2024年 · 第47卷第12期

近年来随着免疫治疗的应用和流式细胞术检测技术的进步，多参数流式细胞术精细化分析免疫细胞亚群的临床应用也越来越广泛。中华检验医学杂志编委会组织“基于多参数流式细胞术的精细化免疫细胞亚群分析及临床应用”专题报道，凝练多参数流式细胞术进行免疫细胞精细化分型的临床应用现状及进展，全面认识实验室检测面临的挑战，以促进其在临床疾病诊疗中的规范应用。

T细胞介导的细胞免疫应答与实体肿瘤的发生发展和治疗转归密切相关。免疫检查点抑制剂（ICI）免疫治疗通过纠正宿主的细胞免疫功能改善了部分实体肿瘤患者的生存预后，但不同患者对于ICI治疗反应不同，亟须有效可靠的生物标志物用以监测疗效和不良反应。随着肿瘤免疫学基础研究的深入及流式细胞术免疫细胞精细分型的发展，外周血免疫细胞功能评估作为肿瘤精准诊疗伴随诊断研究的新方向，在指导临床选择治疗方案、监测不良反应、评估疗效和预后等方面取得重要进展，展现出良好的临床应用潜能。

间质性肺疾病（ILD）是一类以弥漫性肺实质、肺泡炎症和肺纤维化为病变特征的异质性疾病，目前尚无理想的诊断及预测预后工具。生物学标志物的应用能够辅助疾病快速诊断并指导临床治疗决策。因此，迫切需要可靠、安全、可行性高的生物标志物用于明确间质性肺疾病的疾病进展及治疗决策，以实现间质性肺疾病患者及时、精准和个性化的治疗。

质谱流式细胞术（CyTOF）将传统流式细胞技术与质谱分析技术相结合，其具有独特的金属标签标记、无需繁琐的补偿计算、高通量细胞分析以及多样化数据信息处理等优势，可实现单细胞水平同时检测40多个参数，其应用已涉及医学领域中的信号通路、生长发育、肿瘤微环境、自身免疫性疾病、感染、免疫治疗以及器官移植等方面。该文围绕CyTOF在儿科疾病临床诊疗与研究的最新应用进展进行阐述，以期将CyTOF更好地应用于儿科疾病的诊治。

多参数流式细胞术（MFC）在淋巴造血系统肿瘤的检测中起到至关重要的作用，但是长期以来应用多限于骨髓。外周血样本具有取材方便、相对无创、信息量大的优势，且最近多项临床诊疗指南共识的更新均涉及MFC检测外周血免疫表型的应用。然而，国内目前对MFC检测外周血样本肿瘤细胞和肿瘤前驱病变的认识及应用尚有不足。为进一步了解MFC外周血免疫表型分析在淋巴造血系统肿瘤诊断与随访中应用价值、最新进展和注意事项，促进MFC外周血免疫表型分析的临床应用，制定适用于各类医疗机构的临床实验室、第三方医学检验实验室等相关单位的规范化参考文件，由执笔专家起草初稿，中华医学会检验医学分会临床血液体液学组组织来自全国38家医疗机构的45位专家结合实践经验，并参考了大量文献，经过函审、讨论、调查问卷反馈，最终形成了包括17项内容的本共识。

目的 探讨骨髓增生异常综合征（MDS）患者淋巴细胞精细分型的特征，以评估MDS患者病程中免疫状态变化。 方法 回顾性研究南京医科大学第一附属医院2022年2月1日至2024年1月31日确诊的73例MDS患者，包括男47例，女26例，年龄66（56，73）岁，以同期健康管理中心30名健康人作为对照组，采用流式细胞术对其进行淋巴细胞精细分型检测。比较各组间淋巴细胞亚群分布差异；采用Spearman秩相关系数分析淋巴细胞亚群与原始细胞或CD34+细胞相关性。 结果 随着修订的国际预后评分系统（IPSS-R）危险程度升高，较低危组、中危组、较高危组辅助性T（Th）细胞（P=0.047）及纯真亚群（CD4+CD45RA+CD62L+）比例（P=0.021）逐渐升高，记忆亚群（CD4+CD45RA-）比例逐渐降低（P=0.007）；与基因突变数目较低组相比，较高组B细胞（8.76%比18.41%，P=0.005）及杀伤性T细胞活晚期化亚群（CD8+HLADR+）比例（21.21%比31.69%，P=0.020）较低；自然杀伤（NK）细胞比例较高（14.98%比8.94%，P=0.032）。原始细胞与Th细胞（P=0.022）、CD4+CD45RA+CD62L+T细胞（P=0.045）、CD4+CD45RA-T细胞（P=0.017）及杀伤性T细胞高度活化亚群（CD8+CD38+HLADR+）比例（P=0.013）存在相关性。 结论 MDS患者Th细胞及纯真亚群比例升高，记忆亚群比例降低可能预示IPSS-R危险度升高；B细胞及CD8+HLADR+T细胞比例降低，NK细胞比例升高可能提示基因突变的累积。不同IPSS-R危险度、不同基因突变数目的MDS患者淋巴细胞亚群分布差异提示在MDS患者病程中存在免疫失调，淋巴细胞精细分型有助于评估MDS患者免疫功能变化。

目的 初步建立流式细胞术检测精细化免疫细胞亚群的参考区间。 方法 横断面研究。研究共纳入326名表观健康人，按照年龄分为18~40岁和41~60岁组。空腹状态下采集外周静脉血，参照既往专家共识方案进行流式细胞检测。依据CLSI EP28-A3c和中华人民共和国卫生行业标准WS/T 402-2024进行总体人群和不同年龄组的外周血精细化免疫细胞亚群的参考区间分析。 结果 检测结果主要分为T、B、NK、DC及单核细胞精细化亚群，部分亚群的参考区间采用总人群的结果，包括CD3+亚群（56.4%~83.3%），CD4+TEMRA亚群（0.2%~11.6%），CD4+TEM亚群（14.9%~52.8%），CD4+CD28+亚群（76.3%~99.9%），CD19+CD5+亚群（9.7%~45.8%），CD19+CD27-亚群（45.7%~90.0%），CD19+CD27+亚群（9.8%~54.0%），CD3+CD16+CD56+亚群（1.3%~20.2%），CD3-CD19-CD20-CD14-CD56-HLA-DR+亚群（0.4%~2.0%），单核细胞Mo1亚群CD14+CD16-（46.3%~94.6%），Mo2亚群CD14+CD16+（2.8%~49.7%）等。当不同年龄组间Z值>Z*（截断值3.50）时，提示这些亚群需根据年龄分组建立不同的参考区间。 结论 初步建立了多参数流式细胞术免疫细胞精细亚群的参考区间，对于符合分组参考区间标准的亚群，在临床应用及实验室验证时应充分考虑年龄因素。

目的 探讨直肠癌新辅助治疗对患者外周血淋巴细胞亚群绝对数和百分比的影响，及淋巴细胞亚群与新辅助治疗效果的关系。 方法 回顾性分析2020年1月1日至2023年12月31日就诊于复旦大学附属肿瘤医院的局部晚期直肠癌患者外周血淋巴细胞亚群检测结果。入组患者均进行术前新辅助治疗［短程放疗序贯PD-1（程序性死亡受体1）单抗联合Xelox化疗4个疗程］，在治疗前和新辅助治疗结束后都采用流式细胞术检测外周血中淋巴细胞各亚群（CD3+T、CD4+T、CD8+T、B、NK）的绝对数和比例（%）以及CD4+CD25+CD127low调节性T细胞（Treg）占CD4+T细胞的百分比（CD4+Treg%）、功能性CD8+T占总T细胞的百分比（CD8+CD28+T%）。根据上述条件共有58例患者符合要求，并在完成新辅助治疗后，根据临床或病理诊断进行疗效判断，分为完全缓解（CR）组和非CR组，CR组男20例，女7例，年龄（52.89±9.95）岁；非CR组男17例，女14例，年龄（57.26±11.05）岁。采用配对t检验比较分析淋巴细胞各亚群在新辅助治疗前后的变化，通过两样本独立t检验分析CR组和非CR组各淋巴细胞亚群治疗后变化程度和治疗前基础水平的差异，并通过受试者工作特征（ROC）曲线评估相关亚群的基础水平对直肠癌患者新辅助治疗疗效的预测效能。把应用相同治疗方案但仅有治疗前淋巴细胞各亚群基础水平的患者（n=104）作为验证组，分析相关预测指标的符合率。 结果 与新辅助治疗前比较，治疗后所有患者CD3+T、CD4+T、CD8+T、B、NK细胞绝对数均减少（P<0.05），CD8+T%和NK%均升高（P<0.05），B%下降（P<0.05），CD3+T%、CD4+T%、CD4+Treg%和CD8+CD28+T%差异无统计学意义，上述变化与疗效无关，但CR组患者新辅助治疗前CD3+T、CD4+T、CD8+T绝对数，CD3+T%、CD8+T%以及CD8+CD28+T%高于非CR组患者（P<0.05）。ROC曲线分析显示，上述疗效相关指标治疗前基础值预测直肠癌患者新辅助治疗完全缓解与否的曲线下面积（AUC）分别为0.838、0.756、0.839、0.659、0.702、0.858；其中，CD3+T绝对数联合CD8+CD28+T%检测的AUC为0.886，敏感度和特异度分别为81.5%和90.3%。在验证组中，上述预测指标的阳性符合率为69.4%~97.5%，阴性符合率为69.8%~84.4%。 结论 直肠癌新辅助治疗影响淋巴细胞的组成比，使具有抗肿瘤效应的免疫细胞比例增加，且可通过患者治疗前的淋巴细胞亚群数量和组成比预测新辅助治疗的疗效。

目的 分析T细胞精细亚群在B淋巴细胞增殖性疾病（B-LPD）患者和健康人群中的细胞占比差异及细胞免疫监测特征。 方法 观察性研究。收集山东大学齐鲁医院2022年5月14日至2024年1月19日间诊断收治累及骨髓和外周血的B-LPD患者194例［男122例、女72例、年龄（64±20）岁］，其中包括慢性淋巴细胞白血病（CLL）76例、弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）23例、滤泡淋巴瘤（FL）17例、毛细胞白血病（HCL）12例、淋巴浆细胞淋巴瘤/巨球蛋白血症（LPL/WM）10例、套细胞淋巴瘤（MCL）26例、边缘区淋巴瘤（MZL）20例，以及CD5-B型淋巴细胞增殖性疾病未分类（B-LPD-U）10例。同时收集本院健康管理中心2023年11月18日采集的健康对照组（HC）45名［男22名、女23名、年龄（62±17）岁］。利用流式细胞术对T细胞亚群进行精细分群，根据圈门策略，按照CD45RA和CD62L的表达情况将CD4+和CD8+T细胞分别划分初始T细胞（TN，CD45RA+CD62L+）、中央记忆T细胞（TCM，CD45RA-CD62L+）、效应记忆T细胞（TEM，CD45RA-CD62L-）、终末分化效应记忆细胞（TEMRA，CD45RA+CD62L-）；将调节性T细胞（Treg，CD3+CD4+CD127low CD25high）划分为CD45RA+的初始Treg（nTreg）和CD45RA-的记忆Treg（mTreg），以及HLA-DR+的活化Treg（aTreg）。采用Kruskal-Wallis单因素方差分析比较HC组与各组B-LPD患者的T细胞亚群差异变化。 结果 B-LPD各组的CD3+T细胞在淋巴细胞的比例（CCL组13.15%、DLBCL组41.75%、FL组30.52%、HCL组34.24%、LPL/WM组40.58%、MCL组20.67%、MZL组26.36%、CD5-B-LPD-U组17.49%）均小于HC组（64.85%）。B-LPD各组的CD4+T细胞在CD3+T细胞的比例（CCL组46.63%、DLBCL组40.76%、FL组42.77%、HCL组43.81%、LPL/WM组43.02%、MCL组45.58%、MZL组43.95%、CD5-B-LPD-U组46.91%）均低于HC组（54.61%），差异有统计学意义。 结论 B-LPD相关疾病影响T细胞免疫功能，CD4+TEM增多、CD8+TEMRA减少以及aTreg的增多提示B-LPD抑制CD8+T细胞免疫杀伤，激活Treg细胞免疫抑制功能。

目的 观察CAR19 T细胞治疗B系肿瘤中，患者体内 T细胞的增殖动力学。 方法 观察性研究。运用流式细胞术，对2021年11月1日至2023年12月31日在苏州大学附属第一医院接受CAR19 T细胞治疗的52例B 系肿瘤患者（包括12例B-ALL和40例NHL），治疗前后的CAR19+和CAR19-T细胞扩增水平及亚群的变化进行监测。并根据B系肿瘤治疗指南中的 疗效评估标准，将患者分为完全缓解组和未完全缓解组，采用t检验或非参数秩和检验比较两组CAR19+和CAR19-T细胞各亚群差异。 结果 患者CAR19+T细胞扩增峰值时，完全缓解组和未获得完全缓解组CAR19+T细胞中各亚群均无统计学差异；患者体内的CAR19-T细胞6个月后CD3+/CD4+/CD8-比例仍低于治疗前水平（48.0+27.2比63.1+19.7，<0.01）其中的亚群CD197+CD45RA+，CD197-CD45RA-比例恢复至治疗前水平，而CD197-CD45RA+比例低于治疗前水平（4.2+3.0比21.1+15.6，<0.01）；CD3+/CD4-/CD8+比例6个月后恢复至治疗前水平，其中的亚群CD197-CD45RA-的比例恢复至治疗前水平，而CD197+CD45RA+（16.6+8.7比35.1+30.1，<0.01），CD197+CD45RA-（18.7+9.1比25.8+19.1，<0.01）比例仍低于治疗前水平。 结论 CAR19 T细胞治疗后，不同疗效患者CAR19+T细胞各亚群比例无差异。治疗后体内CAR19-CD3+CD4-CD8+细胞比例要早于CD3+CD4+CD8-恢复，且两者各亚群的变化存在不同。此治疗方案对体内的CAR19-T细胞亚群的影响很大，且它的重建需要较长时间。

目的 探讨异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）后患者外周血淋巴细胞亚群特征在发生巨细胞病毒（CMV）感染鉴别中的意义及价值。 方法 回顾性研究。收集2021年5月31日至2023年1月30日北京陆道培医院收治的allo-HSCT患者。本研究收集了CMV感染组50例及非CMV感染组47例。采用流式细胞技术检测患者allo-HSCT后第30（+30）天时间点外周血淋巴细胞亚群，分析淋巴细胞绝对数及亚群在发生CMV感染组患者鉴别中的意义。采用Mann-Whitney U 检验和χ2检验。对单因素分析有统计学意义的指标再进行二元Logistic回归分析，并绘制ROC曲线。不同结局下各单因素的生存曲线采用Kaplan-Meier法，Log-rank检验。 结果 1.在CMV感染组患者中22%（11/50）明确CMV病毒血症合并CMV病，其外周血全血CMV病毒最高拷贝数1 600（1 400，5 800）拷贝数/ml高于未明确合并CMV病患者970（670，2 300）拷贝数/ml，差异有统计学意义（Z=-2.281，P=0.029）。2.CMV感染组患者随访终点OS为80%（40/50），非CMV感染组患者随访终点OS为87.2%（41/47）。两组随访终点OS上差异无统计学意义（χ2=0.231，P=0.630）。3.在二元逻辑斯回归模型中，患者回输的CD34细胞数、移植后亚群CD3+CD38+T细胞占CD3+T细胞百分比、CD4+CD38+T细胞占CD4+淋巴细胞百分比为发生感染的重要独立危险因素，接受者操作特性曲线（ROC）曲线结果显示CMV感染的独立危险因素曲线下面积AUC=0.914（>0.7，P<0.001），决断值为0.702，敏感度0.857，特异度0.844。 结论 allo-HSCT移植后，CMV感染组免疫亚群显示较非CMV感染组有较低的T细胞和CD4+T细胞百分比，在T细胞分化上以TEM增多，NaiveT细胞减少为表现。并表明活化指标CD38在T细胞上的表达水平对于CMV感染有较好的判断价值。

目的 检测原发性干燥综合征（pSS）患者外周血B细胞免疫表型，探讨其在pSS中的变化及临床意义。 方法 回顾性病例对照研究。收集2023年3月1日至2024年2月28日在大连医科大学附属第二医院就诊的pSS患者25例（pSS组），均为女性，年龄（62.0±11.9）岁。同时期纳入25名女性健康体检者作为对照组（HC组），年龄（57.6±11.2）岁。采用流式细胞术检测外周血B细胞亚群比例。pSS患者以年龄分为<60岁组（15例）、≥60岁组（10例）；以ESSDAI评分分为ESSDAI评分<5分组（9例）、ESSDAI评分≥5分组（16例）；以是否出现系统损伤分为无系统损伤组（7例）、合并系统损伤组（18例）；以抗SSA抗体分为抗SSA抗体阴性组（7例）、抗SSA抗体阳性组（18例）；以抗SSB抗体分为抗SSB抗体阴性组（17例）、抗SSB抗体阳性组（8例）。采用Mann-Whitney U检验比较两组间B细胞亚群分布差异，Spearman相关性分析B细胞亚群比例与pSS患者实验室指标及ESSDAI评分相关性。 结果 与HC组相比，pSS组初始B细胞、CD19+CD20+B细胞、浆母细胞比例升高，未转换记忆B细胞、类别转换记忆B细胞及调节性B细胞比例下降，差异均有统计学意义（P均<0.05）。pSS患者中，ESSDAI评分≥5分组浆母细胞比例高于ESSDAI评分<5分组［1.20%（1.00%，1.38%）比0.5%（0.38%，0.65%），Z=2.416，P<0.05］，而调节性B细胞比例低于ESSDAI评分<5分组［2.50%（2.00%，2.78%）比5.55%（3.58%，7.10%），Z=2.775，P<0.05］；合并系统损伤组未转换记忆B细胞比例低于无系统损伤组［1.50%（0.85%，1.70%）%比2.45%（1.73%，2.78%），Z=2.122，P<0.05］。Spearman相关性分析显示，pSS患者ESSDAI评分与浆母细胞比例呈正相关（r=0.431，P<0.05），与调节性B细胞比例呈负相关（r=-0.413，P<0.05）。 结论 pSS患者外周血浆母细胞比例升高、调节性B细胞比例下降，与pSS疾病活动性高度相关，浆母细胞及调节性B细胞可能在pSS发病中起着重要作用。

目的 探讨肾移植后慢性抗体介导排斥反应（CAMR）患者外周血中树突状细胞的表型特征，揭示其在CAMR发生与发展中的潜在作用机制。 方法 病例对照研究。共纳入2020年10月1日至2021年7月31日在四川大学华西医院接受肾移植手术或长期随访的肾移植受者25例，其中CAMR患者15例，肾功能稳定组患者10例。采用流式细胞术分析外周血单个核细胞中DC亚群，采用相关性分析探讨各DC亚群与肾功能检验指标之间的关系，并在CAMR组中基于DC绝对计数、ILT3+mDC绝对计数、ILT3+pDC绝对计数、ILT4+mDC+绝对计数以及ILT4+pDC绝对计数结果进行迭代聚类分析。 结果 与肾功能稳定组患者相比，CAMR组患者pDC百分比和绝对计数、pDC/mDC比值、ILT3+pDC绝对计数均降低，而ILT3+mDC百分比升高，DC百分比与Scr（r=-0.467，P=0.019）和CysC（r=-0.502，P=0.011）呈负相关，与eGFR呈正相关（r=0.436，P=0.029），而ILT4+pDC百分比与CysC呈正相关（r=0.433，P=0.031），DC绝对计数与CysC呈负相关（r=-0.425，P=0.034）。CAMR组的迭代聚类分析定义了两组患者，两组患者的Scr、eGFR以及CysC检测结果差异均有统计学意义。 结论 移植后患者DC亚群的分布及ILT3和ILT4的表达，可能为早期识别CAMR风险、优化免疫抑制治疗策略提供新的生物标志物。特别是pDC的变化及ILT3、ILT4的表达水平，可作为评估移植后免疫状态和肾功能预后的有价值指标。

目的 开发一种基于智能手机的便携、易操作的胱抑素C（CYS-C）透射比浊仪。 方法 基于智能手机环境光传感器对光信号的敏感性及免疫比浊检测原理，设计制作一种智能手机比浊仪，用于血清中CYS-C的即时检测（POCT）。通过3D打印技术制作智能手机比浊仪的主体结构，并按照设计的电路和光路进行了组装，同时对装置中光源的稳定性、装置的可行性进行了验证。最后通过与临床使用的全自动生化分析仪的127份血清检测结果进行比较，评估了智能手机比浊仪的敏感度、特异度和符合率。 结果 智能手机比浊仪在装置性能测定时，连续工作60 min光源强度CV=0.9%。同时在CYS-C样本的批次重复测试中CV值均低于5%。检测127份血清中的CYS-C的结果计算敏感度84.4%、特异度95.8%、符合率92.9%，检测结果与全自动生化分析仪相关系数r=0.902 9。 结论 开发的智能手机比浊仪在稳定性、一致性和准确性方面表现良好，与全自动生化分析仪结果高度相关，证实了其在临床检测CYS-C中的实用性和有效性。

目的 探讨风险管理软件用于降低实验室信息领域的相关风险的可行性。 方法 组建风险控制小组实施风险管理的应用研究。通过头脑风暴、失效模式和效应分析等方法，使用借助风险管理软件对2024年浙江大学医学院附属第一医院ISO 15189条款7.6数据控制和信息管理进行风险评估，并实施风险控制、风险监控和风险管理评审。 结果 在数据控制和信息管理领域识别出42项风险点。经过风险控制小组评估，确定其中1项高风险，风险系数为51.56，3项中风险，风险系数分别为35.45、31.27、30.75。采取相应的风险控制措施后，4项风险点的风险系数均降低到25以下可接受范围，并纳入风险监测列表。 结论 应用风险管理软件有助于实验室信息领域风险管理的实施。

先证者1，女，51岁，无输血史，有妊娠史，慢性粒细胞白血病急性期；先证者2，男，53岁，无输血史，肝癌患者。先证者1，2在常规ABO血型鉴定中正定型出现混合外观现象，医院送标本至本血液中心进行进一步鉴定。实验发现先证者1正定型为A型混合外观，反定型为A型，先证者2正定型为B型混合外观，反定型为B型。对两例先证者分别进行短串联重复序列（STR）实验，排除由于嵌合体导致的混合外观形象。对先证者1父母进行ABO血型鉴定。后对两例先证者进行ABO基因1~7外显子测序，结果显示先证者1、2均为O01/O01，与血清学结果不相符。后针对ABO血型基因A102特异性位点467与B101特异性位点526设计引物，检出先证者1与先证者2因疾病受损的A102与B101等位基因。推测引起ABO血型血清学与基因测序结果不相符的原因可能是由于疾病导致的ABO血型基因染色体杂合性缺失。

免疫衰老是人体衰老的重要组成部分，与感染风险增加、肿瘤与心血管病等衰老相关疾病的发生发展密切相关。利用流式细胞术对免疫细胞的衰老标志物进行检测，可评价不同类型免疫细胞的衰老状态。目前，衰老研究多针对特定免疫细胞亚群，全景描述不同类型免疫细胞衰老标志物的报道较少。免疫细胞种类繁多，不同类型免疫细胞的衰老标志物也各不相同。中性粒细胞、单核细胞和树突状细胞等重要髓系细胞、固有淋巴细胞、获得性淋巴细胞、非常规T淋巴细胞等不同类型免疫细胞的衰老相关流式检测标志物与衰老的关系、数量变化及机制被重点分析，整体展示了不同类型免疫细胞的常用衰老标志物。通过流式技术对这些标志物进行检测，有利于描绘出人体的免疫衰老状态，未来也可能有助于针对衰老疾病的干预和治疗进行评价。目前也存在免疫细胞精细亚群检测方案不统一、部分衰老标志物研究结果矛盾等问题，仍有待进一步研究阐明，以促进流式细胞检测在免疫衰老评估中的临床应用。

免疫检查点抑制剂（ICI）为肿瘤治疗带来了突破性进展，但较低的治疗响应率仍然是重要挑战，亟需有效的生物标志物用于免疫治疗的监测。免疫衰老通过降低机体免疫监视能力促进肿瘤发生发展，在肿瘤进展和免疫治疗中发挥关键作用。随着流式细胞术、多组学分析和单细胞技术等方法的应用，免疫衰老分子标志检测在肿瘤风险评估、预后预测及ICI疗效监测中取得重要进展。