2007年 · 第45卷第01期

目的 评价不同吸氧浓度(fraction of inhaled oxygen, FiO2)及吸氧时间在新生小鼠视网膜病中的致病作用。 方法 选择7日龄(P7)新生C57BL/6J小鼠204只，分为8组：组1~组3(每组均为24只)分别吸30%氧气5、7、9 d，组4~组6(每组均为24只)分别吸50%氧气5、7、9 d，组7(n＝30)吸75%氧气5 d，组8(n＝30)对照组在空气中生长。采用视网膜铺片法经ADP酶染色，观察吸氧后视网膜血管形态的动态改变；视网膜切片经常规HE染色，计数平均每只小鼠每张切片上突破视网膜内界膜的新生血管内皮细胞核数目，以定量反映视网膜血管的增生情况。 结果 (1)视网膜铺片结果：①FiO2为30%：吸氧5 d或7 d后视网膜血管形态全部正常；吸氧9d后深层血管网轻度阻塞，出氧箱2 d后迅速恢复正常，至P21发育成熟。②FiO2为50%：吸氧5 d后视网膜血管较明显收缩，视网膜中央较大区域无血管灌注，出氧箱2 d后出现较多新生血管，但出氧箱5 d后血管形态基本恢复正常；随着吸氧时间的延长，视网膜血管异常程度逐渐减轻，恢复更快。③FiO2为75%：吸氧5 d后视网膜血管明显收缩，视网膜中央大片区域无血管灌注，出氧箱2 d后出现新生血管，P17~P21达到高峰；延长吸氧时间后母、幼鼠死亡率明显上升。(2)视网膜切片结果：仅组7(FiO275%×5d)新生血管内皮细胞核数目达(41.9±2.8)个，与其余各组(均<1个)差异有显著统计学意义(P<0.0001)，其余各组间差异均无统计学意义。 结论 吸氧浓度和持续时间可影响视网膜血管的发育，长时间高浓度吸氧导致不可逆的血管增生性改变，临床上应尽量避免。

目的 对足月新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)生后6 h内振幅整合脑电图(aEEG)的变化及其在HIE早期诊断和神经学预后评估的价值进行初步探讨。 方法 对2003年5月至2005年2月间在我院新生儿病房住院的33例足月HIE患儿在生后6 h内进行aEEG描记，并将aEEG监测结果与HIE患儿临床分度及18个月时的神经学预后进行相关性分析，分析其在HIE早期诊断和神经学预后预测中的价值。 结果 33例HIE患儿中，aEEG正常20例(60.6%)，轻度异常5例(15.2%)，重度异常8例(24.2%)。33例HIE患儿中，轻度HIE 17例(51.5%)，中度HIE 9例(27.3%)，重度HIE 7例(21.2%)。25例进行神经预后分析，其中19例神经学预后正常， 1例伤残(智力缺陷)，5例死亡。aEEG分类结果与HIE临床分度及其神经学预后均相关性强。aEEG异常预测新生儿中重度HIE的敏感性为100%，特异性为81.3%，阳性预测值为85.0%，阴性预测值为100%；预测HIE异常神经学预后的敏感性为100%、特异性为90.9%、阳性预测值为93.3%和阴性预测值为100%。 结论 对足月HIE新生儿生后6 h内aEEG监测能早期预测HIE病情轻重程度并预测其神经学预后。

目的 探讨苍白球MRI信号改变与高胆红素血症的严重程度及其相关因素关系，为胆红素脑病诊断与预后判定提供客观依据。 方法 36例高胆红素血症新生儿(TSB>342 μmol/L)在生后[10±6(2~34)]d接受头部MRI检查。场强1.5~3.0 Tesla，扫描序列为T1WI, T2WI和DWI。2名不知被检者病史的放射科医师分析MRI结果。 结果 首次MRI有20例苍白球T1WI呈对称性高信号。有苍白球信号改变组的TSB、B/A及UCB均显著高于无改变组[(605.28±89.19) μmol/L vs.(438.19±67.89) μmol/L, (1.08±0.18) vs.(0.77±0.16), (555.49±92.3) μmol/L vs. (412.01±54.8) μmol/L，P＝0.000]，所有MRI-DWI均未见信号改变； TSB在342.0~427.5 μmol/L者9例，未见苍白球信号改变，427.5~513.0 μmol/L者7例，有改变者3例，超过525.0 μmol/L 20例，有改变者17例，黄疸程度与苍白球信号改变有密切关系(χ2＝15.000, P＝0.000)；15例ABE苍白球T1WI均呈对称性的高信号(χ2＝17.601, P＝0.000)，同时3例T2WI苍白球也呈对称性稍高信号(TSB分别为，745.3 μmol/L, 735.7 μmol/L, 707.6 μmol/L)。7日内入院的25例中，16例苍白球有改变，平均入院时间显著晚于9例无改变者[(121.5±39.9) h vs. (68.9±35) h，P<0.03]。 6例接受了第2次MRI，其中3例ABE有2例苍白球信号转为T2WI高信号，临床均表现脑瘫，另1例苍白球信号正常，但有听力异常；余3例非ABE患儿，2例苍白球信号转为正常，1例两次均无苍白球信号异常，目前发育正常。 结论 MRI T1WI苍白球对称性高信号，与高胆红素血症的严重程度及暴露时间密切关系，是新生儿ABE的重要表现特征。T1WI高信号转变为T2WI高信号可能提示预后不良。

目的 制备血氧浓度波动所致新生大鼠增生性视网膜病变的模型，进一步探讨早产儿视网膜病(ROP)的发病机制。 方法 208只新生SD大鼠，随机分为氧气组和对照组，采用免疫组织化学方法以及RT-PCR技术，观察生后14、 18、 25 d视网膜组织中血管内皮生长因子(VEGF)及Flk-1(VEGFR-2)蛋白和mRNA表达水平。并且在氧气暴露后4 d，取幼鼠眼球进行视网膜铺片以及组织石蜡切片HE染色，观察视网膜血管的改变情况。 结果 (1)氧气组18 d幼鼠视网膜无血管面积明显大于空气组(P<0.05)，且突破内界膜的内皮细胞核数目明显多于空气组(P<0.05)，表明模型建立成功。(2)氧气组视网膜VEGF及Flk-1在14、 18 d时表达均明显强于对照组(P<0.05) ，在25d时阳性表达明显减弱，与对照组比较，差异无统计学意义(P>0.05)。且VEGF及Flk-1在18 d时表达最强，与14及25 d比较，表达强度差异均有统计学意义(P<0.05)。(3)氧气组视网膜组织VEGF mRNA及Flk-1 mRNA表达水平在14 d、 18 d均明显高于对照组(P<0.05)。25 d时氧气组VEGF mRNA及Flk-1 mRNA表达水平均下降，与对照组比较，差异无统计学意义(P>0.05)。 结论 反复血氧浓度的波动可导致新生大鼠视网膜血管增生性病变，血管增生性视网膜组织中VEGF及Flk-1表达明显增强。本研究还提出，ROP视网膜血管增生过程中存在一种正反馈机制即VEGF与Flk-1的上调协同作用，共同促进视网膜新生血管的形成。

目的 分离新近发现的儿童呼吸道病毒病原——人偏肺病毒(hMPV)，并分析其感染的临床表现。 方法 选取重庆医科大学儿童医院2004年12月至2005年7月因呼吸道感染住院的患儿，无菌采集鼻咽吸取物。离心后细胞沉淀用直接免疫荧光法检测呼吸道合胞病毒、腺病毒、流感病毒A/B、副流感病毒1、2、3型等常见呼吸道病毒病原。上清接种于Vero-E6和LLC-MK2细胞，进行hMPV分离，出现细胞病变者，扩增hMPV N、F基因，F基因扩增产物序列递交GenBank。收集并分析hMPV感染患儿的临床资料。 结果 收集的86份鼻咽吸取物中，有6份接种Vero-E6和LLC-MK2细胞后出现细胞病变，且用RT-PCR成功扩增出hMPV N、F基因片段，证实hMPV分离成功。在6例阳性标本中，2例收集于冬季，2例春季，2例夏季。6位患儿年龄都小于2岁，诊断为支气管肺炎(2/6)、毛细支气管炎(2/6)、婴幼儿哮喘(1/6)和上呼吸道感染(1/6)。副流感病毒3和腺病毒可为协同感染病毒病原。 结论 首次在中国内地成功分离获得6株hMPV，从活病毒水平证实hMPV是导致中国儿童下呼吸道感染的病毒病原，hMPV感染的临床表现与呼吸道合胞病毒感染相似。采用病毒分离技术，hMPV在呼吸道感染患儿中的检出率约为7%(6/86)。

目的 探讨N-乙酰半胱氨酸对新生小鼠肝细胞内毒素损伤时的保护作用，为新生小鼠内毒素肝损伤的防治研究提供理论依据。 方法 采用胶原酶消化组织块法分离新生小鼠的肝细胞，将细胞分内毒素处理组(LPS组)及N-乙酰半胱氨酸预处理组(NAC组)。 LPS组培养基中加入LPS 10 μg/ml; NAC组先在培养基中加入N-乙酰半胱氨酸5 mmol/L，孵育1 h后再加入LPS 10 μg/ml。分别于加入LPS 0、6和12 h收集各组肝细胞上清和肝细胞，每组12例，以生化法检测培养上清的丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase，ALT)和一氧化氮(nitric oxide，NO)的水平，并以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测各组细胞诱导型一氧化氮合成酶(induced nitric oxide synthase，iNOS)mRNA的表达。 结果 LPS组在0、6、12 h的ALT值分别为(21.1±4.78) U/L、(59.8±8.59) U/L、(89.6±15.30) U/L，NO水平分别为(1.6±0.31) μmol/L、(6.6±0.81)μmol/L、(7.8±1.01) μmol/L，iNOS mRNA水平分别为0.17±0.023、 0.71±0.091、 0.71±0.097。LPS组的ALT和NO、iNOS mRNA水平在6、12 h较0 h明显升高，差异有极显著统计学意义(P<0.01)；NAC组上清中ALT和NO水平在0、6、12 h分别为(20.6±5.98) U/L、(40.8±7.30) U/L、(55.4±5.48) U/L和(1.7±0.26) μmol/L、(3.2±0.71) μmol/L、(4.0±0.71) μmol/L，肝细胞iNOSmRNA的表达水平在0、6、12 h分别为0.18±0.026、0.41±0.060、0.40±0.067。经NAC预处理后，在6、12 h上清中ALT的水平与LPS组比较明显降低，而且NO水平以及肝细胞iNOS mRNA的表达与LPS组比较也明显降低，差异均有极显著统计学意义(P<0.01)。 结论 NAC对新生小鼠肝细胞内毒素损伤有保护作用，NAC可能通过抑制LPS激活iNOS而发挥保护作用。

目的 研究维生素D受体基因起始密码子(VDRSC)多态性在晚发性佝偻病组、维生素D缺乏状态组及正常对照组中分布频率的差异，探讨晚发性佝偻病的遗传易感因素。 方法 用聚合酶链反应——限制性长度多态性(RFLP)分析晚发性佝偻病组30例、维生素D缺乏状态组35例以及正常对照组60例VDRSC多态性的分布频率。 结果 三组VDRSC基因型分布频率差异有统计学意义(χ2＝13.184，P＝0.010)；等位基因分布频率差异也有统计学意义(χ2＝8.975，P＝0.011)。组间两两比较晚发性佝偻病组VDRSC基因型和等位基因与其他两组比较差异有统计学意义，其FF型频率(56.7%)明显高于正常对照组(21.7%, P＝0.006)，也明显高于维生素D缺乏状态组(22.9%，P＝0.002)；晚发性佝偻病组F型(70.0%)明显高于正常对照组(48.3%, P＝0.006)，也明显高于维生素D缺乏状态组(47.1%, P＝0.009)。多项分类Logistic回归分析结果显示，在调整了其他危险因素后，FF型仍是晚发性佝偻病的危险因素，相对危险度(OR)＝3.120。 结论 VDRSC多态性可能决定晚发性佝偻病的遗传易感性。

目的 探索在我国目前的国情下，针对语言发育落后儿童的干预模式。 方法 随机选择上海青浦地区6个社区13~24个月的幼儿206名，用问卷方式了解所有儿童自发表达的词汇量，选出词汇量低于第5百分位的异常儿童14名。在为期12个月的干预中，首先由儿童保健专家对每个儿童进行发育评估，并根据个体的语言水平和家庭情况，制定干预计划。然后由经培训的幼教老师深入家庭、托幼机构实施干预计划。采用Gesell婴幼儿发育量表进行干预前后的发育评估。 结果 经12个月的干预后Gesell言语能和应人能的发育商(DQ)均有显著提高(P<0.01)，应物能也有显著提高(P<0.05)。言语能和应人能的提高都显示出一个明显的追赶效应，发育水平分别提高(18.0±5.3)个月和(16.2±5.9)个月。经干预后71.4%幼儿的语言水平达到正常。 结论 所采用的医教结合模式对1~2岁幼儿进行早期语言干预有效，能明显提高幼儿的语言水平和沟通能力。

目的 研究广西汉族人群在FⅧ基因内含子13(CA)n及内含子22(GT)n(AG)n两位点的基因频率分布，并用于血友病甲的家系分析。 方法 采用聚合酶链反应(PCR)扩增FⅧ基因内含子13(CA)n及22(GT)n(AG)n的多态性片段，银染色法显示扩增结果；任选一标本，测其扩增片段长度获得其i13(CA)n及i22(GT)n(AG)n的具体重复数，从而推算出所有标本两位点的二核苷酸重复数。 结果 在91名广西汉族人135条X染色体中，共检出6种i13(CA)n和4种i22(GT)n(AG)n，i13(CA)n位点基因频率在0.0002~0.5408间，多态信息量(polymorphism information content，PIC)为0.5899，实际杂合度为0.6364(28/44)；i22(GT)n(AG)n位点基因频率为0.0444~0.4963, PIC为0.5359，实际杂合度为0.5227(23/44)。13个有阳性家族史的血友病家系，用该方法进行家系分析， 9个家系可作出诊断，可诊断率为69%。 结论 (1) i13(CA)n、i22(GT)n(AG)n在广西汉族人中PIC高，是血友病甲家系分析中的有用位点；(2)相比FⅧ相关的某些单个限制性片段长度多态性位点(restrictive fragment length polymorphism, RFLP)，i22(GT)n(AG)n是一个较为有用的位点。

目的 分析晕厥儿童的病因分布并对各种病因晕厥儿童的临床特征加以分析，以提高其诊断效率。 方法 回顾性分析在北京大学第一医院儿科就诊的以"晕厥"为主诉的154例患儿的临床资料。 结果 自主神经介导的反射性晕厥是晕厥患儿的最常见的病因，占所有患儿的65.6%。其次为心源性晕厥，占所有患儿的6.5%。此外，还包括精神性疾病、神经源性及代谢性疾病导致的晕厥。自主神经介导的反射性晕厥、精神性晕厥患儿多见于青春期女孩，发病年龄大于心源性、神经源性及代谢性疾病导致的晕厥患儿(均P<0.05)；心源性及精神性晕厥患儿的晕厥发作次数则显著多于自主神经介导的反射性晕厥、神经源性及代谢性疾病导致的晕厥患儿(均P<0.05)。通过logistic回归分析显示，患儿的晕厥次数及晕厥发生时的体位对判断晕厥病因具有重要的意义(P<0.05)。心电图的检查对发现心源性晕厥儿童具有重要意义。其他检查包括脑电图、Holter心电图、超声心动图检查及精神学评估在寻找晕厥儿童病因方面的意义有限。直立倾斜试验对诊断及鉴别诊断自主神经介导的反射性晕厥具有重要的意义。 结论 导致儿童晕厥的病因众多，可选择的辅助检查也有多种，但详细的病史收集、体格检查及心电图检查是诊断晕厥儿童的基础。

目的 研究扩增后脐血巨核细胞的生物学特性和功能，为脐血巨核细胞的扩增和临床应用提供依据。 方法 收集足月妊娠健康新生儿的脐带血，免疫磁珠法分离出其中的CD34＋细胞。采用血小板生长因子(thrombopoietin, TPO)＋干细胞因子(stem cell factor, SCF)＋白细胞介素3(interleukin -3, IL-3)＋IL-6和TPO＋SCF两种细胞因子组合，将富集的脐血CD34＋接种于无血清无基质细胞的悬浮培养体系中，分别在3、7、10、14 d收集扩增产物。运用流式细胞术检测巨核细胞的表型；血浆块法检测巨核细胞集落(colony forming unit-megakaryocyte ，CFU-MK)的形成；对巨核细胞进行DNA含量检测以评价其成熟程度；血小板体外活化实验及SCID小鼠体内移植实验评价扩增后巨核细胞的功能。 结果 不同细胞因子组合和培养时间扩增后，巨核细胞的数量和生物学特性不同。随着培养时间的延长，巨核细胞(CD41＋)的数量逐渐增加，但培养至14 d时增势减缓。因子组合TPO＋SCF＋IL-3＋IL-6各时间段的扩增能力(分别扩增5.2、40.7、121.2、149.7倍)均比因子组合TPO＋SCF(分别扩增3.8、27.4、85.9、106.5倍)强，但因子组合TPO＋SCF的扩增能力仍能满足临床的需要。巨核祖细胞(CD34＋CD41＋)的数量在第7天时最多(分别增加43.4和36.2倍)，这也被CFU-Mk所证实。DNA含量检测发现，随着培养天数的增加，多倍体细胞所占的百分比增加。体外血小板活化实验证实，扩增的巨核细胞在体外可产生血小板，有正常巨核细胞功能。移植后两组小鼠的骨髓中均检测到人CD45＋和CD41＋细胞。小鼠外周血中人血小板在移植后3 d就可测到，5 d就可达到高水平(分别为20.7%和17.9%)，维持20 d以后才逐渐下降。 结论 通过对扩增后巨核细胞的生物学特性的研究，有助于寻找有效、简便、易于植入受者体内的扩增方法。体外扩增的脐血巨核细胞可植入骨髓并产生功能正常的血小板。