2006年 · 第44卷第06期

目的 了解原发性免疫缺陷病的临床发病情况，加强临床医师对该类疾病的认识，促进今后防治工作的开展。 方法 回顾性分析1974年1月至2003年12月我院93例原发性免疫缺陷病患儿的临床资料。 结果 93例原发性免疫缺陷病患儿中，以抗体缺陷为主者占39.8%(37/93)；以联合免疫缺陷者占22.6%(21/93)；以T淋巴细胞缺陷为主者占14.0%(13/93)；其他明确的免疫缺陷综合征者占12.9%(12/93)；吞噬功能缺陷者占9.7%(9/93)；补体缺陷者占1.1%(1/93)。从年度诊断的原发性免疫缺陷病病例数来看有逐年增多的趋势，1996年以后诊断例数呈现大幅度上升，共诊断50例。死亡病例共计16例，以联合免疫缺陷病为主。男∶女＝3∶1。 结论 我国各类原发性免疫缺陷病均有发病，并且随着诊断技术水平的不断提高，临床诊断的病例日益增多，已成为临床，特别是儿内科的一组重要的疾病，应引起全国临床医师的注意。

目的 探讨嗜酸性粒细胞和肥大细胞在过敏性紫癜性肾炎(HSPN)的发生发展中的作用。 方法 用荧光酶标法测定46例过敏性紫癜性肾炎(HSPN)患儿血清嗜酸性阳离子蛋白(ECP)水平；采用免疫酶组织化学技术检测32例过敏性紫癜性肾炎患儿肾组织中类胰蛋白酶表达细胞(肥大细胞)的数量和分布情况，并分析其与肾脏病变程度之间的关系。 结果 ①HSPN活动期血清ECP水平为(16.3±6.5) μg/L，显著高于正常对照组[(3.1±1.7) μg/L(P<0.01)]和治疗缓解组[(3.9±1.4) μg/L(P<0.01)]；首次发作时患儿血清ECP水平为(23.0±8.7) μg/L，明显高于治疗后复发组ECP水平[(9.3±2.2) μg/L(P<0.01)]；而缓解组和对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。②免疫组化结果显示正常肾组织中极少有肥大细胞，定数为(4.4±2.4)个/mm2，而过敏性紫癜性肾炎患儿肾间质中浸润肥大细胞显著增多，且随肾脏病理损害程度的加重而更加明显，肾脏病理分级Ⅱ级患儿肾组织中肥大细胞为(27.2±19.2)个/mm2，Ⅲ级为(42.1±16.4)个/mm2，Ⅳ级为(77.9±15.0)个/mm2，过敏性紫癜性肾炎各组与对照组比较、Ⅳ级与Ⅲ级比较、Ⅲ级与Ⅱ级比较差异均有统计学意义。 结论 ECP水平反映了过敏性紫癜性肾炎的活动情况，肾脏病变与肾间质中肥大细胞浸润程度相平行，嗜酸性粒细胞和肥大细胞在HSPN发生和发展中起了重要作用。

目的 系统观察过敏性紫癜(HSP)急性期调节性T细胞(Tr)亚群及辅助性T细胞亚群(Th1/ Th2)的变化，探讨HSP急性期免疫失衡的发病机制。 方法 流式细胞术检测20例HSP急性期患儿各种调节性T细胞亚群(CD4＋CD25＋Tr、Tr1、Th3等)和辅助性T细胞亚群(Th1、Th2)的改变，并采用逆转录聚合酶链反应(RT－PCR)和荧光定量聚合酶链反应(Real－time PCR)检测其外周血单个核细胞(PBMC)Foxp3 mRNA的表达。同期20例同龄健康儿童作为对照。 结果 HSP急性期CD3＋CD8-INF－γ－IL－4＋(Th2)细胞显著增高(P<0.05)，Th1/ Th2比值显著降低(P<0.05)。各调节性T细胞亚群CD4＋CD25＋Tr、CD4＋ IL－4－IL－10＋(Tr1)、CD4＋ TGF－β＋ (Th3)细胞与正常对照组比较均显著降低(P均<0.05)。HSP组PBMC Foxp3 mRNA的表达与正常对照组比较亦显著降低(0.22±0.05 vs. 66.32±9.25，P<0.001)。 结论 HSP急性期存在明显的免疫失衡，Th2优势明显；调节性T细胞CD4＋CD25＋ Tr、Tr1、Th3数量减少导致的免疫抑制效应不足可能是导致HSP免疫失衡的重要原因，而HSP患儿调节性T细胞减少与Foxp3表达降低有关。

目的 了解双歧杆菌基因组DNA(bDNA)的免疫调节作用、双歧杆菌制剂抗过敏可能的机制。 方法 使用bDNA体外刺激脐带血单个核细胞(CBMC)，以空白、DNase Ⅰ完全酶解的bDNA(d－bDNA)和人DNA(hDNA)作为对照。在刺激后不同时间点终止培养，测定培养上清中细胞因子IL－12、IL－10的水平；计数分泌IFN－γ和IL－4的阳性细胞数量；并检测细胞内信号蛋白T－bet(T－box expressed in T cells) 、GATA3 mRNA表达强度的变化。 结果 刺激12 h bDNA组细胞培养上清IL－12水平明显高于其他对照组(P<0.05)，这种IL－12水平升高也发生在刺激后24、48 h。刺激12、24 h后，bDNA组细胞上清中IL－10水平比对照组、d－bDNA组和hDNA有所降低，但无统计学意义(P>0.05)。bDNA组加佛波脂(PMA)刺激后，分泌IFN－γ的阳性细胞数高于对照组(P<0.05)。bDNA组分泌IL－4阳性细胞数少于对照组、d－bDNA组及hDNA组(P<0.05)。bDNA组细胞在6、12、24 h后，细胞中核转录因子T－bet mRNA的表达强度比对照组增强(P<0.05)。bDNA刺激不同时间后，细胞中核转录因子GATA3 mRNA的表达强度与其他组相比无明显差异。 结论 双歧杆菌基因组DNA上调CBMC IL－12、IFN－γ分泌及T－bet表达，下调IL－4分泌，促进CBMC Th1应答。这可能是双歧杆菌产生抗过敏作用的重要机制之一。

目的 观察卡介苗(BCG)新生期接种和呼吸道合胞病毒(RSV)感染对小鼠实验性哮喘的联合作用。 方法 新生期小鼠分5组：对照组、鸡卵白蛋白(OVA)组、BCG＋OVA组、RSV＋OVA组、BCG＋RSV＋OVA组，除对照组外，其他各组为哮喘组都进行OVA致敏和激发。最后一次激发后24 h内测气道高反应性，进行支气管肺泡灌洗，观察支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞数及分类，ELISA方法检测肺泡灌洗液中细胞因子含量和血清中OVA特异性IgE水平，肺组织HE染色进行炎症病理学分析。 结果 (1)各哮喘组BALF中白细胞总数及各类炎症细胞数都比对照组显著升高。BCG＋OVA组的白细胞总数、嗜酸性粒细胞和淋巴细胞计数显著低于其他哮喘组(P<0.05或0.01)。(2)各哮喘组与对照组比较BALF中IL－4水平显著增高(P<0.05)，IFN－γ水平显著减低(P<0.05)，4组哮喘组之间两两比较差异无统计学意义。各实验组IL－10水平差异无统计学意义。(3)各哮喘组血清中OVA特异性IgE水平都比对照组明显增高(P<0.05或0.01)，各哮喘组之间比较差异无统计学意义。(4)随吸入乙酰甲胆碱浓度增加各组气道反应性明显增加。RSV＋OVA组和BCG＋RSV＋OVA组的气道反应性最高，其后依次是OVA组、BCG＋OVA组、对照组。RSV＋OVA组和BCG＋RSV＋OVA组间比较差异无统计学意义。(5)各哮喘组的炎症评分都显著高于对照组。BCG＋OVA组的细支气管周围炎症和支气管周围嗜酸性粒细胞浸润百分率显著低于另外三组(P均<0.05)，肺泡炎症反应明显低于OVA组和BCG＋RSV＋OVA组(P均<0.05)。 结论 新生期BCG接种在OVA致敏/激发的小鼠哮喘模型中能减轻哮喘炎症和气道高反应性，但这种抗哮喘作用可被RSV感染逆转。

目的 了解2003—2004年广州地区儿童呼吸道感染常见病原肺炎链球菌和流感嗜血杆菌对常用抗生素的敏感性，以便有效指导临床合理用药和预防。 方法 对2003—2004年在广州市儿童医院就诊的1565例上呼吸道感染儿童鼻咽分泌物进行培养，分离肺炎链球菌和流感嗜血杆菌；采用纸片扩散法及E－test方法对分离株进行常用抗生素敏感性检测。 结果 从1565例呼吸道感染儿童鼻咽部分离肺炎链菌球共172株，流感嗜血杆菌484株。172株肺炎链球菌对常用抗生素耐药株数(耐药率)分别为：青霉素55(32.0%)、阿莫西林/克拉维酸19(11.1%)、头孢曲松56(32.6%)、头孢呋辛31(18.1%)、头孢克洛68(39.5%)、红霉素142(82.6%)、四环素135(78.5%)、氯霉素42(24.4%)、复方磺胺甲基异FDC2唑150(87.2%)、克林霉素119(69.2%)、氧氟沙星5(3.1%)；肺炎链球菌的青霉素不敏感株对β－内酰胺类、红霉素、复方磺胺甲基异FDC2唑耐药率明显高于青霉素敏感株，且多重耐药率在90%以上。484株流感嗜血杆菌中，143株β－内酰胺酶阳性，产酶率为29.5%，484株流感嗜血杆菌的耐药株数(耐药率)分别为：氨苄西林194(40.1%)，阿莫西林/克拉维酸16(3.4%)、头孢曲松20(4.1%)、头孢呋辛9(1.9%)、头孢克洛27(5.6%)、复方磺胺甲基异FDC2唑272(56.2%)、四环素252(52.1%)、氯霉素84(17.4%)、阿奇霉素10(2.1%)、氧氟沙星3(0.6%)。 结论 广州地区儿童呼吸道肺炎链球菌和流感嗜血杆菌耐药形势严峻，与该地区前3年资料比较，肺炎链球菌对青霉素敏感性有所增加，但对头孢曲松耐药性增加，青霉素不敏感株的多重耐药率较高，以红霉素、四环素、复方磺胺甲基异FDC2唑多重耐药为主要特点。流感嗜血杆菌的产酶率上升，导致菌株对氨苄西林耐药性明显增高，对头孢二、三代抗生素、阿莫西林/克拉维酸、阿奇霉素有较高的敏感性。

目的 研究早产儿脑对外界刺激的反应性与神经发育的关系，早期对早产儿进行脑功能的评价，为了解其神经发育水平、估价预后提供客观证据。 方法 对不同胎龄的早产儿进行声刺激，用近红外光谱技术，观察声刺激后脑反应性的变化，并进行神经发育随访，评价早产儿早期脑反应性与其后神经发育的关系。 结果 本组早产儿生后对声刺激均显示出不同程度的反应，30～32周的早产儿声刺激后开始反应时间、高峰出现时间、停止刺激后开始恢复时间分别为(278±94)s、(446±67)s、(199±52)s，明显长于足月儿的(107±30)s、(264±51)s、(131±46)s。氧合血红蛋白、还原血红蛋白、脑组织氧饱和度的最大反应值分别为(0.3±0.3)%、(0.7±0.5)%、(0.3±0.3)%，明显低于足月儿的(1.7±0.7)%、(1.7±0.8)%、(1.6±0.7)%。胎龄大于32周的早产儿反应的时间及最大反应值与足月儿相比，差异无统计学意义。围产期脑损伤可影响脑的反应性，早产儿脑反应性与纠正胎龄40周时的神经行为评分及神经发育相关。随访过程中颅脑超声表现为脑发育异常者，其新生儿期对声刺激无反应的比例明显高于脑发育正常者。 结论 近红外光谱技术能评价新生儿的脑反应性，早产儿具备对声刺激后的脑反应性，早期的脑反应性与神经发育水平有关。

目的 建立实时聚合酶链式反应(PCR)技术检测儿科呼吸道标本中呼吸道合胞病毒(RSV)的方法。 方法 (1)根据RSV N基因序列设计合成分别用于扩增RSV A亚型和B亚型的TaqMan探针和引物，建立实时PCR方法，进行灵敏度和特异性检测。(2)采用实时PCR检测61例RSV检测阳性的冻存标本和103例新收集的呼吸道标本，并与病毒分离、间接免疫荧光、巢式PCR结果相比较。 结果 (1)实时PCR对A亚型RSV检测的灵敏度为5.25 pfu ，B亚型为3.75 pfu，与巢式PCR相同。(2)实时PCR检测其他呼吸道病毒阳性标本，结果均为阴性；A亚型和B亚型之间无交叉。(3)实时PCR检测其他方法检测过的RSV阳性的冻存标本61例，A亚型(30例)阳性为27例(90%)，B亚型(31)阳性为27例(87.1%)。(4)103例新鲜标本中，实时PCR检出RSV 35例(A亚型7，B亚型28)，阳性率34.0%，其中巢式PCR阳性31例，阳性率30.1%；间接免疫荧光阳性22例，阳性率21.4%；病毒分离阳性9例，阳性率8.7%。实时PCR阴性的68例，其他方法均为阴性。实时PCR与三种方法的一致性检验，一致率在74.76% ～ 96.12%(P均<0.01)；差异性检验结果说明，实时PCR阳性检出高于间接免疫荧光和病毒分离(P均<0.01)，而与巢式PCR差异无统计学意义(P>0.05)。 结论 实时PCR检测儿科鼻咽分泌物标本中RSV的方法，敏感性、特异性和可重复性好，可用于急性呼吸道感染患儿标本中的RSV检测。

目的 探讨共刺激分子OX40/OX40L在小鼠过敏性哮喘发病机制中的作用。 方法 制作BALB/c小鼠哮喘模型，治疗组在致敏阶段给予抗－OX40L单克隆抗体，并设两个对照组：哮喘模型组和IgG抗体组。检测各组支气管肺泡灌洗液中白细胞总数并进行分类记数；ELISA法检测支气管肺泡灌洗液中白细胞介素－4与γ型干扰素水平；光镜观察肺组织形态学改变和OX40的表达情况。 结果 治疗组支气管肺泡灌洗液中白细胞总数为(26.6±4.6)×106/ml，嗜酸性粒细胞百分数(15.1±2.6)%，淋巴细胞百分数(7.0±0.9)%，均低于两对照组；IL－4水平为(672±58) pg/ml，低于两对照组，而INF－γ水平为(0.86±0.09 )pg/ml，高于两对照组，差异均有统计学意义；治疗组肺组织形态学明显改善，OX40的表达弱于两对照组；治疗组小鼠的哮喘症状和体征较两对照组明显改善。 结论 在哮喘小鼠的致敏阶段给予抗OX40L单克隆抗体，能有效控制Th1/Th2的失衡和肺组织的炎症反应，并能够明显减轻哮喘发作的症状和体征。

目的 探讨5溴脱氧尿苷(Brdu)和端粒酶逆转录酶(TERT)标记肺干细胞特点及其增殖、分化在肺发育和高氧肺损伤修复中的作用。 方法 (1) 3 d新生鼠分为高氧组(95%左右氧气7 d)、高氧组siRNA干预组(高氧同时TGF－β1 siRNA经腹腔注入，隔日1次，共3次)和正常对照组，处死前自腹腔注入Brdu。(2)免疫组化法检测Brdu和TERT阳性显色细胞，并分别使用碱性磷酸酶和辣根过氧化氢酶两种显色系统作Brdu/TERT和SPC抗体免疫双染。(3)分离新处死肺细胞，立即涂片，做Brdu和TERT免疫标记，计数阳性细胞百分比。 结果 (1)高氧组可见肺泡壁较薄、结构简单化、肺泡大小不均，有些肺泡融合、体积增加，肺泡腔有较多脱落的AECII。(2)肺组织Brdu阳性显色部位主要在各级支气管黏膜下和肺间隔，支气管黏膜上皮及肺泡壁有散在分布，阳性细胞数量较少，多呈立方形、核大；TERT阳性显色在外周肺组织肺间隔和肺泡壁部位，数量明显少于Brdu [表达积分(1.61±0.83 ) vs. (0.62±0.55)，P<0.05]，且阳性显色呈不对称性，即多集中在肺某一区域；高氧肺组织Brdu和TERT阳性标记细胞稍高于正常对照组[(1.43±0.85) vs. (1.61±0.83)；(0.62±0.55) vs. (0.83±0.84)，P>0.05]。(3)SPC分别和Brdu、TERT双染，可见少量阳性细胞。(4)肺细胞SPC免疫显色部位在胞浆，呈棕褐色，阳性细胞大小不一，高氧组和正常组显色细胞数无明显区别，阳性细胞百分比分别为80.3%、78.6%。(5)肺细胞Brdu阳性显色细胞明显少于SPC阳性细胞，体积明显大于未显色细胞，核形态主要为致密圆形，个别呈杆状；高氧组阳性细胞数略多于正常组，阳性细胞百分比分别为28.5%、21.4%。(6)TERT阳性显色细胞更为少见，阳性细胞体积多较小，核呈多种形态包括致密圆形、疏松圆形、杆状、分叶状；正常组和高氧组阳性细胞百分比分别为1.5%、2.3%。 结论 (1)Brdu和TERT可作为不同分化能力的肺干细胞标记，其中TERT更能反映肺干细胞特征或是成体肺干细胞标记更特异性的指标，Brdu标记从干细胞增殖分化尚保留干细胞特征的TAC。(2)高氧肺损伤时肺干细胞出现有限增殖分化。