Volume 118 · Issue 01 · 2005

缺氧性肺动脉高压(HPH)是由抑制O引起的₂-敏感、电压门控（K_v）肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）中的通道。缺氧性肺动脉高压的发生机制尚未完全阐明。线粒体ATP敏感性K⁺通道（米托K_ATP）对缺氧极其敏感，是控制线粒体膜电位（Δ ψ_米).本研究探讨了缺氧24h培养的人肺动脉平滑肌细胞(hPASMC)细胞膜电位和Kv通道的变化，并探讨了Mito K的作用_ATP和Δ ψ_米在这种情况下。

从接受胸部手术的患者获得新鲜的人肺组织。分离、培养hPASMCs，分为6组：①对照组，常氧培养；②diazoxide groip，与Mito K的开启剂二氮嗪在常氧条件下培养_ATP;③5-HD组，与Mito K拮抗剂5-羟基癸酸钠（5-HD）常氧培养_ATP;④24小时缺氧组；⑤24小时缺氧+二氮嗪组；⑥缺氧24h+5HD组。采用全细胞膜片钳技术追踪细胞膜K⁺电流。细胞膜Kvl的表达。5分别用RT-PCR和Western blot技术测定mRNA和蛋白。用罗丹明荧光（R-123）技术测试线粒体电位的相对变化。

二氮嗪暴露24h后，常氧hPASMCs的R-123荧光强度较对照组显著增加（P<0.05），但在hPASMCs暴露于5-HD 24小时后，这些测试没有显著变化。24小时缺氧或24小时缺氧+二氮嗪均可显著增加HPASMC R-123荧光强度，且24小时缺氧+二氮嗪组的变化较24小时缺氧组更显著（P<0.05），但5-HD可部分减弱24h缺氧对R-123荧光强度的影响。暴露于二氮嗪24小时后，细胞膜K⁺电流与细胞膜Kvl的表达。与对照组相比，常氧hPASMCs的5 mRNA和蛋白显著降低（P<0.05)，但hPASMCs暴露于5-HD 24小时后，这些测试没有显著变化。24小时缺氧或24小时缺氧+二氮嗪降低细胞膜K⁺电流和Kvl的表达。5 mRNA和蛋白质（P<0.05），但缺氧24小时+二氮嗪组较缺氧24小时组变化更显著（P<0.05).5-HD可部分减弱24小时缺氧对细胞膜K的抑制作用⁺电流和Kvl的表达。5 mRNA或蛋白质（P<0.05).

水户K的开业_ATP其次是细胞膜Kvl表达的改变。5导致缺氧hPASMCs细胞膜电位变化的mRNA和蛋白质。这可能是缺氧性肺动脉高压发生的一种机制。中国医学杂志2005；118（1）：12-19

肺动脉平滑肌细胞（PA SMC）增殖在肺血管结构重塑中起重要作用。目前，与PASMCs增殖相关的机制尚不清楚。粘着斑激酶（FAK）是一种广泛表达的非受体蛋白酪氨酸激酶。最近的研究表明，FAK参与调节cy对细胞骨骼组织、粘附、迁移、存活和增殖的信号通路。此外，还没有关于FAK在人肺动脉平滑肌细胞（HPASMCs）中的作用的报道。我们通过使用反义寡脱氧核苷酸（ODNs）选择性抑制FAK蛋白的表达，研究了FAK是否参与了HPASMCs增殖和凋亡的细胞内信号通路。

用ODNs、正义FAK、错配正义和反义FAK分别被动转染由纤连蛋白(40 μ g/ml)刺激的培养的HPASMCs。通过免疫沉淀和蛋白质印迹检测FAK、Jun NH2末端激酶（JNK）、细胞周期蛋白依赖性激酶2（CDK2）和caspase-3蛋白的表达。通过流式细胞术分析细胞周期和细胞凋亡。此外，通过免疫细胞化学染色检测细胞质FAK表达。

与错配正义组相比，反义FAK ODNs组HPASMCs中FAK、JNK和CDK2蛋白表达显著降低，正义FAK ODNs组显著升高。当用反义ODNs处理时，半胱天冬酶-3表达在HPASMCs中上调，而当用有义ODNs处理时下调。与错配正义ODNs组相比，G₁有义ODNs组的细胞期显著减少，而S期细胞的比例显著增加。相反，与错配正义ODNs组相比，G₁反义-FAK ODNs组的相显著增加。反义FAK组细胞凋亡水平高于错配正义组，后者高于正义FAK组。另外，通过免疫细胞化学，正义-FAK ODNs组被强染色，而反义-FAK ODNs组被弱染色。

结果提示FAK与HPASMCs的增殖有关。反义-FAK ODNs抑制HPASMCs增殖并促进其凋亡。FAK可能通过JNK、CDK 2信号通路增强HPASMCs增殖，并通过caspase-3抑制HPASMCs凋亡。中国医学杂志2005；118（1）：20-26

腹腔镜根治性膀胱切除术（LRC）联合原位回肠新膀胱目前用于治疗浸润性膀胱癌，然而，它尚未得到很好的编纂和说明。我们在本文中逐步描述了我们在33例患者中开发的一种技术，并取得了良好的效果。

手术过程可分为八个步骤：腹腔镜盆腔淋巴结切除术和远端输尿管松动术；暴露Denonvillier间隙和前列腺后部；暴露耻骨后间隙和膀胱前表面；将膀胱和前列腺的外侧蒂分开；分割前列腺的顶点；回肠袋的体外形成；输尿管的体外植入；1例腹腔镜尿道-新膀胱吻合术。2002年12月至2004年9月期间，对33例肌层浸润性膀胱癌患者进行了该手术，男29例，女4例。

运行时间5.5~8.5 h，平均6.5 h；估计失血量为200-1000 mL，平均460 ml。所有患者膀胱标本的手术切缘均为阴性。在1-21个月的随访中，所有患者均无局部复发的证据。但1例术后9个月发现淋巴结转移。大多数患者在术后1~3个月实现了尿液控制。日间自制率为94%（31例），夜间自制率为88%（29例）。所有病例均在术后3至6个月进行尿动力学评估。新膀胱容量平均值为(296±37)ml。最大流速平均值为(18.7+7.1)ml/s。平均残余尿量为(32±19)ml。在所有病例中，术后1至2个月的排泄性尿路造影显示上尿路轻度扩张，无输尿管梗阻，随访时消退。膀胱造影显示新膀胱的形状与正常膀胱相似。在大多数患者的膀胱镜检查中观察到两个小的输尿管乳头伴间歇性尿液流出。33例患者中有6例（18%）发生术后并发症，其中囊袋渗漏2例，盆腔感染1例，部分性小肠梗阻2例，新膀胱阴道瘘1例。

当需要根治性膀胱切除术时，原位回肠新膀胱LRC是膀胱癌的可行选择。通过下中线小切口在体外形成回肠囊和输尿管植入可以简化手术的复杂性，缩短手术时间，降低医疗费用。中国医学杂志2005；118（1）：27-33

成人慢性特发性血小板减少性紫癜（ITP）是一种以持续性血小板减少为特征的常见血液病。到目前为止，关于中国成人慢性ITP患者的报道很少。本研究旨在基于在单个中心随访超过25年的大型中国患者队列，确定慢性ITP的治疗结果和预后因素。

对我院1974~1999年诊断为慢性ITP的1791例14岁以上患者的病历资料进行回顾性分析。

女性与男性的比例为21：，中位年龄为34岁（范围为14-80岁），中位血小板计数为38：10⁹/L[范围(1-99)：10⁹/L]，中位随访36个月（范围1-220个月）。689例患者使用类固醇，其中209例（30.3%）达到完全缓解（CR）。124例患者接受了脾切除术，14例患者对脾切除术前类固醇无反应。激素无应答者脾切除术后的CR率(29/90, 32.2%)低于激素治疗成功后复发者(12/20, 60.0%)（P<0.05).与抗核抗体（ANA）阴性患者相比，ANA阳性患者对类固醇的反应相似，但脾切除术后缓解期明显较短（P<0.01).

成年中国慢性ITP患者在类固醇治疗和脾切除术后可获得长期缓解。原发性类固醇难治性是预测脾切除术后续反应不佳的预后因素。中国医学杂志2005；118（1）：34-37

据报道，来源于鹿茸的鹿茸多肽(VAP)可以维持神经细胞的存活并促进神经细胞的生长和分化，尤其是神经组织的发育。本研究旨在探讨VAPs对神经干细胞的影响体外来源于胚胎大鼠脑。

将来源于E12-14大鼠脑的神经干细胞分离、培养并扩增7天，直至产生神经干细胞聚集体和神经球。在不同浓度VAPs的条件下培养神经干细胞，然后进行免疫细胞化学检测神经干细胞的分化情况。

VAPs能显著促进神经干细胞的分化，在一定浓度的VAPs作用下，大部分神经干细胞向神经元方向分化

VAPs可成功将神经干细胞诱导为神经元在体外，这可以为神经系统的再生提供基础。中国医学杂志2005；118（1）：38-42

近年来的研究揭示了自由基在高能冲击波（HESW）诱导的肾损伤中的重要作用。本研究旨在探讨黄芪中药对自由基介导的HESW诱导的兔肾小管损伤的作用。

将45只健康雄性新西兰大白兔随机分为3组：对照组（n=15），假手术组（n=15）和草药治疗组（n=15).在HESW应用前三天，对照组接受维拉帕米（0.4 mg/kg），SHAM接受生理盐水（20 ml），草药治疗的动物接受黄芪（2.4 g/kg）静脉滴注。将HESW（1500次电击，18kV）应用于所有麻醉兔的右肾。我们测定了休克治疗前后血和肾匀浆中超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）水平。还观察到组织病理学变化。

假手术组MDA水平升高，SOD活性显著降低（P<休克治疗后均为0.05)。对照组的MDA水平增加要小得多（P<0.05），并且在接受治疗的组中没有增加到统计学显著水平黄芪(P>0.05).对照组的SOD值显著高于假手术组（P<0.05).相反，在接受治疗的兔中，SOD水平迅速恢复黄芪，在24小时内达到最低点，并比对照组和假手术兔更快地恢复到基线（P<0.05).组织病理学检查显示，对照组的肾小管损伤不如假手术组严重，而对照组的肾小管损伤黄芪与对照组相比，组甚至更轻微，恢复迅速。

这项研究提供的初步证据表明黄芪对HESW诱导的自由基介导的肾小管损伤有较强的保护作用，且这些作用优于维拉帕米。中国医学杂志2005；118（1）：43-49

最近，三氧化二砷（AS₂O₃)被认为是一种新型的抗肿瘤药物。但同时对正常组织表现出严重的毒性作用。为了提高其治疗效果，降低其毒性，我们制备了三氧化二砷负载白蛋白免疫纳米球[AS₂O₃-(HAS-NS)-BDI-1]以非克隆抗体(McAb)BDI-1为靶点，检测其对膀胱癌细胞的特异性杀伤作用。

作为₂O₃采用化学交联法制备了-HAS-NS。用硫酸铵盐析和层析纯化单克隆抗体BDI-1。用SPDP交联法将白蛋白微球与McAb结合。As中As的浓度₂O₃-(HAS-NS)-BDI-l和AS₂O₃通过原子荧光法测量-HAS-NS。作为₂O₃通过SDS-PAGE还原电泳、间接免疫荧光试验、光学显微镜和扫描电镜观察检测-(HAS-NS)-BDI-l及其活性。吖啶橙染色和氚化胸苷（³H-TdR）掺入试验用于指示AS的特异性杀伤活性₂O₃-(HAS-NS)-BDI-l体外。

在AS₂O₃-（HAS-NS）-BDI-1组，我们在SDS-PAGE还原电泳中看到两条蛋白带，免疫纳米球通过免疫荧光试验呈圆形，具有清晰的绿色荧光。显微镜下观察到BIU-87细胞被AS覆盖₂O₃-(HAS-NS)-BDI-l和₂O₃-(HAS-NS)-BDI-l随BIU-87细胞移动。白蛋白免疫纳米球与BIU-87细胞紧密连接。AS的特异性杀伤活性₂O₃通过吖啶橙染色观察膀胱肿瘤细胞上的-（HAS-NS）-BDI-1³H-TdR掺入测定。

作为₂O₃-（HAS-NS）-BDI-1可能特异性结合BIU-87细胞，从而导致杀伤膀胱肿瘤细胞的高活性。中国医学杂志2005；118（1）：50-55

目前尚不清楚病毒遗传变异性是否会影响对干扰素（IFN）-α治疗的反应。最近的报道表明，IFN-α效应可能与乙型肝炎病毒（HBV）转录后调节有关。本研究旨在探讨HBV转录后调节元件（HPRE）的异质性以及HPRE的多样性与对IFN-α治疗反应的关系。

采用聚合酶链反应(PCR)产物直接测序法测定了31例中国HBV感染者的HPRE序列，并与白种人的HPRE序列进行了比较。随后，构建在各个点含有HPRE的真核表达载体并转染到Hep G2细胞中，然后将其暴露于重组人细胞因子。

在21例和19例慢性乙型肝炎患者中分别发现HPRE中1504处T至C点突变和1508处C至T（G）点突变；在17例患者中发现nt 1509处的C至T点突变。这些点突变在高加索患者s的HPRE中不存在。在nt 1504处的T到C点突变的情况下，CAT基因的活性明显增加，但在nt 1508和1509处的C到T(G)突变的情况下，CAT基因的活性没有变化。除了HPRE的nt 1508处的点突变可能逃避IFN-α对HPRE的抑制作用外，HPRE的这些点突变处的CAT基因活性可被IFN-α/γ和肿瘤坏死因子(TNF)-α抑制。

中国人和高加索人HBV患者的HPRE存在点突变，可能与IFN-α反应相关。HPRE的变化可能影响HPRE的功能，并影响除IFN-γ或TNF-α对HPRE的调节功能。中国医学杂志2005；118（1）：56-61

气管内滴注到小鼠中的抗原负载嗜酸性粒细胞（EOSs）能够诱导引流淋巴结中Th2型细胞因子的产生。本研究的目的是评估气管支气管腔内的EOSs是否可以刺激肺组织中Th2细胞的扩增。

从卵清蛋白致敏和攻击的BALB/c小鼠中回收气道EOs，然后将这些EOs与CD4共培养⁺在不存在或存在抗CD80或/和-CD86单克隆抗体的情况下从致敏小鼠分离的细胞。将气道EOSs滴入致敏小鼠的气管中。在此后的第3天，取出肺组织并制备成用于培养的细胞悬浮液。收集无细胞培养上清液用于检测细胞因子。

气道EOSs作为CD80和CD86依赖性抗原呈递细胞刺激肺CD4⁺淋巴细胞产生白细胞介素-4、白细胞介素-5和白细胞介素-13，但不产生干扰素-γ体外化验。当在致敏受体小鼠中气管内滴注时，气道EOSs引发肺Th2细胞体内白细胞介素-4、白细胞介素-5和白细胞介素-13，但不是干扰素-γ，在体外也是CD80和CD86依赖性的培养物。

气道腔内的EOSs可以处理吸入的抗原并发挥作用体外和体内作为抗原呈递细胞促进肺中Th2细胞的扩增。中国医学杂志2005；118（1）：6-11