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SAG1和IL-2基因佐剂联合DNA介导免疫小鼠对弓形虫感染的保护作用 CHEN Guanjin, CHEN Haifeng, GUO Hong, ZHENG Huanqin
中华医学杂志英文版 2002年 115卷 10期
DOI: 10.3760/cma.j.issn.0366-6999.2002.10.103
目标 表征SAG1编码质粒联合IL-2基因佐剂在小鼠中诱导的免疫应答，并评估该疫苗接种对弓形虫病的保护作用。
方法 向小鼠肌肉内共注射编码弓形虫SAG1的质粒加鼠IL-2表达载体，剂量为100 μ g。以3周间隔再使用2次加强免疫。作为对照，用PBS或空质粒pcDNA3接种小鼠。使用ELISA测定体液和细胞应答以测定Ab、Ab同种型和IFN-γ以及IL-4。为了检测DNA在注射小鼠中的整合和传播，进行了PCR和原位杂交。然后用弓形虫的高毒力RH速殖子腹膜内感染所有小鼠。
结果 在用SAG1表达质粒免疫三次后，在小鼠中观察到特异性IgG水平的显著增加。对于IgG同种型，IL-2表达质粒的共接种增强了IgG2a的水平和IFN-γ的产生。通过用具有RH速殖子的组合质粒接种来攻击小鼠导致延长的存活。
结论 由SAG1 DNA免疫引起的体液和细胞因子应答可以通过与IL-2表达质粒共接种来调节。使用DNA疫苗与适当的细胞因子基因组合以预防弓形虫 感染需要进一步调查。115(10)：1448-1452
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贾第鞭毛虫病C57BL/6N小鼠模型的建立 LU Siqi, LUO Xiaobing, CHEN Xiaoning, WANG Fengyun
中华医学杂志英文版 2002年 115卷 10期
DOI: 10.3760/cma.j.issn.0366-6999.2002.10.104
目标 建立C57BL/6N小鼠感染蓝氏贾第鞭毛虫 (G.兰布利亚 )来自人类来源的分离物。
方法 两组C57BL/6N小鼠接种纯化的两个包囊G.兰布利亚 分别通过管饲法分离（CD和XZ）。观察并总结感染小鼠的囊肿排泄模式和曲线。观察感染小鼠小肠组织病理学变化。
结果 36只小鼠接受1 x 104 囊肿均被感染。C57BL/6N小鼠对G.兰布利亚 感染。被CD和XZ分离株的囊肿感染的两组小鼠之间没有显著差异。囊肿排泄间歇性发生。在36只受感染的小鼠中，32只（89%）间歇性通过囊肿，4只（11%）持续通过囊肿。囊肿排泄的潜伏期为0-3天。（接种后）。囊肿排泄中断时间为12~20天。i.囊肿排泄高峰在第6天。我。在2小时收集期间通过的囊肿的峰值计数为2.3 × 107 /g粪便标本。肠段可见水肿、炎症、细胞浸润、小血管充血、有丝分裂象及粘膜坏死。
结论 C57BI/6N小鼠是合适的动物模型G.兰布利亚 .115(10)：1453-1456
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中国内脏利什曼病不同流行病原SSU rDNA可变区DNA序列的差异 HU Xiaosu, BU Lingyi, MA Ying, WANG Yajing, JING Baoqian, YI Taolin
中华医学杂志英文版 2002年 115卷 10期
DOI: 10.3760/cma.j.issn.0366-6999.2002.10.105
目标 为了证实来自中国不同疫源地的5个杜氏利什曼原虫（L.D.）分离株的SSU rDNA可变区中存在点突变。
方法 通过PCR从7个利什曼原虫种/分离物的核DNA中扩增特异性SSU rDNA片段，然后克隆到pGEM中R -T易向量。之后，通过自动DNA测序仪对特定片段进行测序。
结果 序列分析表明，7个利什曼原虫种/分离物的扩增DNA片段长度均为392 bp。5个点突变均位于两个独特的序列块（UQ-I和UQ-Ⅱ）中，未发现插入或缺失。基因库中利什曼原虫比较的同一性大于98%。
结论 5 L.d.的SSU rDNA可变区存在5个点突变。中国内脏利什曼病(VL)不同疫源地的分离株。L.d.之间存在SSU rDNA可变区的序列差异。来自不同病灶的分离物。115(10)：1457-1459
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日本血吸虫病无创免疫诊断：唾液中特异性抗体的检测 WANG Zhaojun, XUE Chunliang, LOU Wenxian, ZHANG Xiangyan, ZHANG Enying, WU Weiduo, SHEN Guangjin
中华医学杂志英文版 2002年 115卷 10期
DOI: 10.3760/cma.j.issn.0366-6999.2002.10.106
方法 日本血吸虫 建立感染动物模型。收集兔和慢性血吸虫病患者的成对唾液和血清样品。采用间接ELISA法检测唾液和血清中抗血吸虫特异性抗体。
结果 兔唾液和血清抗体检测的特异性分别为93%（28/30）和97%（29/30），兔血清和唾液抗体检测的敏感性分别为100%（24/24）和88%（21/24）。显著相关性（r =0.5307,P =0.0038<血清和唾液中抗SEA IgG水平之间存在0.05)。与血清中的那些一样，唾液中的抗SEA IgG水平可以反映感染和治疗的状态。患者唾液样本的抗体检测灵敏度为91%（29/32），血清为100%（32/32）。140份正常唾液样本中8份呈阳性（即假阳性率6%），156份正常血清样本中6份呈阳性（假阳性率4%）。有显著的相关性（r= 0.4227,P= 0.008<0.05)唾液和血清中特异性抗体之间的差异。
结论 唾液中特异性抗体的检测可作为一种非侵入性免疫诊断方法日本血吸虫病 .115(10)：1460-1464
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日本血吸虫原肌球蛋白cDNA的克隆及其在大肠杆菌中的表达 CAO Jianping, LIU Shuxian, SONG Guangcheng, XU Yuxin
中华医学杂志英文版 2002年 115卷 10期
DOI: 10.3760/cma.j.issn.0366-6999.2002.10.107
目标 克隆编码中国人的基因日本血吸虫 原肌球蛋白及其在大肠杆菌 .
方法 通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)获得SjcTM cDNA片段，除氨基末端14个氨基酸外南日本。 将RT-PCR产物克隆到T载体中并测序。然后将衍生自构建的TA克隆pGEM-SjcTM的SjcTM cDNA亚克隆到表达载体pBV220中。在通过琼脂糖凝胶电泳、核酸内切酶消化和PCR表征后，所得重组质粒用于在温度依赖性条件下表达。
结果 对克隆到T载体中的RT-PCR产物进行测序，并显示在核酸水平上具有96.5%的同一性，在推导的氨基酸序列中具有98.1%的同一性曼氏链球菌 原肌球蛋白。然后将靶DNA片段亚克隆到原核载体pBV220中。诱导表达大肠杆菌 DH5 α细胞导致恒定水平的重组蛋白产生。SDS-PAGE和Western blot结果表明，非融合重组蛋白(rSjcTM)的分子量约为32kDa，可被天然特异性多克隆抗血清特异性识别日本链球菌 原肌球蛋白(SjcTM)。
结论 编码cDNA的工程日本链球菌 成功制备了原肌球蛋白及其细菌表达。115(10)：1465-1469
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通过IFN-γ转基因表达抑制小鼠哮喘模型的过敏反应 GAO Zhancheng, KANG Yu, XU Yu, SHANG Ying, GAI Jun, HE Quanying
中华医学杂志英文版 2002年 115卷 10期
DOI: 10.3760/cma.j.issn.0366-6999.2002.10.108
目标 在小鼠哮喘模型中，研究腺病毒载体介导的外源基因在小鼠肺中的表达以及mIFN-γ转基因表达对过敏原诱导的肺嗜酸性粒细胞浸润的影响。
方法 通过安装具有LacZ基因的复制缺陷型腺病毒(AdCMVLacZ)5 × 10，将LacZ标记基因转导到CD-1小鼠气道上皮细胞中9 气管内或鼻孔中的斑块形成单位（pfu）。将C57小鼠腹膜内致敏并用卵清蛋白(OVA)气雾剂激发以产生哮喘模型。ADCMVMLFN γ 5 × 109 在OVA攻击前48小时，在哮喘小鼠中通过鼻孔施用pfu。OVA攻击后48小时恢复血清、支气管肺泡灌洗液（BAL）和肺。
结果 在通过气管内安装或滴鼻施用AdCMVLacZ后，肺显示出具有X-gal染色的高水平广泛的LacZ转导，主要沿着气道。IFN-γ通过腺病毒载体转导可过表达体外 和体内 （AdCMVIFNy感染后96小时，BAL中为1624.7±1321.5 pg/ml）。在AdCMVIFNy治疗的哮喘模型中，组织学评估揭示了支气管周围和血管周围嗜酸性粒细胞浸润的显著抑制；BAL中嗜酸性粒细胞的可回收百分比平均为9.00%±4.58%，与阳性对照组（75.13%±6.85%）相比有统计学意义（P <0.001).BAL细胞总数((145±55.6)× 103 与阳性对照组相比((216.6±71.1)× 103 细胞/ml)。
结论 腺病毒载体能够在鼠肺中过表达外源基因。腺病毒载体介导的IFN-γ在肺上皮中的过表达体内 可以消除哮喘模型中过敏原诱导的肺嗜酸性粒细胞浸润，这可能为过敏性哮喘细胞因子免疫遗传转移提供一种新的预防性治疗方法。115(10)：1470-1474
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骨髓增生异常综合征的端粒酶活性 FU Chengcheng, CHEN Zixing
中华医学杂志英文版 2002年 115卷 10期
DOI: 10.3760/cma.j.issn.0366-6999.2002.10.109
目标 目的：研究骨髓增生异常综合征（MDS）患者骨髓单个核细胞端粒酶活性（TA）及其与正常骨髓细胞和白血病细胞的差异。
方法 应用聚合酶链反应—酶联免疫吸附试验（PCR-ELISA）试剂盒对20例正常人骨髓标本、21例不同阶段MDS患者和32例急性白血病患者的单核细胞TA进行了半定量测定。
结果 正常骨髓细胞TA在0~0.3单位(U)范围内，平均值为0.11±0.08 U。其中，根据试剂盒小册子推荐的标准，3份样本被认为是阳性。急性白血病患者骨髓细胞的TA范围为0~0.96 U，平均值为0.42±0.26 U。阳性率为78.1%，与正常骨髓（BM）有显著差异（P <0.01).骨髓增生异常综合征患者TA平均水平为0.27±0.19 U（0~0.97 U），阳性率为66.7%。与正常BM细胞相比，差异有显著性（P <0.05).特别是，MDS高危亚组表现出显著更高的端粒酶活性（P <0.05).根据国际预后评分系统（IPPS），与MDS患者的INT-1和INT-2亚组相比，TA的差异也有显著性（P <0.05).细胞核型异常与TA无关。
结论 正常骨髓细胞表现出边缘水平的TA，而在急性白血病患者中可以看到显著增加的水平。来自MDS患者的BM细胞显示中等TA，其中预后不良的IPPS评分的高危MDS亚组显示显著更高的TA。115(10)：1475-1478
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浙江省产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌流行病学及耐药性研究 YU Yunsong, ZHOU Weilin, CHEN Yagang, DING Yongxiang, MA Yilin
中华医学杂志英文版 2002年 115卷 10期
DOI: 10.3760/cma.j.issn.0366-6999.2002.10.110
目标 研究产超广谱β-内酰胺酶(ESBL)大肠埃希菌(E.coli)和肺炎克雷伯菌(K.pneumoniae)的流行病学状况及耐药性特征。
方法 从浙江省不同地区共收集282株临床分离的大肠杆菌和180株肺炎克雷伯菌。进行抑制剂强化肉汤稀释试验以检测超广谱β-内酰胺酶。进行测试以检测这些菌株对九种常用抗生素的耐药性。
结果 大肠杆菌和肺炎克雷伯菌中超广谱β-内酰胺酶的患病率分别为34.0%和38.3%。大肠杆菌和肺炎克雷伯菌中超广谱β-内酰胺酶的平均患病率为35.7%。产超广谱β-内酰胺酶菌株对头孢他啶和头孢噻肟的耐药率分别为40%和26%，对头孢吡肟、头孢西丁、哌拉西林—他唑巴坦、头孢哌酮—舒巴坦、阿米卡星和环丙沙星的耐药率分别为40%和26%。所有这些菌株都对亚胺培南敏感。
结论 本研究结果表明，超广谱β-内酰胺酶的流行率较高，而产生超广谱β-内酰胺酶的菌株对除亚胺培南外的大多数抗菌药物均有耐药性。115(10)：1479-1482
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一种新型甲型肝炎灭活疫苗在年轻人中的免疫原性和安全性：一项比较研究 REN Aiguo, FENG Fumin, MA Junrong, XU Yingjun, LIU Chongbai
中华医学杂志英文版 2002年 115卷 10期
DOI: 10.3760/cma.j.issn.0366-6999.2002.10.111
目标 评价一种新型甲型肝炎灭活疫苗在年轻人中的免疫原性、安全性和剂量。
方法 104名甲型肝炎病毒和乙型肝炎表面抗原血清阴性的正常成年志愿者被随机分配到三组中的一组。高剂量组首次接种1000单位新疫苗，低剂量组首次接种500单位相同疫苗，Havrix组首次接种1440单位Havrix酶联免疫吸附测定单位，Havrix是一种获得许可的甲肝灭活疫苗。所有组均在初次接种后6个月接受同一疫苗的加强剂量。测量所有三组的局部和全身不良反应、血清转化率和甲型肝炎病毒抗体几何平均滴度。
结果 初次给药和加强给药后，所有三组的局部和全身反应类型和发生率相似，尽管初次给药后Havrix组的局部反应更为频繁。未发生严重不良反应。首次给药后1个月，高剂量组血清转化率为87.5%，低剂量组为70.0%，Havrix组为50.0%（P =0.001，相对于高剂量组)。在第6个月（加强剂量给药前），高剂量组的血清转化率为96.9%，低剂量组为65.0%（P =0.0029），Havrix组为68.8%（P =0.007).所有组中的所有受试者在接受加强剂量后一个月血清转化。在第1个月时，所有三组的几何平均滴度相似，但在第6个月时，高剂量组（264 mlU/ml）高于Havrix组（135 mlU/ml）（P= 0.0013).加强剂量后1个月，高剂量组的几何平均滴度（2747 mlU/ml）高于低剂量组（1657 mlU/ml）（P =0.0223）或Havrix组（1316 mlU/ml）（P =0.01).
结论 这种新型甲肝灭活疫苗具有免疫原性和安全性；500或1000单位的两个剂量可以诱导远远高于保护水平的甲型肝炎病毒抗体。115(10)：1483-1485
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葡萄糖和游离脂肪酸对体外培养人血管内皮细胞增殖的抑制作用 SU Jin, TIAN Haoming, LIU Rui, LIANG Jinzhong
中华医学杂志英文版 2002年 115卷 10期
DOI: 10.3760/cma.j.issn.0366-6999.2002.10.112
目标 探讨葡萄糖和游离脂肪酸对人血管内皮细胞增殖和细胞周期的影响在体外， 并检查升高的FFAs和葡萄糖的联合存在是否会交叉放大它们各自的损伤作用。
方法 将培养的人血管内皮细胞(ECV304)与各种浓度的葡萄糖和/或FFAs(棕榈酸酯和/或油酸酯)温育24-96小时。使用相差显微镜和电子显微镜观察形态学改变。通过比色3-[4，5-二甲基噻唑-2-基]-2，5-二苯基四唑溴化物(MTT)测定来测量增殖抑制。使用台盼蓝排阻法测定细胞活力。通过流式细胞术分析细胞沿细胞周期各阶段的分布。
结果 葡萄糖15或30mmol/L、棕榈酸(PA)0.25或0.5 mmol/L、油酸(OA)0.5 mmol/L抑制内皮细胞增殖并加速其死亡，呈剂量和时间依赖性。在用升高的葡萄糖和/或FFAs治疗后，G0 /克1 期细胞增加，而S期细胞减少，表明高葡萄糖和/或FFAs主要使内皮细胞停滞在G0 /克1 阶段。用葡萄糖加FFAs（葡萄糖30mmol/L+PA 0.25 mmol/L，葡萄糖30mmol/L+OA 0.5 mmol/L，葡萄糖30mmol/L+PA 0.25 mmol/L+OA 0.5 mmol/L）孵育的内皮细胞中增殖和死细胞群的抑制率比单独用高葡萄糖或FFAs（PA和/或OA）处理的内皮细胞增加更明显。
结论 高环境葡萄糖和FFAs均可在体外抑制内皮细胞增殖并加速其死亡。这些变化在高水平葡萄糖和FFAs的组合存在下被交叉扩增。115(10)：1486-1490
±s4.196±2.090 g），明显低于对照组10只小鼠的量（121.3 g，
±s，12.1±4.3 g）。因此，对肺泡球菌的抑制率为65.7%（P<0.01).类似地，感染10周后来自治疗组的7只小鼠的肺泡球菌的总湿重为4.3 g（
±s0.62±1.21 g），远低于对照组6只小鼠采集的量（17.85 g，
±s，2.93±3.28 g）。对肺泡球菌的抑制率为80.6%（P<0.01).此外，肺泡球菌的超微结构在两组之间显示出明显的差异。
