2024年 · 第47卷第11期

基因测序技术在恶性肿瘤的早期筛查、伴随诊断、分子分型以及预后评估中扮演日益重要的角色。本期“肿瘤与测序”重点号邀请了检验医学领域知名专家，围绕肿瘤测序技术的发展、应用与展望以及基于DNA酶类生物传感器的新型肿瘤液体活检技术等前沿理论进行了详细介绍。此外，各种下一代测序技术（NGS）以及液体活检技术在实体或血液系统肿瘤中的应用研究也蓬勃涌现。值得关注的是，基于循环肿瘤DNA（ctDNA）和循环肿瘤细胞（CTC）分析的液体活检技术的临床应用发展迅猛，有望作为无创检测分析工具，助力肿瘤精准医疗。针对现有ctDNA NGS的不足，未来可以通过靶向CTC-DNA来实现更精准的抗肿瘤靶向诊疗。肿瘤基因测序的发展之路上还面临诸多挑战，只有正视并攻克这些难题，才能使其真正应用于临床实验室，以推动检验医学更好地服务于临床诊疗。

为探讨肿瘤易感基因检测的普及所引发的策略层面的争议和思考，该文围绕肿瘤易感基因检测的受检人群、检测基因和组合以及检测方法等，结合最新研究进展、临床实践经验及专家观点，阐述不同策略选择时的考量因素，同时探讨当前肿瘤易感基因检测面临的挑战。肿瘤易感基因检测在肿瘤预防及个体化诊疗方面具有重要意义，然而在临床实践中必须全面考虑各种因素，以推动其良性发展及广泛应用。

非小细胞肺癌（NSCLC）居我国乃至全球恶性肿瘤首位，近年来基因检测技术，尤其是肿瘤基因测序技术的发展，为NSCLC的临床分子诊断提供了坚实的依据，极大地提高了患者从靶向治疗或免疫治疗中获益的可能性，显著延长了患者的生存期。如何规范化利用肿瘤基因测序技术为NSCLC精准医疗提供依据尤为重要。本文就肿瘤基因测序技术在NSCLC临床分子诊断路径中应用的规范化进行了探讨，有利于推动肿瘤基因测序技术在NSCLC患者靶向治疗或免疫治疗药物的选择、毒副作用预测、疗效监测、复发及预后评价等中的规范化应用，也为肿瘤基因测序技术在其他实体瘤中的规范化应用提供了依据。

目的 筛选实验室多参数指标，建立恶性肿瘤骨髓转移（BMM）预测模型并验证。 方法 采用病例对照研究，选取2018年3月至2024年3月在吉林大学第一医院收治的恶性肿瘤患者444例为研究对象，其中模型建立集243例，模型验证集201例；模型建立集又分为BMM阳性组（81例）和BMM阴性组（162例），模型验证集分阳性验证组（67例）和阴性验证组（134例）。收集患者一般临床信息（包括性别、年龄、临床诊断等），以及47项实验室指标（包括血常规、凝血常规、肝功能、肿瘤标志物、钾、钠、氯、钙离子检测、骨髓形态学检查、骨髓活检等）。将BMM作为结局事件，采用2组间比较筛选差异变量，采用Pearson相关性分析研究参数之间的相关性，采用多因素Logistic回归分析筛选BMM的风险因素，建立Logistic模型，采用受试者工作特征（ROC）曲线评价BMM预测模型的诊断效能。 结果 模型建立集中BMM阳性组与阴性组间存在差异的28项参数的Pearson相关性分析显示，平均血小板体积（MPV）、红细胞比容（HCT）、血红蛋白（HGB）、凝血酶原时间（PT）等17项参数的相关系数均≤0.6（P<0.05），进一步多因素Logistic回归分析显示，MPV、HCT、HGB、PT、红细胞分布宽度（RDW）、碱性磷酸酶（ALP）、血小板计数（PLT）、平均红细胞血红蛋白浓度（MCHC）、氯离子（Cl-）为恶性肿瘤发生BMM的危险因素［MPV（OR=9.929，95%CI 2.688~71.335）、HCT（OR=8.232，95%CI 6.223~9.841）、HGB（OR=4.300，95%CI 1.947~16.577）、PT（OR=3.738，95%CI 1.359~11.666）、RDW（OR=1.995，95%CI 1.275~3.807）、ALP（OR=1.025，95%CI 1.012~1.045）、PLT（OR=1.014，95%CI 1.002~1.031）、MCHC（OR=0.724，95%CI 0.523~0.880）和Cl-（OR=0.703，95%CI 0.472~0.967）］。模型建立集中，各风险因素联合应用预测恶性肿瘤BMM的AUC为0.943（95%CI 0.898~0.987，P<0.001），敏感度为86.3%，特异度为89.2%；模型验证集中，AUC为0.924（95%CI 0.854~0.960，P<0.001），敏感度为86.7%，特异度为83.8%。 结论 本研究建立并验证了BMM的多参数预测模型，有助于预测恶性肿瘤BMM，为骨髓穿刺术的诊断决策提供一定参考。

目的 探讨基于靶向扩增子测序的快速二代测序（NGS）策略在诊断髓系肿瘤中的应用价值。 方法 观察性研究。收集2021年2月至2022年8月就诊于苏州大学附属第一医院的682例患者的骨髓或外周血标本，同步进行快速NGS和常规NGS检测，分别采用本地Ion Reporter软件和自主建立的生物信息学分析平台进行测序结果分析，比较2个测序平台的检测时效性，同时采用Kappa一致性检验来评估2个测序平台结果的一致性。应用快速NGS结合多重PCR和原位荧光杂交技术，在72 h内对年龄18~59岁的新诊断急性髓系白血病（AML）患者进行筛选，筛选出欧洲白血病网（ELN）2017高危组AML进行个体化诱导治疗。 结果 从样本接收到报告单发放，快速NGS和常规NGS检测周期时间分别为3（2，4）d和13（11，15）d，差异有统计学意义（Z=‒22.636，P<0.001）。682份标本共计1 507个突变位点，快速NGS共检出1 499个突变位点，检出率为99.5%，检出674份结果准确，准确率为98.8%；常规NGS共检出1 506个位点，检出率为99.9%，检出681份结果准确，准确率为99.9%。682份标本，181份未检出突变，501份检出突变，快速NGS漏检8份，常规NGS漏检1份。Kappa一致性检验显示，2种NGS检测结果一致性较好（Kappa=0.967，P<0.001）。通过快速诊断的286例AML患者中，筛选出ELN不良风险AML 78例，其中42例患者入组，年龄39（33，52）岁，在接受1个疗程的维奈克拉联合地西他滨诱导治疗后，78.6%（38/42）的患者获得复合完全缓解。104例其他髓系肿瘤中，快速NGS检出突变80例，检出率为76.9%，其中89.0%（215/242）的突变位点可以作为骨髓增生异常综合征、骨髓增殖性肿瘤和骨髓增生异常/骨髓增殖性肿瘤诊断分型、预后评估及靶向用药的依据。 结论 基于靶向扩增子测序的快速NGS与常规NGS一致性较好且缩短了诊断时间，检测灵敏度及检测范围已经满足髓系肿瘤诊断分型、预后分层及靶向治疗的需求。

目的 探讨肿瘤坏死因子β（TNF-β）基因多态性与胃癌易感性的关系，同时分析TNF-β特定基因型与血清TNF-β表达水平之间的联系。 方法 采用病例对照的研究方法，选取2021年9月至2022年12月在复旦大学附属肿瘤医院确诊为胃癌的患者153例为胃癌组；选取同期健康体检者150名为健康对照组。研究前期利用常规PCR扩增检测胃癌组和对照组外周血DNA各30份，经测序鉴定TNF-β多态性位点（rs1041981、rs2229092、rs2229094和rs78613290）的基因型频率；后续利用等位基因特异性荧光定量PCR法进一步检测分析TNF-β多态性位点的基因型与等位基因频率；用酶联免疫吸附法（ELISA）测定血清TNF-β水平，并分析与TNF-β特定基因型的关系。采用χ2检验和Fisher检验分析TNF-β多态性位点的基因型分布频率，采用非参数统计分析血清TNF-β表达水平差异。 结果 30例胃癌患者和30名健康对照测序结果显示，多态性位点rs1041981在胃癌组的基因型分布是CC型16.67%（5/30）、CA型40.00%（12/30）和AA型43.33%（13/30），在对照组的基因型分布是CC型40.00%（12/30）、CA型43.33%（13/30）和AA型16.67%（5/30），基因型频率差异有统计学意义（χ2=6.478，P=0.039）；多态性位点rs2229092在2组的基因型为AA、AG和GG，分布频率差异无统计学意义（χ2=1.888，P=0.612）；多态性位点rs2229094基因型（TT和TC）和rs78613290基因型（GG和AG）在2组的分布频率差异无统计学意义（P均>0.05）。进一步扩大临床样本（胃癌组153例，对照组150例）验证发现，胃癌组位点rs1041981基因型［CC型15.69%（24/153）、CA型54.90%（84/153）、AA型29.4%（45/153）］与对照组［CC型27.33%（41/150）、CA型58.00%（87/150）、AA型14.67%（22/150）］的分布频率差异有统计学意义（χ2=12.366，P=0.002），分析不同等位基因频率对于胃癌风险的影响，发现rs1041981的A等位基因发生胃癌的风险相对于C等位基因比值比（OR）为1.701（95%CI 1.235~2.355）。结合胃癌患者的临床病理特征进行基因表型分析，发现rs1041981的基因型在不同性别、肿瘤浸润深度和有无淋巴结转移的组别中分布频率差异均有统计学意义（P均<0.05）。rs1041981位点AA基因型的胃癌患者其血清TNF-β的表达水平高于CA基因型和CC基因型患者（P均<0.05）。 结论 TNF-β基因多态性位点（rs1041981，C>A）在胃癌组和健康对照组中的基因型频率存在差异，rs1041981位点A等位基因增加了胃癌发生的易感性，同时不同基因型胃癌患者其血清TNF-β的表达水平亦不同，AA基因型表达水平最高。

目的 探讨提高EB病毒（EBV）核酸检测灵敏度对于鼻咽癌的诊断和疗效评估的价值。 方法 观察性研究。按照性能验证实验的要求，验证本研究所用的EBV DNA检测系统在100 拷贝/ml水平的检测精密度，并通过与数字PCR法的比较评估检测系统的准确性。收集2021年12月至2022年5月就诊于南方医科大学南方医院的52份病理确诊为鼻咽部未分化非角化性癌的初诊患者血浆样本，以及156份在我院放疗科接受治疗的鼻咽癌患者血浆样本，回顾分析2021年12月至2022年5月南方医院送检EBV DNA定量检测样本5 488份，比较将检测阈值限从500 拷贝/ml提升至100 拷贝/ml对鼻咽癌检出率和疗效评估的影响。 结果 在100 拷贝/ml水平上，对样本进行30次重复检测，检测值与靶值的对数值偏倚均低于0.4（CV=6.94%）。用本研究使用的检测系统和数字PCR法分别测定156例鼻咽癌患者外周血中的EBV DNA，2种方法的测定结果一致性良好（r=0.95，P<0.001）。将EBV DNA检测阈值限从500拷贝/ml提升至100拷贝/ml，可使初诊未治疗的鼻咽癌患者检出率从67.31%（35/52）提高至82.69%（43/52）。对于治疗中的鼻咽癌患者，以500 拷贝/ml和100 拷贝/ml为检测阈值限，外周血EBV DNA检出率分别为12.82%（20/156）和23.72%（37/156）。 结论 提升EBV核酸检测灵敏度可提高EBV检出率，对于鼻咽癌患者的辅助诊断及疗效评估具有一定价值。

目的 分析CT表现为结节的肺腺癌患者的组织甲基化特征。 方法 回顾性研究。收集2022年6月1日至2024年1月20日于上海市第一人民医院确诊为肺腺癌的70例肺结节患者。使用随机数字表法将其分为2组，发现组40例和验证组30例。发现组中组织样本采用简并亚硫酸氢盐测序技术（RRBS）检测分析，比较癌组织和配对癌旁组织的平均甲基化水平；筛选差异性甲基化区域（DMR），分析其在不同基因功能元件上的分布并绘制聚类热图；进一步对DMR进行GO和KEGG功能富集分析；随后对获得的潜在肺腺癌相关甲基化基因通过TCGA肺腺癌队列和靶向亚硫酸氢盐测序（TBS）在验证组中进行验证。组间甲基化水平的比较采用t检验或非参数检验，率和构成比采用χ2检验或者Fisher精确检验。 结果 发现组中，癌组织平均甲基化水平低于癌旁组织［（42.369±4.627）比（44.370±4.046），t=‒2.059，P=0.043］；共筛选出37 995个DMR，包括16 889个高甲基化区域和21 106个低甲基化区域，主要分布在启动子区（48.917%）、内含子区（36.457%）和外显子区（10.812%）；DMR聚类热图显示癌组织和癌旁组织分别形成两个聚类。GO分析显示DMR相关基因主要定位在细胞膜和核染色质上，参与RNA聚合酶Ⅱ相关的转录及调控过程。KEGG通路富集分析显示DMR相关基因主要参与神经活性配体-受体相互作用通路、癌症通路、钙信号通路、cAMP信号通路和MAPK信号传导通路。TCGA队列验证出了11个潜在的特征性DMR。在验证组中采用TBS证实MIR10B、DMRTA2、HOPX、TFAP2B 及MARCH11相关的DMR在癌组织中甲基化水平高于癌旁组织［11.200（4.305，27.088）比2.650（1.298，4.645），Z=‒4.539，P<0.05；18.610（13.600，33.025）比8.675（5.488，13.085），Z=‒4.554，P<0.05；17.600（2.183，76.015）比1.085（0.898，1.835），Z=‒5.131，P<0.05；5.250（3.220，7.693）比3.495（2.165，4.383），Z=‒2.861，P<0.05；11.515（7.525，21.033）比 7.830（5.518，11.488），Z=‒2.440，P<0.05］，差异均有统计学意义。 结论 肺腺癌组织与癌旁正常肺组织的甲基化模式存在差异。筛选并鉴定出的DMR参与多个关键通路的调控过程。TCGA队列和独立验证组结果表明，MIR10B、DMRTA2、HOPX、TFAP2B及MARCH11等DMR在肺腺癌中具有潜在诊断意义，但其临床应用价值仍需进一步验证。

目的 基于循环肿瘤DNA（ctDNA）分析晚期非小细胞肺癌患者表皮生长因子受体（EGFR）伴随抑癌基因P53（TP53）及磷脂酰肌醇-4，5-二磷酸3-激酶催化亚基 α（PIK3CA）或SMAD家族成员4（SMAD4）基因突变在临床应用中的价值。 方法 单中心、回顾性研究。筛选2022年6月至2024年1月就诊于上海市胸科医院的非小细胞肺癌患者，收集患者靶向治疗前的外周血，分离细胞游离DNA（cfDNA）及白细胞DNA，进行二代测序，比对分析后获取ctDNA数据，按照美国分子病理协会/美国临床肿瘤学会/美国病理学家协会联合制定的体细胞变异解读指南对患者基因变异进行分析。采用卡方检验及Kaplan-Meier生存曲线评估EGFR基因突变患者及同时伴随其他基因突变患者的靶向治疗部分缓解（PR）率。 结果 126例患者中仅携带EGFR突变率为46.0%（58/126），PR率为74.1%（43/58）；EGFR、TP53双重突变率为37.3%（47/126），PR率53.2%（25/47）；EGFR、TP53突变同时伴随PIK3CA或SMAD4突变率16.7%（21/126），PR率28.6%（6/21），且3组间无进展生存曲线差异有统计学意义（χ2=23.81，P<0.01）。 结论 基于ctDNA的二代测序检测技术可检出伴随EGFR突变的TP53、PIK3CA或SMAD4等基因突变，多重基因突变是患者PR率及无进展生存曲线较差的重要因素。

目的 建立人类白细胞抗原（HLA）DPA1~DPB1连锁预测模型，并采用非血缘异基因造血干细胞移植供受者的临床资料和随访数据验证，探讨该预测模型对判断移植预后的临床应用价值。 方法 回顾性研究。基于NetMHCⅡpan的人工神经网络算法、实验室已建立的中国人群DPA1~DPB1连锁单体型数据库、最新国际免疫遗传学/人类白细胞抗原（IPD-IMGT/HLA）数据库公布的序列已知的DPA1~DPB1氨基酸FASTA数据，建立47种DPA1~DPB1连锁模型。采用基于杂交捕获文库构建法的二代测序技术，对2016年1月至2021年9月间在苏州大学附属第一医院血液科进行无关供者造血干细胞移植的250对供受者进行HLA-A、-B、-C、DRB1、DQB1、DQA1、DRB3/4/5、DPB1、DPA1（9个位点）HLA基因分型检测。回顾性分析移植供受者的HLA分型数据和临床资料，验证及预测采用模型分析的DPA1~DPB1连锁可允许错配与不可允许错配对移植预后的影响。采用Kaplan-Meier 法Log-Rank检验比较不同组间总生存（OS）率的生存曲线；采用竞争风险模型比较不同组之间Ⅱ~Ⅳ 度急性移植物抗宿主病和非复发死亡（NRM）的累积发生率。采用ROC曲线下面积比较建立的预测模型与T细胞表位（TCE）模型的预测性能。 结果 根据氨基酸的亲水与疏水特性不同将模型分为Ⅰ~Ⅳ型：Ⅰ型P1~P8位疏水型加P9位亲水型6种，Ⅱ型为疏水型17种，Ⅲ型为两亲型9种，Ⅳ型为亲水型15种。按预测模型将供受者DPA1相合、DPB1错配病例分为P1相合或不相合者，与DPA1和DPB1全相合者比较发现，P1不相合患者2年OS率为75%（12/16）比96.2%（25/26）（χ²=4.13，P=0.04），NRM率为4/16比0（χ²=7.05，P<0.01）；而P1相合的患者与DPA1和DPB1全相合者相比，2年OS率和NRM率差异无统计学意义（P>0.05）。本文建立的预测模型与DPB1 的TCE模型相比，预测移植后2年OS率的ROC 曲线下面积更大（Z=0.71，P=0.48）。在供受者DPA1和DPB1均错配的病例中，与DPA1和DPB1全相合者比较，P1相合或不相合者2年OS率均降低，NRM均升高，且P1不相合者较相合者预后更差。 结论 基于高通量二代测序技术建立DPA1~DPB1连锁预测模型，可用于预测HLA-DP错配对移植OS和NRM的影响，且预测性能优于TCE模型。

目的 评估全基因组测序（WGS）预测结核分枝杆菌对氟喹诺酮类药物耐药性的应用价值，并建立其耐药基因突变与耐药水平的量化关系。 方法 以中国疾病预防控制中心结核病预防控制中心国家结核病参比实验室保存的2013—2020年不同耐药模式的296株结核病耐药监测菌株为研究对象，采用SensititreTM MYCOTBI微孔板和WGS技术，检测结核分枝杆菌对氧氟沙星和莫西沙星的表型及基因型药物敏感性。以表型药敏结果作为金标准，计算WGS预测氟喹诺酮类药物敏感性的敏感度、特异度和一致性等指标。对耐药突变位点与耐药水平的分布进行汇总分析。采用配对χ2检验检验比较两种检测方法检出率的差异，P<0.05为差异有统计学意义。 结果 296株不同耐药模式的结核分枝杆菌包括196株利福平耐药，50株其他耐药菌株和50株全敏感菌株。WGS共检测到81株结核分枝杆菌携带氟喹诺酮类药物耐药相关突变，其中以gyrA94、90及91密码子突变为主。WGS预测氧氟沙星的敏感度、特异度和一致性（Kappa值）分别为86.5%、98.1%和0.87。WGS预测莫西沙星的敏感度、特异度和一致性分别为80.0%、99.5%和0.83。表型药敏试验对氧氟沙星耐药检出率与WGS的耐药检出率差异无统计学意义（30.1%比27.4%，χ2=3.06，P=0.08）。表型药敏试验对莫西沙星的耐药检出率（33.8%，100/296）高于WGS的耐药检出率（27.4%，81/296），差异有统计学意义（χ2=15.43，P<0.01）。耐药突变位点与耐药水平的分布分析结果表明，不同耐药突变位点对应的最低抑菌浓度不同，其中多位点组合突变、gyrA_D94G、gyrA_D94Y、gyrA_D94N主要对应高水平耐药，而gyrA_D94A、gyrA_A90V、gyrA_S91P主要对应低水平耐药。 结论 WGS对氟喹诺酮类药物耐药性的预测有较好的敏感度、特异度和一致性，并可在一定程度上预测其耐药水平的高低。

目的 了解解鸟氨酸拉乌尔菌的临床流行情况和耐药性，并对碳青霉烯类耐药菌株进行耐药特征分析。 方法 收集2015年5月至2020年12月经基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术鉴定的解鸟氨酸拉乌尔菌临床分离株83株，对其中碳青霉烯类耐药的解鸟氨酸拉乌尔菌进行临床信息收集、耐药表型、碳青霉烯酶基因检测；采用脉冲场凝胶电泳（PFGE）对耐药菌株进行同源性分析；全基因组测序（WGS）确定耐药株质粒、耐药基因与毒力基因等分子特征；基于核心单核苷酸多态性（core-SNP）构建系统发育进化树，分析耐药菌株的进化特征。 结果 83株解鸟氨酸拉乌尔菌中11株对碳青霉烯类抗菌药物耐药。耐药菌株主要来源于外科、重症监护病房和肿瘤科患者的引流液和创面分泌物；除对碳青霉烯类耐药外，11株菌对头孢类、头霉素类、氨曲南耐药性100%，但对左氧氟沙星、替加环素、黏菌素体外活性较好；碳青霉烯酶基因检测结果提示，8株菌携带blaIMP-4基因，3株菌携带blaKPC-2基因，其中1株同时携带blaIMP-4和blaKPC-2基因，2株同时携带blaIMP-4和blaNDM-1基因；PFGE结果提示共有7种带型、4种流行株；WGS提示该11株解鸟氨酸拉乌尔菌携带的质粒复制子类型主要为IncFIA、IncFIB、IncHI1B、IncU、repB和Col，除携带碳青霉烯酶耐药基因外，还携带其他10种不同类型耐药基因，另外，11株菌均检出铁载体相关毒力基因entB、fyu、ybt和irp；系统发育进化分析显示Ro6348和Ro6050、Ro7401和Ro7242、Ro8647和Ro5832、Ro9907和Ro8856分别分组在一起，而Ro8454、Ro7349、Ro7326位于不同的分支上。 结论 解鸟氨酸拉乌尔菌耐药性与肺炎克雷伯菌相近，携带多种耐药基因，但不同于国内肺炎克雷伯菌，其碳青霉烯酶主要以IMP-4为主。PFGE和系统发育进化分析结果提示该型菌株在院内有相互传播趋势，应引起临床和院感重视。

目的 以C反应蛋白（CRP）为模式靶分子，验证生物膜干涉非标记免疫检测这一方法用于外周血标志物检测的可行性。 方法 收集中国医学科学院阜外医院2021年7月和2022年5月的临床常规检测当日剩余的血清样本85份。首先，将生物素化的抗CRP抗体固化到包被有链霉亲和素的BLI探针上，使用GatorPrime BLI非标记生物分子分析仪检测系列稀释的CRP标准品，实时测定动态结合曲线，以浓度与起始结合速率绘制标准曲线。其次，依据美国临床实验室和标准协会（CLSI）文件，评价判定本方法的灵敏度，包括空白限、检出限和定量检出限。采用血清样本及第三方质控品评价精密度。使用1份高浓度血清样本系列稀释后验证线性范围。比较非标记BLI法和临床实验室常规检测结果，采用Passing-bablok回归和Spearman相关性分析方法的一致性。 结果 GatorPrime检测CRP标准品的动态检测范围为0.6~300 mg/L，且通过血清样本验证此检测范围的线性度良好。测定本方法的空白检出限、检出限和定量检出限分别为0.246 mg/L、0.573 mg/L和2.158 mg/L。精密度实验显示，4个浓度伯乐质控（21.15~57.26 mg/L）的实验室总不精密度为5.8%~9.0%，2个血清样本（2.32 mg/L和100.06 mg/L）测定的实验室内总不精密度分别为22.3%和7.4%。与2种临床实验室常用的免疫比浊法检测进行方法学比较，显示本方法与之相关性好（Passing-bablok回归Y=-1.065+1.119X和Y=-0.452+1.034X，r=0.993和0.976，P<0.001）。 结论 基于BLI法非标记免疫检测可实现血液样本中CRP的宽浓度范围测定，其分析性能基本达到实验室检测性能要求。

先证者女，33岁，孕妇（孕4产1），前3次均为孕3月左右自然流产，无输血和移植史，第4次孕期临床诊断先兆流产，于2023年6月28日在东莞市中医院妇产科拟行剖宫产，术前备血，进行交叉配血试验时发现该先证者血浆中有无法确定特异性的意外抗体，无法找到合适的供者红细胞。血样本遂送至东莞市中心血站输血研究室，本实验室对该先证者采用血型血清学鉴定其红细胞血型表型证实为罕见的p血型，意外抗体特异性鉴定为抗-PP1Pk，先证者基因测序发现为新等位基因A4GALT*（c.100G>A+c.418_428delins）纯合子，推测其引起多肽链p.Val34Ile和p.Gln140Trpfs*73改变，并导致α1，4-半乳糖基转移酶失活。同时在家系成员中发现另一个新等位基因A4GALT*c.100G>A，经预测该变异引起的单独p.Val34Ile改变并不影响蛋白功能和酶活性。

粪菌移植（FMT）疗法已在艰难梭菌感染、肠易激综合征、炎症性肠病等多种疾病治疗中取得显著疗效。研究显示，FMT可能通过重塑患者肠道菌群组成从而影响恶性肿瘤疾病的发生发展，具有潜在治疗价值。近年来，FMT关键技术，例如洗涤菌群移植、经内镜肠道植管术、孢子移植和手工制备移植，为FMT在疾病治疗中提供更多可能。本文介绍了FMT的发展现状，FMT关键技术，并对其应用优缺点进行总结，以及重点阐述了FMT在恶性肿瘤疾病治疗如辅助免疫治疗、化学治疗、手术治疗及内分泌治疗中的应用研究，为FMT在该领域今后的临床应用提供理论依据。

肿瘤对世界公共卫生构成严峻挑战，灵敏、准确地检测肿瘤标志物对于癌症早期筛查或诊断至关重要。具有出色物理、化学和生物特性的DNA酶被广泛应用于生物传感策略的设计中，通过在荧光、电化学、表面增强拉曼散射的传感平台的应用，可实现对肿瘤早期筛查检测。本文概述了DNA酶的功能机制和常见分类，总结了基于DNA酶的新型生物传感技术在液体活检领域的进展，并展望了有待突破的技术问题以及未来发展方向。