)和0%(0/43)，P＝0.111；继续住院时间分别为(225.8±7.7)d和(434.1±4.7)d，t＝1.095，P＝0.278，均无统计学意义。 结论 (1)在新生儿肺炎中，痰真菌生长比较普遍，以白色念珠菌为主。(2)早产儿、碳青霉烯类抗生素治疗可作为痰真菌生长的独立危险因素。(3)仅一次痰真菌生长只提示需作进一步真菌检查，不能凭此确诊肺部真菌感染或决定是否抗真菌治疗。

目的 探讨新生儿败血症的快速可靠诊断方法，以提高临床检测细菌的速度及准确性。 方法 以细菌16S rRNA基因为靶序列，设计通用引物及TaqMan探针，建立细菌16S rRNA基因实时荧光定量PCR反应体系；选择临床引起新生儿败血症的常见菌如金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和大肠埃希菌等进行浓度梯度实验；对临床疑为新生儿败血症的830例感染性疾病的新生儿抽取静脉血分别做细菌16S rRNA基因荧光定量PCR和血培养检测。 结果 临床常见分离株金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大肠埃希菌荧光定量PCR检测结果均为阳性；巨细胞病毒、EB病毒、乙肝病毒，新型隐球菌及白色念珠菌，人基因组DNA及空白对照均为阴性。细菌荧光定量PCR最低能检测到3个细菌，其荧光定量CT值为37.90；对临床疑为感染性疾病的830例患儿标本中，荧光定量PCR检测血标本阳性率5.18%(43/830)，血培养阳性率2.41% (20/830)，前者明显高于后者，差异具有统计学意义，P<0.01, 30例非感染性疾病患儿血标本荧光定量PCR检测及细菌培养均为阴性。若以血培养作为对照，荧光定量PCR方法的诊断敏感性为100%，特异性为97.16%，正确诊断指数为0.972。 结论 建立了细菌16S rRNA基因荧光定量PCR诊断新生儿败血症方法。其检测快速、简便，为新生儿败血症提供早期、敏感的病原学诊断依据。

目的 建立抗生素所致肠道菌群失调小鼠模型，在此模型上用烟曲霉菌变应原滴鼻激发，探讨变应性气道反应和肠道菌群失调的关系。 方法 60只雌性BALB/c小鼠分为6组，每组10只。①抗生素1组：口服头孢哌酮7 d，第7天给予50 μl白色念珠菌1次；②对照1组：1~7 d给予等量生理盐水代替头孢哌酮和白色念珠菌(①和②组于第8天断颈后取盲肠内容物做细菌和真菌培养计数)；③抗生素加激发组：前7天处理同抗生素1组，9、16 d经鼻给予烟曲霉菌变应原50 μl；④抗生素2组：前7天处理同抗生素1组，9、16 d经鼻给予50 μl生理盐水；⑤激发组：前7天处理同对照1组，9、16 d经鼻给予烟曲霉菌变应原50 μl；⑥对照2组：前7天处理同对照1组，9、16 d经鼻给予50 μl生理盐水(③~⑥组于第19天检测肺部气道变应性)。 结果 ①抗生素1组小鼠肠道内肠杆菌、肠球菌、双歧杆菌、乳酸杆菌减少，白色念珠菌增加，伴体重减少，粪便含水量增加，表明肠道菌群失调。②抗生素加激发组和激发组小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数、淋巴细胞、中性粒细胞和嗜酸性粒细胞增加，尤以抗生素加激发组小鼠更为明显。③抗生素加激发组的BALF中IL-4(45.35±2.36)pg/ml较对照2组(35.32±2.53)pg/ml增加，GATA-3转录因子mRNA表达水平(0.569±0.023)比对照2组(0.410±0.020)高，T-bet/GATA-3比值(0.578±0.021)较对照2组(0.804±0.035)降低。 结论 抗生素致肠道菌群失调小鼠经过烟曲霉菌变应原气道激发，可致Th2优势反应的气道变应性，提示抗生素致肠道菌群失调是诱发哮喘等变应性疾病发生的危险因素。