2001年 · 第39卷第11期

目的 探讨儿童过敏性紫癜(HSP)的临床特点。 方法 对1996年1月1日~2000年12月31日，在本院住院的575例过敏性紫癜患儿的发病特点、临床表现、肾损害相关因素及预后等方面进行回顾性分析。 结果 (1)1996~2000年，每年的患病率依次为0.43%、0.60%、0.75%、0.78%及1.21%。(2)农村患儿386例，占67.13%。(3)诱因：感染337例，占58.61%，进食特殊食物128例，占22.26%。(4)出现肾脏症状272例，发生率为47.30%。118例皮肤紫癜者25例出现肾脏损害，占21.19%；114例皮肤紫癜加关节症状者，34例出现肾脏损害者，占29.82%；192例皮肤紫癜加消化道症状者中119例发生肾损害，占61.98%；151例皮肤紫癜加消化道症状加关节症状者中94例发生肾损害，占62.25% (P<0.005)。(5)预后：543例治愈好转，占94.48%。9例血C3减低者中3例分别在1~2年后出现典型的SLE表现。 结论 (1)HSP患病率有逐年升高趋势。农村患儿发病较多。发病诱因仍以感染为第一位。(2)HSP早期出现较多肾外症状，特别是消化道症状明显者，易发生肾脏损害。(3)HSP中出现血C3减低者，其早期"紫癜样皮疹"有可能为SLE的皮肤损害之一；紫癜肾伴血C3减低者，应及早做肾活检，以与早期狼疮肾鉴别。

目的 探讨白介素-4(IL-4)基因修饰对儿童实体瘤多药耐药(MDR)的逆转作用及可能机制。 方法 用逆转录病毒载体将人IL-4基因导入人肝母细胞瘤细胞系HepG2，采用MTT生物活性法检测瘤细胞对化疗药物的敏感性。间接免疫荧光分光光度分析瘤细胞P-糖蛋白(P-gp)的表达率。微量荧光分光光度法分析瘤细胞内阿霉素(ADM)聚集量。 结果 IL-4基因修饰显著降低瘤细胞对种化疗药物的半数抑制浓度(IC50)，表现出MDR逆转效应(耐药逆转倍数在6~32倍数间)及明显增加化疗药物在瘤细胞内聚集，同时IL-4基因修饰瘤细胞P-gp阳性表达率(5±0.6%)较野生型及空载体修饰细胞(98.5±0.5%、97.0±1.0%)明显减低。IL-4基因修饰对瘤细胞的MDR逆转作用可为PKC激活剂TPA所阻断。IL-4基因修饰瘤苗及其培养上清与野生型细胞共培养，也可使野生型瘤细胞产生MDR逆转效应。 结论 IL-4基因修饰瘤苗可通过自分泌、旁分泌形式逆转瘤细胞MDR，此作用可能与其抑制PKC活性及下调P-gp表达。

目的 研究儿童系统性红斑狼疮(SLE)与HLA-II类DR等位基因的相关性，以及临床表型与基因序列及可能的分子结构之间的关系，可望对(SLE)的易感基因有所发现，并揭示其可能的发病机理。 方法 应用PCR-SSP方法，分析了53例SLE患者及78例正常对照HLA-II类基因DRB1位点的多态性，并对DRB1*15阳性患者35人进行PCR-SSCP分析，结合PCR产物直接测序，分析临床表型与基因序列之间的关系。 结果 SLE患者DRB1*15基因频率较对照明显增高(RR＝4.5, Pc<0.05，χ2＝15.3)，DRB1*03基因频率较对照升高(RR＝5.4，Pc<0.05，χ2＝7.7)；而DRB1*04基因频率明显降低(RR＝0.22，Pc<0.05，χ2＝8.2)。其中，HLA基因的型别不同，可影响SLE的临床表现。合并狼疮脑病、狼疮肾炎的重症患者，DRB1*15基因第123位碱基发生C→G取代突变，从而使第41位氨基酸由天冬氨酸变为谷氨酸。 结论 儿童SLE的发病与携带HLA-DRB1*15、DRB1*03等位基因有关，此二基因可能为疾病相关基因。其中HLA型别不同，影响SLE患者的临床表现。DRB1*04基因频率降低，可能为疾病保护性基因。发生DRB1*15基因编码序列突变者以重症患者为主，提示HLA分子结构改变对功能的影响，此结论可能部分性解释SLE的发病机理。

目的 探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-I)对脐血免疫活性细胞功能的影响。 方法 采用3H-TdR掺入法和3H-TdR释放法从T细胞增殖，NK细胞杀伤活性， CTL杀伤活性三个方面来探讨IGF-I对脐血免疫活性细胞功能的影响。 结果 (1)IGF-I能明显增强PHA刺激的脐血T细胞DNA合成，促进其增殖(P<0.001)。(2)IGF-I能明显增强脐血NK细胞的基础杀伤活性和IL-2激活的NK细胞杀伤活性(P<0.005)，经IL-2和IGF-I联合处理后，脐血NK细胞杀伤活性接近IGF-I处理后的年长儿NK细胞杀伤活性(P>0.05)。(3)IGF-I能明显增强脐血CTL的杀伤活性(P<0.05)。 结论 IGF-I对多种脐血免疫活性细胞均有正性调节作用，可望将其作为一种免疫刺激剂应用于临床，但因人体神经内分泌免疫系统网络的复杂性，需作进一步研究以阐明其具体机制，为广泛应用于临床打下基础。

目的 研究人类细小病毒B19感染与小儿常见风湿性疾病的关系。 方法 用巢式PCR法对95例小儿常见风湿性疾病患者进行B19-DNA检测，对部分患者进行B19-IgM检测。 结果 (1)病例组B19-DNA阳性33例(34.7%)，健康对照组B19-DNA阳性2例(4.0%)；病例组B19-DNA阳性率与对照组相比有显著差异(P<0.01)。(2)病例组B19-IgM检测50例，阳性11例(22.0%)，健康对照组B19-IgM均为阴性；B19-IgM阳性率与对照组相比有显著差异(P<0.01)。(3)过敏性紫癜、幼年类风湿性关节炎、皮肌炎、系统性红斑狼疮、川崎病患儿B19-DNA及IgM阳性率分别为25%和20%、37.2%和20%、40%和20%、42.9%和28.6%、37.5%和25.0%。五种风湿性疾病B19-DNA及IgM阳性率无显著差异(P>0.05)。(4)50例成对标本中，10例B19-DNA、IgM均阳性，1例仅B19-IgM阳性，7例仅B19-DNA阳性，B19-DNA和IgM同时阴性32例，B19-DNA和IgM一致率为84.0%，两者结果有一致性(P<0.01)；50例中B19-DNA阳性17例(34.0%)，IgM阳性11例(22.0%)，两者差异无显著意义(P>0.05)。 结论 (1)我国风湿性疾病患儿有较高的B19感染率。(2) B19与小儿风湿性疾病密切相关，可能是导致这些疾病的主要病原体之一。

目的 研究视黄酸(RA)促进脐血淋巴细胞(CBL)细胞因子表达的作用途径，探讨视黄酸受体α在该过程中的可能作用。 方法 收集19例健康新生儿的脐血标本进行体外培养，采用RT-PCR法检测CBL中视黄酸受体α(RAR-α)、IL-2、IFN-γ和IL-4的mRNA水平。 结果 RA上调CBL中RAR-α的基因表达水平，培养24小时时的上调幅度为(1.17±0.07)倍(P<0.001)。RA上调IL-2的基因表达水平，培养24小时时的上调幅度为(1.29±0.20)倍(P<0.001)。RA也上调IFN-γ的基因表达水平，培养48小时时的上调幅度为(1.39±0.26)倍(P<0.001)。RA还上调IL-4的基因表达水平，培养24小时时的上调幅度为(1.52±0.44)倍(P<0.002)。RA使RAR-α基因表达的上调幅度与RA使IL-2、IFN-γ和IL-4基因表达的上调幅度皆存在正相关，r值分别为0.40、0.39和0.46, (P<0.05)。 结论 RAR-α可能参与RA对CBL细胞因子(IL-2、IFN-γ和IL-4)表达的促进作用。RA可能通过增加RAR-α的表达而上调IL-2、IFN-γ及IL-4等细胞因子的表达，从而促进CBL的功能。

目的 通过研究胰岛素样生长因子1(IGF-1)对脐血CD14＋单核细胞转化的树突状细胞分化成熟的影响，以探讨IGF-1对新生儿天然免疫的作用。 方法 利用无血清，无激素培养系统，体外培养10例健康足月新生儿脐血及10例健康成人外周血CD14＋单核细胞，观察IGF-1对新生儿脐血CD14＋单核细胞转化的树突状细胞(monocyte-derived dendritic cell, mDC)表型和功能的影响。 结果 与正常成人比较，IL-4＋GM-CSF诱导的新生儿脐血mDC中：CD1a＋细胞百分率和甘露糖受体(MR)阳性细胞百分率明显降低，细胞表面主要组织相容性II型抗原(MHCII)和CD40表达明显降低，其吞噬功能，抗原提呈功能明显下降。IGF-1能显著升高脐血mDCMHCII表达，下调甘露糖受体及细胞的吞噬功能。 结论 IGF-1体外可促进脐血CD14＋单核细胞转化的树突状细胞成熟。

目的 应用分子生物学技术探讨慢性肺疾病(CLD)和呼吸窘迫综合征(RDS)患儿肺部的炎症反应机制。 方法 应用原位基因杂交技术(in situ-hybridzation),结合免疫组织化学染色技术和常规组织染色技术检测尸解肺组织的炎性细胞浸润和细胞因子基因表达情况，结果用中位数(M)表示。 结果 新生儿RDS患儿肺内IL-8 mRNA基因表达为27 /5 mm2 ，明显高于对照组的2/5 mm2，差异有显著性(U＝3.23，P<0.01)；CLD患儿肺内IL-8 mRNA基因表达为56/5 mm2,也明显高于对照组的4/5 mm2，差异有显著性(U＝57.3，P<0.01)。RDS组肺间质CD68阳性巨噬细胞(145/5 mm2)、白细胞弹性蛋白酶(N-elastase)阳性多核粒细胞(133/5 mm2)均明显高于对照组(CD68细胞18/5 mm2, N-elastase细胞28/5 mm2)。 CLD组肺间质CD68阳性巨噬细胞(中位数为153/5 mm2)、N-elastase阳性的多核粒细胞(182/5 mm2)均明显高于对照组(CD68细胞31/5 mm2, N-elastase细胞37/5 mm2)。 CD3+淋巴细胞在RDS新生儿肺组织增加不明显(21/5 mm2和17/5 mm2，P>0.05)，而在CLD组肺组织中明显高于对照组(41/5 mm2和5/5 mm2, P<0.01)。 结论 RDS和CLD可引起肺组织细胞因子基因表达增加，提示炎症反应参与了RDS和CLD的病理生理发病机制。RDS时肺组织炎性细胞聚集的机制可能和CLD不完全相同。巨噬细胞和中性粒细胞是参与RDS病理机制的炎性细胞。当疾病发展到CLD时，除以上两种细胞外，CD3+淋巴细胞也参与其中，进一步加重疾病的病理变化。

目的 探讨硫酸镁对体外培养的神经细胞缺氧所致损伤的保护作用及其可能的机制。 方法 将培养至12 d的乳鼠神经细胞，随机分为正常培养组、对照缺氧组和硫酸镁治疗组，加入氰化钾以阻断细胞氧化磷酸化反应，观察硫酸镁对缺氧神经细胞的影响，作用12、24 h后，在光、电镜下观察细胞形态变化，并以MTT法测定细胞活力。 结果 氰化钾作用后，对照缺氧组细胞密度减小、突起萎缩、线粒体肿胀、嵴崩解、核浓缩；硫酸镁治疗组损伤程度明显较缺氧组轻；正常培养组与对照缺氧组MTT法测定A值：12 h为0.287±0.041、0.174±0.021；24 h为0.293±0.035、0.101±0.029(P<0.01)；硫酸镁治疗组A值：12 h为0.214±0.053、24 h为0.198±0.026，与缺氧组比较差异有显著性(P<0.01)。分别比较各组12 h与24 h的A值，差异也有显著性(P<0.01)。 结论 硫酸镁用于缺氧早期，可减轻神经细胞的后续损伤，其机制可能为包括阻断兴奋性氨基酸受体在内的多种作用。

目的 研究新生儿呼吸窘迫综合征(RDS)肺动脉压力动态变化及其与血清内皮素-1(endothelin-1，ET-1)、一氧化氮(nitric oxide，NO )的关系。 方法 对13例确诊为新生儿RDS患儿(实验组)和20例正常新生儿(对照组)用脉冲超声多谱勒分别于生后2、12、24、48、72 h测定肺动脉血流加速时间(TPV)及右心室射血时间(RVET)，以TPV/RVET比值反映肺动脉压力。用硝酸还原酶法和放射免疫法分别测定实验组和对照组新生儿生后24、72 h血清ET-1和NO的水平。 结果 实验组和对照组新生儿肺动脉压力在生后2、12及72 h差异无显著意义(t值分别为1.25、1.84、0.94，P均>0.05)；实验组24、48 h TPV/RVET比值为0.277±0.076、0.278±0.027，对照组分别为0.321±0.051、0.329±0.062，两组相比差异有显著意义(t值分别为2.86、2.20，P<0.01、 <0.05)；实验组和对照组在生后24 h时ET-1[(62±23)ng/L、(47±8)ng/L]、NO[(11±10) μmol/L、(32±22) μmol/L]水平相比，差异有显著意义(t值分别为2.33、2.37，P均<0.05)；而72 h时差异无显著意义(t值分别为0.87、1.93，P均>0.05)，与肺动脉压力变化相一致。死亡组肺动脉压力(0.25±0.02)明显高于存活组(0.28±0.03, t＝2.35, P<0.05)；死亡组患儿ET-1水平[(91±27)ng/L]明显高于存活组[(39±9)ng/L]，差异有显著意义(t＝4.97，P<0.01)；死亡组患儿NO水平为(5±4) μmol/L，明显低于存活组的(32±28) μmol/L,差异有显著意义(t＝2.38，P<0.05)；实验组RDS患儿生后24 h其血清ET-1水平与肺动脉压力呈正相关：y＝302.3x-861.2，NO水平与肺动脉压力呈负相关：y＝-98.3x＋400.8。 结论 新生儿RDS患儿肺动脉压力较正常儿高，持续时间较长，且易合并持续肺动脉高压。血清ET-1水平与肺动脉压力呈正相关，NO水平与肺动脉压力呈负相关。

目的 利用逆转录-多重巢式聚合酶链反应(reverse transcription-Multiplex nested polymerase chain reaction，RT-Multiplex Nested PCR)分析30例不同类型的白血病患者染色体畸变情况。 方法 采用国内首次建立的一种RT-Multiplex Nested PCR方法，同时筛选出29种对急性白血病诊断和预后具有重要意义的染色体结构畸变。 结果 14/19例白血病儿童携带有7种染色体畸变或基因异常，包括t(1；19)、t(8；21)、dupMLL(11q23)、t(12；21)、TAL1D、HOX11和EVI1原癌基因活化；11/11例白血病成人中共检出5种染色体易位或基因异常，包括t(8；21)、t(15；17)、t(9；22)、HOX11和EVI1原癌基因活化。首次在1例成人急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia, APL)标本中发现一种因早幼粒细胞白血病(promyelocytic leukemia, PML)基因剪接位置不同造成的新型PML/RAR α融合转录本。 结论 RT-Multiplex Nested PCR可用于白血病患者初诊时染色体畸变的筛选，迅速获知患者的染色体结构畸变情况。

目的 探索一种更简便，更特异的方法，用于血友病甲的基因诊断及其家系的遗传咨询。 方法 应用聚合酶链反应(PCR)和双链异源泳动分析(HMA)对我国10个血友病甲患儿及其家系成员中FⅧ基因内13内含子二核苷酸重复序列(CA)n多态性和等位基因进行分析。 结果 10个家系中，男性20例，女性10例，共40条X染色体，经PCR扩增、琼脂糖电泳均可显示出140~150 bp DNA条带，男性呈现单一的DNA条带，女性则根据等位基因的不同，出现两条DNA条带(杂合子)或者一条DNA条带(纯合子)。 结论 二核苷酸重复序列广泛分布于中国人群FⅧ基因中，重复序列的多态性作为第二代遗传标志，结合等位基因分析和HMA杂交电泳泳动分析，可明确鉴别出血友病甲基因的携带者，可用于血友病甲的基因诊断和遗传咨询。

目的 探讨范可尼贫血(Fanconi anemia, FA)的诊断及其基因亚型。 方法 将1997年和1998年我科收治的3例FA患儿的临床表现、诊断及基因亚型进行研究。分别对3例FA患儿的外周血淋巴细胞进行了丝裂霉素C(MMC)诱导的染色体断裂试验，用细胞融合和互补分析方法，检测FA患儿基因亚型。 结果 3例患儿临床表现主要为进行性面色苍白，体格发育落后，伴先天畸形；外周血象示三系减少；骨髓象均符合再生障碍性贫血改变。外周血淋巴细胞经MMC诱导染色体断裂率、畸变率及每个畸变细胞的染色体平均断裂率均明显增高，确诊为FA；经细胞融合和互补分析方法检测3例FA患儿均为FA-A亚型基因缺陷。 结论 3例FA患儿的外周血淋巴细胞均对MMC异常敏感；FA的发病机制可能为DNA损伤所致；基因亚型检测可为基因治疗提供依据。