Volume 118 · Issue 03 · 2005

治疗性基因的表达及其抗肿瘤作用将增强，并且推测溶瘤病毒与治疗性基因的协同作用。本研究旨在评估新型基因病毒治疗系统CNHK300-门多他汀（CNHK300-mE）在肝细胞癌（HCC）中的抗肿瘤作用。

利用人端粒酶逆转录酶（hTERT）启动子驱动腺病毒El A基因的表达，并将治疗基因小鼠内皮抑素克隆到腺病毒基因组中，构建了一个名为CNHK300-mE的新型基因病毒治疗系统。通过组织培养感染剂量50(TCID50）法和细胞活力测定，分析了CNHK300-mE在两种HCC细胞系（HepGII和Hep3B）和一种正常细胞系（MRC-5）中的复制和细胞溶解能力，以及小鼠内皮抑素的转基因表达体外和体内通过Western blotting和ELISA检测。肿瘤生长抑制和抗血管生成作用体内使用源自SMMC-7721 HCC细胞的裸鼠异种移植模型进行研究。

在感染后96小时，CNHK300-mE在HCC细胞系中的复制能力是正常细胞系的3296倍，在正常细胞系中杀死50%细胞的有效剂量(ED50)是HCC细胞系的25倍，两者均优于ONYX-015。CNHK300-mE的肿瘤生长抑制优于Ad-mE或ONYX-015（P<0.01）和抗血管生成作用体内血管性血友病因子免疫组化染色也观察到优于Ad-mE。与非复制型腺病毒Ad-mE相比，CNHK300-mE介导的mE转基因表达显著更高体外（P<0.005）和体内(P<0.05).

能够在端粒酶阳性HCC细胞中复制和裂解并介导治疗基因的有效表达体外和体内新型基因-病毒治疗系统CNHK300-mE在治疗HCC方面具有潜在的有效性。118(3)：179-185

在增生性瘢痕组织中，由于广泛的皮肤热损伤中真皮和表皮的损伤，通常不存在甜腺和毛囊，从而剥夺了体温的调节。本研究旨在揭示儿童和成人正常皮肤和增生性瘢痕中汗腺的形态和分布特征，并研究瘢痕对烧伤后汗腺再生可能的干扰作用。

增生性瘢痕活检取自4名儿童（4-10岁）和4名成人（35-51岁）。每个患者瘢痕附近的正常、未损伤的全层皮肤用作对照。角蛋白19（K19）分别用作表皮干细胞和汗腺分泌部分的标志物，角蛋白14（K14）分别用作管部分的标志物。进行免疫组织化学和组织学评估。

来自儿童和成人的皮肤组织切片的组织学和免疫组织化学染色显示正常皮肤表皮基底膜中的K19阳性细胞。这些细胞仅为单层且排列规则。小汗腺的分泌或导管部分位于真皮和表皮层。然而，在瘢痕组织中，基底层K19阳性细胞很少，汗腺分泌部分的解剖位置发生变化。它们位于瘢痕边缘和真皮网状层之间。汗腺的这些分泌部分扩张并且组织不规则。但少数K14阳性细胞呈环状散在瘢痕组织中。

瘢痕组织中有一些残留的汗腺，其中存在活性汗腺的再生过程。烧伤后，汗腺可能由成体表皮干细胞或创面中残留的汗腺再生。118(3)：186-191

目前还没有针对肝纤维化的有效疗法。本研究旨在提供证据，证明将表达反义金属蛋白酶组织抑制剂-1（TIMP-1）的质粒引入免疫诱导的肝纤维化大鼠模型中可导致间质胶原酶活性增加，从而增强胶原的降解。

采用实时巢式聚合酶链反应（RT-Nested-PCR）和基因重组技术构建可在真核细胞中表达的大鼠反义TIMP-1重组质粒。重组质粒和空载体(pcDNA3)均用糖基-聚-L-赖氨酸包封，并注射到患有猪血清诱导的肝纤维化的大鼠中。通过Northern印迹、RT-PCR和Western印迹评估外源转染质粒的表达。使用异硫氰酸荧光素（FITC）标记的I型胶原检测肝间质胶原酶活性。除肝羟脯氨酸含量外，通过免疫组化染色检测肝I型和III型胶原，通过Van Gieson染色检测肝纤维化分期。

成功表达外源性反义TIMP-1体内并能阻断TIMP-1基因和蛋白的表达。活性和潜在肝间质胶原酶活性升高（P<0.01），肝羟脯氨酸含量和I型、III型胶原的积累降低，肝纤维化减轻（P<0.01)与模型组比较。

结果表明反义TIMP-1重组质粒对肝纤维化有一定的抑制作用。118(3)：192-197

我们报道了去甲斑蝥素（NCTD）诱导人黑色素瘤A375-S2细胞凋亡，并且caspase和线粒体途径的激活参与了凋亡过程。本研究旨在探讨丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）和蛋白激酶C（PKC）在NCTD诱导A375-S2细胞凋亡中的作用。

我们在A375-S2细胞中使用3-（4, 5-二甲基噻唑-2-基）-2, 5-二苯基四唑溴化物（MTT）测定、DNA片段化（DNA琼脂糖凝胶电泳）和MAPK蛋白水平（蛋白质印迹分析）评估了NCTD对细胞生长抑制的影响。还收集了光学显微镜数据。

NCTD对A375-S2细胞的抑制作用被MAPK和PKC抑制剂部分逆转。NCTD治疗后磷酸化JNK和p38的表达也增加，c-Jun NH2末端激酶（JNK）和p38的抑制剂（分别为SP600125和SB203580）对磷酸化JNK和p38表达的上调具有显著的抑制作用。同时PKC抑制剂staurosporine阻断了磷酸化JNK和磷酸化p38的上调，但对细胞外信号调节激酶（ERK）表达影响不大。

这些结果表明，JNK和p38 MAPK的激活促进了NCTD诱导的A375-S2细胞凋亡的过程，PKC在MAPK的激活中起重要的调节作用。118(3)：198-203

甲状旁腺功能减退症（HPT）的治疗仍然是一个临床难题，这需要一种新的疗法。HPT的基因治疗一直很有价值，但如何提高基因转移效率和表达稳定性是一个难题。本研究旨在优化重组甲状旁腺激素（PTH）基因的造血干细胞（HSC）对HPT的基因治疗。

通过聚合酶链反应（PCR）从pcDNA3.1-PTH载体扩增人PTH基因，并通过双酶消化（EcoRI和XhoI）将其插入鼠干细胞病毒（MSCV）载体中。通过脂质体转染法将重组载体转染到PA317包装细胞系中，并通过G418选择性培养基进行筛选。提取浓缩的重组逆转录病毒并用于感染HSC，将其注射到患有HPT的小鼠中。观察各组小鼠症状及血清PTH、钙水平的变化。

人PTH基因成功插入MSCV载体，滴度可达2 × 10⁷浓缩逆转录病毒溶液中的菌落形成单位（CFU）/ml。PTH分泌量达15ng•10⁶·细胞-每48小时1个。通过PCR扩增未检测到野生型病毒，因此它们可以安全使用。患有HPT的小鼠在注射与PTH重组的HSC后恢复迅速，血清钙和PTH水平保持正常约三个月。该方法的治疗效果优于单纯注射重组逆转录病毒。

获得重组逆转录病毒载体MSCV-PTH和重组PTH基因的高效浓缩逆转录病毒溶液。重组逆转录病毒溶液可高效感染HSC。感染的HSC可以治愈小鼠HPT。该方法为HPT的临床基因治疗提供了理论依据。118(3)：204-209

肛管中存在肛门括约肌的测压不对称。有关于肛门括约肌解剖的报道，但肛门括约肌的构型与压力不对称之间的关系尚不清楚。本研究旨在探讨肛门括约肌压力不对称的解剖学证据和临床应用。

对27例正常大便失禁患儿和12例异常大便失禁患儿进行了放松和挤压状态下的PC polygram HR测定。

在正常儿童中，肛管中的八个通道存在纵向压力梯度，最大压力距离肛门边缘1 cm。肛管中也存在8个通道的纵向压力不对称变化，从距肛缘3cm~2cm~1cm。高压分布由肛管后向肛管前发生变化。在距肛门边缘1 cm的前方，肛管内形成最大压力。然而，在大便失禁患者中既未观察到纵向压力梯度，也未观察到纵向压力不对称变化。

横纹肌复合体的构型和功能可能有助于肛门括约肌压力不对称的形成，这对肛门控制至关重要。中国医学杂志2005；118（3）：210-214

结节性硬化症(TS)是一种常染色体显性疾病，具有显著的临床表现范围。重要器官如脑、肾、心和肺的受累是TS患者死亡的主要原因。本研究的目的是总结TS的特征性皮肤特征和常见的皮外受累，这有助于内脏受累的早期发现。

分析了78例TS患者的临床资料，包括详细病史、体格检查和皮肤病学检查、头颅计算机断层扫描（CT）和磁共振成像（MRI）、腹部超声检查、胸部X线检查、手足X线检查和眼科检查。

TS患者多累及皮肤、脑和肾脏。低黑色素斑是最常见和最早的皮肤病变。他们的人数超过81人中的3人。5%的病人。其次是面部血管纤维瘤和尚格林's贴片的频率越来越低。平均年龄2.6岁、6.0岁和8.1岁的患者出现前额斑块、面部血管纤维瘤和沙格林斑。头颅CT显示TS患者阳性率较高。

TS的皮肤特征有助于该病的早期诊断。低黑素性黄斑对于癫痫患者或低黑素性黄斑数量超过3个的婴儿尤其重要。头颅CT对TS的诊断有重要价值。TS患者应检查脑、肾等内脏器官的受累。118(3)：215-219

线粒体衍生的胱天蛋白酶第二激活因子（Smac）是一个新的促凋亡基因，在辐射对肿瘤细胞的凋亡诱导作用中起重要作用。本研究的目的是研究外源性Smac基因转移及其过表达对宫颈癌细胞放疗敏感性的影响。

将Smac基因转入宫颈癌细胞系HeLa后，经G418持续筛选获得亚克隆细胞。RT-PCR和Western blot检测细胞Smac基因表达体外通过台盼蓝染色测定法检测细胞活力。用X射线照射处理后，通过溴化四唑比色法研究细胞放射治疗敏感性。采用电镜、膜联蛋白V-FITC和碘化丙啶染色流式细胞术测定细胞凋亡及其率。Western blot和比色法检测细胞caspase-3的表达和活性。

HeLa/Smac细胞和宫颈癌亚克隆细胞系的Smac mRNA和蛋白水平显著高于HeLa（P<0.01).它们之间的细胞活力没有显著差异（P>0.05).然而，8 Gy X射线照射后，HeLa/Smac的生长活性降低了22.42%（P<0.01).与HeLa细胞相比，部分HeLa/Smac细胞在电镜下呈现典型的凋亡形态学改变，凋亡率较高(16.4%对6.2%，P<0.01);HeLa/Smac细胞中caspase-3的表达水平显著提高（P<0.01），而其活性提高了3.42倍（P<0.01).

外源性Smac基因的稳定转移及其在宫颈癌细胞系中的过表达可显著增强细胞caspase-3的表达和活性，改善照射对癌细胞的凋亡诱导作用，是提高宫颈癌放疗效果的新策略。118(3)：226-230