IL-2基因转染的G422胶质母细胞瘤体外增殖及体内致瘤性的改变洪波 朱诚 曹雪涛 王文仲 于益芝 章卫平
中华神经外科杂志1997年 13卷 05期
DOI: 10.3760/cma.j.issn.1001-2346.1997.05.102
目的:
探讨IL-2基因治疗胶质瘤的可能性,并对其免疫机制进行初步分析。
方法:
重组的复制缺陷腺病毒作为基因转移的载体,将鼠IL-2基因转染G422小鼠胶质母细胞瘤细胞(G422-mIL2),RT-PCR检测G422-mIL2细胞中目的基因的mRNA表达,采用IL-2依赖细胞株检测G422-mIL2培养上清中mIL-2的活性,MTT法检测G422-mIL2体外增殖能力的改变。将野生型G422细胞、LacZ基因转染的G422细胞(G422-LacZ)、G422-mIL2接种到小鼠皮下,观察皮下肿瘤的生长和荷瘤小鼠的存活期,采用4小时51Cr释放法检测荷瘤小鼠脾细胞LAK、CTL的杀伤活性。
结果:
G422-mIL2细胞有目的基因mRNA的表达,体外培养上清中分泌高水平的mIL-2,和野生型G422、G422-LacZ相比,其体外的细胞增殖能力无显著差异(P>0.05),而接种皮下后肿瘤生长延缓,小鼠的存活期延长(P<0.01),有4/10的小鼠长期无瘤生存(>90天)。G422-mIL2接种组小鼠脾细胞的LAK、CTL活性显著增强(P<0.01)。
结论:
IL-2基因转染的G422细胞的体内致瘤性显著降低,其机理可能是提高了荷瘤小鼠特异性和非特异性抗肿瘤免疫反应。
抗人脑胶质瘤单克隆抗体SZ39单链抗体的构建及初步表达沈树泉 周筱梅 黄强 许志元 王爱东 杜子威
中华神经外科杂志1997年 13卷 05期
DOI: 10.3760/cma.j.issn.1001-2346.1997.05.104
目的:
研究人脑胶质瘤基因工程单抗。
方法:
采用基因重组技术分别将抗人脑胶质瘤单抗SZ39重链和轻链可变区基因片段连接,构建表达载体,并在大肠杆菌中表达。
结果:
表达的ScFv抗体为可溶性,ELISA和Western Blot检测证实能特异性地与人脑胶质瘤细胞系SHG-44表面抗原结合,其表达量为220μg/L。
结论:
成功地构建了抗人脑胶质瘤单抗SZ39 ScFv表达质粒,并得到了与胶质瘤细胞表面抗原相结合的单链抗体。
抗CD3-抗胶质瘤双特异性抗体体外细胞毒作用的多因素分析楼美清 王文仲 黄强 沈茜 陈功 周晓平 兰青 周丽英
中华神经外科杂志1997年 13卷 05期
DOI: 10.3760/cma.j.issn.1001-2346.1997.05.105
目的:
探索胶质瘤免疫治疗的新途径。
方法:
采用单比实验和联合作用等对比分析,观察抗CD3-抗胶质瘤双抗和相应单抗等多因素细胞毒作用。
结果:
单用抗体、单用IL-2没有明显的细胞毒作用;LAK细胞+抗体和/或LAK细胞+抗体+IL-2具有明显的细胞毒作用,其中双抗的增强作用明显高于其它各组;源于恶性胶质瘤患者的LAK细胞的细胞毒作用较正常人低,但双抗+IL-2可增强其活性。
结论:
抗CD3-抗胶质瘤双特异性抗体连同IL-2可将激活的人外周血淋巴细胞特异地介导至胶质瘤细胞后发挥细胞毒作用。
胸苷激酶基因治疗人多形性胶质母细胞瘤BT325并诱导BT325和9L肿瘤细胞的凋亡林松 吴建中 王忠诚 厉俊华 孙异临 吴宏伟 顾建人
中华神经外科杂志1997年 13卷 05期
DOI: 10.3760/cma.j.issn.1001-2346.1997.05.107
目的:
了解转单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(HSV-TK)前后胶质瘤细胞对更昔洛韦(GCV)的药物敏感性;钙通道阻滞剂尼莫地平是否增强HSV-TK/GCV基因治疗的肿瘤杀伤作用,以及该治疗方法能否诱导胶质瘤细胞凋亡。
方法:
用带有HSV-TK/GCV基因的重组逆转录病毒载体,转染人多形性胶质母细胞瘤株BT325。用MTT法测定GCV对转染HSV-TK基因BT325瘤细胞的杀伤作用。
结果:
0.1μg/ml的GCV对转HSV-TK基因的BT325瘤细胞有杀伤作用,加入尼莫地平后,0.01μg/ml的GCV即有杀伤作用。同时发现该治疗方法可以引起胶质瘤细胞的凋亡。
结论:
HSV-TK/GCV基因治疗对胶质瘤有很强的杀伤作用,并可以引起肿瘤细胞的凋亡;尼莫地平有协同作用,这可能使尼莫地平做为一种增敏剂在脑肿瘤该治疗中使用。
逆转录病毒载体介导中国单疱病毒TK基因转导脑胶质瘤细胞王伟民 郭忠 蔡如珏 张光霁 许秀兰 朱诚 顾健人
中华神经外科杂志1997年 13卷 05期
DOI: 10.3760/cma.j.issn.1001-2346.1997.05.108
目的:
研究载中国单疱病毒胸苷激酶基因逆转录病毒重组体(RV-HSV-TKc)和羟甲基无环鸟苷(GCV)体外转染和杀伤脑胶质瘤效果,探索应用该系统基因治疗脑胶质瘤。
方法:
RV-HSV-TKc重组体病毒感染胶质瘤细胞,G418筛选转染阳性胶质瘤细胞克隆。Northern杂交检测抗G418胶质瘤细胞中的TKc基因表达。药物敏感实验观察TKc胶质瘤细胞对GCV的毒性反应。
结果:
1.0mg/ml G418筛选10~14天获抗性胶质瘤细胞克隆;Northern杂交显示抗G418细胞TKc基因明显表达;TKc胶质瘤细胞对GCV高度敏感,其ED50为:C6TKc0.02μg/ml,U251TKc0.006μg/ml,U87TKc0.004μg/ml,TKc胶质瘤细胞对GCV的敏感性是非转基因胶质瘤细胞的500倍以上。
结论:
载中国TKc基因逆转录病毒重组体可有效转染脑胶质瘤细胞并使其对GCV高度敏感,该系统可望用于脑胶质瘤的基因治疗。