2006年 · 第39卷第08期

骨骼肌的病理检查在众多肌肉病相关的辅助检查方法中最有诊断价值.20世纪60年代开展的肌肉活检冰冻切片技术以及电生理检查技术促进了骨骼肌疾病的研究和诊断,此后的神经生化检查为代谢性肌肉病的诊断提供了更多的依据,影像学的应用为观察肌肉损害的全身分布和肌肉活检部位的选择提供了重要参考,基因和免疫细胞化学方法的应用促进了分子肌肉病理学的发展[1],使骨骼肌病理检查在鉴别疾病相关结构、为治疗策略提供形态学依据以及研究发病机制方面[2]更显重要。

肌萎缩侧索硬化(ALS)或称运动神经元病(MND),是一种由于上、下运动神经元丢失导致延髓部、四肢、胸部肌肉逐渐无力和萎缩的进展性神经系统退行性疾病.患者为隐袭起病,进展缓慢,多因呼吸衰竭死亡;发病年龄平均55岁,发病起平均存活3.5年.2.5年后50%患者存活,5年后20%患者存活[1],目前尚无治愈的方法.谷氨酸释放抑制剂利鲁唑可减缓疾病的进展,是目前惟一通过美国食品及药物管理局(FDA)认证并在全球广泛使用的药物,但它不是一种治愈性药物,不能改善症状或逆转进行性恶化的趋向[2].因此开发更有效的治疗方法如新的谷氨酸拮抗剂、神经营养因子及基因治疗或干细胞治疗成为了研究的目标,其中干细胞移植治疗研究尤其得到关注。

目的 了解大剂量糖皮质激素(GC)冲击为主综合治疗重症肌无力(MG)的疗效及副作用.方法 应用临床评分随访观察64例大剂量GC冲击后短程激素加综合治疗、83例大剂量GC冲击后长程激素加综合治疗和70例非GC冲击治疗患者的病情变化及副作用.结果 治疗1个月时的有效率短程组为89.06%,长程组为89.16%,对照组为70.00%;改善幅度短程组为64.62%±27.06%,长程组为65.62%±27.21%,对照组为48.35%±32.09%;加用其他免疫抑制剂继续治疗6个月时,有效率依次为短程组93.76%、长程组93.98%、对照组82.85%;改善幅度短程组为72.16%±26.95%,长程组为73.06%±24.74%,对照组为56.31%±32.08%,在治疗1个月和6个月时,短程组和长程组相对评分差异均无统计学意义;GC副作用长程组明显多于短程组(P＜0.05).结论 大剂量GC冲击后短程激素加综合治疗MG与大剂量GC冲击后长程综合治疗MG疗效相当,均好于对照组,但GC冲击后短程激素并综合治疗组副作用低于长程组。

目的 报道1个眼咽远端型肌病家系的病理和电生理改变特点,分析其吞咽功能障碍的变化规律.方法 先证者为24岁女性,出现进行性加重的眼外肌麻痹、吞咽困难、构音障碍及四肢远端无力和萎缩2年.肌酸激酶轻度升高.家族同代人中还有5例在20～30岁出现类似症状.对先证者进行纤维咽喉镜吞咽功能检查和肌电图检查,对胫前肌进行肌肉病理检查.结果 纤维咽喉镜检查发现软腭上抬差,肌电图检查发现胫前肌呈现肌源性损害伴随肌强直现象.肌肉病理改变特点是肌纤维出现肥大、萎缩、间质纤维化,部分肌纤维内可见镶边空泡,电镜检查显示肌纤维的胞质内存在管丝包涵体.结论 临床和病理检查证实眼咽远端型肌病的存在,软腭运动障碍是出现咽喉症状的主要原因,此病存在肌强直的电生理改变特点。

目的 初步探讨磁共振扩散张量成像(DTI)在肌萎缩侧索硬化症(ALS)诊断中的临床意义.方法 16例有明确上运动神经元(UMN)损害体征者作为A组,4例仅有下运动神经元(LMN)损害体征者作为B组,15名健康志愿者为对照组.行轴位DTI扫描,选取感兴趣区(ROI)测量各向异性分数(FA)和平均扩散系数(ADC).结果 与对照组比较,A组内囊后肢水平FA值降低(t=3.452,P=0.002),ADC值增大(t=2.670,P=0.012);其他ROI的FA、ADC值差异无统计学意义.与对照组比较,B组内囊后肢水平FA值有下降趋势(U=11,P=0.057);与A组比较差异无统计学意义(U=29,P=0.777).A组内囊后肢水平FA值与ALS功能评分呈正相关(r=0.577,P=0.019),与锥体束征评分呈负相关(r=-0.789,P=0.000),与年龄、病程、病情进展速度无相关性;ADC值与以上指标间均无相关性.结论 DTI可以客观而定量地评价锥体束病变,为ALS的诊断提供有价值的信息。

目的 研究胚胎发育不良性神经上皮瘤(DNT)的临床、影像及病理学特征.方法 回顾分析11例DNT患者的临床和影像学资料,对术中切除标本进行病理形态学观察,并对患者进行长期随访.结果 临床以难治性癫(癎)发作为主要表现,11例中有9例在20岁之前发病.磁共振成像(MRI)示皮质或皮质下低T1、高T2信号影,边界清晰,呈囊状或脑回样.7例显示强化.6例行术中皮质脑电图(ECOG)检查,发现5例瘤灶切除后仍有部分(癎)样放电存在.组织学由神经元和神经胶质异源性成分混合构成,1例为简单型,7例为复杂型,3例为非特异型.8例标本充足的病例有7例伴皮质发育不良改变.癫(癎)控制结果Ⅰ级9例,Ⅱ级2例,无肿瘤复发.结论 DNT为WHO Ⅰ级的良性肿瘤,应结合临床、影像和病理学特征确诊DNT,准确的诊断有重要的治疗和预后判断价值。

目的 检测10例Creutzfeldt-Jakob病(CJD)患者prion基因(PRNP)外显子突变情况.方法 抽取患者外周静脉血,提取DNA,PCR法扩增PRNP外显子后直接测序,并用限制性内切酶Nsp Ⅰ检测PRNP 129位点密码子基因型.结果 2例肯定CJD患者中,1例PRNP检测未见异常,另1例PRNP第729碱基G被C取代(729G→C),使编码prion第211个氨基酸的密码子GAG变成了GAC,翻译后第211个氨基酸由谷氨酸变为天冬氨酸(E211D).8例很可能CJD患者中,2例PRNP第751碱基G被A取代(751G→A),使编码prion第219个氨基酸的密码子GAG变成了AAG,翻译后第219个氨基酸由谷氨酸变为赖氨酸(E219K).10例CJD患者PRNP 129位点密码子基因型都是甲硫氨酸纯合型.结论 1例肯定CJD患者的prion基因外显子存在一种新的点突变E211D,这很可能是导致遗传prion病发生的原因.2例很可能CJD患者的prion基因突变E219K,与M129V同属于基因多态性,而不是致病原因.prion基因检测有助于prion病的诊断。

目的 评价脑电图(EEG)在判定脑死亡中的作用.方法 选择浙江省各大医院临床诊断为脑死亡患者88例.其中男性54例,女性34例,年龄16～82岁,平均(43.6±18.5)岁.采用意大利EB Neuro公司Belight便携式脑电图仪,按国际10/20标准,用针电极进行描记,对88例临床诊断脑死亡患者相隔12 h行2次EEG检测.结果 以脑电静息,即不出现＞2 μV的脑波活动作为脑死亡的EEG诊断标准.88例中有81例(92.04%)患者在相隔12 h行2次EEG检查,其结果均呈脑电静息表现.其中6例(6.82%)患者EEG检查存在低幅脑波活动.另1例(1.14%)首次EEG检查干扰太大影响结果判断,间隔12 h检查即显示脑电静息.结论 EEG用于评估脑死亡具有较高的敏感性,在严格控制仪器参数及检测条件和动态观察的情况下,可将其作为判断脑死亡的一项重要辅助检查手段。

目的 构建小鼠核受体相关因子1(Nurr1)shRNA的真核表达载体,并检测其对多巴胺能细胞内源基因的干扰作用.方法 构建两个针对Nurr1的RNA干扰重组表达载体,分别命名为pSC-N1和pSC-N2.经测序确认后,转染多巴胺能神经前体细胞系MN9D细胞株,以实时荧光定量PCR以及Western blot方法检测转染后Nurr1 mRNA和蛋白的表达.结果 测序鉴定证实合成的siRNA基因序列正确并已被准确克隆入pSilenCircle载体.pSC-N1和pSC-N2可特异性抑制MN9D细胞中Nurr1 mRNA的表达,下降率分别为62.3%和45.6%;Nurr1蛋白的表达亦明显下调,其下降率分别为57.4%和72.0%,而对照质粒对其无抑制作用.结论 成功构建了能特异性抑制多巴胺能细胞内源Nurr1表达的shRNA表达载体,为多巴胺能神经元发育以及帕金森病相关基因的功能研究奠定了基础。

目的 研究中药单体成分红景天甙(salidroside)对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱发的帕金森病(Parkinson disease,PD)小鼠模型的脑保护作用及其可能机制.方法 80只C57BL雄性小鼠,分为正常对照组、MPTP模型组、MPTP+红景天甙组(即干预组,分别用3 mg/kg、50mg/kg和150 mg/kg)及红景天甙对照组(分别用3 mg/kg、50 mg/kg和150 mg/kg),每组10只.应用免疫组化法观察黑质酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经元数目变化,蛋白印迹法(Western blot)检测TH、胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)在纹状体中表达水平的变化.结果 在小鼠黑质部位,MPTP组TH阳性神经元数目明显少于正常对照组及干预组(P＜0.05).Westernblot结果显示,不同剂量干预组小鼠纹状体中的TH蛋白表达(相对灰度值)(0.8326±0.0930,0.9007±0.0104和1.1114±0.2013)较MPTP组的TH蛋白表达(0.5738±0.0114)明显增加(P＜0.05);干预组的GDNF蛋白表达(1.3503±0.0573)较MPTP组的蛋白表达(0.1485±0.0118)显著增加(P＜0.05);干预组的GFAP蛋白表达(2.4788±0.2093)与MPTP组(1.8431±0.1559)之间差异无统计学意义(P＞0.05),但是干预组较正常对照组(1.3695±0.1174)明显增加(P＜0.05).结论 红景天甙可以拮抗MPTP诱导的PD模型小鼠黑质多巴胺能神经元的丢失,其神经保护作用可能与促进内源性GDNF分泌增加有关。

目的 研究中国大陆脊髓小脑性共济失调(spinocerebellar ataxias,SCA)17型(SCA17)的分布频率,以及南方汉族健康人群TATA结合蛋白(TATA-binding protein,TBP)基因CAG/CAA重复次数正常变异范围.方法 应用荧光聚合酶链反应(PCR)、毛细管电泳等技术,对已经排除了SCA1、2、3、6、7和齿状核-红核-苍白球路易体萎缩的67个常染色体显性遗传SCA家系的先证者、66例散发SCA患者及110名健康人进行TBP基因CAG/CAA重复次数分析.结果 南方汉族健康人群TBP基因CAG/CAA重复次数范围为26～43次,杂合频率为76.36%,共有14种等位基因.在一个散发SCA患者中发现TBP基因CAG/CAA重复次数为44次.结论 SCA17在中国内地为罕见的SCA亚型,南方汉族健康人群TBP基因常见的CAG/CAA重复次数为34和35次。

目的 研究我国肝豆状核变性(WD)患者MURR1基因的突变特征及其与WD患者临床表型的关系.方法 根据MURR1基因全长3个外显子及其毗邻内含子序列,自行设计合成引物,聚合酶链反应(PCR)扩增61例经ATP7B基因诊断确诊的WD患者的MURR1基因序列,PCR产物纯化后直接测序检测MURR1基因突变和多态,并以60名健康人作为对照.结果 1例患者在5'非翻译区检出较为罕见的-43T→C杂合新多态,因例数太少,无法分析基因型和临床表型的关系.27例患者检出2号内含子的IVS2+63C→G杂合多态,1例为纯合多态,频率为23.8%(29/122);60名健康对照中,26名检出此杂合多态,3名为纯合多态,频率为26.7%(32/120).通过χ2检验,IVS2+63C→G在健康对照和WD患者中的频率基本相等(χ2=0.269,P＞0.1),表明这是一个群体多态.在MURR1基因编码区和剪接位置均未发现突变或多态.结论 MURR1基因突变在我国WD患者中是罕见的,与我国WD患者的临床表型无相关性。

例1 女,56岁,于1998年出现左眼视力下降,诊断为球后视神经炎,激素治疗后好转.随后3年内两眼交替出现3次球后视神经炎,视力逐渐下降,双眼遗有指动视力.曾行视觉诱发电位检查示:双眼P100潜伏期延长.2001年反复出现左下肢麻木,后出现双下肢截瘫,大小便失禁,行颈、胸、腰椎磁共振成像(MRI)示髓内脱髓鞘病变累及脊髓全段,头颅MRI未见明显异常,诊断为视神经脊髓炎.2005年7月突然出现左眼视物不清入我院.查体:右眼视力眼前指动,左眼光感,眼底为原发性视神经萎缩改变,双上肢肌力Ⅳ级,腱反射(+++),双上肢Hoffmann征(+),双下肢肌力0级,右侧Chaddock征(±),胸5以下浅痛觉减退.给予激素、环磷酰胺、保护神经等治疗后,左眼视力改善。

4例患者分别于1999年至2005年3月于我院就诊,均为男性,年龄17～48岁,病前均有上呼吸道感染或肠道感染病史,其中2例发展为肠梗阻,1例出现贲门失迟缓症.一般在感染后3～14 d出现晕厥,2例同时出现面部无汗、唾液及泪液少. 　　

我院在2003年6月至2005年3月期间,收住5例多发性硬化(MS)用干扰素-β(IFN-β)治疗,临床资料见表1.5例中男性3例,女性2例,年龄18～36岁,平均26.4岁.按Poser关于MS的诊断标准,临床确诊3例,临床可能2例.入院时扩展的残疾功能状况量表(EDSS)评分2.0～7.5分,平均3.8分.首发症状视力减退者2例,感觉异常者2例,肢体无力者1例.磁共振检查发现病灶位于大脑半球者4例,脑干者2例,脊髓者3例.视觉诱发电位异常者4例,脑脊液24 h鞘内免疫球蛋白G(IgG)合成率增高1例。

腓骨肌萎缩症(Charcot-Marie-Tooth disease,CMT),是神经系统常见的遗传性疾病之一,根据电生理和病理学研究将其分成两大组:CMT1(脱髓鞘型)和CMT2(神经元型或称轴索型).该病是一组遗传异质性疾病,目前已发现30个基因座位与不同类型的CMT相关,其中有11型已明确了致病基因[1],发病率最高的是常染色体显性遗传的CMT1A[2,3].我们已先后建立起短串联重复序列分析(STR)和聚合酶链反应(PCR)酶切法检测特异性融合片段来诊断CMT1A基因重复[4].STR结合银染的方法因有便宜、省时和所需DNA数量少等优点曾被广泛应用,但主要缺点是受杂合率的限制,如果被检测者为纯合子,则无法得出结论[5];再者,实验结果不稳定,银染重复性不理想.而PCR酶切法的阳性率则较低[4,6].因此,为提高基因重复检测的阳性率,并适于在临床应用,我们应用实时荧光定量PCR技术,以SYBRGreen Ⅰ荧光染料为标记物,采用标准曲线的相对定量方法检测了18例CMT1A患者的基因重复,现报道如下。

X-连锁的dystrophin基因是目前人类基因组中最大的基因,长2400kb,有79个外显子,所以易于发生重排和重组而引起突变.大部分突变为一个或多个外显子缺失(60%),其他为重复突变(6%)、置换和点突变等[1].突变可破坏dystrophin基因转录的阅读框,使dystrophin蛋白的合成提前终止引起Duchenne型肌营养不良(Duchenne muscular dystrophy,DMD).dystrophin为一杆状蛋白,相对分子质量为427 000,含有4个结构域,即N-端区、中央杆状区、半胱氨酸富集区、C-端区.中央杆状区由24个血影蛋白样重复序列和4个铰链区构成,占整个蛋白长度的80%.dystrophin蛋白把细胞骨架肌球蛋白固定到肌纤维膜,对维持细胞膜的完整性是必不可少的.dystrophin蛋白缺乏使细胞膜的脆性增加,易于受到肌肉收缩引起的机械压力的损伤.DMD的发病率约为1/3500名新生男婴,是最严重和最常见的进展性肌萎缩性疾病,患者通常于20多岁死于呼吸、循环衰竭.其中1/3的病例由新的突变引起,所以依靠遗传咨询和产前诊断不能完全消除此病,还需要一种有效的治疗方法.最近的研究显示用反义寡核苷酸(antisense oligonucleotides,AOs)干预剪接诱导外显子跳读是一种有前景的治疗方法.我们就关于干预剪接治疗DMD在动物模型和人体细胞内研究中的进展以及需要解决的主要问题作一综述。

视神经脊髓炎(neuromyelitis optica,NMO)是一种临床上具有复发或单向病程的,选择性、侵袭性损伤视神经和脊髓的自身免疫病,亚洲人多见.既往对NMO是多发性硬化(multiple sclerosis,MS)的一个亚型还是另外一种疾病存在争议,目前认为其可能是一种不同于MS的离子通道病[1].NMO和经典的MS(classical MS,CMS)不仅在遗传背景、发病机制、病理改变和临床表现上不同,而且治疗和预后也不尽相同.我们对近几年来NMO免疫、病理和治疗方面的研究进展做一综述。

短暂性脑缺血发作(TIA)为源于脑血管的可逆性的神经功能缺损,症状于24 h之内完全消失,不留任何残损症状,这是传统TIA的定义.近年来,随着神经影像学、神经介入治疗学、血管超声学的进展及临床实践的积累,人们对TIA的认识有了很大的提高,TIA的危险性得到进一步细化.我们就TIA近几年的研究进展作一综述。

阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)是一种原因未明的神经系统退行性病变.早期对AD的研究主要集中在两种特征性病理改变:老年斑(senile plaques,SP)与神经纤维缠结(neuro-fibrillary tangles,NFT).SP的主要成分是β-淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ);神经纤维缠结的聚集主要是由tau蛋白过度磷酸化形成的.近来有研究发现,上述特征性病理改变与脑部胰岛素、胰岛素样生长因子(insulin-like growth factor,IGF)所介导的信号系统紊乱相关,上述信号传导系统可能参与AD的发病机制,两者间的相关性已经逐渐被关注.我们将相关研究进展综述如下。