2003年 · 第41卷第04期

目的 建立一种适合我国国情的有机酸尿症及其他遗传性代谢病的高危筛查诊断方法。 方法 应用滤纸片收集尿标本，建立尿有机酸及氨基酸代谢产物的萃取、衍化和气相色谱-质谱分析方法；成立遗传代谢性疾病高危筛查诊断协作网络并开展工作。 结果 352例样本中共检出阳性病例34例(9.66%)，病种包括甲基丙二酸血症6例，α-酮戊二酸尿症5例，酪氨酸血症Ⅰ型4例，二羧酸尿症4例，多种羧化酶缺乏症3例，苯丙酮尿症3例，高乳酸血症3例，丙酸血症2例，鸟氨酸氨甲酰基转移酶缺乏症1例，乙基丙二酸-己二酸尿症1例，戊二酸尿症Ⅱ型1例和3-甲基巴豆酰羧化酶缺乏症1例。常见的临床症状和体征包括智能发育落后、惊厥、肌张力异常和黄疸。常规实验室检查多见代谢性酸中毒、低血糖和高血氨等异常。 结论 尿有机酸气相色谱-质谱分析为遗传性代谢病高危筛查诊断的重要技术。应用滤纸片收集尿标本后在遗传代谢病诊断中心进行检测为实用而有效的方法。建立协作网络是成功开展遗传性代谢病高危筛查诊断工作的关键。

目的 探讨生物素酶缺乏症的临床特征、诊断与治疗方法。 方法 运用尿有机酸分析(气相色谱-质谱联用)及干燥滤纸血片生物素酶测定进行筛查与诊断，对6例生物素酶缺乏症患儿的临床经过进行分析。 结果 (1)6例干燥滤纸血片生物素酶活性均小于0.1 pmol/(min·3 mm)。尿有机酸分析显示例1、2、3、5乳酸、3-羟基丙酸、丙酮酸、丙酰甘氨酸、甲基巴豆酰甘氨酸、β-羟基异戊酸浓度明显增高，例4、6仅显示乳酸、丙酮酸、甲基巴豆酰甘氨酸增高。(2)6例各有不同程度的神经系统损害和皮肤粘膜异常。例1~3为婴儿期起病，因惊厥、智力运动倒退、呕吐、意识障碍来院，合并贫血、酮症酸中毒、低血糖。例2于7个月起出现顽固性湿疹，口角、肛门周围糜烂。例4以扭转痉挛及全身性脓疱型牛皮癣为主。例5、6分别于7岁、5岁起病，进行性肢体运动障碍，MRI显示颈髓炎性脱髓鞘病变。例6伴视神经萎缩、脱发。除例3未接受治疗外，5例经生物素补充治疗后疗效显著，皮肤损害均已控制，神经系统情况逐渐好转。例4、6仍存在明显的下肢运动障碍。 结论 生物素酶缺乏症患儿临床表现复杂，生物素补充治疗疗效显著，早期发现、合理治疗可有效地改善预后。对可疑患者应及早进行尿有机酸分析和血清生物素酶测定等有关检查。

目的 对临床诊断为糖原累积症Ⅰa型的患儿及其父母进行葡萄糖-6-磷酸酶(G6Pase)的基因突变筛查，并对基因突变完全相同的患儿进行临床特点的比较分析。 方法 提取患儿及其父母外周血DNA，分别进行G6Pase基因五个外显子的PCR扩增，纯化后进行DNA直接测序；对基因突变相同的6家系7例患儿进行临床表现、生化改变及对治疗反应的比较分析。 结果 所有7例患儿均为G6Pase基因外显子5核苷酸位点第727处纯合子型G→T的单个碱基突变(G727T)，而其父母均为此杂合突变的携带者。基因突变完全相同的7例患儿临床表现的严重性、对治疗的反应不全相同，除经典的低血糖、生长发育落后、肝脏肿大、肾脏肿大、代谢性酸中毒和乳酸血症外，尚有脾大(1例)，轻度肝功能受损(6例)，多发肝腺瘤(1例)等。 结论 G727T突变很可能是中国人种糖原累积症Ⅰa型的较常见突变；具有相同突变的患儿不仅临床表现轻重不同，而且，对生玉米淀粉治疗的反应也各有差异；通过典型的临床及生化表现辅以外周血基因分析，完全可以取代传统的有创伤性肝穿刺酶学分析的确诊方法。

目的 探讨应用连锁分析和基因测序方法对X-连锁迟发性脊椎骨骺发育不良(X linked spondylepiphyseal dysplasia tarda, SEDL)进行基因诊断的可行性。 方法 利用与SEDL基因毗邻的微卫星遗传标记DXS16多态性对一个SEDL大家系的21名成员进行连锁分析，确定与该家系SEDL致病基因连锁的DXS16等位基因型，对家系中的年轻女性和年幼男性进行基因诊断。为探讨连锁分析诊断的准确性，随后对SEDL基因编码外显子3~6进行PCR扩增产物双向直接测序以确定导致该家系发病的SEDL基因突变型，通过检测致病基因对待诊对象进行直接诊断。 结果 21名家系成员的连锁分析结果显示与致病基因连锁的DXS16是D2等位基因，6位待诊对象中Ⅳ14、Ⅳ19、Ⅳ21、Ⅴ7各有一个DXS16 D2等位基因，表明她们是携带者；而Ⅳ23和Ⅴ4不具有与致病基因连锁的DXS16等位基因，表明她(他)们是正常人。对21名成员的DNA测序证实该家系的致病突变是首次发现的SEDL基因第2内含子剪接受体处IVS2-2A→C突变。待诊对象Ⅳ14、Ⅳ19、Ⅳ21、Ⅴ7携带该突变，Ⅳ23和Ⅴ4基因型正常。基因测序和连锁分析的诊断结果完全一致。 结论 连锁分析用于SEDL基因诊断简便、快速、花费少、与基因测序方法一样准确，解决了长期以来SEDL症状前患者和潜在女性携带者无法诊断的难题，有重要的临床价值。

目的 研究组织相容性复合体-DMA、DMB基因与中国人1型糖尿病临床状态的相关性。 方法 根据性别、发病年龄、起病急缓、起病时酮症发生情况、胰岛β细胞残存功能(就诊时空腹C-肽水平)等临床状态的不同，将1型糖尿病患儿进行分组，研究DM易感性基因和二聚体在不同临床状态分组中的频率分布情况。 结果 (1)DMA*0103、DMB*0103基因在1型糖尿病患儿中的频率显著高于正常对照，分别为50.0%、4.0%，为1型糖尿病的易感性基因。DMA*0103/DMB*0102、DMA*0103/DMB*0103、DMA*0103/DMB*0101二聚体在1型糖尿病患儿中的频率也显著增高，分别为15%、24%、13% ，为1型糖尿病的易感性二聚体。(2)携带DMB*0103基因或DM易感性二聚体的个体，在C-肽低水平患儿组中的频率均显著高于C-肽高水平组。DM易感性二聚体与患儿的发病年龄及发病时酮症发生情况也有显著的相关性，携带DM易感性二聚体的个体，10岁前发生糖尿病的概率显著增加，新发生1型糖尿病时也更易出现酮症或酮症酸中毒。 结论 DM基因和二聚体均与1型糖尿病临床状态存在显著的相关性，1型糖尿病的临床状态异质性有一定的遗传机理起作用。

目的 分析胸腹非同步呼吸运动，诊断膈肌疲劳。 方法 采用电阻抗呼吸图仪，观察53例有非同步呼吸运动的患儿胸腹运动曲线是否同步、主波方向是否一致，并计算胸腹运动曲线峰值错位时间与呼吸周期的比值(M值)。再以腹部阻抗值为X轴，胸部阻抗值为Y轴，描绘胸腹呼吸运动曲线二维图和最大X值到最小X值连线与X轴的夹角α值。并检测动脉血气及监测呼吸和心率的变化。 结果 (1)一维图M值和二维图α值之间存在十分显著的正相关关系(r＝0.956, P<0.001),非同步呼吸运动可分为三型：①膈肌疲劳Ⅰ型：一维图呈胸腹部矛盾呼吸运动曲线，M值为(48.1±4.4)%，二维图顺时针方向运行，α值为(138.3±15.0)°；②膈肌疲劳Ⅱ型：一维图呈现胸腹呼吸运动曲线峰值错位，M值为(16.5±4.7)%，二维图为逆时针方向运行，α值为(55.3±10.8)°；③膈肌疲劳Ⅲ型：一维图呈腹部双峰型曲线，M值为0，二维图呈"8"字型双环，α值为(41.3 ±3.8)°。(2)动脉血pH、PCO2在Ⅰ型、Ⅱ型与Ⅲ型或对照组组间相比差异均有非常显著性(P分别<0.001 )，而Ⅲ型与对照组相比差异无显著性(P>0.05)。(3)呼吸频率和心率无论在Ⅰ型、Ⅱ型或Ⅲ型均高于对照组(P分别<0.001)，且它们相互之间差异亦有显著性(P分别<0.001)。(4)一维图M值和二维图α值都同动脉血pH存在负相关关系(r＝-0.514, -0.497, P均<0.001),一维图M值和二维图α值都同PCO2存在正相关关系(r＝0.672,0.625, P<0.001，0.01)。 结论 (1)根据电阻抗呼吸图的特征，可将膈肌疲劳分成三型。(2)儿童膈肌疲劳的发展是一系列特征性的变化过程。(3) Ⅲ型电阻抗呼吸图的出现是采用各种防治对策，避免恶化为呼吸衰竭的关键时期。

目的 探讨嗜酸性粒细胞(EOS)凋亡及调控因子在儿童哮喘发病机制中的作用和临床意义。 方法 采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)技术进行原位活化嗜酸性粒细胞(EG2+)细胞凋亡的检测，以免疫组化标记EG2+细胞和凋亡相关基因BcL-2的表达，对11例哮喘缓解期患儿吸入糖皮质激素前后及7例非哮喘患儿的支气管粘膜、痰液、BAL、外周血液中EG2+细胞及其凋亡、BcL-2的表达进行研究。 结果 (1)治疗前哮喘患儿支气管粘膜、痰液、BAL中的EG2+凋亡细胞分别为0(0~3)个/mm2、(4.51±2.12)%、(4.01±1.91)%，均低于对照组的3(0~10)个/mm2、(12.11±0.41)%、(13.42±3.83)%(均P<0.01)，而EG2+细胞分别为62(23~142)个/mm2、(8.24±3.13)%、(2.04±0.92)%，均高于对照组(P<0.001)；吸入糖皮质激素治疗后上述标本中EG2+凋亡细胞较治疗前明显增高(均P<0.01)，并高于对照组，分别为5(1~11)个/mm2、(20.01±8.23)%、(21.23±10.24)%；EG2+细胞较治疗前减少(P<0.01, <0.05)，分别为30(12~51)个/mm2、(3.83±1.14)%、(0.64±0.11)%，但仍高于对照组；治疗前后支气管粘膜中BcL-2＋细胞无明显变化(P>0.05)；肺功能改善(P<0.05)。(2)哮喘患儿治疗前后外周血直接检测EOS凋亡与对照组比较，差异无显著性(均P>0.05)。(3)痰液、BAL、支气管粘膜中EG2+凋亡细胞与FEV1%之间存在中度正相关(r＝0.563, 0.523，0.502，P均<0.05)。 结论 哮喘患儿气道局部存在EG2+细胞凋亡障碍，这是其局部EOS浸润，导致慢性炎症的重要原因。吸入糖皮质激素后促进气道EOS凋亡是治疗哮喘的主要机制之一。

目的 探讨地塞米松、氨力农和氨基胍三种不同作用机理的药物对内毒素休克兔氧代谢的影响。 方法 将35只兔随机均分成5组，即手术对照组、内毒素组、地塞米松组、氨力农组和氨基胍组。各组分别于术后30 min(T0)、注射内毒素(400 μg/kg)后达到休克诊断标准时(T)、用药治疗后1~6 h (T1~T6)取动脉、混合静脉血作血气分析，记录心输出量。计算氧运输量(DO2)，氧消耗量(VO2)和氧摄取率(ERO2)。 结果 T0点所有指标组间差异无显著性。内毒素组DO2与VO2逐渐下降，试验结束时DO2为(8.1±2.4) ml/(kg·min)，VO2为(2.7±1.0) ml/(kg·min)。地塞米松组DO2和VO2于治疗后保持稳定，T6时分别为(12.4±3.1)和(5.1±1.6) ml/(kg·min)，均显著高于内毒素组(P分别<0.01，<0.05)。氨基胍组T1、T2点DO2分别为(17.0±2.8)、(17.2±2.5)ml/(kg·min),明显高于内毒素组的(12.2±2.6)和(14.1±3.8) ml/(kg·min)，P均<0.05，但试验结束时DO2为(11.2±1.7) ml/(kg·min)与内毒素组差异无显著性(P>0.05)。用药后VO2缓慢升高。试验结束时VO2与内毒素组差异有显著性(P<0.01)。氨力农组仅T3、T4点VO2较内毒素组显著升高。T6时DO2为(9.5±1.3) ml/(kg·min)，VO2为(4.1±1.5) ml/(kg·min)与内毒素组相比差异无显著性(P>0.05)。试验结束时治疗组ERO2与内毒素组差异无显著性(P>0.05)。 结论 三种药物可不同程度改善内毒素休克兔的氧利用，尤以地塞米松和氨基胍作用显著。

目的 探讨细菌感染状态下，新生儿中性粒细胞非髓过氧化物酶(non-myeloperoxidase，NMPO)介导系统活性的变化，以及脐带血血浆对NMPO介导系统激活的影响。 方法 利用佛波醇乙酯(phorbol 12-myristate 13-acetate, PMA)、金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌刺激脐带血中性粒细胞，并将脐带血的血细胞或血浆与成人外周血的血细胞或血浆进行交叉混合，结合荧光染色-流式细胞仪技术检测NMPO介导系统的活性。 结果 利用PMA刺激，以模拟非感染状态下NMPO介导系统的激活，新生儿脐带血中性粒细胞的NMPO介导系统的活性与成人相比明显低下(t＝3.378，P<0.01)。利用金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌刺激，以模拟感染状态下NMPO介导系统的激活，新生儿脐带血NMPO介导系统的活性均表现为低下，但是在大肠埃希菌刺激时表现的更明显(t＝12.150, P<0.001)。同时，在利用大肠埃希菌刺激时，脐带血血浆可以明显地抑制NMPO介导系统的活性，表现为混合了脐带血血浆的新生儿脐带血和成人外周血中性粒细胞NMPO介导系统的活性均明显降低。 结论 新生儿的中性粒细胞功能本身可能存在着发育的不完善。大肠埃希菌刺激时，新生儿脐带血NMPO介导系统的活性明显低下，可能与新生儿血浆中所含有免疫球蛋白量较低有关，这提示免疫球蛋白在抗革兰阴性菌感染时对中性粒细胞的杀菌作用起到了重要的调节作用。

目的 探讨癫发作激发的程序性细胞死亡机制是否参与癫发作所致的神经细胞坏死过程。 方法 利用Sprague-Dawley大鼠，经腹腔内注射毛果云香碱(pilocarpine)制作癫发作模型。在实验24 h和72 h，脑灌流固定后，取脑进行检测。经HE和TUNEL染色，在光镜下，观察神经细胞死亡，并采用免疫组织化学方法检测Bax和Bcl-2基因表达。 结果 癫发作24 h和72 h,在大鼠海马CA1区，细胞损伤形态上是细胞坏死。但癫发作72 h，在海马CA1区，TUNEL阳性的坏死细胞数明显增多，与对照组比较差异有显著性(P<0.001).癫发作后72 h, Bax表达显著增高，与对照组比较差异有显著性(P<0.001)，而Bcl-2表达无增高，Bcl-2/Bax比值降低。 结论 癫发作所致的迟发性神经细胞坏死伴有程序性细胞死亡机制。