2005年 · 第43卷第09期

目的 建立一步法RT-PCR检测临床样本鼻病毒基因，并对扩增产物进行测序分析。 方法 在鼻病毒基因组5′端非编码区选择一对鼻病毒特异性兼并引物建立一步法RT-PCR系统。对2004年春季收集的78份急性呼吸道感染患儿鼻咽拭子样本进行鼻病毒基因筛测，对扩增阳性的样本进行核苷酸测序并用生物信息学软件分析。 结果 78份鼻咽拭子样本用一步法RT-PCR检测出鼻病毒基因阳性11份，阳性率为14.1%，其中包括临床诊断为上呼吸道感染7例、支气管炎3例、肺炎1例。11份鼻病毒阳性样本用测序引物扩增并测序，测得的核苷酸序列经blast比对，与GeneBank中鼻病毒序列同源性分别高达89.0%~95.5%；11份样本序列之间的核苷酸同源性为75.2%~91.8%，核苷酸水平变异率为8.8%~31.0%；11份样本序列在进化树中聚类为两簇；11份样本序列高度保守区基因突变多为固定位点的单个核苷酸变异。 结论 所建立的一步法RT-PCR系统检测鼻病毒基因有快速、简便、特异性高的优点，适用于临床检测。临床样本测序分析发现，鼻病毒基因组有高度变异的特点。

目的 对上海地区2002年4—6月儿童手足口病流行期间的手足口病患儿进行病原学调查。 方法 采集手足口病患儿的疱疹液、粪便、咽拭子进行病毒分离；分别用肠道病毒组合血清、肠道病毒71型(EV71)单价血清和柯萨奇病毒A组16型(CA16)单价血清对分离到的病毒进行中和试验定型；对不能定型的病毒株再分别用EV71和CA16的VP1基因的特异性引物进行RT-PCR鉴定。 结果 从72例患儿共采集102份标本，由其中67例患儿的91份标本分离到病毒；所有分离到的病毒株均不能用血清学方法进行定型；进一步经RT-PCR检测，58例为CA16，9例为EV71，二者之比为6.4∶1；其中2例的EV71病毒株经中国疾病预防控制中心进行序列分析，认为属新的C4基因亚型；在EV71阳性病例中1例并发脑炎，出现抽搐、休克、昏迷、呼吸衰竭。 结论 从该组手足口病患儿检测到的主要病原是CA16和EV71；在上海地区首次报道与EV71感染相关的手足口病合并重症脑炎病例。

目的 了解2004年流感流行季节(2004年8月—2005年4月)北京地区婴幼儿急性呼吸道感染患儿中分离到的甲3型流感病毒是否存在抗原性的改变以及其变异程度。 方法 提取1株于2004年3月和32株于2004年流感流行季节从北京地区急性呼吸道感染患儿中分离到的甲3型流感病毒的病毒RNA，经RT-PCR扩增得到HA1区基因片段并进行核苷酸序列测定，使用生物信息软件分析HA1区基因序列。 结果 所测定的血凝素HA1区基因均为987 bp，编码一个含329个氨基酸的蛋白质。将33株甲3型流感病毒流行株的血凝素(HA1)氨基酸序列与近年WHO推荐的参考疫苗株比较，我们发现一致的多处位点的氨基酸突变，而且突变位点涉及2个抗原决定簇(A、B)和受体结合部位。而2004年3月分离到的毒株在进化分析和氨基酸变异上均不同于2004年流行季节的毒株。 结论 对血凝素基因HA1区的序列分析结果提示2004—2005年流行季节的甲3型流感病毒较春季的流行株和2004年疫苗株出现了较大的漂移，提示其抗原性可能出现了改变。这种变异对于病毒抗原性的影响以及对于疫苗效果评价的意义值得密切关注。

目的 通过分子流行病学调查研究兰州地区婴幼儿杯状病毒(HuCV)腹泻的特点。 方法 采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)对2001年12月—2004年6月兰州地区婴幼儿腹泻轮状病毒ELISA阴性粪便标本进行HuCV检测。 结果 251份轮状病毒阴性标本中共检出HuCV感染25例，总阳性率9.96%，其中133份2001—2002年的标本中检出HuCV感染12份，阳性率为9.02%，未进行分型；118份2003—2004年的标本中检出HuCV感染13份，阳性率为11.02%，其中诺瓦克样病毒GⅡ型11例，未检出诺瓦克样病毒GⅠ型，札榥样病毒2例，其中有1例合并星状病毒感染。发病年龄以2岁以下患儿为主，呈散发流行，未表现出明显的季节性。 结论 HuCV是引起兰州地区婴幼儿病毒性腹泻的主要病原之一，其主要流行型可能为诺瓦克样病毒GⅡ型。

目的 探讨北京和广州地区B组链球菌(GBS)抗生素耐药菌谱及对红霉素耐药机制。 方法 GBS菌193株，其中140株和47株GBS分别来自北京和广州地区正常妇女阴道拭子标本，6株GBS菌株来自北京地区新生儿感染性肺炎和脑膜炎患儿体液标本中培养分离。应用标准的KB纸片法对临床常用7种抗生素耐药性检测。应用PCR法对102株(包括57株敏感株及45株耐药株)GBS进行红霉素耐药基因ermB、mefA检测。 结果 193株GBS菌均对青霉素类、头孢菌素类抗生素敏感；但青霉素和氨苄青霉素中介率均为17%；北京地区GBS的红霉素和林可霉素耐药率从1998年到1999年分别从8%增加到16%和从20%增加到28%；广州地区1999年分离的GBS菌株对红霉素和林可霉素耐药率分别为45%和26%，与北京地区1998、1999年分离的GBS菌株的红霉素耐药率比较，差异有统计学意义(P＝0.000)。在45株红霉素耐药GBS菌中有40株同时对林可霉素耐药，5株表现为红霉素耐药而林可霉素敏感。20株GBS红霉素耐药仅含有ermB基因；13株红霉素耐药株仅含有mefA基因；同时含有ermB和mefA基因有6株。6株耐药株未能检测到ermB和mefA基因。 结论 青霉素、氨苄青霉素可作为治疗GBS感染首选药物；头孢菌素类抗生素可作为二线的选择药物。而红霉素和林可霉素作为预防和治疗GBS感染的药物应用价值应重新给予评价。在我国ermB基因介导的核糖体靶位点改变在GBS耐药机制中可能起主要作用。

目的 探讨空肠弯曲菌(CJ)脂多糖(LPS)中唾液酸(SA)基团参与CJ诱发周围神经病关键性抗原成分的重要地位，为CJ LPS与神经节苷脂间的分子模拟推论确立免疫病理学证据。 方法 构建唾液酸合成酶基因1(neuB1)失活、LPS外核寡糖缺乏SA基团的GBS相关CJ O：19变异株。分别以野生株和变异株LPS全身免疫豚鼠，ELISA法检测免疫血清中抗CJ LPS和抗神经节苷脂GM1 IgG抗体，取坐骨神经作病理学检查。再将免疫血清行坐骨神经外膜下注射并作病理学检查。 结果 (1)Pen O：19 CJ变异株的neuB1失活、LPS中SA基团缺失；(2)野生株LPS和变异株LPS全身免疫后，豚鼠均产生高滴度抗LPS特异性IgG；(3)全身免疫后第21、35天，野生株LPS免疫血清中检测到抗GM1 IgG抗体，而变异株LPS免疫血清中却测不到该抗体；(4)野生株LPS组中有17.3%的坐骨神经原纤维发生以轴索变性为主(占65.0%)的免疫性损伤，与变异株LPS组比较差异有统计学意义(χ2＝125，P<0.01)。而变异株LPS组病变率仅2.4%，与对照组比较差异没有统计学意义(P>0.05)；(5)野生株LPS免疫血清神经外膜下注射后，67.8%的豚鼠坐骨神经原纤维发生以轴索变性为主(占68.0%)的病变，而变异株LPS免疫血清注射后仅3.2%的神经原纤维发生病变，差异具有统计学意义(P<0.01)。 结论 外核寡糖缺乏SA基团的GBS相关CJ O：19变异株LPS不再能使实验动物血清中产生高滴度的抗GM1抗体，同时丧失对周围神经的免疫致病力，表明含SA基团的LPS寡糖侧链，是CJ诱发周围神经病的GM1样关键性抗原，从免疫病理学角度证实有关CJ诱发GBS的分子模拟推论。

目的 了解北京地区儿童中青霉素不敏感肺炎链球菌(PNSP)的流行状况，阐明其分子流行病学特征。 方法 以2000—2002年于0~5岁上呼吸道感染儿童鼻咽部分离的63株PNSP冻存标本为研究对象，进行耐药模式分析，以聚合酶链反应(PCR)扩增青霉素结合蛋白(PBP)基因pbp1a、pbp2b和pbp2x，分析其限制性片段长度多态性(RFLP)，并进行细菌染色体RFLP脉冲场凝胶电泳(PFGE)比较。 结果 63株PNSP有61株(96.8%)为多重耐药菌株。pbp1a、pbp2b和pbp2x分别有8、9和18种基因型，三者组合的谱型共有30种。63株PNSP的PFGE型共分为35个，其中，9种PFGE型包括菌株≥2株，这9种型共包含37株，占59%，均为多重耐药菌株。与亚洲流行菌株比较，我们发现2株PFGE型可能相关的PNSP分别与亚洲流行菌株越南-19群、新加坡-19群、中国台湾-19群和韩国-19群谱型完全相同。 结论 北京地区儿童中PNSP的多重耐药状况严峻，克隆传播是PNSP流行的重要因素；已存在与亚洲流行菌株相同的克隆，值得关注。

目的 探讨川崎病(Kawasaki disease，KD)血清基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9，MMP-9)及其特异性组织抑制物1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1，TIMP-1)水平的动态变化在冠状动脉病变(coronary artery lesion, CAL)的预测和早期诊断中的临床价值。 方法 实验组KD合并CAL患儿15例，未合并CAL患儿44例，急性期静脉注射免疫球蛋白(intravenous immunoglobulin, IVIG)前后、亚急性期及恢复期各抽取1次外周静脉血，对照组为20例正常体检儿童。ELISA双抗体法测定血清MMP-9与TIMP-1含量。 结果 KD患儿急性期血清MMP-9含量、TIMP-1含量及MMP-9/ TIMP-1均较正常对照组增高(P<0.01)；IVIG干预后KD患儿血清MMP-9含量与MMP-9/ TIMP-1比值降低(P<0.01)；KD合并CAL患儿IVIG干预前血清MMP-9含量及血清MMP-9/ TIMP-1比值高于无CAL患儿(P<0.01)。 结论 川崎病冠状动脉病变患儿血清MMP-9含量与MMP-9/ TIMP-1比值在急性期高于无冠状动脉病变患儿，提示MMP-9含量的急剧升高及与TIMP-1相互拮抗作用的失代偿可能是川崎病冠状动脉病变的高风险因素，动态监测血清MMP-9含量和(或)MMP-9/ TIMP-1比值对预测和早期诊断川崎病合并冠脉病变具有重要的临床意义。

目的 探讨三维超声心动图(3DE)在小儿圆锥动脉干畸形(CTD)病理形态学诊断中的应用价值。 方法 用HP Sonos 5500型彩色超声心动图仪和Tom Tec Echo-view 4.2对210例0~15岁CTD患儿进行二维超声心动图(2DE)和3DE检查，并以心导管造影和手术诊断为标准，用5剖切面10剖视面三维超声剖视诊断方案和Van Praagh先天性心脏病顺序分段诊断步骤对CTD作3DE剖视诊断，结果与2DE对比。 结果 房、室间隔左、右心观(L1a、L2a)、心脏四腔观(Ha、Hb)、瓣膜俯视及仰视观(S1a、S2a)等剖视面对CTD有诊断价值，在心室构型，心室大动脉连接，室间隔缺损具体位置、形态及其与大动脉相互关系等方面能较2DE提供更多空间信息。在已手术的147例中，补充2DE诊断18例(12.2%)，纠正2DE诊断10例(6.8%)。 结论 3DE可对CTD作出较准确的三维病理形态学诊断，能基本满足CTD 3DE剖视诊断要求。

目的 了解2000—2003年北京、上海、广州细菌耐药监测项目中，小于5岁呼吸道感染儿童鼻咽部携带氨苄西林(AMP)耐药流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae，Hi)的分子流行病学情况。 方法 对上述呼吸道感染儿童鼻咽部分离的899株Hi进行AMP敏感性检测，筛选出74株AMP耐药Hi，采用巢式PCR荚膜分型和玻片凝集法，对AMP耐药菌株进行b型Hi(Haemophilus influenzae type b，Hib)检测，并用脉冲电场凝胶电泳(pulsed-field gel electrophoresis，PFGE)和多重PCR两种方法，对AMP耐药菌株进行基因分型。 结果 74株AMP耐药Hi中，有2株Hib(占2.7%)。PFGE分型74株AMP耐药Hi中有38种基因型，具有克隆传播趋势的有5型，包括41株Hi(占55.4%)。其中菌株数最多的为A型，有18株，占24.3%，以2002年上海地区为主。多重PCR分型结果有31型，多重PCR与PFGE分型结果一致率为63.5%。 结论 北京、上海、广州三地区四年内小于5岁的呼吸道感染儿童鼻咽部携带的AMP耐药Hi有55.4%的菌株存在克隆传播。