2023年 · 第46卷第08期

临床质谱技术在激素、药物、维生素、氨基酸等检测中发挥越来越重要的作用，大分子多肽和蛋白的质谱检测也受到广泛关注。临床质谱技术的发展道路上还面临诸多挑战。通过不断努力，临床质谱技术将有更美好的未来。

早期滥用药物的检测推动了质谱技术在北美临床实验室的应用。质谱分析因为其分析灵敏度、特异性和同时检测的能力优势，已经越来越广泛的应用于临床。目前，质谱技术已经成功用于临床小分子化合物、多肽、蛋白质、临床毒理和微生物等常规检测。尽管还需要更多经过FDA批准的商品化平台和试剂，但毫无疑问质谱技术已经展现出丰富的临床应用。

质谱技术作为免疫分析方法的补充，在临床实验室占据重要位置。随着质谱技术在蛋白质组学研究中的应用和发展，临床实验室开始了从小分子检测到蛋白质/多肽检测的探索，逐渐在临床应用的蛋白分析包括甲状腺球蛋白、胰岛素样生长因子-Ⅰ、载脂蛋白E和淀粉样蛋白等。然而在发展的道路上，面临前处理优化耗时长、成本高、缺少参考物质、监管不完善等挑战。尽管新兴的蛋白质组学生物标志物转化到临床诊断应用较慢，但庞大的蛋白质组学数据库和蛋白组学研究为后续临床发展提供了有力支撑。

由于临床质谱方法大多是实验室自建方法且缺少标准化，因此检测质量管理显得尤为重要。质谱方法相比常规检测方法有独特的质量管理要点和应对措施。首先在开发阶段要重视标准品的准确性和方法性能验证。其次实际运行中不仅要逐一审核样本的保留时间、内标强度、离子比等数据，还需要对批内样本的信噪比和内标变异度做整体分析。此外对于长期项目管理，回顾性分析和参加室间质量评价项目是必不可少的。

近年来，随着质谱技术越来越多地应用于临床检验领域，配置质谱仪器、建设临床质谱实验室已成为众多医疗机构及第三方医学检测实验室的选择。与常规生化免疫系统相比，质谱分析检测系统对实验室环境的要求更为严格，需配备的辅助设备、耗材、试剂种类更为繁多，手工操作环节更加繁琐，同时对操作人员的技术能力要求更高。目前尚缺乏临床质谱实验室建设的指导性文件，如何建设安全高效、工作流程顺畅且符合质量规范要求的临床质谱实验室仍是医疗机构面临的严峻考验。为规范医疗机构临床质谱实验室建设，中华医学会检验医学分会临床生化检验学组、中国医学装备协会检验医学分会联合领域内专家从临床质谱实验室通用要求、人员、环境、仪器、试剂及耗材要求等方面制定共识。

流式细胞术在临床血液及免疫相关疾病的精准诊治中具有重要作用。随着流式细胞仪普及程度的不断提高，临床实验室开展流式细胞术检测，服务临床诊疗的能力和水平也逐渐提升。为适应流式细胞术临床应用的进展和需求，加强质量控制，结合近年来国内外相关领域研究进展，对2013年发表的《流式细胞术的临床应用共识》进行更新，制定此共识。

目的 建立一种基于同位素内标法定量的血清万古霉素液相色谱串联质谱检测方法（LC-MS/MS），并进行临床应用评估。 方法 方法学评价类研究。收集2021年3月至2022年6月就诊于浙江大学医学院附属邵逸夫医院且接受万古霉素静脉给药治疗的221例患者的临床血清样本，其中男142例，女79例，年龄（59.31±15.32）岁，检测其谷浓度。收集体检中心30名体检结果均正常的表观健康人剩余血清样本作为空白基质用于方法学评价，其中男 15 名，女 15 名，年龄（35.65±9.86）岁。使用AB Sciex Triple Quad 4500 MD 液相色谱串联质谱系统，采用Phenyl-Hexyl色谱柱进行分离，柱温40 ℃，以含0.1%甲酸的水溶液和含0.1%甲酸的甲醇溶液梯度洗脱，以万古霉素-［d12］三氟乙酸盐作为内标（IS），建立定量方法，并对方法的敏感度、特异度、线性、回收率、精密度、基质效应、残留进行性能验证。 结果 万古霉素的检出限是0.2 mg/L，最低定量限是0.5 mg/L，在浓度1~50 mg/L范围内线性关系良好（R2=0.998 4），准确度（回收率87.45%~112.69%），日内和日间精密度（CV4.91%~7.69%），内标归一化基质因子（90.22%~104.29%），携带污染不影响待测物的定量分析。221例患者中血药谷浓度为（13.15±8.56）mg/L。 结论 新建立的血清万古霉素LC-MS/MS检测方法分析性能符合要求，可用于临床治疗药物浓度监测。

目的 建立基于液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）同时检测伏立康唑（VRC）、泊沙康唑（PCZ）和利奈唑胺（LNZ）血清药物浓度方法。 方法 方法学验证。收集2022年6月至12月浙江大学医学院附属第二医院服用伏立康唑、泊沙康唑和利奈唑胺的重症感染患者标本分别为155、44和59例。以利奈唑胺-［2H3］为内标，准确称量和配制伏立康唑、泊沙康唑和利奈唑胺工作液，采用ACE PFP色谱柱，梯度洗脱，进行液相色谱质谱分析。质谱分析采用正离子电喷雾离子化多离子反应监测模式（MRM）。根据CLSI中C62-A文件指南和液相色谱质谱临床应用建议指南评价该方法的线性、精密度、最低检测限和回收率等。 结果 VRC和PCZ线性范围均为0.10~10.00 mg/L，最低检测限均为0.01 mg/L；LNZ线性范围为0.50~50.00 mg/L，最低检测限为0.05 mg/L，范围内线性良好（r均>0.99）。VRC批内变异系数（CV）≤8.30%，批间CV≤6.99%；PCZ批内CV≤9.78%，批间CV≤7.98%；LNZ批内CV≤6.14%，批间CV≤7.14%。VRC、PCZ和LNZ回收率分别为90.96%~103.18%、91.84%~99.17%和97.04%~100.41%。血药浓度VRC155例、PCZ44例和LNZ59例。 结论 本研究成功建立LC-MS/MS法同时检测VRC、PCZ和LNZ血清药物浓度，该方法检测可靠实用，满足临床治疗药物监测（TDM）需求。

目的 建立并验证一种基于液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）同时测定脑脊液Aβ1-42、Aβ1-40和Aβ1-38的检测方法，并评价该方法与3种主流检测方法间的一致性。 方法 方法建立、验证与一致性评价。以15N标记的β-淀粉样蛋白作为内标，采用Waters MCX 96孔固相萃取板进行抽提和萃取，收集洗脱液至QuanRecovery MaxPeak 700 μl收集板。在正离子模式下，基于电喷雾离子化的多反应监测模式实现脑脊液Aβ1-42、Aβ1-40和Aβ1-38的同时测定。参考CLSI C62-A和EP-15A3指南对定量限、线性、回收率、精密度、正确度等性能进行方法学评价。收集57例临床检测剩余的脑脊液样本，采用INNOTEST ELISA试剂盒及Lumipulse G和Roche Elecsys全自动化学发光检测系统测定Aβ1-42和Aβ1-40的浓度，采用Passing-Bablok和Bland-Altman法进行不同检测系统间的比对及偏倚评估。 结果 该方法的分析时长为8 min，测定Aβ1-42、Aβ1-40和Aβ1-38的定量限分别为0.1、0.5、0.1 ng/ml，线性范围可覆盖临床实际样本浓度分布；回收率分别为86.2%~93.8%、100.9%~103.9%和103.3%~107.1%；总不精密度分别为4.7%~7.4%、3.5%~4.6%和5.2%~10.9%；Aβ1-42有证参考物质的测定值均在允许不确定度的范围内；携带污染率均≤0.11%。此外，基于该LC-MS/MS法测定的脑脊液Aβ1-42和Aβ1-40的结果与基于INNOTEST ELISA方法和Lumipulse G及Roche Elecsys全自动生化分析仪检测的结果相关性较好，相关系数r为0.920~0.970，但测定值间存在明显不同。 结论 本研究建立了一种基于LC-MS/MS同时测定脑脊液Aβ1-42、Aβ1-40和Aβ1-38的检测方法，该方法准确、简便，可应用于临床检测。质谱法检测Aβ1-42和Aβ1-40，特别是Aβ1-42，与其他检测系统间的相关性较好但测定值存在显著差异，提示阿尔茨海默症经典标志物检测的一致化和标准化有待改进。

目的 建立同位素稀释液相色谱串联质谱（ID-LC-MS/MS）方法检测血清中L-色氨酸及其代谢物。 方法 方法学建立及评价。收集2022年11月至2023年1月的华西医院166例健康体检者的血清样本。采用L-色氨酸（Trp）、L-犬尿氨酸（Kyn）和犬尿喹啉酸（KA）的同位素标记物为内标，通过蛋白沉淀处理血清样本，应用LC-MS/MS同时检测Trp、Kyn和KA含量。评价该方法的选择性、特异性、线性、检出限（LOD）、定量限（LOQ）、携带污染、精密度、加标回收率、基质效应和稀释一致性。 结果 Trp、Kyn和KA的线性相关系数均>0.999，LOD分别为0.10 μmol/L、0.01 μmol/L和1.00 nmol/L，LOQ分别为0.20 μmol/L、0.04 μmol/L和2.00 nmol/L，批内精密度和批间精密度均<10%，平均加标回收率与相对基质效应均在100%左右，超线性范围的样本最多可稀释16倍。健康体检者血清中Trp、Kyn、KA含量、Kyn/Trp和KA/Kyn比值分别为（59.55±10.92）μmol/L、（1.85±0.43）μmol/L、（39.89±17.93）nmol/L、（31.64±8.19）×10-3和21.51±6.72。 结论 建立了基于ID-LC-MS/MS定量检测Trp、Kyn和KA的方法，该方法简便快捷、灵敏度高、结果准确可靠，为临床相关研究提供了可靠支撑。

目的 建立一种稳定、灵敏的液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）检测人血浆12种神经酰胺方法。 方法 收集2021年10月至2022年10月在遵义医科大学及其各附属医院健康体检的438名表观健康人群，建立12种神经酰胺生物参考区间。采用氘代同位素作为内标，使用ACQUITY UPLC BEH C18（2.1 mm×50 mm，1.7 μm）色谱柱进行分离，流动相为水（含0.1%甲酸）和异丙醇：乙腈（1∶1，v/v，含0.1%甲酸），流速0.4 ml/min，梯度洗脱。使用Qlife Lab 9000 Plus三重四极杆质谱建立LC-MS/MS检测12种神经酰胺的方法。并从线性、定量下限、精密度、回收率和稳定性几个方面对该方法进行性能评价。 结果 该方法通过了线性、定量下限、回收率、精密度、稳定性的性能评价。12种神经酰胺批内和批间精密度为1.3%~14.3%，正确度通过加标回收实验验证，回收率在91.9%~111.0%，最低定量下限范围为0.001~0.100 μmol/L，标准曲线显示出良好的线性关系（r>0.990），稳定性实验显示12种神经酰胺在生物基质中及不同条件处理后规定时间内稳定。12种神经酰胺建立了各自相应的生物参考区间，分别为0.103~0.326 μmol/L［Cer（d18∶1/16∶0）］、0.018~0.098 μmol/L［Cer（d18∶1/18∶0）］、0.933~3.919 μmol/L［Cer（d18∶1/24∶0）］、0.243~1.072 μmol/L［Cer（d18∶1/24∶1）］、0.001~0.007 μmol/L［Cer（d18∶1/14∶0）］、0.022~0.095 μmol/L［Cer（d18∶1/20∶0）］、0.185~0.835 μmol/L［Cer（d18∶1/22∶0）］、0.003~0.022 μmol/L［Cer（d18∶0/16∶0）］、0.001~0.016 μmol/L［Cer（d18∶0/18∶0）］、0.017~0.156 μmol/L［Cer（d18∶0/24∶0）］、0.008~0.074 μmol/L［Cer（d18∶0/24∶1）］、0.106~0.721 μmol/L［LacCer（d18∶1/24∶1）］。 结论 本研究建立了可靠的检测人血浆12种神经酰胺的LC-MS/MS检测方法，适合于临床应用。

目的 采用高效液相色谱-串联质谱（HPLC-MS/MS）定量检测孕妇孕中期维生素浓度，探究孕妇孕期血清维生素A、D和E的水平变化趋势。 方法 纳入2021年10月1日至2022年10月31日武汉大学人民医院产科建档720例孕妇，年龄（29.7±4.4）岁，孕期12~22周。采用HPLC-MS/MS测定维生素A、D和E的含量，统计分析各分组的浓度水平，并计算缺乏率。 结果 维生素A、D和E分布范围（95%CI）：0.74~2.74 μmol/L、2.88~25.37 ng/ml 和 6.18~35.08 μmol/L，缺乏率分别为9.30%、93.76%和35.83%，双胎组的维生素A、D和E水平分别为（1.67±0.51）μmol/L、（13.18±7.44）ng/ml和11.97（8.85，14.60）μmol/L，均高于单胎组（1.45±0.36）μmol/L、（10.87±5.26）ng/ml和10.46（6.99，14.11）μmol/L，独立样本t检验有统计学意义（P<0.001）。VitD在体重指数较低组（<22 kg/m2）浓度为（12.54±5.74）ng/ml，高于BMI较高组（≥22 kg/m2）（10.46±4.90）ng/ml，差异有统计意义（P<0.001）。 结论 本研究使用HPLC-MS 对孕中期3种维生素水平进行监测，监测孕期血清维生素A、D和E的水平变化。

目的 联合使用同位素稀释液相色谱串联质谱及酶学参考方法研制冰冻人血清尿素、肌酐国家二级标准物质，作为量值溯源的载体。 方法 参照JJF1343-2012《标准物质定值的通用原则及统计学原理》和JJF 1006-1994《一级标准物质技术规范》的要求对候选物质进行均匀性、稳定性、互换性评价；联合广东省中医院、北京航天总医院、深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司、迈克生物股份有限公司、北京利德曼生化股份有限公司、浙江美康生物科技股份有限公司的6家参考实验室采用国际检验医学溯源联合委员会推荐的同位素稀释液相色谱串联质谱法及酶学参考方法共同对标准物质进行定值，计算不确定度。 结果 所研制标准物质均匀性的方差分析结果为P>0.05，稳定性评价t值小于t（0.05）查表时的t值，互换性评价结果位于4个常规检测系统测量值95%置信区间内，最终定值结果为尿素：14.7 mmol/L，扩展不确定度0.3 mmol/L（k=2），肌酐：313.9 μmol/L，扩展不确定度14.5 μmol/L（k=2）。 结论 成功研制的冰冻人血清尿素、肌酐二级标准物质标示值可靠，均匀性、稳定性较好，不同检测系统间具有良好互换性。

目的 探讨适用于临床实验室进行流式细胞术计数CD34+细胞的性能验证方法和评价标准。 方法 参考国际指南和我国行业标准，设计流式细胞术计数CD34+细胞（包括相对计数和绝对计数）的性能验证方案，选用全国室间质评（EQA）发放的4个批号质评物，并收集3份干细胞采集物和3份外周血标本，对FACSCanto Ⅱ 配套检测系统的精密度、线性、携带污染率、正确度和准确度实施性能验证，并基于当前技术水平设定评价标准。 结果 相对、绝对计数的批内CV分别为2.5%~8.9%和3.0%~9.0%，批间CV分别为2.8%~10.5%和3.8%~9.9%；低浓度段（3.6~123.6个/μl）和高浓度段（113.2~1 196.3个/μl）线性回归方程的斜率分别为0.993 2和0.965 2，R2分别为0.999 6和0.993 9，偏差为-8.67%~0.22%；相对、绝对计数的携带污染率分别为0.07%和0.00%；相对计数≤0.2%或绝对计数≤20个/μl时，正确度绝对偏倚在±0.006%或±0.5个/μl范围内，准确度绝对偏差在±0.02%或±0.9个/μl范围内；相对计数>0.2%或绝对计数>20个/μl时，相对偏倚在±5.65%范围内，相对偏差在±8.19%范围内。各验证结果均在设定的评价标准允许范围内。 结论 本研究制定的性能验证方案和设定的评价标准，既遵循国内外指南的推荐，又符合我国临床实验室的检测技术水平，具有可操作性，可为临床实验室开展性能验证工作提供参考。

基于质谱技术的蛋白质分析已成为一种强大的临床实验室工具，相较于传统方法，它提供了更可靠的评估途径，为疾病的诊断和治疗带来更多益处。针对靶向蛋白的定量分析已广泛应用于胰岛素样生长因子1、甲状腺球蛋白和单克隆抗体药物等领域。同时，非靶向质谱蛋白分析也取得重大进展，如淀粉样变性、单克隆免疫球蛋白疾病和膜性肾病的诊断。高分辨质谱技术使得致病蛋白得以鉴定和鉴别，同时揭示了参与疾病发病和进展的新蛋白质。因此，临床诊断和疾病鉴别得到改进，对这些疾病的认识也得到提高。

N6-甲基腺苷（m6A）是哺乳动物最常见的RNA修饰之一。m6A修饰由m6A甲基化酶或去甲基化酶催化，经m6A阅读蛋白识别参与RNA代谢的各种过程。近年来，诸多研究表明m6A修饰通过调控基因表达影响细胞应激和细胞稳态，参与细胞程序性死亡、营养物质和能量代谢、免疫调控等多种生物学过程，是肿瘤发生发展过程中的重要机制之一。在血液肿瘤中，m6A水平异常及相关酶表达失调广泛参与急性白血病、慢性粒细胞白血病、多发性骨髓瘤、淋巴瘤的发生发展与化疗耐药，是影响患者预后的重要因素。m6A修饰机制复杂，在不同类型肿瘤或亚型中可能发挥不同功能。筛选合适的患者人群应用m6A靶向抑制剂可能是未来实现血液肿瘤精准治疗的新方向。

准确、适用的参考区间可为疾病诊断、疗效评价及健康监测提供重要依据。许多临床检验指标存在年龄依赖趋势，对此类指标的结果判读应考虑年龄因素的影响。然而，划分年龄亚组的参考区间在实际应用中存在局限性，而连续参考区间不仅可以为精准判读检验结果提供参考，还可以为动态监测其变化趋势提供基线。该文基于本研究团队在儿童参考区间方面进行的研究，介绍建立连续参考区间的不同算法及其适用条件与实现步骤，为我国连续参考区间的建立提供方法学参考与实现途径。