2024年 · 第47卷第09期

自身免疫性肾病和肺病是由免疫系统错误地攻击肾脏和肺部所引起的疾病，由于发病机制复杂，临床表现多变且缺乏特异性，使得准确诊断面临诸多挑战。尽管抗髓过氧化物酶抗体、抗蛋白酶3抗体、抗磷脂酶A2受体抗体等标志物已广泛应用于临床实践，显著提高了诊断的精确性和效能，但血清阴性的膜性肾病、免疫球蛋白A肾病、肺泡蛋白沉积症、间质性肺病、肺结节病等疾病仍缺乏特异的诊断指标。因此亟需寻找更加敏感和特异的标志物，为早期诊断和指导个性化治疗提供依据。为了进一步提升诊疗质量，未来需致力于推动检测方法的规范化和标准化，以确保检测过程的质量控制。这将有助于提升自身免疫性肾病和肺病的实验室检测水平，促进其在临床实践中的推广应用，从而更好地服务于临床诊疗，改善患者的临床结局和生活质量。

肺泡蛋白沉积症（PAP）是一种由于肺泡表面活性物质在肺泡巨噬细胞和肺泡腔内异常沉积导致呼吸困难为主要特征的弥漫性肺疾病，其中自身免疫型PAP（aPAP）是最常见的临床类型，约占90%。由于抗粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子抗体（抗GM-CSF抗体）的异常产生，导致肺泡巨噬细胞功能障碍。本文讨论GM-CSF信号通路的异常、肺泡巨噬细胞的失能以及自身抗体的产生，阐明aPAP发病机制的研究现状，介绍aPAP的诊疗进展。

膜性肾病（MN）是临床上表现为肾病综合征的主要病理类型之一，包括一组临床和病理相似的肾脏疾病，特征性的病理改变是肾小球毛细血管基底膜弥漫性增厚，肾小球毛细血管袢上皮侧可见大量排列紧密、规则的免疫复合物沉积，是导致成人肾病综合征的一个常见原因。MN起病比较隐匿，早诊断、早治疗意义重大，依据病因可分为特发性膜性肾病（IMN）和继发性膜性肾病（SMN）。多种自身抗体如抗M型磷脂酶 A2 受体（PLA2R）抗体、抗Ⅰ型血小板反应蛋白7A域（THSD7A）抗体等证实为IMN、SMN或其他肾小球疾病诊断、鉴别诊断、疾病活动及预后的重要依据。近年来，不断发现MN相关新的生物标志物，已陆续鉴定足细胞靶抗原如神经表皮生长因子样1蛋白、信号素3B、原钙黏蛋白7、丝氨酸蛋白酶HTRA1、外泌素1/外泌素2、神经细胞黏附分子1等与MN相关，并分别具有独特的生物学意义，尤其对于PLA2R和THSD7A阴性的MN疾病诊断以及疾病预测具有重要临床价值。本文主要对膜性肾病相关靶抗原及自身抗体检测的临床意义进行综述。

侵袭性真菌病发病率逐年升高，已成为困扰临床科室的严重感染性疾病之一。目前侵袭性真菌病早期诊断的重要检测指标是1-3-β-D-葡聚糖试验和半乳甘露聚糖抗原试验，即G试验和GM试验。国家卫生健康委员会在《国家医疗质量安全改进目标》之目标四中提出“提高住院患者抗菌药物治疗前病原学送检率”，同时强调G试验等项目作为临床常见真菌学检测项目的重要性。而如何保证临床实验室真菌检测项目质量就显得非常重要。该文就影响G试验和GM试验检测的关键因素及开展全国室间质评的重要性进行了详细阐述。

随着临床医学和检验医学的不断发展，实验室自建检测方法（包括自制试剂等）流程与管理规范化成为医疗机构的迫切需求。北京医学会检验医学分会、上海市医学会检验医学专科分会组织专家进行了政策学习、文献归纳、专业讨论与总结，并形成该专家共识。该共识基于自建检测的质量、风险、性能三方面核心关键要素，围绕术语、研发与产品准备、检验流程、登记备案、督查、检验前中后环节、转化应用与推广等内容给出了共识性建议，以期为医疗机构开展相应工作提供参考。

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）技术在微生物学检验中具有检测速度快、鉴定准确率高、检测成本低、检测通量高、可鉴定菌种类型广泛等特点。随着微生物质谱技术的快速发展和广泛应用，MALDI-TOF MS的规范化使用及管理、技术要点等内容亟须广泛普及，以更好推动该技术在临床微生物学实验室的高效使用。专家组通过对国内外相关指南共识及文献的阅读和讨论，结合我国MALDI-TOF MS的临床应用现状，就临床实际工作中存在的常见问题，对影响或决定MALDI-TOF MS技术规范化使用、结果准确解读、科研探索等方面存在的问题进行了反复和深入的讨论，最终形成本共识。随着实践经验的不断总结和临床研究的不断深入，编写组将不定期对共识内容进行更新和完善。

目的 探讨血清涎液化糖链抗原-6（KL-6）、肺泡表面蛋白A（SP-A）、肺泡表面蛋白D（SP-D）、血清铁蛋白（SF）、糖类抗原（CA）153和人类附睾蛋白4（HE4）在结缔组织病间质性肺疾病（CTD-ILD）中诊断价值。 方法 回顾性横断面研究。选取2021年6月至2024年1月，于中国医科大学附属盛京医院住院和门诊初次确诊为CTD的患者（500例）为研究对象，其中ILD组300例、非ILD组200例；另选取同期健康人为健康对照组（100名）。采用不同方法检测血清KL-6、SP-A、SP-D、SF、CA153和HE4水平。建立Logistic回归模型分析CTD-ILD的独立危险因素并建立联合模型，使用受试者工作曲线（ROC）及曲线下面积（AUC）评价单一生物标志物诊断及联合诊断CTD-ILD的价值。 结果 CTD-ILD组患者血清KL-6、SP-A、CA153水平高于CTD-nonILD组和HC组（P均<0.05）；各组血清SP-D、SF和HE4之间比较，差异均有统计学意义（P均<0.05）。二元单因素Logistic分析显示，血清KL-6、SP-A、SP-D、CA153和HE4水平升高是CTD-ILD的独立危险因素（OR值分别为0.994、1.025、0.923、0.958和0.989，P均<0.05）。ROC曲线结果表明，KL-6、SP-A、SP-D、CA153和HE4诊断CTD-ILD的AUC分别为0.881、0.610、0.733、0.757和0.848，95%CI分别为0.852~0.911、0.557~0.663、0.685~0.780、0.715~0.799和0.813~0.883敏感度分别为81.0%、81.5%、82.9%、66.0%和77.3%，特异度分别为81.0%、41.5%、59.0%、75.9%和81.0%；其联合诊断CTD-ILD的AUC为0.927，95%CI为0.905~0.950，敏感度为83.2%，特异度为85.9%。 结论 CTD-ILD患者血清KL-6、SP-A、SP-D、CA153和HE4水平升高，在CTD-ILD的诊断中具有重要价值，联合检测可显著提升CTD-ILD的诊断效能。

目的 对8种自动化免疫检测系统测定的甲胎蛋白（AFP）结果进行可比性分析，结合北京市临床检验中心（BCCL）2020—2021年和2023年AFP室间质量评价（EQA）的结果，评估AFP的检测现状。 方法 方法学评价。2019年收集北京朝阳医院检验科剩余血清标本，用雅培Architect i2000、贝克曼DxI 800、罗氏Cobas E601、索灵Liaison XL、迈克IS1200、安图A2000、利德曼CI1000、迈瑞CL-2000i分别检测40份AFP个体血清样本，8种不同检测系统的AFP检测结果分别与其中位数队列进行比较，根据Passing-Bablok回归分析方法间相关性，以一致性相关系数（CCC）评价方法间一致性。方法间的相对平均偏差应用Bland-Altman差异分析法，以生物学变异度最优（±5.90%）要求为标准进行偏差评估。统计近3年BCCL AFP的EQA结果，计算组内稳健均值、稳健变异系数（CV）和标准不确定度。评价限以允许总误差（TEa）中等生物学变异度（±21.87%）要求为标准，分别计算以仪器/方法分组的通过率。 结果 8种检测系统的CV均≤1/3 TEa（±8.3%），精密度验证通过。罗氏Cobas E601和迈克IS1200与中位数队列的相对平均偏差>±5.90%，其余6种检测系统均<±5.90%。8种检测系统与其中位数队列间的相关性与一致性良好（R2和CCC均>0.95）。EQA结果表明，各仪器/方法组内稳健均值间差异均无统计学意义（P>0.05）。在仪器分组中，除西门子和其他两组外，其余组实验室间稳健CV均在9%以内。多数仪器和方法的通过率经分组后高于总通过率，但酶免疫化学发光法的通过率较低。 结论 8种AFP自动化免疫检测系统与其中位数队列具有良好的相关性，多数检测系统间AFP检测结果的一致性较好，但个别检测系统AFP检测结果的可比性有待进一步提高。

目的 探讨人巨细胞病毒（HCMV）UL95基因的优势B细胞表位肽段在诊断系统性红斑狼疮（SLE）疾病中的临床意义，以及SLE患者血浆中UL95特异性抗体水平和临床指标的相关性，以期找到SLE疾病的辅助诊断指标。 方法 采用非随机对照研究，分析HCMV UL95基因序列特征及其多态性，并利用生物信息学分析并化学合成UL95优势B细胞表位短肽，将UL95合成短肽作为包被抗原，ELISA法检测97例SLE患者及35名健康对照者（HC）血浆中UL95的特异性抗体水平，ROC曲线分析UL95短肽抗体对于SLE的诊断价值，Pearson相关性检验分析UL95特异性抗体水平与SLE患者临床指标的相关性。 结果 UL95基因核苷酸序列相似性为92.9%~100%，氨基酸序列相似性为92.1%~100%，序列高度保守，具有同源性。多种参数综合预测得到可能优势B细胞表位6个，分别命名为（Bp1、Bp2、Bp3、Bp4、Bp5、Bp6）。ELISA结果显示SLE患者血浆中的UL95特异性抗体水平（0.35±0.12）高于HC组（0.28±0.10）（t=3.091，P=0.002）。区分SLE和HC的ROC曲线下面积为0.703，敏感度为54.6%，特异度为88.6%。此外中高活动亚组（SLEDAI≥4）的UL95特异性抗体水平（OD值）（0.36±0.10）高于低活动亚组（SLEDAI<4分）（0.30±0.07）（t=‒2.055，P=0.044）。UL95特异性抗体水平和临床指标总免疫球蛋白G、总免疫球蛋白M呈正相关，与补体C3、补体C4、血小板呈负相关。 结论 UL95的抗体水平与狼疮疾病活动度有关，UL95的Bp1（10~21）肽段对SLE辅助诊断有重要意义，有望成为一种新的参考指标。

目的 调查我国医疗机构临床实验室建设基本现状。 方法 基于Web方式的室间质量评价软件系统，收集所有参加2023年国家卫生健康委临床检验中心室间质量评价的14 405个实验室基本信息，包括实验室信息系统（LIS）建设、实验室建筑面积、实验室人员基本情况和开展检验项目情况等。比较各类型实验室不同指标差异。 结果 14 405个实验室中，广东省实验室数占比最高，为10.6%（1 533/14 405）。有24.5%（3 528/14 405）的实验室未使用LIS；第三方医学检验实验室建筑面积和工作人员数量分别为1 400（850，2 196）m2和20（12，35）名，均高于其他类型机构（P均<0.05）；不同级别、不同类型医院的实验室建筑面积、工作人员和开展检验项目数量比较，差异有统计学意义（P均<0.01）；对医院检验科进一步分析显示，三级医院和综合医院检验科实验室建筑面积分别为1 050（600，1 800）m2和1 000（500，1 600）m2，工作人员分别为30（19，45）和26（17，39）名，开展检验项目数量分别为287（189，388）和285（198，378）项，均高于其他级别或类型医院检验科实验室（P均<0.05）；实验室工作人员教育水平及职称结果显示，硕士及以上学历人员占比为18.2%（52 138/286 855），高级职称工作人员占比为17.4%（49 280/282 528）。 结论 我国不同类型实验室基本建设情况参差不齐，应进一步加强实验室工作人员及信息系统的建设。

目的 应用第三代测序技术监测重型β地中海贫血患者异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）术后供体基因嵌合比例的变化，并初步探讨该技术在allo-HSCT术后早期供体基因嵌合比例监测中的应用价值。 方法 病例分析。以2022年6—7月在广西医科大学第一附属医院就诊的3例已行allo-HSCT的重型β地中海贫血患者为研究对象，基因型分别为IVS-Ⅱ-654/CD41-42、IVS-Ⅱ-654/IVS-Ⅱ-654和CD41-42/CD41-42。利用第三代测序技术“可视化”分析3例患者allo-HSCT术后供受体DNA的读长比例，从而监测供体DNA的基因嵌合状态，并与Sanger测序结果进行对比分析。对3例患者进行移植后随访，监测血象，评估其植入状态和造血重建情况。 结果 第三代测序检测的3例患者allo-HSCT术后供体DNA嵌合状态的结果与Sanger测序结果一致，随着移植后天数的增加，供体DNA的嵌合状态逐渐向完全供体基因嵌合状态转变。受者1移植后10 d、20 d供体DNA嵌合比例分别为95.5%和100%；受者2移植后30 d和40 d，供体DNA嵌合比例均达100%；受者3移植后1 d供体DNA嵌合比例为69.5%，移植后10 d、20 d均达100%；所有患者移植后30 d内均达到完全供体基因嵌合。3例患者均在移植后1个月内获得了粒系、血小板系、红系的稳定植入，造血重建。 结论 本研究开发了一种利用第三代测序技术检测供体DNA嵌合比例的新方法，能够早期监测供体DNA的基因嵌合状态。

目的 基于微滴式数字PCR（ddPCR）技术，构建针对肾移植术后监测病毒的多联检测方法，评估其检测性能，探讨临床应用前景。 方法 构建多瘤病毒1型（BKV）、多瘤病毒2型（JCV）和细环病毒（TTV）联合检测的ddPCR检测方法，对符合率、重复性、检测下限等指标进行性能评价。2023年6—9月在上海交通大学医学院附属仁济医院收集69份临床尿液标本，同时应用实时荧光定量PCR（qPCR）和ddPCR方法进行检测。应用Spearman相关性分析、Bland-Altman分析和Wilcoxon配对秩和检验分析2种方法学的检测结果。 结果 构建的ddPCR方法对7个参考品的检出符合率为7/7；对精密度参考品R1、R2分别检测10次，其变异系数均小于10%；检测下限为10 拷贝/μl。ddPCR与qPCR检测BKV和JCV的符合率达95%（66/69；68/69）以上；相关性分析显示2种方法检测BKV和JCV病毒载量的相关系数R分别为0.874和0.840；Bland-Altman分析显示2种方法对BKV和JCV病毒载量检测的平均差异分别为‒0.34和‒0.187；Wilcoxon配对秩和检验显示2种方法对多瘤病毒的检测结果差异无统计学意义（P>0.05）。 结论 成功构建基于ddPCR的肾移植术后病毒多联检测方法，确证该方法具有高正确度、高灵敏度、多重检测的优点，可用于临床尿液样本中BKV、JCV和TTV的定量检测。

目的 了解2019—2022年深圳市南山区手足口病（HFMD）流行情况及病原学特征，为辖区内的HFMD防范提供科学依据。 方法 利用描述性研究方法对中国疾病预防控制信息系统中深圳市南山区2019—2022年HFMD流行病学数据进行分析。应用多重荧光PCR方法对临床诊断HFMD样本进行病原学特征分析，对优势病原柯萨奇病毒A组6型（CV-A6）的VP1基因进行扩增和测序，用DNASTAR 软件的SepMan Pro进行序列拼接及MegAlign进行核苷酸同源性分析，用MEGA 6软件构建系统发育树，应用SPSS22.0进行统计学分析。 结果 2019—2022年深圳市南山区累计报告HFMD病例13 195例，年均发病率为186.18/10万，夏秋季为主要发病季节，7岁以下儿童为主要发病人群，占比93.1%（12 278/13 195），男女性别比为1.44∶1。实验室检测临床诊断HFMD样本451份，其中阳性样本403份，阴性样本48份，病原构成主要为CV-A6（63.03%，254/403），柯萨奇病毒A组16型（CV-A16）（27.79%，112/403）、柯萨奇病毒A组4型（CV-A4）（4.71%，19/403）、柯萨奇病毒A组10型（CV-A10）（1.99%，8/403）、埃可病毒11型（Echo-11）（0.25%，1/403）、不确定型别占2.23%（9/403），未检出肠道病毒71型（EV71）。13株毒株核苷酸同源性94.0%~99.6%，与原型株Gdula核苷酸同源性84.1%~85.8%。系统发育树结果显示南山区13株CV-A6毒株均为D3a基因型，为中国大陆优势流行型别。 结论 2019—2022年深圳市南山区HFMD呈现明显的人群和时间分布差异，应加强夏秋季节及重点人群HFMD防控宣传教育。CV-A6和CV-A16为近年来深圳市南山区HFMD优势毒株，应加强对优势毒株的监测。

患者男，57岁，因系统性硬化症复发入院于2023年5月至上海华山医院治疗，问诊有轻度腹泻（2~3次/d）怀疑合并感染性腹泻，患者粪便经选择性增菌和分离鉴定为“非A—F群沙门菌”，经参比实验室血清分型、耐药表型、全基因组测序和中国沙门菌区域血清型数据库比对鉴定为密执安沙门菌ST2065，结合其耐药和毒力结果判断为高耐药、低肠毒素表型。医嘱患者口服替加环素7 d，患者症状改善出院。

患者男，27岁，因“无明显诱因出现剧烈胸痛伴心悸、气短、胸闷”于2018年8月收治入西京医院。计算机断层扫描血管造影检查结果提示主动脉A型夹层。基于二代测序的遗传性主动脉疾病相关的15个基因的组合检测及Sanger测序验证发现患者COL3A1基因存在c.998G>T（p.Gly333Val）杂合错义突变。通过家系成员的Sanger测序验证，突变c.998G>T与该家系患者表型共分离。根据ACMG遗传变异分类标准与指南判读，该突变致病等级为“可能致病”，携带该突变可明确诊断为“血管型Ehlers-Danlos综合征”。明确诊断后，对患者进行了对症治疗，但病情发展迅速，患者放弃治疗，出院后不久死亡。本研究报道了1个COL3A1基因的新突变，扩展了该基因的突变谱。

患者女，61岁，因“反复咳嗽4年，加重伴发热6 d”于2023年5月4日收入深圳市中医院。胸部CT示支气管扩张伴肺部感染；痰涂片显微镜检查提示诺卡菌可能，痰真菌培养检出烟曲霉；抗诺卡菌及抗烟曲霉治疗数天后，炎症指标有所下降，但仍有低热。行支气管肺泡灌洗液培养和宏基因组测序，检出甜味诺卡菌、结核分枝杆菌及烟曲霉3种可疑致病菌，经抗感染治疗，病情好转。对于混合感染的诊断，多种检验方法相结合，可以提高病原菌的正确诊断率，从而更好地指导临床治疗。

病例为A型、Rh（D）阳性的48岁男性献血者，在临床交叉配血过程中发现其作为供血者与多位ABO同型患者主侧配血结果均为阴性、次侧其血浆凝集所有人红细胞并严重溶血（4+H），而作为受血者则结果相反。进一步以盐水试管法及抗人球蛋白微柱凝胶法对样本血浆分别进行不规则抗体筛检和单特异性抗体鉴定，结果血浆与筛检细胞1~3及谱细胞1~10呈全阳性反应（4+H），但与人源p红细胞无反应。血浆中存在抗-P1PkP抗体（IgG+IgM），效价1∶64。以单克隆抗-P1抗体检测红细胞P1抗原为阴性，表型为 p。以Sanger法进行PA（α1，4-半乳糖基转移酶，A4GALT）和PB（β1，3-半乳糖基转移酶，B3GALNT）外显子测序，发现其P1PkP血型基因型为A4GALT*241-243TTCdel/A4GALT*241-243TTCdel，B3GALNT未出现突变。基因A4GALT241-243位点碱基TTC纯合子缺失突变是一种新的分子生物学特征，美国国家生物技术信息中心GenBank授予序列号OR900206。对相关文献报道进行回顾性分析发现p表型的基因突变呈现复杂多态性。在临床输血实践中，因其血浆中存在高效价能溶解所有非p型者红细胞并发生急性溶血性输血反应的抗-P1PkP抗体（IgG+IgM），故不能输给p型之外任何人；红细胞经充分洗涤后可输给ABO且Rh（D）同型（或AB型）的任何人，如作为受者只能接受ABO同型或O型的p型红细胞。

体检者女，49岁，就职于广西贵港某纸业公司（从事餐纸生产），2023年6月11日至贵港市覃塘区人民医院申领健康证，体检筛查肠道病原菌（沙门菌、志贺菌）时分离到沙门菌，多次经验使用抗菌药物清除未果。参比实验室对前后2次分离菌株进行血清分型、耐药表型、全基因组测序均鉴定为肯塔基沙门菌ST198，基于中国沙门菌区域血清型数据库构建ST198耐药基因型系统进化树，定义2株菌均属高水平耐药ST198.2-1亚分支克隆。临床启动多学科会诊根据抗菌药物敏感性试验结果调整医嘱为阿莫西林/克拉维酸和阿奇霉素，8月19日复检3次阴性确认清除肯塔基沙门菌。

患儿男，年龄2岁6个月，因“眼距宽，手指粗短，胸骨凹陷，隐睾，舌系带过短”于2023年6月就诊于青岛大学附属妇女儿童医院。收集临床资料后，通过全外显子组测序（WES）技术，探索可能存在的变异位点并进行生物信息学分析，通过Sanger测序进行家系验证。WES检测结果显示患儿位于X染色体的FGD1（Xq11.22）基因携带c.2432dupT移码半合子变异，导致编码蛋白多肽链合成提前终止（p.E812Gfs*36）。Sanger测序结果显示其母为c.2432dupT杂合变异携带者，其父该位点为野生型。依据美国医学遗传学与基因组学学会（ACMG）相关指南，该变异为致病性变异（ACMG：PVS+2PP）。该患儿确诊为Aarskog-Scott 综合征（ASS）。本研究结果丰富了FGD1基因的变异谱，为临床ASS的筛查和诊断提供了依据。

患者女，72岁，2023年8月因“畏寒发热，腹胀痛、腹泻伴咳嗽气促1 d”至贵港市覃塘区人民医院急诊入院。既往有慢性阻塞性与肺源性心脏病、高血压Ⅲ期及头孢他啶过敏史。临床诊断慢性阻塞性肺炎急性期细菌感染，予左氧氟沙星联合哌拉西林/他唑巴坦等对症治疗，4 d后血培养报告胎儿弯曲菌，7 d后患者复查血培养阴性治愈出院。菌株形态学、质谱鉴定符合胎儿弯曲菌定义；全基因组测序预测多位点序列型为胎儿弯曲菌胎儿亚种ST20，携带四环素类抗菌药物耐药基因tet（O/M/O）、鞭毛基因18个（其中rpoN基因来自空肠弯曲菌，未见另2个胎儿亚种的基因组）、毒力基因6个（包括类伤寒毒素和伤寒毒素基因）。本例胎儿弯曲菌ST20有寄生养殖动物的生态特征和高运动、高毒力的生物特征，易通过粪口途径入血，造成为侵袭性感染。

白塞病是一种以口-眼-生殖器为临床三联征的可变性血管炎，累及动静脉、关节、胃肠道和神经时会造成患者生活质量降低甚至死亡。目前尚缺乏白塞病实验室诊断标志物，寻找与疾病表型、活动度、严重度相关，能应用于早期预警、治疗反应监测和预后评估等方面的生物标志物势在必行。该文重点探讨白塞病生物标志物临床研究进展，明确每种指标在发病机制中的作用，并对未来研究方向进行了相应展望。