2024年 · 第47卷第02期

脑卒中是一种急性脑血管疾病，是由于脑部血管突然破裂或因血管阻塞导致血液不能流入大脑而引起脑组织损伤的一组疾病，包括缺血性和出血性卒中。近年来，虽然脑卒中标志物研究较多，但可用于有效预警和监测的标志物却较少。组学研究是发现疾病发生发展过程中差异基因、分子及表观遗传标记的重要研究策略，本文综述了近年来脑卒中基因组学、转录组学、蛋白组学及代谢组学等重要研究成果，以及在脑卒中预警、诊断及监测中的应用潜能，以期为脑卒中标志物后续研究提供借鉴。

阿尔茨海默病（AD）的早期诊断一直是医学领域的挑战之一。近年来，关于AD血液生物标志物的研究蓬勃发展，对促进AD早期诊断、疾病监测和早期干预有重要意义。随着新一代超敏检测技术的诞生，在血液中相继验证了AD的核心标志物、非特异性标志物及其他相关标志物。然而，血液生物标志物用于AD诊断和预测仍存在准确性和稳定性的问题。本文针对每类标志物的最新进展和优劣进行梳理分析，并提供了几种潜在策略，以克服AD血液生物标志物面临的挑战。

外泌体是细胞间进行信息通信交流的一种纳米级细胞外囊泡结构，其携带的多种生物活性分子的成分和含量根据起源细胞和受体细胞而变化，因此，外泌体可作为生物标志物进行测定。神经退行性疾病是一种起病隐匿的疾病，早期筛查和准确诊断无疑是降低其死亡率和提高治愈率的可靠保证。外泌体作为近几年的研究热点，依靠自身所具有的运输能力和内容物对于疾病的诊断治疗存在着巨大潜能，并且在丰度、稳定性、多样性和获取性方面具有显著优势。该文旨在讨论外泌体作为神经退行性疾病早期诊断的潜在候选者，从而阐述其应用的全新领域，以期为临床预测、治疗提供更加丰富的视角。

狼疮抗凝物（LA）检测是抗磷脂综合征、系统性红斑狼疮实验诊断的重要组成部分，因其为基于凝固时间的检测项目，故LA结果易受多种抗凝药物的干扰。国内实验室在LA检测试剂选择、检测流程、报告方式和结果判断等方面存在着不规范现象，临床医生对LA检测的患者准备和报告解读也存在认识不足等情况。该共识综合国际上各LA检测相关指南的建议及国内现阶段实际应用状况，针对上述问题提出LA检测与报告的指导意见，以期规范国内LA检测流程和报告方式，促进临床医生对LA报告的合理解读与运用，确保相关疾病和临床状况的准确处置。

目的 比较多发性硬化（MS）和吉兰-巴雷综合征（GBS）脑脊液检测结果的特点，为2种神经系统脱髓鞘疾病的鉴别诊断提供依据。 方法 病例分析。以2020年1月至2023年8月在首都医科大学附属北京天坛医院就诊的患者为研究对象，其中MS患者70例［男性19例，女性51例，年龄34（28，44）岁］，GBS患者70例［男性44例，女性26例，年龄50（36，61）岁］。对2组患者进行寡克隆区带电泳及免疫球蛋白G指数（IgG I）检测，同时检测脑脊液常规、脑脊液生化（葡萄糖、氯、蛋白）、乳酸、白介素-6（IL-6）、白介素-8（IL-8）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、单纯疱疹病毒（HSV）抗体、巨细胞病毒（CMV）抗体、风疹病毒（RV）抗体、弓形虫（TOX）抗体、EB病毒（EBV）抗体、柯萨奇病毒（COX）抗体。计数资料比较采用χ2检验；计量资料不符合正态分布，比较采用Mann-Whitney U检验。 结果 MS患者和GBS患者寡克隆区带电泳的阳性率分别为80.00%（56/70）和4.29%（3/70），MS患者阳性率高于GBS患者（χ2=82.289，P<0.001）。MS患者脑脊液白细胞数［5.50（3.00，11.00）个/μl］、氯［127（125，128）mmol/L］水平均高于GBS患者［3.50（2.00，7.00）个/μl，126（124，128）mmol/L］（U=-2.245，P<0.05；U=-2.028，P<0.05），脑脊液蛋白［33.40（27.61，39.17）mg/L］、葡萄糖［3.59（3.36，3.88）mmol/L］和乳酸［1.55（1.40，1.73）mmol/L］水平低于GBS患者［76.71（43.78，138.30）mg/L，3.97（3.55，4.54）mmol/L，1.80（1.60，2.00）mmol/L］（U=-6.747，P<0.001；U=-3.651，P<0.001；U=-4.531，P<0.001）。MS患者脑脊液中IL-6［3.36（2.34，5.02）pg/ml］、IL-8［55.40（46.75，66.40）pg/ml］和TNF-α［5.63（4.25，6.63）pg/ml］水平均低于GBS患者［6.12（3.61，11.73）pg/ml，120.00（74.90，187.80）pg/ml，6.57（5.25，8.03）pg/ml］（U=-3.463，P<0.05；U=-5.225，P<0.001；U=-2.785，P<0.05）。MS患者脑脊液中CMV IgG、TOX IgG、EBVCA-IgG阳性率分别为36.36%（24/66）、0、0，GBS患者脑脊液中CMV IgG、TOX IgG、EBVCA-IgG阳性率分别为85.71%（54/63）、30.16%（19/63）、19.05%（12/63），MS患者脑脊液中CMV IgG、TOX IgG、EBVCA-IgG阳性率低于GBS患者（χ2=32.839，P<0.001；χ2=23.343，P<0.001；χ2=13.861，P<0.001）。 结论 MS患者主要表现为脑脊液寡克隆区带电泳阳性率较高。GBS患者脑脊液蛋白水平升高而白细胞数升高不明显，表现为脑脊液蛋白-细胞分离现象，同时鞘内免疫、炎症相关指标水平升高，病原体抗体阳性率较高。

目的 对神经系统疾病患者的脑脊液和血浆指标与鞘内免疫球蛋白G（IgG）合成关系进行实验室评估，建立诊断鞘内IgG合成的新方法。 方法 本研究回顾性分析了2019—2022年北京天坛医院就诊的410例神经系统疾病患者的脑脊液和血白蛋白、IgG等检测结果。根据脑脊液寡克隆区带结果，将患者分为鞘内IgG合成组和无鞘内IgG合成组。组间比较采用Mann-Whitney U检验，双侧检验P<0.05为差异有统计学意义。将组间存在差异的指标纳入Logistic回归分析，构建预测模型，并与已建立的定量公式IgG指数进行比较。 结果 在鞘内IgG合成组和无鞘内IgG合成组，脑脊液白细胞计数、24 h鞘内IgG合成率等10项指标差异有统计学意义（P<0.05）。联合存在差异的10项指标诊断鞘内IgG合成的曲线下面积（AUC）高于IgG指数（AUC分别为0.920和0.809，Z=31.178，P<0.001），敏感度高于IgG指数（分别为0.825、0.618），特异度低于IgG指数（分别为0.876、0.908）。 结论 脑脊液白细胞计数、24 h鞘内IgG合成率等10项指标联合能够提高鞘内IgG合成的诊断效能和敏感度。

目的 分析视神经炎患者血清特征性代谢物。 方法 病例对照研究。收集2021年1月至2022年1月北京同仁医院神经内科确诊的视神经炎患者血清样本，同时收集性别、年龄匹配的健康体检者血清样本作为对照组。其中，视神经炎组9例，女性5例，男性4例，年龄（35.8±12.9）岁，对照组9例，女性5例，男性4例，年龄（32.6±8.6）岁。采用液相色谱质谱技术分析视神经炎患者、健康人群血清中的代谢物。选择主成分分析（PCA）及正交偏最小二乘法分析（OPLS-DA）的多元统计分析方法，采用OPLS-DA模型的变量投影重要性（VIP）值并结合t检验的P值筛选差异代谢物。 结果 鉴定出37种特征代谢物，VIP>1且P<0.05的差异代谢物共有4种，3种为磷脂类物质，分别为LysoPC（P-16∶0）、LysoPC（16∶0）、LysoPC（P-18∶0），1种为苏氨酸，4种代谢物含量均下调，4种代谢物受试者工作曲线下面积分别为0.951、0.889、0.963和0.944。 结论 基于代谢组学分析，视神经炎患者血清中的一些代谢物发生了变化，可为视神经炎血清标志物的筛选提供实验基础。

目的 建立一种催化发夹自组装（CHA）联合成簇间隔的短回文重复序列及其关联蛋白12a（CRISPR-Cas12a）的传感技术，用于外泌体源性微小RNA-21（miR-21）的检测并分析其性能。 方法 选取2023年9—10月在陆军军医大学第一附属医院确诊为乳腺癌的患者8例为乳腺癌组；选取同期健康体检者8名为健康对照组。采用试剂盒提取血浆外泌体及其miR-21。针对miR-21序列设计DNA发夹和CRISPR RNA序列。通过聚丙烯酰胺凝胶电泳和荧光分光光度计验证检测技术可行性。进一步优化发夹浓度、CHA反应时间、Cas12a蛋白浓度和Cas12a蛋白反应时间。在此基础上，检测不同浓度（0、0.1、0.5、1.0、2.5、5.0、7.5、10.0 nmol/L）的miR-21，收集荧光强度采用一元线性回归方法做线性分析以评价方法学的灵敏度，同时检测不同类型miRNA（miR-31、miR-26a、miR-192、miR-25-3p）及空白对照以评价方法学特异性。采用病例对照研究，用该检测技术和逆转录PCR方法检测乳腺癌组和健康对照组血浆外泌体源性miR-21的相对表达水平以评价其临床样本检测能力。 结果 应用CHA联合CRISPR-Cas12a技术建立了外泌体源性miR-21的检测方法。该方法检测miR-21的浓度与荧光强度呈良好的线性关系（相关系数为0.966 7），线性检测范围为0.1~10.0 nmol/L，检测限为87.81 pmol/L。miR-21的检测荧光强度为450.27±23.96，高于miR-31、miR-26a、miR-192、miR-25-3p和空白对照组（分别为98.89±7.35、98.12±2.07、98.93±2.45、96.66±2.45、82.93±3.54），差异均有统计学意义（P均<0.001）。逆转录PCR结果显示，乳腺癌组血浆外泌体源性miR-21相对表达水平高于健康对照组（1.83±0.27比0.93±0.12，P<0.001）；CHA联合 CRISPR-Cas12a检测技术结果显示，乳腺癌组血浆外泌体源性miR-21相对表达水平高于健康对照组（1.94±0.21比0.98±0.08，P<0.001）；CHA联合 CRISPR-Cas12a检测技术与逆转录PCR检测的乳腺癌组和健康对照组的血浆外泌体源性miR-21相对表达水平比较，差异无统计学意义（P均>0.05）。 结论 建立了CHA联合CRISPR-Cas12a检测外泌体源性miR-21的高灵敏度与高特异性的传感技术，其检测血浆外泌体源性miR-21的结果与逆转录PCR结果一致，可用于乳腺癌患者筛查。

目的 建立基于重组酶介导等温扩增技术（RAA）-规律成簇的间隔短回文重复序列及其相关蛋白（CRISPR-Cas13a）准确检测肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶（KPC）型碳青霉烯酶基因的方法。 方法 收集2020—2021年北京市垂杨柳医院保存的25株产耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌（CRKP）临床分离株和5株碳青霉烯类敏感肺炎克雷伯菌（CSKP），提取菌株总DNA。设计检测KPC DNA特异性RAA引物和检测CRISPR RNA（crRNA），建立基于RAA-CRISPR-Cas13a技术快速准确检测KPC型碳青霉烯酶基因的方法。通过KPC质粒和临床样本菌株对方法进行评价，同时使用荧光定量聚合酶链反应（qPCR）方法进行检测，比较2种方法的检出率和一致性。 结果 本研究建立的RAA-CRISPR-Cas13a方法检测KPC质粒和样本的检测灵敏度均可达到1拷贝/μl，高于qPCR（101 拷贝/μl）。RAA-CRISPR-Cas13a检测方法和qPCR方法均从30株临床菌株（包含25株CRKP菌株和5株CSKP菌株）中检出23株携带KPC基因，7株未检出KPC基因，25株CRKP菌株中KPC基因检出率为92%（23/25），2种检测方法阳性符合率为100%（23/23）。 结论 将RAA扩增技术结合CRISPR-Cas13a技术，建立了一种准确检测KPC型碳青霉烯酶基因的方法。该方法有助于精准的筛选产KPC型碳青霉烯酶的菌株。

目的 评估Xpert Carba-R平台在血培养碳青霉烯耐药基因的快速检测中的应用价值。 方法 本研究选取16株携带不同碳青霉烯耐药基因型的肠杆菌目菌株制备模拟阳性血培养样本，采用Xpert Carba-R直接检测模拟血培养液中的碳青霉烯耐药基因。收集2022年1—6月南京医科大学第一附属医院临床血培养鉴定为肠杆菌目的样本117份进行前瞻性研究，采用Xpert Carba-R检测5种碳青霉烯耐药基因，以PCR测序法为参考方法评价其灵敏度与特异性。同时收集阳性患者临床资料进行预后分析。 结果 16份制备的模拟阳性血培养样本采用Xpert Carba-R检出blaKPC阳性8份，blaNDM阳性5份，blaIMP阳性1份，阴性2份，与已知结果完全一致。117份临床血培养阳性样本中28份经Xpert Carba-R检出为碳青霉烯耐药基因阳性，其中blaKPC阳性24份，blaNDM 2份，blaKPC+blaNDM 2份，与PCR测序法相比其敏感度和特异度均为100%，且检测用时明显减少。25例患者中9例采用单药治疗，5例治疗有效；16例采用联合治疗，12例治疗有效；共17例治疗有效，8例治疗无效其中3例死亡，病死率为12%（3/25）。 结论 Xpert Carba-R可快速、准确地检测血培养液中碳青霉烯耐药基因，为临床早期合理用药提供依据。

目的 检测tRF-31-PER8YP9LON4VD在乳腺癌患者血清中的表达水平及探讨其对乳腺癌细胞功能的影响。 方法 收集2022年4—8月南京医科大学附属肿瘤医院57例乳腺癌患者、39例乳腺良性肿瘤患者和40名正常体检者的血清，同时整理临床特征资料，通过实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测乳腺癌细胞株及乳腺癌患者血清中的tRF-31-PER8YP9LON4VD的表达水平；运用细胞侵袭实验、迁移实验、CCK-8增殖实验等分析tRF-31-PER8YP9LON4VD对乳腺癌细胞功能的影响。采用受试者工作特征（ROC）曲线分析血清中tRF-31-PER8YP9LON4VD在乳腺癌中的诊断效能。采用卡方检验进行tRF-31-PER8YP9LON4VD与临床特征的相关性分析。 结果 tRF-31-PER8YP9LON4VD在乳腺癌细胞株MDA-MB-231（0.50±0.22比1.00±0.01）、T-47D（0.33±0.02比1.00±0.01）和MCF-7（0.50±0.02比1.00±0.01）的tRF-31-PER8YP9LON4VD表达水平明显低于正常乳腺上皮细胞株（1.00±0.01），差异有统计学意义（P均<0.05）。tRF-31-PER8YP9LON4VD在乳腺癌患者血清中的表达水平（1.35±1.25）低于正常体检者（6.42±3.13）和乳腺良性肿瘤患者（9.57±2.11）血清中的表达水平，差异有统计学意义（P均<0.001）。与对照组比较，过表达tRF-31-PER8YP9LON4VD的T-47D（86.67±12.22比532.00±22.68，P<0.001）和MDA-MB-231（535.33±99.12比1 055.67±24.00，P=0.002）侵袭能力较弱，T-47D（442.67±81.79比1 210.67±115.02，P=0.002）和MDA-MB-231（278.67±108.40比571.33±95.37，P=0.015）迁移能力较弱，T-47D和MDA-MB-231增殖能力较弱，差异有统计学意义（P均<0.05）。血清中tRF-31-PER8YP9LON4VD对乳腺癌诊断效能的曲线下面积0.743（95%CI 0.644~0.842），敏感度和特异度分别为89.50%和53.10%。 结论 tRF-31-PER8YP9LON4VD在乳腺癌患者血清中呈低表达，其可能抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。

目的 基于ompK36基因GD突变，建立一种快速检测产肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶的肺炎克雷伯菌（KPC-Kp）亚胺培南最低抑菌浓度（MIC）的方法。 方法 方法学建立。收集丽水市中心医院2011年3月至2019年12月的非重复肺炎克雷伯菌258株，PCR扩增膜孔蛋白ompK36基因以及碳青霉烯酶基因blaKPC、blaNDM、blaIMP、blaOXA-48并测序确认，微量肉汤稀释法检测菌株亚胺培南MIC值，建立基因型与MIC值的对应模式。基于该模式，设计建立实时荧光聚合酶链反应（RT-PCR）快速检测MIC值的方法。利用丽水市疾控中心2017—2019年收集的159株非重复肺炎克雷伯菌进一步验证。四格表计算敏感度、特异度，Kappa检验比较RT-PCR法与肉汤稀释法结果的一致性。 结果 258株肺炎克雷伯菌中，109株未携带碳青霉烯酶基因，65株携带ompK36基因GD突变，127株携带blaKPC，15株携带blaNDM，9株携带blaIMP，未检测到blaOXA-48。以肉汤稀释法为标准，肺炎克雷伯菌耐药基因与亚胺培南MIC值存在3种对应模式：4种碳青霉烯酶基因均阴性时，MIC≤1 mg/L，敏感度为100%（107/107），特异度为98.4%（125/127）；blaKPC阳性而ompK36基因GD突变阴性时，4 mg/L≤MIC≤16 mg/L，敏感度为88.2%（60/68），特异度为98.8%（164/166）；blaKPC和ompK36基因GD突变双阳性时，MIC≥32 mg/L，敏感度为96.6%（57/59），特异度为96.6%（169/175）。RT-PCR法可准确检测blaKPC、blaNDM、blaIMP、blaOXA-48基因；在产酶菌株中ompK36基因GD突变的RT-PCR结果与测序法100%一致。以丽水市疾控中心来源的159株肺炎克雷伯菌为样本，以肉汤稀释法为参照，RT-PCR检测亚胺培南MIC值在3种模式下敏感度和特异度均大于95%，Kappa值为0.971。 结论 基于ompK36基因GD突变建立的RT-PCR法有助于快速判断KPC-Kp的亚胺培南MIC值范围。

患儿女，出生6 d 19 h，以“皮肤黄染3 d，发热6 h”于2023年3月31日就诊于重庆大学附属江津医院。4月1日报告血培养危急值：革兰阴性杆菌，经质谱及生化经鉴定为沙门菌属，血清型AF多价（-），Vi（-），考虑为非A~F群沙门菌。传代培养后血清凝集试验结果为：O13，23 Hz，l，w，利用16S rRNA和gyrB基因测序鉴定为肠沙门菌肠道亚种沃兴顿株，与血清学试验相符。患儿经氨苄西林舒巴坦抗感染治疗14 d后病情好转出院。沙门菌鉴定需同时进行细菌生化鉴定和血清学试验，以保证检测准确性，为临床提供可靠的病原学诊断依据。

特发性快动眼睡眠行为障碍（iRBD）被认为是α-突触核蛋白病的前驱期，为探索α-突触核蛋白病的发病机制和早期干预提供了重要窗口。既往很多在iRBD人群进行预测疾病转化的标志物的相关研究，主要集中在临床、体液、影像领域，其中体液标志物因其对病理变化的直接反应以及良好的可及性成为颇有前景的生物标志物，这些研究涉及不同致病机制相关的物质，结果一致性较差。本文对既往iRBD患者体液标志物研究做一综述，以期为后续研究提供参考。

生物标志物具有重要的临床诊断价值。侧流层析技术（LFA）是基于纸层析原理发展起来的检测手段，在疾病生物标志物检测方面有着广泛应用。目前对于LFA的研究主要关注检测特异度、识别精度和灵敏度，以及疾病标志物的多重检测或多疾病的同时检测等方面。该文对LFA的系统设计、工作原理以及在疾病标志物检测中的应用研究进展进行综述，为LFA技术的进一步发展和应用提供参考。

游离DNA（cfDNA）是存在于人体细胞外液中的DNA片段，在生理或病理条件下（如妊娠、肿瘤等），cfDNA的含量变化和分子特征等使其成为疾病诊疗的生物标志物之一。随着cfDNA富集技术以及测序、质谱等检测技术的发展，cfDNA的检测已形成完整的检验流程。基于cfDNA检测的液体活检技术在临床肿瘤诊疗、产前检查中已得到广泛应用，并且在自身免疫病诊疗中展现出较大的潜力。本综述描述了cfDNA检测技术的发展和液体活检在临床方面的应用，以及cfDNA在疾病诊断和治疗中的研究进展。