2011年 · 第124卷第01期

背景自发性斑块破裂和溃疡以及冠状动脉介入治疗过程中产生的微栓子会降低冠状动脉储备，导致心功能障碍。然而，由微栓塞诱导的微梗死引起的炎症可能起重要作用。已知p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)在心肌的感染和非感染炎症中的活化可引起收缩功能障碍。方法将Sprague-Dawley大鼠随机分为3组：假手术组、冠脉微栓塞(CME)组和SB203580组，每组10只。通过将42 μ m微球注射到左心室中并闭塞升主动脉来产生CME大鼠。在注射微球后股静脉注射p38 MAPK抑制剂SB203580，制成SB203580组。超声心动图测定左室射血分数（LVEF）。通过Western blotting评估心肌中P38 MAPK的蛋白浓度。采用半定量聚合酶链反应扩增技术检测肿瘤坏死因子(TNF)-α mRNA的相对表达。CME组p38 MAPK活性和TNF-α mRNA表达增加。结论CME可明显激活SP38 MAPK，抑制p38 MAPK可部分抑制TNF-α的表达，保护心肌收缩功能。

背景RNA干扰（RNAi）是治疗由显性功能获得性超氧化物歧化酶1（SOD1）突变引起的肌萎缩侧索硬化（ALS）的潜在方法。这种疗法的成功依赖于可以有效递送RNAi的功能性小干扰RNA(siRNA)。本研究旨在设计针对ALS相关突变等位基因的功能性siRNA。结合文献中鉴定的经过验证的siRNA，我们分析了siRNA设计的基本原理，并随后开发了用于设计siRNA的基于不对称规则的策略。然后，我们进一步测试了这种设计策略在将天然对称的siRNA转化为具有有利不对称性的功能性siRNA以用于SOD1等位基因基因沉默的有效性。功能性siRNA可以靶向SOD1 mRNA编码序列的整个跨度以及非编码区。虽然在这些验证的siRNA中没有可区分的核碱基分布模式，但在siRNA的最后两个位置（P18和P19）处GC计数的高百分比表明不对称规则的强烈影响。在siRNA反义链5’的1位引入错配成功地将无活性的siRNA转化为以所需功效沉默SOD1的功能性siRNA。结论将错配整合到siRNA中的基于不对称规则的策略最一致地增强了RNAi功效，并保证产生成功沉默ALS相关SOD1突变等位基因的功能性siRNA，而不管靶位置如何。该策略还可用于设计用于沉默其他疾病相关的显性功能获得突变基因的siRNA。

背景缺氧诱导因子（HIF）可能在肿瘤发生和发展过程中起重要作用。本研究的目的是比较HIF-1 α和HIF-2 α在人非小细胞肺癌(NSCLC)肿瘤血管生成中的表达及其对患者预后的总体影响。方法在目前的工作中，我们通过组织芯片研究比较了140例NSCLC患者手术标本中HIF-1 α和HIF-2 α的免疫组化表达。结果49/140例(35.0%)和64/140例(45.7%)患者HIF-1 α和HIF-2 α高表达。HIF-1 α和HIF-2 α表达之间没有直接相关性。晚期肿瘤患者HIF-2 α频繁高表达（P=0.007），我们还发现HIF-2 α与T或N分期之间有显著相关性（分别为P=0.030和0.043）。HIF-1 α显示出与T分期的边缘相关性(P=0.084)，其在早期肿瘤中显示出更高的表达。HIF-1 α和血管内皮生长因子(VEGF)表达之间存在显著相关性(P=0.045)，而胸苷磷酸化酶(TP)、环氧化酶(COX)-2和微血管密度(MVD)在高HIF-2 α肿瘤中的表达水平显著较高(分别为P=0.020、0.004和0.046)。此外，总生存期的单因素分析表明，HIF-2 α表达，而不是HIF-1 α，与不良预后相关（P=0.001），在多因素分析中仍有显著意义（P=0.036）。结论综上所述，我们得出结论，HIF-1 α和HIF-2 α可能在非小细胞肺癌肿瘤过程的不同阶段对主要血管生成因子有差异调节作用。HIF-2 α可能在肿瘤血管生成中起主导作用，并且作为非小细胞肺癌的重要预后因素似乎具有明显的价值。

背景发夹细胞穿透肽（hCPPs）表现出分子条件激活的有趣特征。我们假设hCPPs有可能选择性地将顺磁性钆探针递送到基质金属蛋白酶2(MMP-2)阳性的人卵巢腺癌细胞系SKOV-3中。方法采用标准固相肽合成方案，通过f-moc策略合成hCPPs，并用1, 4, 7, 10-四氮杂环十二烷-N，N'，N'，N''-四乙酸钆(III)(Gd-DOTA)和异硫氰酸荧光素(FITC)标记。通过逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和酶谱法证明MMP-2的表达和活性。通过荧光素成像和流式细胞术观察hCPPs在SKOV-3细胞中的内化和定位。结果SKOV-3细胞对hCPPs的摄取依赖于MMP-2的活性。用Gd-DOTA-hCPPs处理的SKOV-3细胞的T1WI信号表明Gd-DOTA-hCPPs的摄取在一段时间内增加(r=0.990，P<0.01)和浓度依赖性(r=0.964, P<0.001)，但被MMP-2抑制剂抑制。结论HCPPS可作为MRI分子探针检测MMP-2活性的有效载体。

背景Delta-like 4(DLL4)是一种内皮特异性Notch配体，已被证明在生理性和病理性血管生成过程中起调节因子的作用。据报道，DLL4-Notch信号通路受缺氧调节，并且可以通过抑制血管生成分支和触发血管成熟来防止过度血管生成。脉络膜新生血管（CNV）是血管生成的一种病理形式，缺氧被认为在其中起重要作用。方法利用200 μ mol/L CoCl2诱导的化学性缺氧，观察DLL4在CNV发病中的原代细胞脉络膜视网膜内皮细胞(RF/6A细胞)中的表达。在转染DLL4小干扰RNA（siRNA）后，通过RT-PCR、实时PCR和蛋白质印迹分析研究了缺氧RF/6A细胞中DLL4和关键下游基因（包括HES1和HEY1）的mRNA和蛋白质表达。使用三个对照：一个没有转染，一个有转染试剂，和一个有乱序阴性对照siRNA。研究了DLL4 siRNA对低氧RF/6A细胞增殖、迁移和管形成等生物学功能的影响。转染后，与乱序siRNA对照相比，靶向DLL4的siRNA-双链体1使DLL4 mRNA水平耗竭多达91.4%，并且DLL4蛋白表达也受到类似影响。空白对照、转染试剂对照和乱序siRNA组之间的DLL4表达没有显著差异。此外，在用DLL4 siRNA-双链体1转染缺氧RF/6A细胞后，与乱序siRNA对照相比，在DLL4-Notch信号下游起作用的HES1和HEY1的mRNA水平分别降低了75.1%和86.3%。此外，敲低DLL4表达显著促进缺氧RF/6A细胞的增殖，并导致它们停滞在细胞周期的S期。DLL4 siRNA显著诱导缺氧RF/6A细胞的迁移和管形成，与scrambled siRNA相比，迁移细胞数量增加1.6倍，总管长度增加82.3%（P<结论DLL4是血管生成分枝和出芽的负调节因子。基于我们的结果，DLL4信号似乎在缺氧下脉络膜血管内皮细胞的生物学行为中起着重要作用。因此，DLL4可能代表未来CNV治疗的新靶点。

背景肝细胞生长因子（HGF）通过促进动脉新生治疗缺血性疾病，但其作用机制尚不清楚。notch信号通路在新生血管形成中起重要作用。方法在前期研究的基础上，以200 pfu/细胞的腺病毒-HGF(Ad-HGF)感染人股动脉内皮细胞(HFAECs)后，在指定时间收集细胞和上清液。通过ELISA和逆转录-PCR(RT-PCR)分析细胞的HGF表达和Notch1、Dll4和Hey2表达。通过MTT和Transwell迁移实验观察HFAECs增殖和迁移能力的变化。结果与对照组相比，Ad-HGF组的HGF表达不随时间增加而增加，HGF对Notch1、Dll4和Hey2基因转录的诱导也不随HGF的增加而增强。结论HGF通过激活Dll4-Notch-Hey2信号通路间接促进细胞的增殖和迁移能力，从而促进子代动脉分支的形成。

背景分子靶向药物目前广泛应用于非小细胞肺癌（NSCLC）的临床治疗。盐酸埃克替尼是一种新型口服表皮生长因子受体（EGFR）酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-TKIs）。在本研究中，我们检测了晚期非小细胞肺癌患者肿瘤标本中EGFR、K-RAS、B-RAF体细胞突变和EGFR mRNA表达作为盐酸埃克替尼疗效预测因子的作用。方法我们分析了40例晚期非小细胞肺癌患者中14例的肿瘤石蜡包埋标本，这些标本来自盐酸埃克替尼I期临床试验。结果14例标本中EGFR基因突变7例，外显子19缺失(3/7),外显子21点突变(4/7);2例患者出现K-RAS突变。未检测到EGFR外显子20或B-RAF的突变。在EGFR突变患者中，1名患者发展为进展性疾病（PD），3名患者疾病稳定（SD），2名患者部分应答（PR），1名患者完全应答（CR）。在野生型EGFR患者中，4例患者发生PD，3例患者获得性SD，无PR/CR（P=0.0407）。EGFR突变与更好的无进展生存期（PFS）（141天对61天）相关，但无统计学显著差异（P=0.8597），中位总生存期（OS）（≥449天对140天）。评估了EGFR mRNA表达水平（3个高，8个中等，1个低，2个由于肿瘤组织不足而无法测量），未观察到与缓解、PFS或OS的统计学显著关系。结论EGFR突变率与报道的亚洲人群一致，因此MEL技术是可靠的，高通量和快速测量EGFR突变。EGFR外显子19缺失和外显子21点突变是盐酸埃克替尼二线或以上治疗应答的预测性生物标志物。

背景肺上皮细胞中信号转导和转录激活因子6(STAT6)的表达在哮喘发病机制中起着关键作用。STAT6表达的激活导致T辅助细胞2型(Th2)细胞分化，导致Th2介导的IgE产生、过敏性气道炎症的发展和高反应性。方法本研究通过合成与STAT6翻译起始位点重叠的20-mer硫代磷酸反义寡核苷酸(ASODN),构建STAT6反义RNA(pANTI-STAT6),转染小鼠脾淋巴细胞,在体外和小鼠哮喘模型中分析其拮抗STAT6功能的作用。当细胞与pANTI-STAT6一起培养时，这种作用更加突出。在卵清蛋白(OVA)致敏小鼠中与过敏性肺部炎症相关的哮喘的鼠模型中，局部鼻内施用异硫氰酸荧光素(FITC)标记的STAT6 ASODN以吸收肺细胞中的DNA，伴随着细胞内STAT6表达的减少。这种肺内阻断STAT6表达消除了肺部炎症、嗜酸性粒细胞浸润和Th2细胞因子产生的迹象。这些数据表明STAT6在哮喘的发病机制中起着关键作用，并且使用局部递送STAT6 ASODN作为治疗哮喘等过敏性气道炎症的新方法。

背景哮喘的一个重要生理特征是气道平滑肌细胞（ASMCs）的表型变化，但ASMCs变化背后的确切机制仍不清楚。我们的研究评估了p21Ras是否可以直接调节ASMCs的表型。方法用高度特异性的p21Ras抑制剂FTP III治疗大鼠ASMCs。通过免疫细胞化学鉴定ASMCs。电镜观察细胞超微结构，免疫印迹分析评价α-肌动蛋白的表达。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测IL-6和RANTES水平。结果哮喘ASMCs呈增殖/分泌表型，体积较大，密度较大，伪足较多，分泌细胞器增多。此外，哮喘ASMCs中ASMCs的标志物α-肌动蛋白的水平降低，IL-6和RANTES的分泌增加。结论p21Ras诱导哮喘ASMCs形成增殖/分泌表型，但其抑制剂FTP III可显著逆转该表型。p21Ras在ASMCs中的作用可能是哮喘治疗的新靶点。

背景内质网（ER）应激和ER应激介导的细胞凋亡与多种疾病的发病机制有关。在最近的一项研究中，报道了脂多糖（LPS）处理的小鼠的肺中ER应激通路被激活。还发现细胞凋亡相关分子C/EBP同源蛋白（CHOP）在LPS诱导的肺损伤中起关键作用。本研究的目的是验证LPS是否可以激活气道上皮细胞的内质网应激反应以及哪种分子参与该途径。本研究旨在寻找保护LPS损伤气道上皮细胞的新试剂。将SiRNA-MUC5AC转染到NCI-H292细胞中。观察地塞米松和红霉素对LPS诱导的NCI-H292细胞的影响。细胞中MUC5AC的敲除减弱了与LPS孵育后ER应激标志物的增加。地塞米松和红霉素降低LPS诱导的NCI-H292细胞caspase-3活性。结论LPS可能通过MUC5AC的过表达激活内质网应激。地塞米松可能通过减轻MUC5AC的超载来保护人气道上皮细胞免受内质网应激相关的凋亡。

头孢曲松诱导的免疫性溶血性贫血是这类抗生素罕见但严重的并发症。在这篇文章中，我们报告了一名43岁的患者，他患有头孢曲松诱导的溶血并发急性门静脉血栓形成。抢救输血成功后，经肠系膜上动脉途径溶栓。完全实现了再通。反复CT静脉造影显示门静脉仍通畅，口服抗凝治疗6个月。

背景血糖变异性是一种不依赖于HbA1c的危险因素，在糖尿病并发症的发展中比持续高血糖具有更大的有害影响。本研究分析了2型糖尿病（T2DM）与HbA1c的血糖变异性特征<方法86例T2DM患者，每日两次使用预混胰岛素类似物（门冬胰岛素30），HbA1c<使用连续血糖监测（CGM）系统监测了6.5%和20名血糖调节正常（NGR）的对照受试者。血糖波动的平均幅度（MAGE）、平均每日差异（MODD）用于评估日内、日间血糖变异性。低血糖定义为血糖水平<3.9 mmol/L在CGM中持续至少15分钟。根据MAGE参考值将T2DM患者分为两组：低MAGE组和MAGE组<3.4 mmol/L（L-MAGE）和MAGE≥3.4 mmol/L的高MAGE组（H-MAGE）。结果首次CGM后L-MAGE组41例，H-MAGE组45例。T2DM组MAGE和MODD均高于NGR组（P<0.01).H-MAGE组24%（n=11）共发生13起低血糖事件，13起事件中10起发生在夜间，而L-MAGE组5%（n=2）共发生2起低血糖事件，也发生在夜间（低血糖事件：24%vs.5%, χ 2=6.40, P<0.01).MAGE值与低血糖值和餐后2小时血糖值相关（分别为r=-0.32和0.26，P<0.05).再用阿卡波糖治疗，再用CGM治疗后，H-MAGE组的MAGE和MODD值均显著下降（40%，P<0.01和15%，P<0.05），但仍高于NGR受试者（P<0.05);2%（n=1）共发生1次低血糖事件，发生率显著降低（2%vs.24%, χ 2=9.61, P<结论胰岛素治疗期间HbA1c控制良好的T2DM患者血糖变异性及无症状低血糖事件。每日两次预混胰岛素与阿卡波糖联合治疗可使血糖变异性平缓并减少低血糖事件。

背景子宫内膜异位症（EM）是一种主要见于育龄妇女的良性妇科疾病。然而，其发病机制仍知之甚少。本实验旨在建立稳定可靠的子宫内膜与腹膜共培养的培养环境，观察有无EM患者子宫内膜的黏附/侵袭能力。卵巢畸胎瘤或单纯卵巢囊肿6例作为对照。我们将子宫内膜和腹膜共培养成四组（EM的子宫内膜与EM的腹膜一起培养，对照的子宫内膜与对照的腹膜一起培养，EM的子宫内膜与非EM的腹膜一起培养，对照的子宫内膜与EM的腹膜一起培养），以观察气液表面培养和培养基中培养的粘附/侵袭过程。分别于术后1h、6h、12h、24h、2d、3d、4d、5d、6d、7d取标本进行组织学、细胞角蛋白8(CK8)和CD10的免疫荧光和免疫组化分析。CK8免疫荧光显示有EM和无EM患者之间的粘附过程无显著差异。CD10免疫组化显示EM患者子宫内膜间质细胞在培养3天内频繁侵入腹膜，而非EM患者子宫内膜异位细胞未侵入腹膜。EM患者的子宫内膜在共培养过程中显示出增加的侵袭能力，这可能有助于解释子宫内膜异位症的病因。

腹膜后血管外皮细胞瘤是一种不常见的肿瘤。我们报告一例41岁男性，经腹部超音波检查诊断为无明显症状的腹膜后肿瘤。腹部CT和MRI扫描显示一个6cm × 5cm的实体瘤与邻近器官清晰勾勒。进行了肿瘤切除，组织病理学检查证实了血管外皮细胞瘤的诊断。

目标阐明哮喘相关表型易感基因在染色体上定位和定位的发展。数据来源使用PubMed选择已发表的关于哮喘相关表型易感基因的文章。研究选择采用候选基因定位克隆和全基因组扫描结合连锁和关联分析的方法，确定哮喘易感基因和哮喘相关表型在基因组中的位置。结果基因组中有多个区域携带哮喘和哮喘相关表型的易感基因，包括染色体5、11、12、6、2、3、13、7、14、9、19和17。这些区域中的许多含有参与哮喘发展和进展的候选基因。一些易感基因可能影响表型表达或对治疗的反应。此外，多个基因与环境的相互作用可能有助于哮喘的易感性。结论作为克隆哮喘易感基因的重要步骤，肯定需要在染色体上进行精细定位和定位。应该寻求新的强有力的基因发现工具以及遗传学、生物学和生物信息学的整合。