2005年 · 第43卷第07期

目的 研究使用流式细胞术检测小儿急性B淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia, ALL)微小残留病(minimal residual disease, MRD)的临床预后价值。 方法 能将残留白血病细胞与正常骨髓细胞区分开来的抗体组合称为有效抗体组合。我们使用流式细胞术对36例具有有效抗体组合的B-ALL患儿缓解后的骨髓标本进行MRD的定期检测。对6例无有效抗体组合的患儿，我们使用CD45/CD19/CD34/CD10与CD45/CD19/CD20/CD22两个抗体组合定期检测骨髓标本。 结果 (1)在42例患儿中有36例(86%)具有有效抗体组合；(2)在治疗6个月时间点时，MRD水平≥10-4的患儿(13例)无病生存率(disease free survival, DFS)与MRD水平<10-4的患儿(12例)相比无统计学意义(P＝0.62)；在治疗9个月时，MRD水平≥10-4的患儿(10例)要比MRD水平<10-4的患儿(13例)生存率低(P＝0.025)；在治疗12个月时，MRD水平≥10-4的患儿(8例)要比MRD水平<10-4的患儿(9例)生存率低(P＝0.042)；(3)共有7例患儿复发，其中6例复发患儿在复发前的4~10个月均检测到≥10-3水平的MRD。在随访过程中至少有1次MRD水平≥10-3患儿的无病生存率较MRD水平在10-3以下的患儿为低(P＝0.003)；(4)5例复发患儿的免疫表型基本未发生变化，只有1例丢失了CD13抗原；(5)在6例无有效抗体组合患儿中未发现有意义的MRD。 结论 (1)MRD水平在10-3或以上的患儿预后较差；(2)治疗9个月与12个月时间点的MRD水平有预后价值；(3)对于无有效抗体组合的患儿，CD45/CD19/CD34/CD10与CD45/CD19/CD20/CD22抗体组合的效果应进一步评估。

目的 对119例儿童标危型(SR)急性淋巴细胞性白血病(ALL)治疗的效果进行随访分析，探讨如何提高其生存率。 方法 119例SR-ALL采用CCLG-97方案进行治疗。 结果 4周诱导治疗完全缓解(CR)率为97.4%；21例失访：1998年、1999年、2000年、2001年、2002年各年失访率为63%、14%、10%、8%、5%；1年、2年、3年、4年、5年、6年生存率分别为93.3%、90.2%、88.0%、85.0%、85.0%、85.0%；13例复发，总复发率为13.8%，9例单独骨髓复发中有5例与不规则治疗有关，占56%；2例为4周未CR者于2年内复发；2例为正规疗程中复发，1例为亚二倍体，1例免疫分型示T淋巴系表达；4例为单独中枢神经系统(CNSL)复发，复发率为4.3%；全部患儿无睾丸白血病(TL)发生，无第二肿瘤发生。死亡15例，病死率为12.6%，化疗相关死亡5例，占4.2%。 结论 加强管理与正规治疗是提高我国儿童ALL长期存活率的重要措施之一；须在提高检测手段的基础上调整临床分型标准，CCLG-97方案在减少标危型ALL骨髓复发的同时，并未增加化疗相关死亡率；应积极开展大剂量氨甲蝶呤(HD-MTX)的治疗，进一步探索其剂量、用法及个体化的应用。

目的 分析儿童急性淋巴细胞性白血病(ALL)治疗失败的主要原因，并探讨改善预后的措施。 方法 分析1998年10月1日至2003年6月30日在我院新诊断的ALL病例治疗依从失败的时段、地域差别和对预后的影响；分析患儿治疗失败的危险组、地域差别和主要失败原因。 结果 新诊断ALL总数为224例，总依从失败率29.5%(66/224例)，早期、中期、晚期依从失败率依次为17.0%(38/224)、9.8%(22/224)和2.7%(6/224)。上海本地患儿中晚期依从失败率为10.5%(6/57)，外地患儿为17.1%(22/129)。中位随访40个月，治疗失败共52例，占31.7%，未获缓解(CR)、复发及合并症死亡分别为22.6%(37/164)、9.5%(15/164)。高、中、低危险组和不明分组治疗失败率分别为47.1%(24/51)、34.0%(18/53)、9.4%(5/53)和5/7。外地患儿治疗失败率为28.6%(32/112)，中晚期依从失败及治疗总失败率为42.9%(32＋22/129)。上海患儿治疗失败率为38.5%(20/52)，中晚期依从失败加治疗总失败率为45.6%(20＋6/57)。 结论 依从失败和治疗失败二者同等重要，均不容忽视；治疗失败中合并症死亡比例仍较高；中、高危组比例高，分组方法需改进；对治疗并发症尤其是诱导治疗期合并症应有足够的重视。

目的 探讨含人脐血来源的间充质干细胞(MSCs)体系在体外对脐血造血干细胞(HSCs)扩增作用。 方法 (1)用含人脐血MSCs及不同造血生长因子(HGFs)组合的无血清扩增体系对人脐血CD34＋细胞进行体外扩增。(2)于扩增前及扩增后第6、12天分别用双色流式细胞仪动态检测HSCs表面抗原标记：CD34＋、CD34＋CD38-、CD34＋CD3＋、CD34＋CD19＋、CD34＋ CD33＋和CD34＋CD41a＋细胞的含量。(3)按本实验室方法行体外半固体培养，观察扩增前后脐血细胞粒-单核细胞集落形成单位(CFU-GM)、爆式红系集落形成单位(BFU-E)、混合集落形成单位(CFU-Mix)及高增殖集落形成单位(CFU-HPP)集落形成情况。 结果 (1)含人脐血MSCs体系对脐血CD34＋CD38-细胞的扩增倍数在第6天和第12天分别为159和437倍。该亚群百分比在单纯因子组扩增第12天时为1.98%，而在含脐血MSCs组为9.98%，明显高于扩增前。(2)集落培养表明，含脐血MSCs组扩增第12天与扩增第6天相比，其CFU-Mix和CFU-HPP的扩增倍数增加，而单纯因子组这两种集落的扩增倍数下降。(3)随扩增天数的增加，两组扩增体系中CD34＋CD3＋和CD34＋CD41a＋细胞均明显增加，而CD34＋CD19＋和CD34＋CD3＋细胞均明显减少。两组相比，含脐血MSCs组差异更显著。 结论 (1)含脐血MSCs体系不仅能扩增更原始的造血干/祖细胞(HSPC)，且具有在短期内(12 d)保持HSCs不耗竭。(2)含脐血MSCs体系对脐血CD34＋细胞向定向祖细胞的扩增，主要为髓系及巨核系祖细胞，而对其向淋巴系祖细胞的扩增具有抑制作用。

目的 从脐血中分离单个核细胞(MNCs)，体外培养扩增间充质干细胞(MSCs)并研究其生物学特性和诱导分化潜能。 方法 取35份足月顺产新生儿脐血，密度梯度离心法分离出其中的MNCs，采用含胎牛血清的DMEM培养基体外培养扩增MSCs。显微镜下观察MSCs的形态、细胞化学染色，流式细胞仪测定MSCs的细胞免疫表型，体外诱导分化实验检测MSCs分化成骨细胞、脂肪细胞和神经细胞的能力。 结果 从12份脐血中可培养出MSCs，形态上与从其他来源的MSCs类似，可传至20代而无形态上的变化。细胞化学染色示碱性磷酸酶(ALP)阴性，非特异性酯酶——α-丁酸萘酚酯酶(alpha-naphthol butyric acid esterase，NBE)阳性。其表达CD29、CD44和CD105，特别是人类MSCs标记SH-2和SH-3阳性，而CD3、CD14、CD19、CD34和CD45阴性，说明它们并非来自造血细胞。这些MSCs在适当诱导分化剂的作用下，2周左右可以诱导分化形成骨细胞， 20天左右可以诱导分化形成脂肪细胞。脐血MSCs预诱导12 h后，胞体发生收缩，细胞边缘有细的突起。正式诱导5 h后大多数细胞呈现典型的神经元样。 结论 胎儿脐血MNCs可分离培养出MSCs。这些MSCs具有与其他来源MSCs类似的表型及分化潜能。

目的 克隆人促凋亡基因(second mitochondria-derived activator of caspases，Smac)，研究Smac基因转染对Burkitt′s淋巴瘤Raji细胞的促凋亡作用。 方法 从人胚肾293细胞中扩增人Smac基因全长的cDNA；构建含Smac基因全长cDNA的真核表达载体pcDNA3.1/Smac，并转染人Burkitt′s淋巴瘤Raji细胞；用Western blot测定外源基因的表达；Hoechest 33 258和碘化丙锭双荧光染色，结合激光共聚焦显微镜观察细胞凋亡形态；流式细胞仪分析细胞凋亡百分率；比色法测定caspase-3酶活性。 结果 成功克隆人Smac基因全长cDNA，并构建真核表达载体pcDNA3.1/Smac；转染人Smac基因全长cDNA的真核表达载体24 h，可显著诱导Burkitt′s淋巴瘤Raji细胞的凋亡，凋亡百分率达(43.7±2.5)%；转染人Smac基因全长cDNA的真核表达载体24 h，可显著诱导Raji细胞中caspase-3酶活性上调，吸光度为0.936±0.041，与正常对照组(0.138±0.026)及空载体转染对照组(0.136±0.036)相比，P <0.05。 结论 转染并表达外源性Smac基因，可显著诱导人Burkitt′s淋巴瘤Raji细胞凋亡。其机制可能与caspase-3酶活性上调有关。

目的 对131I与抗甲状腺药物(ATD)治疗儿童Graves病进行前瞻性对比性研究，定量评价两种方法的优劣。 方法 80例8至14岁Graves病患儿，根据患儿的年龄、性别、病程、甲状腺大小、血清甲状腺激素水平等进行配对，分为131I与ATD治疗组，至少观察2年以上。甲状腺功能亢进症(甲亢)治愈为0分，好转为1分，无效为2分，治疗后出现突眼或突眼加重、甲亢性心脏病、肝功能受损、白细胞减低者分别为2分，治疗后发生暂时性甲状腺功能减退症(甲减)为1分，永久性甲减为2分，甲亢治愈后复发为2分。将两组各自疗效及总得分进行比较。 结果 131I治疗组40例总得分34分，中位得分1分，ATD组40例总得分69分，中位得分1.5分，两组差异有统计学意义(P<0.01)，131I疗效优于ATD；治疗后两组在发生突眼和对突眼改善的疗效、甲减的发生率上差异无统计学意义(P>0.05)，而131I治疗组治疗后甲亢复发率明显低于ATD治疗组(P<0.05)；131I治疗组出现甲亢性心脏病、肝功能受损、白细胞降低等副作用低于ATD治疗组(P<0.05)。 结论 131I治疗儿童Graves病的综合疗效优于ATD。

目的 探讨外周血中性粒细胞CD64表达在新生儿败血症早期诊断中的价值。 方法 89例疑似败血症患儿，通过临床表现、血培养及5项非特异性指标：白细胞、血小板、血浆C反应蛋白、微量血沉和未成熟中性粒细胞与中性粒细胞总数比值，分为败血症组39例和非败血症感染组50例。另设对照组19例。采用流式细胞仪检测外周血中性粒细胞CD64表达。 结果 败血症组患儿外周血中性粒细胞CD64表达率为(75.6±8.9)% ，显著高于非败血症感染组(29.1±6.2)%和对照组(5.1±1.1)%(P均<0.05) ，非败血症感染组与对照组比较差异也有统计学意义(P<0.05)；革兰阴性菌败血症患儿CD64表达率(79.5 ±3.5)%高于革兰阳性菌败血症(76.4±4.6)%，但二者差异无统计学意义(P>0.05) ；败血症组经抗感染治疗后CD64表达水平下降。中性粒细胞CD64对新生儿败血症诊断的敏感性97.4%，特异性84.0%，阳性预测值82.6%，阴性预测值分别为97.6%。CD64检测阳性率62.9%(56/89)高于血培养19.1%(17/89)和5项非特异性指标29.2%(26/89)(P均<0.05)。 结论 外周血中性粒细胞CD64测定可作为新生儿败血症早期诊断的指标，并可以判断疗效。

目的 研究山西汉族儿童维生素D受体(VDR)基因ApaI位点多态性与维生素D缺乏性佝偻病的关系，探讨个体遗传因素在佝偻病发病中的意义，为临床防治探索一条新途径。 方法 以血清25(OH)D3水平、骨源性碱性磷酸酶(BALP)以及临床症状和体征作为分组指标，确定佝偻病组(40例)、对照组(68例)作为研究对象。应用酶联免疫和放射免疫方法，采用聚合酶链反应和限制性片段长度多态性技术(PCR-RFLP)检测VDR基因ApaI位点多态性，Hardy-Weinberg遗传平衡检验方法进行基因分布遗传平衡吻合度检验。 结果 佝偻病组AA、Aa、aa基因型分布频率分别为5.0%、52.5%和42.5%。对照组AA、Aa、aa基因型分布频率分别为4.4%、55.9%、39.7%。佝偻病组等位基因A、a分布频率分别为31.3%、68.7%，对照组等位基因A、a分布频率分别为32.3%、67.7%。VDR基因型分布频率、等位基因分布频率两组间差异无统计学意义(χ2＝0.089，P>0.05；χ2 ＝0.028，P>0.05)。两组间血清25(OH)D3水平差异有统计学意义(t＝-8.919，P<0.01)。 结论 (1)本组汉族儿童VDR基因ApaI位点多态性分布相对较均衡，a等位基因频率为67.7%，是优势基因。(2)本组人群VDR基因多态性分布与高加索人种相比明显不同，存在种族差异。(3)提示VDR基因ApaI位点多态性在个体是否发生维生素D缺乏性佝偻病方面可能没有意义。

目的 探讨狼疮性肾炎(LN)肾脏细胞凋亡与细胞增殖的关系，加强LN发病机制的认识。 方法 用原位末端标记法(TUNEL)检测31例LN患儿及9例对照的肾组织细胞凋亡，用免疫组化及图像分析的方法检测PCNA(增殖细胞核抗原)及PDCD5、Caspase-3的表达。 结果 (1) LN患儿肾组织中肾小球和肾小管的凋亡细胞、增殖细胞数、增殖细胞数/凋亡细胞数(P/A值)均明显高于对照组(LN组及对照组凋亡细胞、增殖细胞数、P/A值在肾小球分别为0.86±0.26比0.14±0.09，8.45±2.83比0.47±0.25，10.01±2.96比3.37±1.93，均P <0.01；在肾小管分别为1.16 ±0.42比0.16±0.07，13.73±3.54比1.32±0.15，12.81±3.91比8.94±1.79，均P<0.05)。(2) PDCD5在LN患儿肾小球的表达强度与对照组相比差异无统计学意义(0.09±0.05比0.08±0.02，P>0.05)，在肾小管的表达强度明显低于对照组(0.13 ±0.05比0.21 ±0.07，P<0.01)。(3) Caspase-3在LN患儿肾小球、肾小管的表达强度明显高于对照组(肾小球0.22±0.07比0.05±0.02，肾小管0.08±0.03比0.05±0.01，均P<0.01)。(4)直线相关分析显示：全部观察标本中肾小球凋亡细胞数与Caspase-3的表达强度呈正相关(r＝ 0.718 ，P<0.01)，与PDCD5的表达强度无显著相关性(r＝0.054，P>0.05)；全部观察标本中肾小球、肾小管PDCD5的表达强度均与肾小球、肾小管Caspase-3的表达强度无明显相关性(r＝0.061，P>0.05，r＝0.049，P>0.05)。多元逐步回归分析显示：在α＝0.15水平上，全部观察标本中肾小管凋亡细胞数与PDCD5的表达强度呈负相关(回归系数为-3.686, t＝-2.875 , P＝0.007)，与Caspase-3的表达强度呈正相关(回归系数为4.761，t＝1.772，P＝0.085)。 结论 (1)LN患儿肾组织细胞凋亡虽然比对照组增加，但相对细胞增殖来说表现为不足；(2)Caspase-3参与了LN患儿肾组织肾小球、肾小管的细胞凋亡；(3)尚不能证实PDCD5参与了LN患儿肾小球细胞凋亡；但可能参与了肾小管的细胞凋亡。