2005年 · 第43卷第12期

目的 对82例儿童急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia ，ALL)治疗结果进行分析，探讨如何提高儿童ALL无病生存率。 方法 应用南方ALL99方案治疗82例ALL患儿。该方案引进德国BFM95和香港-新加坡ALL97方案，作了少许改动，形成南方ALL99方案。改动方面包括将三联鞘注中的氢化可的松换成地塞米松，将外院不规则化疗过的标危患者按中危治疗，将每一疗程开始时的中性粒细胞和血小板的标准提高到中性粒细胞≥1×109/L，血小板≥100×109/L。采用SPSS软件进行寿命表法分析。 结果 对1999年4月至2003年9月收治的82例ALL患儿按南方ALL99方案进行治疗，78例获完全缓解(complete remission，CR)，CR率为95%；13例患者因经济困难或其他原因失访。其中按南方ALL99方案坚持治疗的69例，预期2年无病生存率91%，预期5年以上无病生存率75%；因感染死亡3例(死亡率为4%)，复发死亡6例。 结论 引进德国BFM95和香港-新加坡ALL97方案而成的南方ALL99方案治疗儿童ALL疗效好，化疗相关死亡率低，该方案对中国人耐受性好，值得推广应用。

目的 从分子水平探讨丙戊酸(VPA)诱导白血病细胞凋亡的机制，为临床治疗白血病提供理论依据。 方法 将U937、Jurkat clone E6-1(Jurkat)、BALL-1分别分为1 mmol/L VPA组、1 mmol/L VPA＋1 μmol/L zVAD-fmk组(zVAD为N-苯甲基氧化炭酰-缬氨酸-丙氨酸-天冬氨酸)和空白对照组，作用72 h后在流式细胞仪上检测细胞凋亡；采用流式细胞仪检测各组细胞中Bcl-2、Bax和Bcl-xl的平均荧光指数(MFI)以及胱冬肽酶(caspase)3、8和9的含量；Western-blotting检测各组作用前后P44/42有丝分裂原激活蛋白激酶(MAPK)表达及磷酸化水平。 结果 1 mmol/L VPA诱导U937和Jurkat的凋亡率分别为(75.8±4.2)%和(53.5±5.9)%，与对照组比较，P<0.01；多caspase抑制剂zVAD-fmk可全部抑制U937凋亡，凋亡率为(2.9±0.4)%；可部分抑制Jurkat凋亡，凋亡率下降至(15.4±1.4)%，与1 mmol/L VPA组比较，P<0.01。1 mmol/L VPA未能诱导BALL-1凋亡(P>0.05)。VPA对3种细胞内Bcl-2、Bax和Bcl-xl无明显影响。VPA作用后U937中caspase-3水平由(14.09±1.19)%上升至(32.30±2.47)%，caspase-8水平由(4.58±1.41)%上升至(86.47±3.26)%，均P<0.01，caspase-9变化不显著。Jurkat中caspase-3由(12.01±1.63)%上升至(35.56±0.27)%，caspase-9由(13.89±1.71)%上升至(75.89±4.08)%，均P<0.01，caspase-8变化不显著。BALL-1中caspase-3略有减少，P<0.05。VPA作用后3种细胞均表现为P44/42MAPK蛋白总量及磷酸化水平下降，P<0.01。 结论 VPA通过激活caspase-3和caspase-8诱导U937凋亡；诱导Jurkat凋亡时涉及caspase-3、9的活化；抑制P44/42MAPK通路是VPA诱导凋亡的另一机制。VPA并非通过改变细胞中Bcl-2等的含量造成上述细胞凋亡。高表达Bcl-2可对抗VPA的作用。

目的 在体外实验中，研究脐血CD3AK细胞培养上清液(cord blood CD3AK supernatant, CS)对HL-60细胞增殖、分化和凋亡的影响。 方法 以不同浓度的CS(10% CS、15% CS、20% CS)作用于不同时间(3 d，6 d和9 d)的HL-60细胞为实验对象，应用细胞计数法结合锥虫蓝拒染法研究CS诱导的HL-60增殖情况。应用流式细胞仪分析CS作用前后细胞周期及细胞表面分化标志CD11b的变化，光学显微镜下观察细胞形态变化，氯化硝基唑蓝(NBT)还原实验研究细胞的NBT还原阳性百分率，从而研究HL-60细胞的分化。应用电子显微镜观察细胞凋亡，原位末端标记法研究CS作用前后HL-60细胞的凋亡变化。 结果 随CS作用时间的延长和剂量的增加，细胞增殖速度逐渐减慢。细胞周期分析显示，CS作用后G0期和G1期显著增多，S期显著减少，G2期和M期无明显变化，说明CS使细胞阻滞在G0和G1期。随CS作用时间的延长，细胞体积逐渐增大，3 d后被诱导的细胞表面开始表达分化标志物CD11b并出现细胞核型变化，NBT阳性细胞增多，随CS浓度的增加和作用时间的延长，这些变化越明显。20% CS诱导72 h后，被诱导的细胞出现凋亡，随诱导时间延长，凋亡细胞增多。 结论 CS能抑制HL-60细胞的增殖，诱导HL-60细胞分化和凋亡。

目的 通过对人类偏肺病毒(hMPV)特异性IgG抗体检测，初步了解北京地区人群中该病毒感染的状况。 方法 以大肠杆菌表达的hMPV核蛋白(N蛋白)为抗原，用Western-blot检测随机选取的116例血清标本中hMPV N蛋白特异性IgG抗体，以确定表达的hMPV N蛋白的抗原特异性。随后对1996年4月至1997年3月自首都儿科研究所附属儿童医院和北京宣武医院采集的门诊非呼吸道感染患者及正常儿童的体检血清710例进行hMPV N蛋白特异性IgG抗体检测。 结果 hMPV N蛋白的抗原特异性试验证明表达的hMPV的N蛋白特异性好。本组710份血清中，抗hMPV N蛋白IgG抗体总阳性率为17.2%(122/710)。其中<1个月的婴儿抗体阳性率为13.2%，1个月~的婴儿中抗体阳性率下降至6.1%，2个月~的婴儿中抗体阳性率降至最低(3.1%)，6个月~的婴儿中抗体阳性率上升至13.9%，在随后的几个年龄段内抗体阳性率维持在13.0%左右，30岁以后的人群中抗体阳性率有所升高，30岁~人群中达28.1%，40岁~人群中达32.3%，≥50岁的人群中达38.5%。 结论 研究中所应用的hMPV N蛋白的抗原特异性好；抗体的检测结果提示在北京地区的人群中hMPV的感染并不少见，血清抗体阳性率低的年龄组与文献报道感染发生率高的年龄组相符。

目的 了解早产儿是否存在维生素(Vit)K依赖因子水平低下及其与早产儿脑室周围-脑室内出血的关系，探讨产前补充维生素(Vit)K1对早产儿血浆VitK依赖因子水平的影响及对脑室周围-脑室内出血的预防作用。 方法 将有早产可能且至分娩时孕周不足35周的孕妇分为两组：对照组133例，在产前给予地塞米松注射；对照组44例，产前给予地塞米松＋VitK1。两组早产儿各30例留取脐动脉血离心零下20℃以下保存用凝固法检测Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ等凝血因子活性水平，同时留取同期出生的健康足月新生儿30例脐血标本作对照。两组早产儿生后1周内常规作头颅超声检查以明确有无脑室周围-脑室内出血及其程度。 结果 早产儿与足月新生儿脐血VitK依赖因子活性水平分别为Ⅱ(25.6±9.5)%对(36.7±4.9)%，Ⅶ(59.0±17.7)%对(64.5±10.6)%，Ⅸ(24.7±8.9)%对(30.2±5.7)%，Ⅹ(30.2±5.0)%对(34.3±12.6)(P<0.05)。母亲产前补充VitK1后其婴儿脐血VitK依赖因子水平分别为Ⅱ(36.4±6.9)%，Ⅶ(69.6±16.6)%，Ⅸ(25.7±10.9)%和Ⅹ(39.3±8.0)%，除Ⅸ因子外，Ⅱ、Ⅶ和Ⅹ因子活性均显著升高(P<0.05)。脑室周围-脑室内出血发生率在对照组为52.6%，观察组为31.8%(χ2＝5.744，P＝0.017)；重度出血对照组为12.0%，观察组为2.3%(χ2＝3.626，P＝0.057)。 结论 早产儿存在VitK依赖因子水平低下，可能为其易于发生脑室周围-脑室内出血的原因之一。分娩前母亲补充VitK1可显著提高其血浆Ⅱ、Ⅶ和Ⅹ因子水平，并对脑室周围-脑室内出血有一定的预防作用。

目的 了解Ret蛋白在先天性巨结肠和具结肠同源病肠组织中的表达，并进一步研究Ret蛋白在先天性巨结肠和巨结肠同源病发病中的作用。 方法 采用鼠抗人Ret单克隆抗体通过免疫组化SABC法对15例先天性巨结肠，11例巨结肠同源病肠组织Ret蛋白的表达进行研究，10例正常结肠组织作对照。 结果 Ret蛋白在先天性巨结肠和巨结肠同源病的扩张段，对照组均呈现阳性反应(P>0.05)，在先天性巨结肠狭窄段大多数表现为阴性反应，极少数出现阳性反应，而巨结肠同源病狭窄段可见Ret免疫反应蛋白阳性细胞，而且偶见巨大的阳性细胞；先天性巨结肠狭窄段分别与巨结肠同源病狭窄段和对照组比较均有统计学意义(P<0.001)。 结论 Ret蛋白对先天性巨结肠的发生有重要作用，而与巨结肠同源病的发生无明确关系。

目的 探讨影响极低出生体重儿(VLBW)体重增长的相关因素。 方法 对1998年7月—2004年3月重庆医科大学儿童医院新生儿病房收治的51例VLBW进行回顾性分析。 结果 单因素分析发现，早开奶、热卡摄入量和蛋白质摄入量对体重增长有显著性影响(P<0.05)。多元逐步回归分析结果示，热卡摄入量和蛋白质摄入量是影响体重增长的显著因素，回归方程为Y(体重增长)＝-6.426＋0.120X1(热卡摄入量)＋3.737X2 (蛋白质摄入量)(P<0.01)。达到体重增长目标对象中单纯胃肠内营养组和部分胃肠外营养组热卡摄入量分别为(520.62±21.59) kJ/(kg·d)[(124.43±5.16) kcal/(kg·d)]、(451.49±68.41) kJ/(kg·d)[(107.98±16.35) kcal/(kg·d)]，差异有统计学意义(P<0.05)。早开奶组出生体重恢复时间、住院时间和胃肠外营养液体量占总液量比例>75%时间平均秩分别为18.58、20.24、20.11,晚开奶组分别为33.00、32.48、31.83，差异有统计学意义(P<0.05)。 结论 VLBW在生后应保证足量热卡和蛋白质的供给，对于小于胎龄儿和有严重并发症的患儿更应该加强营养的补充，对VLBW应尽早喂养，同时需要胃肠外营养作为肠内营养的补充。

目的 探讨抗FasL抗体对小鼠柯萨奇病毒性心肌炎的治疗作用及作用机制。 方法 80只BALB/c小鼠随机分为4组：1组为空白对照组、2组为病毒对照组、3组为IgG对照组、4组为抗FasL抗体治疗组。于接种病毒后第10天每组处死小鼠8只，取心脏，分别采用光镜检查心肌组织的病理变化，原位末端标记法(TUNEL)检测心肌细胞凋亡的情况，免疫组化方法检测活化caspase-3的表达，逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测心肌组织中caspase-3和CVB3mRNA表达。 结果 (1)病毒对照组可见活化的caspase-3表达和心肌细胞的凋亡，且均与心肌病变积分成正相关(r＝0.81，P<0.05；r＝0.73，P<0.05)。(2)抗FasL抗体治疗组小鼠心肌组织病变积分、心肌细胞凋亡率、caspase-3蛋白和mRNA表达及心肌细胞内CVB3 mRNA表达均明显低于病毒对照组(P<0.01，P<0.01, P<0.01, P<0.01, P<0.05)和IgG对照组(P<0.01, P<0.01, P<0.05, P<0.01, P<0.05)。 结论 凋亡是病毒性心肌炎心肌损伤的重要机制之一，抗FasL抗体可降低caspase-3活化和mRNA表达，减少心肌细胞凋亡，降低心肌细胞内病毒复制，使心肌损伤明显减轻。

目的 通过观察谷氨酰胺(glutamine, Gln)对内毒素血症幼年大鼠心肌肌动蛋白(alpha sarcomeric actin，α-SA)及其mRNA表达的影响，探讨Gln在大鼠内毒素血症中对心肌收缩功能的保护作用。 方法 选健康18日龄Wistar大鼠121只，按腹腔注射药物不同分为：0 h对照组(Ctrl：生理盐水，n＝11)，内毒素组(LPS, n＝55)、谷氨酰胺组(Gln, n＝55)；后两组又分为2、4、6、 24及72 h共5个时点，每个时点11只，在各指定时点分别将大鼠断头分离心脏，8只用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定α-SA mRNA表达，另3只左心室肌用甲醛固定，制成石蜡切片，用免疫组化方法测定α-SA蛋白质表达。 结果 (1)内毒素血症大鼠心肌α-SA及其mRNA与对照组相比较均有显著下降(P<0.01)，LPS组在6~24 h降至最低；而Gln组则延至24 h为最低，72 h Gln组α-SA已与对照组差异不明显( P>0.05)。(2)LPS与Gln组同一时点相比较，Gln组α-SA各时点均高于LPS组，而α-SA mRNA在4~ 72 h高于LPS组，早期相差不明显(P>0.05)。 结论 (1)α-SA及其mRNA表达在内毒素血症明显受到抑制，收缩蛋白合成减少，而非破坏增加，心肌收缩功能受损。(2)谷氨酰胺可以减轻LPS对α-SA及其mRNA表达的抑制作用，而且恢复较快。

目的 探讨不同发育期大鼠癫癎发病机制。 方法 对P10、P20、P60 3组大鼠，用戊四氮反复点燃5 d，设生理盐水对照组；观察各组大鼠行为学改变，海马神经元形态、神经元计数、苔藓纤维发芽、NF-κB表达。 结果 (1)点燃后P10、P20组惊厥潜伏期、潜伏发作期较P60短，惊厥持续时间较P60长(F＝103.28，132.65，P均<0.05)；(2)P10、P20实验组海马各区无明显神经元丢失；P10 DG区颗粒细胞计数较对照组增多；P60 CA1、CA3区神经元较对照组明显减少，DG区无改变；(3)各组海马CA3区均可见苔藓纤维发芽，其中P60组较P10、P20组明显；(4)各实验组NF-κB阳性表达细胞较对照组均增多，且随鼠龄增加NF-κB光密度值逐渐减弱，差异均有统计学意义(P<0.05)。 结论 (1)不同发育期大鼠惊厥易感性存在差异；(2)发育鼠致癎后海马神经元损伤、病理性苔藓纤维发芽较轻，可能为对惊厥耐受性较好的病理学证据；(3)NF-κB在惊厥性脑损伤过程中发挥一定生物学效应。