2007年 · 第45卷第02期

目的 探讨白细胞介素8(IL-8)-251T/A和781 C/T单核苷酸多态性(SNP)与呼吸道合胞病毒(RSV)易感性的关系。 方法 采用等位基因特异性聚合酶链反应(AS-PCR)技术，对101例RSV肺炎、108例非RSV肺炎住院患儿及35个核心家系的两个SNP位点的基因型进行检测，通过基因测序进行验证。用病例-对照和传递不平衡检验(TDT)分析SNP位点等位基因的分布，并对两个SNP位点的连锁和单体型进行分析。 结果 (1)病例组IL-8-251T的频率显著增加(OR＝2.08, P＝0.0002,病例-对照分析；LRT＝14.31, P＝0.0008，TDT)。(2)IL-8-251T与781C是连锁的(D′＝0.607±0.03，r2＝0.2861，P＝0.0000)。(3)病例组TC单体型的频率显著增加(P＝0.01)。 结论 IL-8-251T与781 C形成的TC单体型与RSV易感性存在关联，即部分RSV易感基因可能存在于含有TC单体型的基因片段中或者与该段基因紧密连锁。

目的 研究脂多糖受体基因(CD14)多态性在温州地区汉族儿童中的分布特征及其与特应性疾病的关联。 方法 特应征组113例，病例入选符合下列标准：(1)年龄2~12岁的汉族儿童；(2)临床诊断为哮喘、过敏性鼻炎或特应性皮炎；(3)血清总IgE升高；(4)血清特异性IgE阳性。选取2~12岁正常体检儿童79例为对照组。应用免疫荧光法测定血清总IgE，UniCAP系统测定SIgE。应用测序法测定两组儿童CD14基因序列，寻找多态位点，调查多态位点的分布特征，比较两组儿童多态位点的基因型频率和等位基因频率，比较不同基因型的血浆IgE水平。 结果 (1)特应征组和对照组儿童均发现CD14/-159多态性，以TT基因型为主，未发现其他多态位点。其中对照组儿童TT、TC、CC 3种基因型频率分别为57.0%、28.0%和15.0%，特应征组儿童TT、TC、CC 3种基因型频率分别为46.9%、35.4%和17.7%，按Hardy-Weinberg平衡吻合度检验，差异无统计学意义(χ2＝3.462，P>0.05)。两组的基因型频率和等位基因频率分布差异无统计学意义(χ2＝1.918，P>0.05)。(2)不同性别间基因型频率差异无统计学意义(χ2＝3.458，P>0.05)。(3)经对数转换，CD14/-159 CC基因型、TC基因型和TT基因型的血清IgE分别为(2500±460)IU/L、(2400±460)IU/L、(2520±460)IU/L,方差分析差异无统计学意义(F＝0.807，P>0.05)。 结论 (1)温州地区汉族儿童存在CD14/-159多态性，未发现CD14基因其他多态位点。温州地区汉族儿童CD14/-159基因型以TT为主。(2)未发现CD14/-159基因型和特应征发病及IgE水平之间的关联。

目的 了解北京地区急性呼吸道感染患儿中人副流感病毒(HPIV)的感染状况。 方法 (1)根据HPIV血凝素蛋白(HA)的基因保守区序列，合成能够区分HPIV 1~4型的多重巢式PCR引物，并用多种呼吸道病毒的标准毒株确定多重PCR方法的特异性；(2)收集2003年8月-2006年4月急性呼吸道感染患儿的临床标本3519例，应用逆转录多重PCR方法，对标本同时进行HPIV 1~4的检测。(3)随机选取不同型别的HPIV基因检测阳性标本共10例，对其PCR扩增产物直接进行核苷酸序列测定，并将所测到的序列与GenBank中的基因序列进行比较。 结果 (1)多重PCR方法的特异性检测显示， HPIV的分离株cDNA有预期大小的扩增片段，与其他常见呼吸道病毒无交叉反应性。(2)3519例标本中多重PCR检测阳性的为349例，占本组检测标本的9.9%(349/3519)，明显高于间接免疫荧光方法和(或)病毒分离4.8%的阳性率(170/3519)；应用多重PCR方法还检测到HPIV1与HPIV3以及HPIV3与HPIV4的混合感染；在上呼吸道及下呼吸道感染的患儿中均有较高的HPIV阳性检出率；季节性分布分析显示，HPIV感染无明显的规律性，以HPIV1、3为主，HPIV2、4仅散发存在。(3)序列分析结果提示，所选取的多重PCR方法检测阳性的10例标本确实是HPIV阳性，其中有两份分别属于HPIV 4A、4B亚型。 结论 HPIV在儿童感染中除了单-亚型感染外还可存在混合型感染。未发现其感染的季节性特点。所应用的逆转录多重RT-PCR方法不仅检出率高于常用的方法(间接免疫荧光方法和病毒分离)，而且能够直接进行亚型分析。除了检出常见的1、2、3型外，还检出了较少见的4型，属国内首次报道。

目的 探讨小儿气管支气管软化症(TBM)的临床特征，并分析纤维支气管镜术在其诊断中的价值。 方法 2004年4月至2006年4月因诊治需要对229名患儿行纤维支气管镜术，依据术中直观检查诊断TBM53例，对其内镜下病变特征、一般情况、临床表现、其他辅助检查、治疗及转归等进行综合分析。 结果 (1)53例TBM中仅22例术前疑诊此病，另31例在术前的临床诊断主要为难治性肺炎及哮喘、原因不明肺不张等。(2)TBM年龄构成：患儿年龄为1个月~8岁，<1岁41例，~2岁6例，~3岁4例，>3岁2例；性别构成：女10例，男43例。(3)TBM病变部位：总气管软化11例，气管-支气管软化24例，支气管软化18例；两肺分布：左肺支气管软化12例；右肺支气管软化11例，左右肺均有软化19例；病变程度：轻度病变21例，中度病变25例，重度病变7例。(4)53例TBM患儿中，临床表现为反复或持续喘息28例，慢性咳嗽16例，反复呼吸道感染5例，肺不张2例，呼吸困难2例。 结论 TBM多见于婴幼儿，临床表现多样，多有呼气性喘鸣和咳嗽；纤维支气管镜检查可提高其诊断准确率，避免漏诊、误诊。

目的 应用多项电生理技术观测婴儿痉挛(IS)的临床发作特征，探索痉挛、肌阵挛和强直性发作的临床-电生理鉴别要点。 方法 应用视频脑电-肌电多导记录及抽搐逆向锁定的脑电平均技术(jerk-locked back averaging, JLA)，对8例1岁以下IS婴儿的681次临床明显发作(包括经测试最后被摒除的20次非皮层性肌阵挛)，进行临床和多项电生理的实时联合记录分析。同时以其中1例Aicardi综合征IS临床发作前2个月的58次肌阵挛发作为对照。 结果 8例IS共记录到3种发作形式，包括痉挛、肌阵挛和强直性发作，分别占94.4%(624/661次)、4.5%(30/661次)和1.1%(7/661次)。痉挛发作多为轴性肌群收缩，具有丛集性及"渐强-渐弱"特征，85.7%(535/624次)的痉挛发作时间在0.4~3.0 s间，14.3%(89/624次)持续3~7 s。此外，还根据发作期EEG认定273次微小痉挛发作。发作期脑电图多为全脑性高幅慢波或低-中幅快波活动(89.1%)，经JLA叠加后发作期脑电与肌电间未见明确锁时关系。肌阵挛为闪电样的肌肉收缩，发作时间<400 ms，发作期脑电图或为性放电，或无明显改变。经JLA叠加后证实性肌阵挛有皮层放电波，且与肌电之间有恒定锁时关系。强直性发作持续3 s以上，脑电图为低幅快波及中幅θ活动。此外，根据强直痉挛的强直达峰时间<2 s、发作期EEG及轴性发作与IS一致等特点，可与强直性发作区别。 结论 IS临床以痉挛发作为主，借助多导电生理记录及JLA等电生理技术，能满意地对痉挛、强直性痉挛、肌阵挛和强直性发作等婴幼儿期常见癫发作进行鉴别，从而有助对婴儿期癫的正确诊断、分类与治疗。

目的 分析白质消融性白质脑病的临床特点及诊断方法。 方法 对9例临床诊断为该病的患儿的临床及头颅影像学特点、实验室检查等进行分析，结合病例对该病进行综述介绍。 结果 (1)临床表现：9例中8例出现神经系统症状和体征，1例仅有MRI异常。发病时间为生后6个月~3岁；5例家族史阳性，病前智力运动发育多正常；多以运动症状起病，下肢为著。6例发病前或每遇病情加重前有呼吸道感染史，3例病前有轻微头部外伤史；到目前为止，有症状的7例呈进行性加重病程，其中4例同时有发作性加重现象。所有病例智力受损相对轻。7例头围正常，8例有上运动单元病变体征，4例有共济失调体征。3例双侧视神经萎缩。(2)头颅MRI：表现为双侧对称弥漫性深部白质长T1长T2信号，可累及皮层下白质，额、顶叶为主，Flair像为对称性白质高信号伴部分白质低信号甚至囊性变或大部分白质低信号仅存少量线状稍高信号，为此症特征性改变。(3)其他遗传性白质脑病相关酶学或生化检查均正常。 结论 以运动障碍起病、运动障碍重于智力障碍、神经影像学改变显著重于临床表现、MRI表现为双侧对称弥漫性深部白质长T1长T2病变伴早期出现白质消融征象是本症的临床特点，临床诊断还需除外其他遗传性及获得性脑白质病。找到相应基因的致病突变可最终确诊。

目的 探讨治疗血浓度下常用抗癫药(AEDs)对未成熟脑损伤的可能性。 方法 160只健康SD大鼠，幼鼠与成年鼠各80只。以AEDs血浓度达到临床治疗稳态血浓度为实验剂量，设立健康7日龄幼鼠及2月龄成年SD大鼠氯硝安定(CZP)、苯巴比妥(PB)、丙戊酸钠(VPA)、托吡酯(TPM)给药组及正常对照组。每一给药组又分为2周短程及5周长程给药组，每组8只。停药当天称取体重及脑重，尼氏染色及电镜观察脑组织病理改变，ELISA法测定血清神经元特异性烯醇化酶(NSE)含量，免疫组化检测Bcl-2、Bax蛋白表达，原位末端标记法(TUNEL)检测凋亡细胞。 结果 (1)短程PB给药幼鼠血清NSE浓度[(8.84±2.10)nmol/L]较正常对照[(6.27±1.27 )nmol/L]高，差异有统计学意义(P<0.01)；(2)长程CZP及PB组幼鼠脑重较对照明显减轻，额叶皮层神经细胞减少，神经元超微结构明显异常，血清NSE浓度[分别为(8.15±1.67) nmol/L及(8.07±1.27 )nmol/L]较对照[(6.02±1.20)nmol/L]高，差异有统计学意义(P<0.01)，Bax蛋白表达强于正常对照组(P<0.01), TUNEL染色阳性细胞较对照组多。 结论 治疗血浓度下4种AEDs中，PB、CZP可引起发育中脑组织明显而持久的组织学损伤及神经元坏死与过度凋亡。

目的 研究幽门螺杆菌(Hp)感染胃黏膜上皮细胞增殖、凋亡和突变型P53蛋白水平的表达情况，以及Hp感染根除治疗前后胃黏膜上皮细胞增殖、凋亡指数变化。 方法 采用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记技术(TUNEL)以及PCNA免疫组织化学法对30例CagA＋Hp感染患儿和30例Hp阴性患儿胃黏膜上皮细胞增殖、凋亡情况进行比较，同时对突变型P53基因蛋白的表达情况进行检测。CagA蛋白抗体的检测采用Western Blot2.1免疫印迹法。 结果 CagA＋Hp感染组胃黏膜上皮细胞增殖指数为11.56%±4.21%，较Hp阴性组(5.85%±2.21%)高(t＝7.57，P<0.01)；凋亡指数CagA＋Hp感染组(10.58%±5.31%)较Hp阴性组(2.86%±0.64%)高(t＝8.096，P<0.01)。30例CagA＋Hp感染组有28例完成了三联药物的Hp根除治疗，2例失访，其中21例根除，7例未根除； 21例CagA＋Hp感染根除治疗后，胃黏膜上皮细胞增殖指数治疗前为(11.50%±4.11%)，治疗后为(6.30%±3.26%)(t＝3.968，P<0.01)。凋亡指数治疗前为(10.58%±4.02%)，治疗后为(3.74%±2.30%)(t＝6.69，P<0.01)。7例未根除治疗患儿胃黏膜上皮细胞增殖指数及凋亡指数变化无统计学意义。CagA＋Hp感染组胃黏膜上皮细胞P53阳性表达率63%(19/30)；在P53阳性表达中，轻度2例，中度8例，重度9例。Hp阴性组胃黏膜上皮细胞P53阳性表达率16%(5/30)，均为轻度表达。CagA＋Hp感染组P53阳性表达率高于Hp阴性感染组(χ2＝6.805, P<0.01)。 结论 CagA＋Hp感染可引起胃黏膜上皮细胞增殖、凋亡的变化，使黏膜增殖、凋亡动态失衡，黏膜的不稳定性增加，突变型P53基因蛋白异常表达可能参与此过程的调控。

目的 观察Toll样受体2和4在新生儿不同感染时的变化，探讨它们在新生儿抗感染免疫中的作用。 方法 收集200例不同胎龄(26~43周)新生儿外周血，分为败血症组、细菌性肺炎组、细菌性脑膜炎组、尿路感染组、先天性梅毒组和非感染组。采用荧光定量PCR法测定TLR2和4 mRNA转录水平(与β-actin拷贝数比值)，流式细胞仪检测外周血单核细胞表面TLR2和TLR4蛋白表达水平(荧光强度)以及TLR2和TLR4阳性细胞百分比。 结果 1. TLR2 mRNA在败血症组明显增加(6.14±0.80)，在G＋菌败血症组表达最为显著(6.43±0.74)，细菌性肺炎组(5.49±0.62)、细菌性脑膜炎组(5.61±0.60)和先天性梅毒组(5.89±0.38)增加也很显著。细胞表面TLR2蛋白表达与mRNA变化一致。2. TLR4 mRNA在G-菌败血症组表达最高(6.78±0.79)。在细菌性肺炎组(5.33±1.07)、细菌性脑膜炎组(5.87±0.70)和尿路感染组(5.38±0.91)也明显增高。TLR4阳性细胞百分比在各感染组显著增加。3.G＋菌败血症组TLR2 mRNA显著高于TLR4 mRNA的表达，G-菌败血症组TLR4 mRNA显著高于TLR2 mRNA的表达。TLR2阳性细胞百分比水平各组均明显高于TLR4。 结论 新生儿感染时TLR2 mRNA/蛋白和TLR4 mRNA显著增高，特别是在严重感染败血症组。提示TLR2和TLR4信号传导途径参与新生儿抗感染免疫机制，为进一步深入了解新生儿感染免疫机制提供实验基础。

目的 探讨新生鼠窒息后心肌组织心肌基质金属蛋白酶(MMPs)表达与心肌损害的相关性。 方法 60只7~10日龄Wistar鼠，随机分成对照组(D组)、窒息组(A、B、C 3组，分别为窒息复氧后1、7、14 d),每组15只。窒息组模拟新生鼠常压窒息模型，测定cTnI水平；心肌组织MMPs-3、9活性；心肌病理积分及胶原含量。 结果 cTnI(ng/ ml) A组(0.3680±0.40)明显高于D组(0.0783±0.06)P<0.05，B组下降(0.1889±0.15)P仍<0.05，C组降至正常(0.1338±0.07)P>0.05；心肌组织MMPs-3活性A组(0.1847±0.04), B组最高(0.2780±0.05)，C组(0.2014±0.05)，与D组(0.1213±0.03)比较P均<0.05；MMPs-9活性A、B、C组逐渐增高(0.1502±0.01、0.1715±0.01、0.1868±0.03、P均<0.05)；心肌胶原含量A、B、C组逐渐增高(35.59±1.09、38.94±0.67、40.69±0.75 ng/ml分别为P>0.05、P<0.05、P<0.05)；MMPs-3、9表达与心肌病理积分呈正相关(r分别为0.669、0.667, P均<0.05)，与胶原含量呈正相关(r分别为0.482、0.679，P均<0.05)。 结论 新生鼠窒息后心肌MMPs-3、9过度激活，继发胶原含量增高，MMPs-3、9活性与心肌病理损害密切相关。提示MMPs参与了窒息后心肌损害，可能是心肌间质重塑的因素之一。

目的 研究刺五加皂甙(ASE)预处理诱导PC12细胞对缺血的耐受及相关机制。 方法 采用MTT比色分析、细胞形态学观察、Western Blot法以及凝胶电泳迁移实验(EMSA)等方法比较ASE预处理对PC12细胞缺血模型(氧葡萄糖剥夺模型)的影响。 结果 在PC12细胞缺血模型中，9 h氧葡萄糖剥夺可明显降低PC12细胞活力，细胞存活率为(49.12±3.22)%。然而ASE 24 h预处理则显著抑制9 h氧葡萄糖剥夺对细胞的损伤，细胞存活率显著提高(67.97±2.92)%，实验组与对照组间相比较差异有显著统计学意义(F＝473.67，P<0.01)；细胞形态学显示，刺五加皂甙(终浓度50 μg/ml)预处理再缺血处理9 h，可明显减轻缺血9 h所致的细胞损害，较多细胞保留突起，突起网络依然存在，胞体完好。Western Blot结果表明ASE预处理能明显增加缺氧诱导因子-1α(HIF-1α蛋白)表达，差异有显著统计学意义(F＝167.18，P<0.01)；ASE预处理诱导表达的HIF-1具有生物学活性，它能与DNA结合，并激活下游基因促红细胞生成素(EPO蛋白)的表达，差异亦有显著统计学意义(F＝128.37，P<0.01)。 结论 ASE预处理可以诱导PC12细胞对缺血的耐受，其诱导耐受的作用可能与ASE预处理诱导PC12细胞HIF-1α稳定表达、提高HIF-1与DNA结合活性以及增加其下游基因EPO蛋白表达有关。