2001年 · 第39卷第07期

目的 认识Alport综合征(AS)女性临床表型以及基因型特征。 方法 AS女性共9例，年龄2~62岁；临床表现以血尿为主，伴蛋白尿(＋)~(＋＋)，除1例血BUN和肌酐升高，其余患者在进入本研究时肾功能均正常。未发现典型的眼部病变及感音神经性耳聋。AS男性共11例，年龄2~28岁；临床表现为血尿、蛋白尿(＋)~(＋＋＋＋)，2例进入本研究时(分别为17岁和28岁)已出现尿毒症或因尿毒症已行肾移植；7例伴有感音神经性耳聋，2例伴有眼部病变。以正常皮肤组织对照4例、正常肾组织对照2例及健康成人6例基因组DNA为对照。应用间接免疫荧光学方法，检测8/9例AS女性和9/11例AS男性皮肤基底膜、3/9例AS女性和6/11例AS男性肾脏基底膜Ⅳ型胶原α 5链。应用PCR-SSCP方法分析全部研究对象的COL4A5基因全部51个外显子，出现多态性的外显子直接测序分析。 结果 AS女性与AS男性相比，临床症状相对轻，少有出现肾功能减退，多不伴有肾外症状。(1)AS女性皮肤和肾脏基底膜α 5(Ⅳ)链均为间断阳性，而正常对照为连续阳性、男性AS表现为完全阴性。(2)PCR-SSCP分析显示5/9例女性AS患者分别在第4、9、20、39和第46外显子扩增产物的DNA条带出现特殊的迁移类型：DNA单链既有与正常对照的DNA迁移率相同的条带，同时还有不同于正常对照的DNA单链条带。(3)其中1例AS女性第4外显子DNA序列分析显示两种序列，一种与正常序列相同，另一种DNA序列出现C→A碱基替代突变。 结论 X连锁型女性AS基因异常的特点为"杂合"，这种"杂合"状态可能成为女性AS临床表型相对较轻的分子基础。

目的 探讨环境刺激对缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage, HIBD)新生大鼠脑功能的影响。 方法 选用7日龄雄性SD大鼠51只，其中36只通过结扎右侧颈总动脉，吸入氧体积浓度为(8.0±0.5)%的氮氧混合气体，制作新生大鼠HIBD模型，制模后的大鼠分为干预组和非干预组；正常对照组大鼠15只(假手术动物)。采用早期触摸(neonatal handling)和丰富环境(enriched environment)刺激进行干预，干预时间为30 d，干预结束后进行感觉运动功能(悬吊试验、行走试验)和行为检测(三等分迷宫试验)以判断干预效果。 结果 非干预组大鼠分辨学习能力较干预组和正常对照组差(P<0.01)，达到学会标准所需的训练次数分别为：非干预组(45±9)次、干预组(27±5)次、正常对照组(24±8)次；非干预组大鼠感觉运动功能低于干预组和正常对照组(P<0.01)，悬吊试验时间分别为非干预组(15±3)s、干预组(22±4)s、正常对照组(36±6)s；行走试验时间分别为(7.0±1.1)s、(4.0±0.8)s、(4.0±0.5)s；干预组和非干预组大鼠大脑皮层死亡细胞百分数分别为(35.7±8.9)%和(39.1±10.9)%，海马部位分别为(38.5±6.3)%和(39.3±10.4)%，干预组与非干预组脑损伤程度差异无显著意义(P>0.05)；所有损伤大鼠行为检测结果与海马损伤程度呈正相关(r＝0.915，P<0.01)；悬吊试验和行走试验结果与皮层损伤程度相关(r分别为-0.75、0.606，P<0.01、<0.05)。 结论 环境刺激可改善HIBD大鼠的感觉运动功能和分辨学习能力。

目的 探讨小儿狼疮肾炎(LN)时肾小球内细胞凋亡的变化及甲基氢化泼尼松(MP)对肾小球内细胞凋亡的影响。 方法 用原位凋亡检测和原位杂交检测试剂盒，对12例LN(7例用激素前肾穿刺，5例行MP冲击后肾穿刺)、9例非LN(未用激素)和7例正常对照的肾活检标本进行了肾小球细胞凋亡和Fas mRNA表达强度的测定。 结果 (1)在未用激素的病例中，LN肾小球凋亡细胞数、凋亡细胞与细胞总数的百分比及Fas mRNA表达强度均明显低于非LN组(分别为0.37±0.12, 2.06±0.99，P<0.01; 0.20±0.11, 1.08±0.52，P<0.01; 0.39±0.16, 2.12±1.01, P<0.01)；而与正常对照组之间差异无显著意义。(2)在LN中，用激素组肾小球凋亡细胞数、凋亡细胞与细胞总数的百分比及Fas mRNA表达强度均明显高于未用激素组(分别为1.12±0.45, 0.37±0.12, P<0.05; 0.62±0.27, 0.20±0.27, P<0.01；1.43±0.52, 0.39±0.16, P<0.01)。(3)相关分析显示：LN组肾小球凋亡细胞数与细胞总数无明显相关，而非LN组两者呈正相关(r＝0.69，P<0.05)；全部观察标本中肾小球凋亡细胞数与Fas mRNA表达强度正相关(r＝0.72，P<0.001)。 结论 小儿LN时肾小球细胞异常增殖的同时凋亡机制不能作出相应的反应，凋亡机制不足，致使增殖占绝对优势。甲基氢化泼尼松可通过Fas mRNA表达上调，诱导细胞凋亡增加，清除LN肾小球病变中增生的固有细胞和浸润细胞，从而抑制炎症发展。

目的 初步评价婴儿复杂型先天性心脏病(简称先心病)二维超声心动图信息采集及三维超声诊断新方法的临床应用价值。 方法 复杂型先心病婴儿24例，男11例，女13例；年龄(7±5)个月。其中肺静脉与心房连接异常5例、房室连接异常5例、心室大血管连接异常9例、混合畸形5例。应用婴儿复杂型先心病三维超声心动图二维超声信息采集方法及剖视诊断方案进行诊断，并与二维超声心动图诊断结果比较，以心导管造影或手术中诊断为标准进行评价。 结果 1/24例(4 %)未能成功进行三维采样。15/23例(65%)能提供主要阳性诊断的详细空间信息，尤其对心室构型判断、心室大血管连接关系及房室间隔缺损分型意义较大；2/23例(9%)纠正了二维超声心动图诊断并经手术或心导管造影证实；6/23例(26%)未能较二维超声心动图提供更多有用信息。 结论 新的二维图像采集、重建及剖视诊断方案能基本满足婴儿复杂型先心病的三维诊断要求，比二维超声心动图能提供更丰富直观的空间诊断信息，具有较高的临床应用价值。

目的 探讨原发性肾病综合征(INS)患儿外周血单个核细胞(PBMC)内两种糖皮质激素受体(GR)亚型——GR α和GR β表达水平与糖皮质激素治疗效应之间的关系。 方法 应用免疫细胞化学方法、 Western Blot和凝胶电泳迁移率变化方法(EMSA)，分别检测不同激素效应INS患儿和正常对照组儿童GR α和GR β免疫阳性的PBMC数目、PBMC细胞内GR α和GR β蛋白质表达和GR-DNA连接活性。 结果 (1) INS患儿PBMC内同时有GR α和GR β的表达，并以GR α表达为主。(2)激素敏感型INS患儿GR α阳性的PBMC细胞数为(50.0±4.5)，激素抵抗型INS患儿为(47.0±5.5)，两组相比差异无显著意义(P>0.05)；而激素抵抗型INS患儿GR β阳性PBMC细胞数(22.0±3.5)明显高于激素敏感型INS患儿(7.5±2.0)(P<0.01)。(3) Western Blot实验结果显示，激素抵抗型INS患儿PBMC核内GR α蛋白量明显低于激素敏感型INS患儿，而GR β蛋白量却明显高于激素敏感型患儿。(4)激素抵抗型INS患儿的GR-DNA连接能力明显低于激素敏感型患儿。 结论 INS患儿PBMC内GR α和GR β表达比例失调、GR β表达亢进可能与糖皮质激素抵抗的发生有关。

目的 通过检测剔除心脏神经嵴的异常鸡胚心脏组织与正常心脏组织之间在发育过程中存在差异表达的基因，探索心脏圆锥动脉干缺损(CTD)发生的相关基因。 方法 用电极刺激方法在鸡胚发育早期破坏心脏神经嵴，建立圆锥动脉干缺损模型。应用抑制消减杂交法(SSH)筛选出在正常心脏组织表达，但在异常心脏组织中表达减少或不表达的基因，构建减数杂交文库，用cDNA芯片技术验证，并进行测序。 结果 建立了含261个克隆的cDNA减数文库，经验证有83个克隆在实验组与对照组之间存在明显的表达差异(31.8%)。随机选15个克隆测序，最后确定7种基因。经Genebank查询发现有一cDNA片段与鸡(Gallus)DEAD-box解旋酶mRNA基因序列100%同源。 结论 在剔除心脏神经嵴造成圆锥动脉干缺损畸形的过程中，有多个基因参与和调节。DEAD-box RNA解旋酶基因的缺失可能是造成心脏CTD畸形的原因之一。

目的 探讨一氧化氮(NO)在小鼠巨细胞病毒(MCMV)感染模型中的作用。 方法 应用34只6~8周龄雌性BALB/C小鼠按所给药物不同分5组，观察每组小鼠血清中一氧化氮代谢产物亚硝酸盐的含量及肝组织中iNOS mRNA的表达和MCMV的感染量。(1)应用亚硝酸盐还原法检测小鼠血清中NO代谢产物亚硝酸盐的含量；(2)应用原位核酸分子杂交法检测模型鼠的肝组织中iNOS mRNA的表达。(3)应用β-半乳糖苷酶(β-gal)染色法和原位核酸分子杂交技术检测模型鼠肝组织中的MCMV的感染量。 结果 MCMV感染小鼠各组(A、B、C)血清中丙氨酸转氨酶(sALT)及NO代谢产物亚硝酸盐NO2的含量均较正常对照组(D)及仅给NO合成抑制剂的对照组(E)明显升高，且相应受到NO合成抑制剂及促进剂的影响。而正常对照组(D)与仅给NO合成抑制剂的对照组(E)间则无明显差异。还可看到MCMV感染各组(A、B、C)小鼠肝细胞中表达iNOS mRNA，同时MCMV IE gene检测阳性，而无MCMV感染的小鼠(D和E组)肝细胞中则无iNOS mRNA表达，MCMV IE gene检测亦是阴性。同时可见给NO合成抑制剂L-NAME的B组小鼠血清中NO2浓度及肝组织切片中iNOS mRNA表达水平较MCMV感染模型小鼠A组降低，而与之相对应，其肝组织中β-gal阳性率及MCMV IE gene的表达却较A组增高(P<0.05)。而给了NO合成促进剂L-Arg的C组的小鼠的结果却与上述相反，即血清中NO2浓度和肝组织切片中iNOS mRNA表达水平越高，则肝组织中MCMV感染量就越低。 结论 本研究结果说明NO在MCMV感染小鼠体内具有抗MCMV的作用。

目的 研究细胞外基质纤维连接蛋白(fibronectin, FN) mRNA在维生素A缺乏胎鼠发育异常心脏中的表达特征，探索FN在先天性心脏病分子水平发病机理中的作用及其意义。 方法 采用地高辛标记探针原位杂交方法检测FN mRNA在时相、部位上的表达规律。研究对象分为维生素A缺乏胎鼠心脏畸形组(实验组Ⅰ)、维生素A缺乏胎鼠心脏正常组(实验组Ⅱ)和正常饲料喂食的对照胎鼠组进行对比，用MC-1407DZ图象分析系统对杂交结果进行定量分析。 结果 正常胎鼠FN于胎龄11 d主要分布于原始心管及心球的内膜。于胎龄13 d开始迁移到动脉干、心室肌小梁、心内膜垫，其表达强度明显高于室间隔等部位(P<0.001)。实验组(Ⅰ、Ⅱ)胎龄11~15 d的心脏内分布部位与对照组基本相似，但表达强度明显低于对照组，且表达延迟。实验组Ⅰ中的表达又显著低于实验组Ⅱ(P<0.05)。心脏严重畸形的胎鼠中FN在缺损部位的间隔及房室瓣中的表达在胎龄后期比对照组相对增高。 结论 纤维连接蛋白在心管融合及心内膜垫发育中起着重要的介导作用。维生素A缺乏对胚胎发育早、中期的胎鼠心脏FN剪切有影响，可导致FN表达减弱并延迟，维生素A缺乏是胎鼠先天性心脏病发生的机制之一。

目的 研究胎儿超声心动图产前诊断先天性心脏病(简称先心病)和经胎盘治疗胎儿心律失常的价值。 方法 应用国产FECG-D型胎儿心电图仪筛查，结合胎儿超声心动图检测第1胎患先心病的460例胎龄为18~40周的高危胎儿，超声仪采用ATL、Maker IX和TOSHBA SSA 40A多普勒彩色超声仪，探头频率为3.5 MHz。 结果 发现先心病8例，同胞一级亲属患病率为1.7%。先心病的类型：房间隔缺损(简称房缺)3例(其中1例合并胎儿水肿)，室间隔缺损(简称室缺)3例(其中1例合并神经管缺损)，完全性的房室管缺损1例，法洛四联症1例。检出23例胎儿心律失常，检出率为5.0%，以室上性心动过速(简称室上速)最多见(13例)，首选地高辛经胎盘治疗，7例有效，其中3例合并先心病或心力衰竭者加用异搏定2例有效，1例因有严重的非免疫性胎儿水肿而死亡；3例窦性心动过速(简称窦速)患儿用心得安治疗有效，1例频发室性早搏用普鲁卡因酰胺治疗后转复。3例妊娠晚期的室上速和2例室性早搏未用药，经阴道分娩后转复。 结论 胎儿超声心动图是产前诊断胎儿心脏异常的重要手段，地高辛是经胎盘治疗胎儿快速心律失常的首选药物。

目的 分析儿童单纯疱疹病毒性脑炎(HSE)的临床特征，探讨其诊断依据及影响预后的因素。 方法 对22例经脑脊液病毒病原学确诊的HSE患儿的临床特征进行分析，并对治疗效果进行观察和随访。 结果 发热22例(100%)，意识障碍18例(81%)，其中昏迷12例[采用Glasgow Coma Scale(GCS)评分、GCS ≤4分3例、5~7分5例、8~9分4例]，嗜睡6例。惊厥16例(72%)，呕吐13例(59%)，头痛10例(45%)，精神症状8例(36%)。合并颅神经麻痹10例(45%)，肢体瘫痪7例(31%)。应用酶联免疫吸附方法测定脑脊液(CSF )HSV-IgM阳性者13例、特异性IgG抗体局部产生指数：血清/CSF比值≤20者7例、双份CSF标本恢复期特异性HSV-IgG 4倍以上升高者4例；或采用聚合酶链反应(PCR)技术测定脑脊液HSV-DNA阳性者3例。头颅CT和(或)MRI提示异常者19例，病变部位以额、颞叶为主12例，7例伴颅内出血。对15例患儿进行6个月~6年的随访，完全康复5例，轻度残疾3例，中度残疾5例，重度残疾2例，合并癫癇者7例。 结论 HSE临床可分轻重两型，早期意识障碍及精神症状是本病特征。脑脊液病毒学检测阳性为确诊依据。起始治疗时的病程、意识状态、及脑内病变程度是影响预后的重要因素。