2000年 · 第113卷第02期

检测血管紧张素转换酶（ACE）基因插入/缺失多态性在2型糖尿病肾病患者对苯那普利的肾保护反应中的潜在作用。

采用聚合酶链反应(PCR)检测ACE基因的插入/缺失多态性。根据ACE基因基因型将90例糖尿病肾病患者分为Ⅱ型30例，ID29例，DD31例。在贝那普利治疗6个月前后测定平均动脉血压（MABP）、尿白蛋白排泄率（UAER）、血清肌酐（Scr）和ACE水平（组间药物剂量无差异）。

在基线时，具有不同基因型的三组在性别、年龄、糖尿病病程、视网膜病变频率、体重指数、HbA方面相似₁c、MABP、UAER、血清肌酐、总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、胰岛素剂量。在II、ID、DD基因型患者中，开始ACEI后接受硝苯地平治疗的贝那普利剂量和患者数量也分别相似。DD基因型患者血清ACE水平最高，ID基因型居中，II基因型患者血清ACE水平最低（P<0.05).开始使用贝那普利治疗6个月后，所有三组的MABP、UAER和ACE水平均显著下降（P<0.05），但与ID或DD基因型患者相比，Ⅱ基因型患者（UAER57.9%，MABP21.4 mmHg，ACE74.8%）的降低显著更大（P<分别为0.01）。开始使用贝那普利后，各组血清肌酐均有轻度升高，但DD组升高率最高（8.9%），II组升高率最低（5.4%）（P<0.05).多元线性回归分析显示，ACE基因多态性影响ACE抑制后蛋白尿的下降（R²=0.69,P<0.001).

II基因型患者对通常提倡的肾保护治疗特别敏感。

目的：探讨31例垂体腺瘤p16基因的表达及临床病理特征。通过分析增殖细胞核抗原（PCNA）的表达，探讨p16表达与细胞增殖活性的关系。

对新鲜制备的31例垂体腺瘤石蜡包埋标本进行免疫组织化学和原位杂交。

在肿瘤标本中发现不同程度的p16基因过表达。p16阳性肿瘤细胞比例越高，肿瘤体积越大，侵袭越频繁，复发率越高。发现p16的表达与PCNA表达程度显著相关。

尽管已知p16基因在多种肿瘤中失活，但我们的研究表明p16过表达可能在垂体腺瘤的发生和进展中起作用。113（2）：162-166

目的：筛选中国人群Wilson病（WD）基因突变热点。

应用循环测序法检测30例Wilson病患者WD基因第8外显子突变。

在14例WD患者中发现了相同的错义突变Arg779Leu，其中4例是纯合子，另一例是该突变的杂合子。该突变在中国患者中的频率为30%。

WD基因第8外显子779密码子（CCG→CTG）是中国人的突变热点之一。113（2）：172-174

探讨热休克蛋白（HSPs）在哮喘和慢性支气管炎发病中的表现。

应用逆转录-DNA聚合酶链反应(RT-PCR)检测了14例健康志愿者、21例哮喘患者和18例慢性支气管炎患者外周血单个核细胞(PBMC)在自然状态和热休克后HSP70、HSP90 α和HSP90 β基因的表达水平。

正常对照组非热休克PBMC无HSP70基因表达，但HSP90 α和HSP90 β表达；无论患者是否处于急性发作期，HSP90 α和HSP90 β基因均可在PBMC中表达。在急性发作患者和三名Aas 3，步骤2的无症状患者的PBMC中发现了HSP70的表达。恢复期患者PBMC无HSP70基因表达，急性发作期患者PBMC无HSP70基因表达。两组患者PBMC均有HSP90 α和HSP90 β基因表达；热休克后，所有正常对照组和患者的PBMC中这三个基因的表达量均显著增加。

哮喘患者和慢性支气管炎患者PBMC中HSP70基因表达不同，提示HSPs尤其是HSP70可能参与了哮喘的发病过程。113（2）：175-177

比较三种不同抗真菌方案治疗隐球菌性脑膜炎的疗效。

22例患者分为3组：I组单用两性霉素B静脉滴注或联合氟胞嘧啶治疗。Ⅱ组单用氟康唑或联合氟胞嘧啶静脉滴注。Ⅲ组治疗分为两步，患者鞘内注射两性霉素B加静脉注射两性霉素B联合或不联合静脉注射氟康唑，直至脑脊液（CSF）真菌学培养转阴，随后口服氟康唑或伊曲康唑维持治疗，直至CSF直接镜检呈阴性，每周1次，连续3周。

22例患者中，治愈17例（77.3%），好转2例（9.1%），死亡3例（13.6%），复发1例（4.5%）。Ⅰ组8例，治愈5例，好转2例，死亡1例，复发1例；Ⅱ组4例，治愈2例，死亡2例；Ⅲ组10例患者全部治愈，无复发。

两步治疗方案可适用于治疗隐球菌性脑膜炎。113（2）：178-180

评估患病率衣原体肺炎耳鼻喉疾病患者的DNA。

PCR检测急性或亚急性咽喉炎或鼻炎、鼻窦炎患者拭子中肺炎衣原体特异性Pst I 474片段DNA。还用微量免疫荧光(MIF)测定血清中的肺炎梭菌特异性抗体。

约28%（49/175）的患者PCR阳性，25.7%（45/175）的患者MIF抗体阳性。两种方法的符合率为91.8%。

提示肺炎衣原体感染在该组患者中很常见，肺炎衣原体Pst I 474特异性PCR对于检测咽喉炎或鼻炎和鼻窦炎中的肺炎衣原体是敏感和特异的。113（2）：181-183

研究类胡萝卜素酸（Rol3-7410）对白血病HL-60细胞株形态和功能改变的影响，并与RA进行比较。

通过形态学和NBT还原评估HL-60细胞的分化。台盼蓝排除用于确定生存力。通过细胞形态的变化和使用PCD-测定试剂盒测量片段化的DNA来评估凋亡。端粒酶PCR ELISA试剂盒检测端粒酶活性。通过流式细胞术分析细胞周期。

HL-60细胞与10^-6-10^-8mol/L Rol3-7410导致细胞生长抑制。暴露于10后检测凋亡细胞^-6通过测量用生物素化dUTP对DNA断裂的“原位”酶促标记，mol/LRo13-7410持续3小时。Ro13-7410处理样品的超微结构检查显示细胞具有染色质压实和细胞质浓缩以及“凋亡小体”的存在。诱导凋亡的细胞伴有细胞内游离钙的增加²⁺用Rol3-7410孵育后降低NBT的HL-60细胞的百分比低于用全反式视黄酸（RA）孵育后（27%vas 85%）。端粒酶PCR-ELISA检测表明，在无诱导剂的条件下培养的HL-60细胞具有显著的端粒酶活性。10年后端粒酶活性逐渐下降^-6mol/L Rol3-7410治疗，并且在1天时变化变得明显。在用Rol3-7410治疗的第5天对端粒酶活性的抑制不如用RA有效。DNA流式细胞荧光分析显示Rol3-7410在G₂2天处理后/M期和G中停滞的细胞百分比₂/M期在治疗4天后增加。对于RA处理的细胞，G中细胞的百分比降低₂治疗2天后观察到/M期。

我们的研究表明，Rol3-7410主要通过诱导细胞凋亡来抑制HL-60细胞的生长，在诱导分化方面不如RA有效。Rol3-7410在诱导过程中显著抑制端粒酶活性，并导致G₂/M在2天内被捕。这些发现表明Rol3-7410对白血病细胞的作用值得进一步研究。

建立bio-11-photosoralen（BP）标记引物逆转录原位聚合酶链反应（PCR），检测30例石蜡包埋肝组织中丙型肝炎病毒的定位和分布。

在紫外灯下将BPs标记在胸苷（T）位置。将该方法与间接RT-原位PCR和原位杂交检测丙型肝炎病毒（HCV）RNA进行比较。

血清HCV PCR和southern印迹表明BP标记psimer PCR是可行的，并且具有良好的特异性。间接原位PCR检测HCV阳性率为53%（16/30），BP标记引物原位PCR检测阳性标本50%（15/30）。统计分析显示P≥0.05，两种方法无显性差异。同时，原位杂交仅见23%（7/30）的阳性信号，低于两次原位PCR（P≤0.05).HCV主要定位于肝血浆，单核细胞和胆管上皮均有阳性信号。

间接原位PCR和BP标记原位PCR对检测肝组织HCV RNA均有较好的敏感性和特异性。HCV RNA位于肝细胞、单核细胞和胆管上皮中。中国医学杂志2000;113(2):103-106

研究全反式视黄酸(ATRA)与As₂O₃其被发现能够选择性诱导急性早幼粒细胞白血病(APL)的分化和凋亡，并且最近成为新发或复发APL的标准治疗。报告了72例APL患者的长期随访结果，并讨论了预后因素。

72例ATRA进入CR的新诊断APL患者分别接受单纯化疗（31例）、ATRA+化疗（30例）和单纯ATRA（11例）。进行单变量分析以确定潜在的预后因素。共有40例患者在首次完全缓解后复发，包括3组患者：A组，复发后接受ATRA和化疗的患者（8例）；B组As治疗患者₂0₃单独2人^ndCR和巩固（21例患者）；C组As治疗患者₂O₃2人份^ndCR和As₂O₃和巩固化疗（11例患者）。还进行了单变量分析以确定潜在的预后因素。

中位随访45个月（5-75个月），中位无事件生存期为21个月，中位总生存期未达到。估计的3年和5年无事件生存率（EFS）和总生存率（OS）分别为32.5±10.5%、18.4±7.5%和73.8±17.5%、58.5±15.2%。在denovo患者中，发现ATRA和化疗在诱导和缓解后治疗中的联合治疗对EFS具有统计学意义（P=0.023），初始外周白细胞计数与OS显著相关。在复发患者中，只有AS的治疗₂O₃复发后巩固化疗或不化疗对CR和两种EFS均有统计学意义（P=0.0061)和OS(P=0.0013)。

ATRA是一种有效的诱导疗法，可被认为是新发APL的首选治疗方法。与单独使用ATRA相比，在诱导和缓解后治疗中加入化疗可延迟或降低复发的可能性。作为₂O₃是复发性APL的有效药物，并且仍然是复发性APL的重要预后因素。113（2）：107-110

探讨2型糖尿病与线粒体DNA突变的关系。

根据前人文献，应用聚合酶链反应-单链构象多态性（PCR-SSCP）技术对中国正常对照、2型糖尿病人群和12个母系遗传2型糖尿病家系的线粒体DNA 3153~3551位点突变频率较高的片段进行了扫描。应用直接测序检测具有异常构象的片段。

在中国正常对照的SSCP电泳中未发现特殊条带，糖尿病人群中只有1名受试者（81号）在SSCP研究中显示异常，被确认为核苷酸3336处T至C的沉默点突变，未引起氨基酸变化（ATT→ATC，Ile）。25 001家系是唯一一个表现出与其他11家系强烈不同的SSCP特征的家系，被证实是由tRNA编码区的单点突变mt3285T→C/T引起的^{低浓铀(UUR)}基因通过直接测序技术。

在本研究中，mt DNA 3153-551内的变异不是中国人群2型糖尿病的主要原因。在25 001家系中发现的线粒体核苷酸3285处的点突变T→C/T位于tRNA的高度保守区^{低浓铀(UUR)}基因。强烈表明这种突变导致tRNA三维结构的转换^{低浓铀(UUR)}这可能干扰正常翻译并导致线粒体氧化磷酸化受损，其特征在于参与呼吸链的多肽的缺陷。因此，可能发生胰岛素分泌不足和胰岛素抵抗。中国医学杂志2000;113(2)：111-116

确定一个推定的肿瘤抑制基因（TSG）的位置，并评估膀胱癌中9号染色体（9q）长臂杂合性丢失（LOH）的频率。

我们使用25个高密度微卫星标记分析了25例膀胱癌患者的9q LOH。

23个样品（92%）在9q的至少一个基因座显示LOH。我们确定了常见的缺失区域在9q12-q21、9q22和9q34。DBH、D9S15、D9S1815、D9S1831、D9S176位点的LOH率分别为44.0%、22.7%、22.7%、16.0%、12.0%，与肿瘤分级、分期无显著相关性。

这些数据表明，9q DBH处TSG的改变可能在膀胱癌的发展中起重要作用。113（2）：117-119

研究gp-91的表达^phox和IL-8基因与血液透析（HD）患者中性粒细胞功能的变化，了解尿毒症与免疫的关系。

通过逆转录聚合酶链反应（RT/PCR）研究对照组和HD患者中未治疗和用脂多糖（LPS）治疗的中性粒细胞的基因表达。吞噬作用和杀菌测定通过菌落计数测量为活细胞内和细胞外细菌数量的减少。

新鲜分离的中性粒细胞表达gp-91^phox对照组中的mRNA，而没有gp-91^phox在HD患者中检测到mRNA。当用LPS攻击时，gp-91 phox mRNA表现出降低的表达。HD患者IL-8 mRNA可自发表达。中性粒细胞的吞噬作用和细胞内杀伤金黄色葡萄球菌与对照组相比明显降低。

受损的gp-91^phox中性粒细胞的基因表达表明HD患者NADPH-氧化酶系统受损，未治疗的中性粒细胞自发表达IL-8 mRNA，这与抑制的吞噬作用和细胞内杀伤能力一致。113（2）：120-123

研究1, 25-二羟基维生素D的作用₃(1, 25(OH))₂D₃）对乳腺癌细胞系MCF-7的生长和凋亡的影响。

使用MTT法测定细胞数。对细胞周期进行流式细胞术分析，并计数凋亡百分比。通过末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记（TUNEL）定量凋亡细胞，并通过Western blotting估计bc1-2蛋白表达。

与1, 25(OH)孵育后₂D₃10^-7mol/L作用48小时，MCF-7细胞表现出显著的生长，呈剂量和时间依赖性。流式细胞术分析表明，G_0/G1随着凋亡峰和百分比的增加而增加。通过显微镜和电镜观察，常见细胞凋亡特征，如典型的凋亡小体。TUNEL还显示1, 25(OH)₂D₃10^-8mol/L和10^-7mol/L组细胞凋亡率明显高于对照组，且诱导凋亡呈剂量依赖性。Western blot显示1, 25(OH)₂D₃10^-8mol/L可下调bcl-2蛋白和10^-7mol/L几乎可以阻断bcl-2蛋白的表达。

1, 25(OH)₂D₃能抑制细胞生长₀/克₁阻滞，增强阿霉素的增殖抑制作用，并诱导细胞凋亡，这可能是由抗凋亡的bcl-2蛋白下调引起的。中国医学杂志2000；113（2）：124-128

阐明后颅窝实性血管母细胞瘤（PFSHs）的诊断和外科治疗。

回顾性分析22例经手术和病理证实的PFSHs患者的资料，并复习相关文献。

术前明确诊断率为13/22。20例患者实现了肿瘤全切除。22例患者中有2例在手术后死亡，一例死于脑干损伤，另一例死于颅内出血。20例患者随访2个月~8年（平均2年）。15例患者Karnofsky量表≥80，1例患者Karnofsky量表≥60-70，4例患者在随访期间死亡。死亡原因为肺炎（2例）和化脓性脑膜炎（2例）。

MRI和DSA（数字减影血管造影）是PFSH的主要术前诊断方式，但PFSH仍然是一种具有挑战性的良性肿瘤。特殊的显微外科技术和改进的手术操作可以提高手术疗效。113（2）：129-132

为了确定排列不良的模式和软骨损伤的程度，通过CT扫描评估髌股关节，并通过关节镜检查证实了这些发现。

在20例中，40个膝关节通过CT扫描检查有和没有股四头肌收缩，以区分静态和动态异常。对CT图像进行分析。20例27膝行关节镜检查。

静态髌骨外侧半脱位10膝，动态外侧半脱位16膝。11个膝关节有静态髌骨外侧倾斜，7个膝关节有动态倾斜。所有27个膝关节均显示关节镜下髌骨追踪不良和软骨损伤。

髌股对线、股四头肌的影响和支持带紧绷的程度可以通过CT测量精确评估，并通过关节镜检查证明。中国医学杂志2000;113(2):133-135

探讨中药川芎嗪抗血栓形成的机制，以及川芎嗪对正常内皮细胞和脂多糖（LPS）刺激内皮细胞纤溶酶原激活物抑制物（PAI-1）表达的影响。

采用胰蛋白酶消化法培养人脐静脉内皮细胞（HUVECs）。采用夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测HUVEC条件培养基中PAI-1蛋白，Northern印迹法测定PAI-1 mRNA表达。使用电泳迁移率移动试验（EMSA），我们观察到HUVEC核因子-κ B（NF-kB）核易位。

LPS处理培养的HUVECs导致这些细胞的PAI-1蛋白和mRNA表达显著增加。然而，当HUVECs与LPS加川芎嗪一起孵育时，LPS对PAI-1的上调减弱。与对照组相比，川芎嗪可降低HUVECs PAI-1蛋白和mRNA的基础水平。由LPS刺激的HUVECs制备的核提取物表明，与未刺激的细胞相比，与NF-kB寡核苷酸的结合增加，但川芎嗪不改变在不存在或存在LPS的情况下的结合。

川芎嗪抑制内皮细胞中基础和LPS诱导的PAI-1蛋白和mRNA表达，川芎嗪对HUVECs中PAI-1的调节可能有NF-kB途径以外的其他机制。113（2）：136-139

靶向HCV 5的两种有效核酶（hCrZn1和HCRZC）^'设计并合成了NC区和C区。构建含有HCRZNC或HCRZC的真核表达载体pSV2-gpt、CD-SR α并转染MT-2细胞，

确定可被核酶切割的丙型肝炎病毒（HCV）的核苷酸位点？并获得高效、无毒、廉价的HCV特异性反义核酶。感染了丙型肝炎病毒。定量聚合酶链反应（PCR）和杂交用于确定核酶抑制HCV的效果。

HCRZNC和HCRZC分别抑制HCV复制54.7%和62.1%。此外，当两种核酶共转染到细胞中时，它们抑制了78.8%的复制。

特异性反义核酶对HCV在培养细胞中的复制有很强的抑制作用，联合使用效果更好。