目的
研究人白细胞介素4(IL-4)对肝母细胞瘤细胞系(HepG2)分化诱导作用及诱导分化过程中端粒酶活性的变化及可能机制。
方法
用锥虫蓝拒染活细胞染色法、流式细胞仪细胞周期分析、瑞氏染色形态学检测、放射免疫测定、原位杂交等方法检测IL-4处理前、后细胞的增殖、形态、甲胎球蛋白合成及原癌基因c-fos、c-myc表达情况。聚合酶链反应结合酶联免疫吸附实验(PCR-ELISA)半定量检测瘤细胞端粒酶活性。用无血清培养使细胞周期同步于静止期(G0/G1)的方法,探讨端粒酶在瘤细胞被诱导分化过程中的活性变化与细胞周期时相的关系。
结果
IL-4处理后HepG2细胞生长速度减慢(n=10, F=16.7, P<0.05),c-fos和c-myc基因表达积分从(279 ±21)%、(210±39)%降至(38±8)%及(16±5)% (n = 10, t值分别为13.6、8.4,P均< 0.01)。G0/G1细胞由(45.4±2.7)%增至(57.8±3.3)% (n = 10, t = 4.2, P < 0.05);细胞形态趋向正常肝细胞形态转化;24 h每106个肿瘤细胞甲胎球蛋白分泌量从(15.6±0.7) ng降至(4.5±1.2) ng(n=10, t = 9.8, P<0.05)。同时还发现IL-4处理后48 h端粒酶活性即见明显下降,A值(代表端粒酶活性)即由处理前的1.2降至0.7(t = 8.4, P < 0.01), 72 h A值降至0.4(t = 13.6, P<0.01),这种作用并不依赖于细胞的周期变化。蛋白激酶C激活剂——佛波酯可逆转IL-4处理细胞被抑制的癌基因表达及端粒酶活性。
结论
IL-4处理可诱导HepG2分化及下调端粒酶活性,此作用可能与蛋白激酶信号传导途径受抑制有关。