2005年 · 第43卷第08期

目的 探讨尿S100B蛋白、尿乳酸/肌酐比值对新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)早期诊断的应用价值。 方法 检测58例足月HIE患儿在生后第1天、第2天、第3天，尿S100B蛋白、尿乳酸/肌酐比值水平，并在生后7天内进行HIE临床分度，以同期25例足月正常新生儿对照组。 结果 HIE组出生后3天内尿S100B蛋白含量和出生后1天内尿乳酸/肌酐比值明显高于对照组(P<0.001); 3天内尿S100B蛋白和1天内尿乳酸/肌酐比值之间及与HIE的临床分度呈正相关(P<0.001)；当尿S100B蛋白水平在0.47 μg/L，尿乳酸/肌酐比值在0.55时，单独检测第3天尿S100B蛋白敏感度、特异度分别为90.4%、91.9% ；尿乳酸/肌酐比值预测HIE的敏感度和特异度以出生后第1天最高，分别为91.5%和90.3%；如检测第3天尿S100B蛋白的同时监测生后1天内尿乳酸/肌酐比值可显著提高HIE诊断的准确性，联合应用两项指标进行检测，诊断的敏感度和特异度分别为98.8%、97.4%，较两种方法单独应用敏感度和特异度均提高。 结论 对窒息患儿以临床表现为基础，同时监测出生后3天内尿S100B蛋白和尿乳酸/肌酐比值，对提高HIE的早期诊断和临床分度具有一定的应用价值。

目的 研究caspase-1及其底物之一白细胞介素(IL)-18 mRNA的表达在缺氧缺血性脑损伤(HIBD)中的作用及其意义。 方法 112只7日龄新生Wistar大鼠按照完全随机化方法分为对照组、HIBD 3、8、24 h、3、6和14 d组，每组16只。其中8只采用RT-PCR方法检测caspase-1和IL-18 mRNA在HIBD后脑皮层中的表达及其相关性，另外8只光镜下观察脑组织病理学改变。 结果 对照组有caspase-1 mRNA少量表达(0.2918 ± 0.0809)，HIBD 24 h组其水平开始增加(0.5222 ± 0.0941，与对照组比较P<0.01)，6 d达高峰(0.7886 ± 0.0480，与其余各组相比P<0.01),此后下降，但HIBD 14 d (0.5314 ± 0.1272)仍可检测出。对照组IL-18 mRNA水平为0.3218 ± 0.0466，HIBD 24 h至6 d其表达逐渐增加(24 h: 0.5823 ± 0.0740; 3 d：0.6976 ± 0.1073; 6 d: 0.9110±0.0647，与对照组比较均为P<0.01)，并达高峰(HIBD 6 d组与其余各组相比P<0.01)。HIBD后IL-18 mRNA的表达在时间上与caspase-1具有紧密相关性(r＝0.871，P<0.01)。组织学检查发现神经元变性、坏死在HIBD 1~6天逐渐加重。 结论 HIBD后caspase-1和IL-18 mRNA的表达逐渐增加，其变化规律与光镜观察到的脑损伤进展的时间框架吻合，提示它们均参与了新生鼠HIBD的病理形成过程。

目的 建立新生鼠缺氧缺血性脑病(HIE)动物模型，阐明HIE病程中神经干细胞(NSCs)的变化特点。 方法 210只7日龄新生SD乳鼠随机分为正常对照组、单纯缺氧组及缺氧缺血组，每组70只。根据处死时相点每组分成3、6 h，1、3、7、14、21 d等7个小组，每组10只。缺氧缺血组结扎血管后左颈总动脉后置于8%氧浓度的低氧环境中2.5 h，单纯缺氧组仅缺氧2.5 h。采用HE、免疫组织化学染色以及光镜技术分别对3组SD大鼠脑组织中的NSCs进行检测。 结果 缺氧缺血后3 h出现轻度脑损伤，1 d病变最严重，3、7 d胶质细胞增生，14、21 d出现脑萎缩。3组SD大鼠脑组织均存在NSCs，从第1天开始各组间NSCs细胞数差异有统计学意义，缺氧缺血组均低于单纯缺氧组，第3天时缺氧缺血组还低于正常对照组，第7~21天单纯缺氧组高于正常对照组。3组NSCs细胞数均有显著性动态变化，趋势也基本相似，除单纯缺氧组3 d高于3 h和6 h外，3 d内各时相点差异无统计学意义；以后随着时间延长而逐渐下降，每后一时相点低于前一时相点。 结论 成功建立了缺氧缺血性脑病动物模型；HIE早期NSCs增殖，随着病情的演变，NSCs开始减少，最后导致病变区的NSCs相继死亡；低氧有利于NSCs的增殖。

目的 研究新生鼠缺氧缺血性脑损伤后经脑室移植人胚胎脑神经干细胞后，植入细胞的存活、迁移及分化情况。 方法 孕12周人胚胎神经干细胞在含有碱性成纤维细胞生长因子、表皮细胞生长因子和白血病细胞抑制因子的N2培养基(D/F12＋N2＋B27)中培养11天。生后7天的新生SD大鼠32只建立缺氧缺血性脑病模型，3天后将培养的人神经干细胞制成悬液(1.0×105/μl)，采用立体定向移植至实验动物损伤侧脑室。移植后1、2、4周及3个月(每时间点各8只)取脑组织行HE染色和免疫组织化学分析。 结果 移植后1周大量抗-人细胞核蛋白抗体阳性的植入细胞从脑室沿胼胝体向外迁移并到达损伤区，以损伤侧皮层、海马多见，在不同区域可见与宿主细胞类似的分化的植入细胞：移行至皮层的植入细胞85%分化为抗-人细胞核蛋白-神经丝蛋白或抗-人核蛋白-神经元管蛋白抗体双阳性的皮层细胞，而位于移行区域的植入细胞60%表达为抗-人核蛋白-胶质纤维酸性蛋白抗体双阳性的星形胶质细胞，其余细胞仍在迁移中未分化。移植后2周更多的移植细胞到达损伤区，移植后4周及3个月植入细胞数较前明显减少。 结论 人胚胎神经干细胞经脑室移植至缺氧缺血性脑损伤的鼠脑后能存活、迁移，并依迁移区域的不同分化为神经元和星形胶质细胞。

目的 探讨人神经干细胞移植方法治疗重度新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)的可行性。 方法 一例出生75天的重度HIE后遗症患儿，智力运动发育严重滞后，肌张力异常，磁共振图像显示脑实质多发软化灶和萎缩。取孕11周人胚胎前脑细胞，经体外培养扩增为人神经干细胞(neural stem cells, NSCS)，并经患儿脑室穿刺注入。 结果 移植28天后患儿不仅肌张力显著改善，智力运动发育迅速追赶、接近正常同龄水平。PET显示顶颞叶放射性增加，细胞代谢明显增强，提示植入的细胞存活。 结论 本例人胚胎来源NSCS移植治疗重度新生儿HIE后遗症，近期临床疗效显著，远期疗效有待进一步观察。

目的 探讨高氧对新生大鼠肺caspase-3和p53基因表达及肺细胞凋亡的影响。 方法 采用Spraque-Dawley新生大鼠95%氧气暴露建立高氧肺损伤模型。应用RT-PCR技术检测肺组织caspase-3 mRNA和p53 mRNA水平，凝胶电泳条带用成像系统照相分析结果。计算目的基因PCR产物条带与内参照β-actin条带光密度值的比值，作为p53基因的相对表达量，结果以±s标记，而caspase-3 mRNA表达量则以阳性表达或阴性表达为标记。应用脱氧核糖核酸转移酶介导的细胞凋亡标记技术(TUNEL)原位检测细胞凋亡。光镜下随机计算5个视野中500个肺细胞中的阳性细胞数，结果以±s标记。 结果 新生大鼠暴露于95%氧浓度环境中24 h后肺组织中p53 mRNA表达中度增加(q＝3.2305，P> 0.05)，48 h后表达显著增加，与空气对照组相比差异有统计学意义(q＝7.2941，P< 0.05)。新生鼠高氧处理72 h、96 h后，肺组织p53 mRNA表达又恢复到正常水平。在各空气对照组和各高氧处理组中个别新生鼠肺的caspase-3 mRNA有微量表达，绝大多数新生鼠肺的caspase-3 mRNA没有表达，差异无统计学意义。95%氧暴露7天的新生鼠肺细胞凋亡水平明显高于空气暴露组新生鼠肺细胞凋亡水平，两者比较差异有极显著的统计学意义(F＝100，P<0.001)。 结论 在高浓度供氧下，肺组织通过暂时上调p53基因的表达，介导细胞周期停滞，阻止G0/G1期细胞进入S期，抑制细胞分裂、增殖，同时p53促进细胞凋亡，从而导致肺生长发育受阻和肺损伤。新生鼠暴露于95%氧环境中，肺组织caspase-3基因基本上不表达，因此推测高氧肺细胞凋亡可能存在不经过caspase-3的凋亡途径。

目的 探讨基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及其组织抑制物(TIMP-1)在支气管哮喘发病中的作用，评价吸入糖皮质激素对其调节作用。 方法 建立哮喘大鼠模型，用ELISA、免疫组织化学、western-blot及RT-PCR技术，对激素治疗前后哮喘大鼠肺组织中MMP-9及TIMP-1表达进行研究。 结果 (1)通过大鼠行为学改变、呼吸功能曲线、IgE水平以及肺组织切片证实哮喘模型成立。(2)哮喘组肺组织细小支气管壁及伴行动脉周围炎性细胞浸润，黏膜断裂，杯状细胞增生，平滑肌增厚；21天组气道壁基膜增厚和平滑肌增生更加明显。(3)大鼠肺组织MMP-9 mRNA表达：哮喘7天组为(2.71±0.37)，21天组为(1.76±0.27)，激素治疗组为(0.88±0.18)，正常对照组为(0.52±0.10)，组间比较差异有统计学意义(F＝151.52 ，P<0.01)。大鼠肺组织TIMP-1 mRNA表达：哮喘7天组为(1.13±0.19)，21天组为(1.55±0.24)，激素治疗组为(0.77±0.15)，正常对照组为(0.47±0.08)，组间比较差异有统计学意义(F＝69.46，P<0.01)。(4)免疫组织化学及蛋白质表达结果与RT-PCR结果一致。 结论 从蛋白质水平及mRNA水平证实哮喘大鼠模型肺组织MMP-9表达升高，TIMP-1表达亦增强；激素下调MMP-9及TIMP-1表达，可能是其抑制气道炎症和气道重塑的机制之一。

目的 研究杭州地区秋冬季婴幼儿腹泻轮状病毒(RV)的感染特点及RV分子流行病学特点。 方法 收集2001—2003年秋冬季来本院就诊拟诊为病毒性肠炎患儿的粪便共683份，采用乳胶凝集试验(LAT)检测A组RV，阳性者再用酶联免疫吸附试验(ELISA)分型检测RV VP7(G)血清型；将ELISA确定VP7(G)血清型的标本进一步做逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增及RV基因测序，证实其VP7(G)血清型。 结果 683份标本中，RV阳性297份，检出率为43.5%(297/683)；ELISA分型：VP7(G)血清型以G1、G3型为主，其中G1型占36.7%(109/297)、G3型占30.9%(92/297)，其余G2、G4、混合型和未分型分别占4.0%(12/297)、7.1%(21/297)、11.8%(35/297)和9.4%(28/297);每年流行的VP7(G)血清型的主流不同，2001年以G1型为主，占54.9%(45/82)、G3型占14.6%(12/82)，2003年以G3型为主，占43.2%(63/146)、G1型占29.5%(43/146)。RT-PCR扩增、基因序列测定和同源性分析证实了ELISA分型的可信性。 结论 2001—2003年杭州地区秋冬季婴幼儿腹泻RV VP7(G)血清型以G1、G3型为主，且每年流行的主流血清型不同。

目的 为进一步拓展供髓源，探讨非血缘相关骨髓移植治疗重型地中海贫血(简称地贫)的可行性。 方法 9例地贫患儿进行了非血缘骨髓移植，其基因突变类型为地贫纯合子或双重杂合子，均确诊为重型β地贫。HLA高分辨配型全相合2例，1个亚型不合5例，2个亚型不合2例，6例红细胞血型不合。预处理为白消安16 mg/kg，分4天口服；环磷酰胺200 mg/kg，分4天静滴；抗人胸腺细胞免疫球蛋白30 mg/kg，分3天静滴和氟达拉宾125 mg/m2，分3天静滴。环孢素A和氨甲蝶呤预防移植物抗宿主病(graft-versus-host disease，GVHD)。 结果 9例患儿均出现明显的过敏反应，1例有一过性低血压，皮肤急性GVHD 7例，肝脏GVHD 1例，肠道GVHD 2例，慢性GVHD 1例，高血压脑病1例，间质性肺炎2例。1例急性肺出血死亡。外周血中性粒细胞>0.5×109/L的时间为12~26天，WBC恢复正常的时间为23~110天，PLT于61~142天>50×109/L，Hb则于23~116天升至100 g/L，最后一次输血时间为13~62天。PCR扩增短串联重复序列检测证实：8例患儿获得完全供体植入，1例未植入。随访6~24个月，7例原重型β地贫基因已消失，5例血型不合者已转成供者相同血型；7例患儿术后无需输血，Hb维持在110 g/L以上。 结论 本组9例重型地贫的非血缘骨髓移植为国内首次尝试，初步证明非血缘骨髓移植根治重型地贫较安全可靠，为解决本病移植治疗的供髓源提供了新途径。

目的 探讨卡维地洛对心力衰竭(heart failure，HF)(简称心衰)时兰尼碱受体/钙释放通道(ryanodine receptor，RyR)的作用。 方法 采用腹主动脉缩窄术建立幼鼠心衰模型，术后6周随机分为2组：心衰组和卡维地洛治疗组。另设假手术对照组。卡维地洛灌胃给药，术后每日观察幼鼠的呼吸、皮毛颜色、活动量、体重等发育状况。4周后行高频超声检测。超速离心分离肌质网(SR)，荧光分光光度仪检测钙离子(Ca2＋)的重吸收和渗漏。 结果 与假手术组(n＝20)比较，HF组(n＝20)幼鼠左室舒张末期内径(LVEDD)(P<0.05)、左室收缩末期内径(LVESD)、室间隔舒张末期厚度(IVSTd)、室间隔收缩末期厚度(IVSTs)、左室后壁舒张末期厚度(LVPWTd)、左室后壁收缩末期厚度(LVPWTs)均明显升高(P<0.01)，短轴缩短率(FS)、射血分数(EF)均明显降低(P<0.01)；与HF组比较，卡维地洛治疗组(n＝20)LVEDD(P<0.05)、LVESD、IVSTd、IVSTs、LVPWTd、LVPWTs均明显降低(P<0.01)，FS、EF均明显升高(P<0.01)。若分别向含有三组SR的缓冲液中仅加入SR Ca2＋-ATP酶抑制剂—毒胡萝卜内酯(thapsigargin)，HF组较假手术组、卡维地洛治疗组有明显的Ca2＋渗漏(P<0.01)；若毒胡萝卜内酯和FKBP抑制剂—FK506一起加入三组SR缓冲液中，假手术组、卡维地洛治疗组、HF组均出现明显的Ca2＋渗漏(P<0.01)；与仅加入毒胡萝卜内酯比较，假手术组和卡维地洛治疗组的Ca2＋渗漏明显增多(P<0.01)，HF组的Ca2＋渗漏未见明显增加(P>0.05)。 结论 HF时心肌Ca2＋渗漏明显，卡维地洛通过恢复HF时心肌RyR FKBP12.6的结合，从而抑制Ca2＋的渗漏，提高心脏功能并有效抑制心室重塑。

目的 总结经导管Amplatzer封堵器(Amplatzer duct occluder, ADO)治疗小儿动脉导管未闭(patent ductus arteriosus, PDA)的远期随访结果，进一步评价应用ADO治疗小儿PDA远期疗效和安全性。 方法 对1998年4月至2003年12月间接受ADO封堵术的PDA患儿进行回顾性队列研究。 结果 共有250例PDA患儿接受ADO封堵术，平均年龄5.3(3个月~16岁)岁，平均体重15.1(3.5~35.0) kg。PDA最窄处直径在1.8~11.0 mm之间，平均(4.2±1.5) mm，其中52例(20.0%)直径超过5 mm。PDA均应用4~14 mm大小的ADO进行封堵，输送长鞘为6 F(205例)或7F(45例)。250例中，ADO成功植入245例(98.0%)。Qp/Qs从1.90±0.60降至1.03±0.21(P<0.05)。不同形状的PDA均可应用ADO进行封堵。近期并发症5例，其中溶血3例，股动脉血栓2例，无死亡病例。共有205例在堵闭术后完成1天~60个月的随访，随访率为82.0%。残余分流率在不同随访时间点分别为9.2%(1天)、2.8%(1个月)、1.2%(6个月)、0.8%(12个月)、0(24个月)、0(36个月)、0(48个月)、0(60个月)。5例(2.0%)随访中因残余分流出现溶血或无溶血需要再次接受治疗，随访1年和5年无事件发生率为98.0%。 结论 应用ADO治疗小儿PDA远期疗效确切，安全性好。

目的 观察基质金属蛋白酶1(matrix metalloproteinase-1, MMP-1)在川崎病患儿外周血不同时期的表达水平，探讨其在冠状动脉(简称冠脉)损伤中的作用。 方法 40例川崎病患儿(无冠脉损伤组23例，冠脉损伤组17例)，按病程分为急性期、亚急性期和恢复期；另分别以10例败血症患儿、10例健康儿童为发热对照组和正常对照组。应用酶联免疫吸附法检测血清MMP-1蛋白水平、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测外周血白细胞MMP-1 mRNA表达水平。 结果 急性期有、无冠脉损伤组血清MMP-1和白细胞表达MMP-1 mRNA水平均明显高于发热对照组和正常对照组(均P<0.01)，且冠脉损伤组MMP-1蛋白和mRNA水平较无冠脉损伤组升高更为显著(P<0.05)；到亚急性期、恢复期时MMP-1蛋白和mRNA水平依次明显降低(各期间比较，均P<0.01)。川崎病组急性期血清MMP-1蛋白水平与外周血白细胞计数呈显著正相关(r＝0.750, P<0.01 )。 结论 MMP-1在川崎病急性期，尤其在冠脉损伤时表达明显升高；MMP-1的过度表达可能与川崎病冠脉损伤的形成有关。