2003年 · 第41卷第12期

目的 探讨用临床表现及实验室检查评分的方法判断早产低出生体重儿院内细菌感染的可能性。 方法 将研究对象按现行新生儿感染的诊断标准分为感染组(A组)及对照组(B组)，按照临床表现的严重程度及临床常用实验室检查结果予以综合性评分，并以有效抗生素治疗后进行对照，分别对组间及组内的评分进行比较。 结果 治疗前24 h A组评分大于B组，两组评分之间差异有显著性(P<0.01)，有效抗生素治疗后A组与B组评分之间差异无显著性(P>0.05)。在A组治疗前与治疗后评分差异有显著性(P<0.01)。B组中≥11分者在抗生素治疗后评分下降，并与治疗前比较差异有显著性(P<0.01)；<11分者差异无显著性。提示现行诊断新生儿感染的标准，对早产儿及胎龄小的极低出生体重儿不敏感。 结论 对早产儿及低出生体重儿进行临床综合评分，有利于判断患儿感染的可能性，并可监测抗感染治疗的有效性。

目的 探讨宫内感染后胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、GFAP mRNA和白介素-1β mRNA(IL-1β mRNA)、肿瘤坏死因子-α mRNA(TNF-αmRNA)在新生大鼠脑组织中的变化。 方法 建立宫内大肠杆菌感染的大鼠模型，应用HE染色和免疫组化方法研究新生1、3、7日龄大鼠脑白质组织病理特点和GFAP表达变化以及RT-PCR法检测GFAP mRNA、IL-1β mRNA和TNF-α mRNA的表达变化。 结果 宫内感染后7日龄大鼠脑白质病理改变包括脑白质染色淡，结构疏松等。感染组7日龄大鼠GFAP阳性细胞数在脑室旁白质和海马区明显多于对照组(脑室旁白质9.73±3.55 vs 5.67±1.90，P<0.05；海马7.81±3.61 vs 2.16±1.11，P<0.05)；在胼胝体区两组比较差异无显著意义(P>0.05)。感染组1、3日龄大鼠GFAP mRNA表达水平明显高于对照组(1日龄0.25±0.07 vs 0.15±0.08，P<0.05；3日龄0.50±0.09 vs 0.39±0.08，P<0.05)；而7日龄大鼠GFAP mRNA表达水平两组比较差异无显著意义(P>0.05)。感染组1日龄大鼠IL-1β mRNA和TNF-α mRNA表达水平均明显高于对照组(IL-1β mRNA：0.83±0.19 vs 0.50±0.30，P<0.05；TNF-α mRNA：0.74±0.30 vs 0.30±0.20，P<0.05)。3、7日龄大鼠IL-1β mRNA和TNF-α mRNA表达水平两组比较差异无显著意义(P均>0.05)。 结论 宫内感染能够导致新生大鼠的脑白质损伤，IL-1β和TNF-α可能参与了脑白质损伤的发病机制。

目的 探讨全身低温对缺氧缺血性脑损伤的保护作用及其机理。 方法 结扎7日龄Wistar大鼠左侧颈总动脉后吸入7.7%氧气60 min制成脑缺氧缺血(HI)模型，随机分成低温组(30℃，n＝18)和常温组(36℃，n＝18)给予维持恒定目标温度10 h。在HI后24 h，每组8只取脑进行匀浆用于半胱天冬酶-2, 3(caspase-2, 3)活性测定和Western蛋白印迹检查，其余每组10只在HI后72 h处死，取脑进行石蜡包埋，冠状切片10 μm用于活性caspase-3,凋亡诱导因子(AIF),发夹寡核苷酸探针原位杂交(HPP)检测凋亡及相关因子，微管相关蛋白-2 (MAP-2)免疫组化染色用于计算脑梗塞体积和海马CA1神经元丢失，HE染色计算脑损伤积分。 结果 常温组在HI后24 h损伤侧大脑半球caspase-2, 3的活性[(27.7±14.7)、(94.9±53.1)pmol/(min·mg蛋白)]均明显高于正常对照组[(7.6±0.7)、(12.9±0.5)pmol/(min·mg蛋白)]和低温干预组[(7.9±3.4)、(21.1±18.7)pmol/(min·mg蛋白)]，P<0.01；而低温组与正常对照组相比无明显差异。Western蛋白印迹结果显示低温组caspase-3的激活受到明显抑制。免疫组化显示常温组活性caspase-3及AIF的阳性细胞数(中位数148.5; 22/视野)明显高于低温组(中位数48.5; 9/视野) ，P<0.05；反应凋亡的HPP的阳性细胞数在常温组(中位数144/视野)也明显高于低温组(中位数133/视野)，P<0.05。低温组脑损伤积分(10.4±2.9)明显低于常温组(14.2±3.5)，P<0.05；低温干预组脑梗塞体积及神经元丢失数[( 40.5±34.8)mm3; 25.7±11.5]均明显低于常温组[(73.9±22.4)mm3、37.4±10.6，P<0.05]。 结论 持续10 h全身低温对HI脑损伤有明显保护作用，其机制与抑制神经细胞凋亡及凋亡相关信号的传导有关。

目的 探讨戊二酸尿症Ⅱ型(glutaric aciduria type Ⅱ，GAⅡ)的诊断和治疗。 方法 应用气相色谱-质谱分析技术(GC-MS)对2例肌无力患儿的尿滤纸片标本进行有机酸分析。确诊为GAⅡ型后，在低蛋白、低脂肪、高碳水化合物饮食控制的基础上，应用VitB2进行治疗，并观察治疗前后临床、生化及尿有机酸分析等方面的变化。 结果 (1)两患儿尿滤纸片标本有机酸分析检出大量戊二酸、异戊酰甘氨酸、乙基丙二酸及己二酸、辛二酸、癸二酸等二羧酸，提示为戊二酸尿症Ⅱ型；(2)经饮食控制和VitB2治疗后，2例患儿的肌无力症状明显好转，肌力明显增强，四肢肌张力恢复正常，尿有机酸分析显示上述有机酸的排出量逐步降低、甚至消失，血清谷-草转氨酶、肌酸激酶以及乳酸脱氢酶水平均较治疗前显著降低。血氨基本降至正常水平。 结论 戊二酸尿症是一种严重的先天代谢障碍性疾病。部分本症患儿在低蛋白、低脂肪、高碳水化合物饮食控制的基础上，应用VitB2进行治疗，可取得较好的临床效果。

目的 MDM2是一种原癌基因，可与P53结合使P53失去抑癌功能。有证据表明，MDM2可能有P53不依赖的癌基因活性，作为一个转录因子直接调节细胞周期调控和转化过程中的其他基因的表达。研究显示，NF-κB的P65亚型是一个肿瘤药物诱导的细胞凋亡的重要抑制因子，在细胞转化及凋亡的调控中起着重要的作用。探讨儿童急性淋巴细胞白血病MDM2，NF-κB及P53相互作用的机制。 方法 应用儿童急性淋巴细胞白血病细胞EU-4细胞株作为模型，转染MDM2进入EU-4细胞，用免疫印迹及Northern杂交法检测转染前后P65的表达。因为E-Selectin的表达是P65依赖性的，共转染MDM2，P65及E-Selectin启动子CAT报告基因进入EU-4细胞，用ELISA测CAT活性。同时分别将不同浓度的阿霉素(15 μg/ml, 7.5 μg/ml, 5 μg/ml,及1 μg/ml)加入转染前后的EU-4细胞，用MTT法检测细胞的药物敏感性。 结果 MDM2的转染能上调P65的表达并增加了NF-κB的活性，该作用为P53不依赖性。而在缺乏P65的情况下，MDM2对CAT活性没有影响。MDM2反义寡核苷酸处理对CAT活性没有影响。MTT检测表明，稳定转染MDM2的细胞对阿霉素(ADM)耐药。 结论 (1)MDM2上调了儿童白血病细胞P65的表达。(2)MDM2增加了白血病细胞对阿霉素的抗药性。(3)在P53缺乏时，MDM2作为一个转录因子直接激活白血病细胞P65基因的表达及增加NF-κB活性，从而发挥其抗凋亡的效应并揭示了肿瘤细胞化疗耐药的新机制。

目的 针对同种异体细胞移植的免疫反应主要是由主要组织相容性复合物Ⅱ(major histocompatibility complex, MHC-Ⅱ，人类中亦称HLA-Ⅱ)类抗原介导，而MHCⅡ类分子转录激活因子(MHC class Ⅱ transactivator，CⅡTA)对MHCⅡ分子的表达起严格且专一性的调控作用，拟通过抗CⅡTA锤头状核酶(ribozyme，Rz)抑制细胞表面MHCⅡ分子的表达。 方法 设计并合成针对人类CⅡTA基因第134、218、464位点的一组核酶，分别命名为Rz134、Rz218、Rz464。通过体外制备和活性鉴定，筛选出活性较高的核酶——Rz464。将Rz464克隆到含有核糖体内进入位点及增强型绿色荧光蛋白的表达载体(internal ribosome entry site-enhanced green fluorescent protein，pIRES2-EGFP)，简称为pRz464，并稳定转染Jukart细胞株(pRz464-J)，流式细胞术检测经典的MHCⅡ(HLA-DR、DP、DQ)抗原表达，逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测CⅡTA mRNA水平。 结果 pRz464-J与无关核酶组比较，HLA-DR、DP、DQ抗原诱导型表达分别降低了73.27%、88.93%、58.82%；同时CⅡTA的诱导性mRNA含量明显减少(P<0.01)。 结论 抗CⅡTA锤头状核酶可抑制CⅡ-AT mRNA的表达，从而阻止其调控的相应基因——MHCⅡ分子的表达，为进一步探讨免疫耐受形成及其在防治移植物抗宿主病(graft versus host disease，GVHD)的前景中奠定了基础。

目的 分析巯嘌呤甲基转移酶(thiopurine methyltransferase，TPMT)基因型对急性白血病(AL)患儿巯嘌呤(6-mercaptopurine，6-MP)耐受性的影响，提高患儿对巯嘌呤类药物治疗的有效性和安全性。 方法 应用以聚合酶链反应(PCR)为基础的2种方法并结合DNA直接测序，检测250例健康成人和280例AL患儿TPMT基因第5外显子G238C、第7外显子G460A和第10外显子A719G的3个多态性位点。详细记录160例患儿6-MP全量治疗时间、减少剂量时间和未治疗时间。 结果 280例AL患儿中，10例为TPMT第10外显子A719G杂合变异，变异率为3.6%，未发现纯合变异，变异的等位基因均为TPMT*3C。AL患儿TPMT基因变异的频率和类型与健康成人差异无显著性。在观察的160例患儿中，有28%的患儿未接受6-MP标准剂量、全疗程治疗。其中TPMT野生型者39例，占野生型患儿的26%，杂合型者6例，占杂合型患儿的60% (P＝0.03)。而且，6/10例TPMT杂合型者和30/150例野生型者减少6-MP的剂量(P＝0.009)。 结论 TPMT基因的多态性位点与AL患儿6-MP的耐受性有关。TPMT杂合型患儿中不耐受6-MP的比例明显高于TPMT野生型者，必须中断治疗或减少剂量以避免较大毒性反应的发生。提示检测TPMT基因型有利于提高巯嘌呤类药物的有效性和安全性。

目的 探讨空肠弯曲菌毒素致周围神经损伤的作用机理。 方法 (1)将PEN 19-CJ毒素(CJT)免疫后的Wistar大鼠血清，以及体外激活的该鼠PBMC上清液，分别注入健康大鼠神经外膜下及静脉内。(2)取大鼠坐骨神经进行单纤维分离，甲苯胺蓝光镜和电镜超微组织病理学检测。(3)用SABC及FITC-免疫荧光法对与CJT共同作用后的正常大鼠和人坐骨神经，以及CJT致病变神经组织标本进行免疫酶组织化学和免疫荧光检测，并以核酸杂交技术检测其TNF-α mRNA表达。 结果 (1)CJT经外膜下及静脉注射均可诱发坐骨神经明显轴索变性及髓鞘脱失病理学改变。外膜下注射组原纤维病变率为76.8%(2 763/3 600)，对照组仅为9.6% (230/2 400)(P<0.01)。静脉注射后病变原纤维发生率于第3天达高峰，为19.5%(390/2 000)，持续至第14天时病变仍为15.5%(310/2 000)，而对照组始终无病变发生(P<0.01)。CJT免疫血清及其PBMC上清液外膜下注射原纤维病变率与对照组无明显差异(P>0.05)。(2)CJT与正常大鼠和人坐骨神经共同孵育后，以及CJT致周围神经病变组织免疫化学检测显示不同程度的CJT结合阳性反应。(3)CJT静脉注射后，在周围神经已出现明显病变时，其他脏器未见明显组织学异常。 结论 (1)CJT对周围神经具有直接毒性损伤作用。在神经组织已有明显病变情况下，脑、肝、肾等脏器未见明显改变，提示CJT对周围神经组织损伤的相对特异性。(2)CJ诱发的吉兰-巴雷综合征中，CJT本身无明显免疫学致病力，可能通过其他途径增强了LPS对周围神经的免疫损伤作用。

目的 观察姜黄素预处理对大鼠感染性脑水肿的保护作用，并从预处理后的脑组织氧自由基、细胞因子含量及HSP70表达三方面探讨其可能的作用机制。 方法 SD大鼠随机分为5组：(1)正常对照组(NS组，n＝9)；(2)感染性脑水肿组(PB组，n＝12)；(3)溶剂对照组(DMSO组，n＝9)；(4)热休克预处理组(HS组，n＝9)；(5)姜黄素预处理组(CUR组，n＝13)。制备感染性脑水肿模型。用干湿法测定脑含水量；原子光谱吸收法测定脑组织钠、钾含量；比色法测定脑组织匀浆上清MDA、SOD含量；ELISA测定TNF-α、IL-1β含量及Western印迹方法研究HSP70的表达。 结果 脑含水量、脑组织钠离子含量、脑组织匀浆上清MDA含量及TNF-α、IL-1β含量：PB组比NS组增高(P<0.01)，HS组、CUR组低于PB组(P<0.01或P<0.05)。SOD含量PB组低于NS组(P<0.05)，HS组、CUR组高于PB组(P<0.05)。Western印迹分析经图像处理仪扫描显示CUR组、HS组、PB组高于NS组及DMSO组，其中以CUR组最高(P<0.01)。 结论 姜黄素预处理对大鼠感染性脑水肿具有保护作用，姜黄素的保护作用可能与抗脂质过氧化、抑制细胞因子的过度产生、诱导或加强HSP70的表达这三方面均有关。