2023年 · 第46卷第06期

在病原学诊断技术快速发展，检验新技术逐渐应用于微生物检测的背景下，检验工作者与临床相关学科应及时提出中国标准、中国指南、中国方案，始终坚持在临床实践中推广和应用临床微生物学相关行业标准和指南，持续推动病原学诊断标准化建设的良性循环，逐步提高我国感染性疾病的实验室诊断能力和行业进步。

中华人民共和国卫生行业标准《WS/T 807-2022 临床微生物培养、鉴定和药敏检测系统的性能验证》已于2022年11月2日发布，2023年5月1日起实施。该卫生行业标准（推荐标准）是制定和实施微生物检验程序性能验证方案的依据和实验室质量管理的准则，其目的是促进临床微生物检验领域的性能验证更加规范化和同质化。本文就卫生行业标准立项背景、编写情况、主要内容和实施难点及意义等进行解读和分析，以帮助临床微生物实验人员更充分地理解和执行卫生行业标准的相关规定，促进行业标准化和学科发展。

基于宏基因测序技术的血浆微生物游离DNA（mcfDNA）测序为感染性疾病提供了一种非侵袭性的病原学诊断技术，在脓毒症和血流感染中，与血培养等传统病原学诊断技术相比，mcfDNA测序在敏感性、时效性和致病原覆盖面方面具有优势，但在用于肺部感染时，其敏感性与支气管肺泡灌洗液等高质量下呼吸道标本的宏基因二代测序仍有较大差距，而且缺乏高质量临床研究数据，因此，还不宜将其作为肺部感染病原学诊断的一线技术，其临床应用尚需控制在亟须明确病原学诊断、传统病原学诊断技术难以达到目的、侵袭性病原学检测标本无法获得的少数疑难危重肺部感染患者中。通过改进测序技术提高其敏感性，通过高质量临床研究明确其适应用对象和最佳应用时机，是未来能够在肺部感染中高效运用这一新的非侵袭性病原学诊断技术的关键。

侵袭性真菌病是感染病学、微生物学、临床药学等学科共同的焦点。欧洲癌症研究与治疗组织和真菌研究小组教育与研究联合会诊断标准中，确定诊断和极似诊断对应有不同的真菌学检查。中国医疗保健国际交流促进会临床微生物学分会、中华医学会检验医学分会临床微生物学组、中华医学会微生物学和免疫学分会临床微生物学组组织专家制定指南，就真菌侵入人体导致的血流感染、肺部感染、中枢神经系统感染、眼部感染、胸腔腹腔感染、关节感染等的适应证、适用样本、检测技术、结果解释和会诊等真菌学信息给出了共识性推荐意见，包括了常见的念珠菌、曲霉、毛霉、肺孢子菌、隐球菌、马尔尼菲篮状菌、镰刀菌、赛多孢等，为该病的临床诊治防控和真菌学检查提供帮助。

戊型病毒性肝炎（简称戊型肝炎）是由戊型肝炎病毒（HEV）引起的一种急慢性传染病。全球每年约发生2 000万例HEV感染，其中约有330万例戊型肝炎，7万例与HEV感染相关的死亡病例。过去10年，我们对戊型肝炎的认识发生了巨大变化，我国仍有大部分HEV感染者，尤其是重症及慢性戊型肝炎患者被漏诊或误诊。根据世界卫生组织提出的到2030年消除病毒性肝炎这一公共卫生危害的目标，并基于医疗机构是目前我国诊断和治疗HEV的主要场所这一事实，中国戊型肝炎研究协助组（CCSHE）、中国医师协会感染科医师分会和国家感染性疾病临床医学研究中心共同制订了该共识，希望促进医疗机构管理、疾病预防控制、临床、检验、感染控制的多学科、多部门联合，有效筛查和诊断HEV感染人群；帮助戊型肝炎患者及时会诊和转诊，优化患者随访及复诊管理流程，提供正确的治疗方法。同时加强非感染、非肝病专科医师对戊型肝炎的认知，以便在日常医疗活动中及时发现HEV感染者。

目的 全面介绍2021年全国细菌耐药现状，掌握耐药流行趋势，为抗菌药物合理使用提供科学数据。 方法 本研究为描述性研究，选取2020年10月至2021年9月全国细菌耐药监测网成员单位共计1 373所医院的监测数据，对纳入统计的3 743 027株细菌的主要分析指标，如主要分离细菌对常用抗菌药物的敏感性、临床常见耐药菌的比较、重要耐药菌的检出率等进行分析。 结果 革兰阴性杆菌的分离率（71.1%，2 659 447/3 743 027）高于革兰阳性菌（28.9%，1 083 580/3 743 027）。分离率排名前5位的细菌依次为大肠埃希菌20.7%（776 145/3 743 027）、肺炎克雷伯菌14.7%（550 618/3 743 027）、金黄色葡萄球菌9.2%（344 515/3 743 027）、铜绿假单胞菌8.4%（314 288/3 743 027）、鲍曼不动杆菌6.4%（241 383/3 743 027）。万古霉素、替考拉宁和利奈唑胺对葡萄球菌和肠球菌保持很高的体外抗菌活性。碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌的检出率为11.3%，较2020年的10.9%上升了0.4%，其他重点监测的耐药细菌大部分呈下降趋势；耐药菌的检出率全国各地区间有一定差异。 结论 目前我国医疗机构抗菌药物监管的成效逐步显现，但仍需进一步加强监管，减少碳青霉烯类等广谱抗菌药物的过度使用，并做好耐药菌医院感染控制工作，以遏制其流行播散，不断降低耐药菌检出率。

目的 评价血培养阳性肉汤直接药敏试验的临床性能，为优化临床血流感染抗菌药物使用策略提供依据。 方法 回顾性研究。对北京大学人民医院2017年5月至2021年12月的780份血培养阳性标本，采用血培养阳性肉汤直接纸片扩散法进行直接药敏试验，结果与实验室常规药敏试验结果对比分析，药敏判断折点参照临床和实验室标准化协会（CLSI）M100 S32文件。 结果 排除53份2种以上菌株生长后，革兰阴性菌331株（主要为大肠埃希菌139株、肺炎克雷伯菌79株、铜绿假单胞菌35株、鲍曼不动杆菌21株），革兰阳性球菌396株（主要为金黄色葡萄球菌25株、凝固酶阴性葡萄球菌316株、肠球菌属47株）。与实验室常规药敏试验进行比较，全部革兰阴性菌分类一致（CA）率为86.0%（1 368/1 591）、重大错误（ME）率为8.7%（139/1 591）、极重大错误（VME）率为0.5%（8/1 591）；全部革兰阳性球菌CA%为89.2%（960/1 076）、ME%为7.5%（81/1 076）、VME%为1.0%（11/1 076）；大肠埃希菌中亚胺培南的CA%为16/17，美罗培南的CA%为90.1%（109/121），头孢吡肟的CA%为70.8%（85/120）；肺炎克雷伯菌中亚胺培南的CA%为10/13，美罗培南的CA%为80.9%（55/68），头孢吡肟的CA%为80.3%（53/66）；铜绿假单胞菌中美罗培南的CA%为96.0%（24/25）；鲍曼不动杆菌中美罗培南的CA%为16/16；金黄色葡萄球菌中利奈唑胺的CA%为100%（25/25），头孢西丁的CA%为100%（24/24）；凝固酶阴性葡萄球菌中利奈唑胺的CA%为98.9%（269/272），头孢西丁的CA%为94.5%（277/293），庆大霉素的CA%为71.6%（194/271）；肠球菌属中万古霉素的CA%为91.5%（43/47），氨苄西林的CA%为94.7%（36/38）。 结论 与常规药敏试验相比，血培养阳性肉汤直接药敏试验在常见革兰阴性菌、革兰阳性球菌中有较高的分类一致率和较低的误差率，能够成为临床血流感染抗菌药物药敏试验的另一种快速的替代方法。

目的 了解碳青霉烯耐药肠杆菌目细菌（CRE）的定植率，及其引起血流感染的比例和危险因素。 方法 回顾性研究。2018年1月至2021年12月在北京大学人民医院检验科进行直肠拭子CRE筛查的患者共4 993例，其中筛查阳性患者137例，收集阳性患者的临床和实验室资料，分析高风险人群CRE筛查的阳性率、定植菌种类、抗菌药物耐药性及定植患者CRE血流感染的危险因素。CRE筛查阳性与转为血流感染危险因素的单因素分析使用χ2检验，多因素分析采用二元logistic回归，以相对危险度（OR）及其95%置信区间（CI）表示，双侧P<0.05为差异有统计学意义。病原菌耐药率采用WHONET 5.6软件分析。 结果 研究期间，共4 991例进行直肠拭子筛查的患者符合入组条件，其中137例患者筛查阳性，阳性率为2.7%（137/4 991），其中重症监护病区和血液科病区阳性率较高，分别为5.5%（27/493）和3.3%（109/3 321）。CRE筛查阳性患者共分离出145株定植菌，分别为肺炎克雷伯菌63株（43.4%，63/145）、大肠埃希菌52株（35.9%，52/145）、阴沟肠杆菌16株（11.0%，16/145）和其他肠杆菌目细菌14株（9.7%，14/145），CRE筛查阳性定植菌以产金属β内酰胺酶为主。分析145株定植菌对22种抗菌药物的耐药性，对阿米卡星和替加环素敏感度最高。137例筛查阳性患者中，14例（10.2%，14/137）转为血流感染，共分离14株病原菌，其中肺炎克雷伯菌10株、大肠埃希菌4株，以产丝氨酸碳青霉烯酶为主。同一患者血流感染分离菌株与其前期筛查菌株产酶类型和抗菌药物耐药性高度一致。将CRE筛查阳性患者与CRE转为血流感染患者相比较，单因素分析中手术史、中性粒细胞减少、造血干细胞移植、直肠拭子筛查前抗菌药物使用史、入院48 h筛查、菌株产丝氨酸碳青霉烯酶差异有统计学意义（P<0.05）。多因素分析中，手术史（OR值为24.659，95%CI 2.540~239.411，P=0.006）和中性粒细胞减少（OR值为93.796，95%CI 6.294~1 397.804，P=0.001）差异有统计学意义（P<0.05）。 结论 CRE在我院患者体内定植率较低，但筛查阳性患者转为血流感染的比例较高，手术史和中性粒细胞减少是定植转为血流感染的危险因素，应加强对高风险病区及易感患者的监控和防治。

目的 通过高通量筛选获得针对革兰阴性杆菌BamA外膜蛋白的小分子抗菌药物。 方法 6株鲍曼不动杆菌临床菌株于2022年1—12月分离自中南大学湘雅三医院住院患者。基于分子对接试验，利用sybyl-X2.1软件对Chemdiv化合物数据库中的小分子化合物进行高通量虚拟筛选；对高通量筛选打分排名靠前的150个小分子进行体外生物学试验筛选，选取具有最佳抗菌活性的前4个小分子进行深入的分子对接分析，并选取对接分数最高的小分子8308-0401进行后续试验；通过棋盘稀释试验检测8308-0401与利福平的联用抗菌效果；最后，通过等离子表面共振试验检测8308-0401与靶蛋白BamA的亲合力。 结果 通过高通量虚拟筛选，发现了排名靠前的150个小分子的对接打分平均为5.63；通过体外生物学试验，发现了小分子8308-0401、8365-1335、C066-2507和L582-0346具有较强的抗菌活性；其中，8308-0401具有最高的分子对接分数，且与利福平联用对鲍曼不动杆菌标准菌株和临床菌株均具有协同抗菌活性；8308-0401与靶蛋白BamA具有较强的亲合力，其结合常数为182 μmol/L。 结论 小分子8308-0401可靶向革兰阴性杆菌BamA外膜蛋白而发挥抗菌活性。

目的 探究lycosin-Ⅰ体外抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的活性及体外联合8种常用抗菌药物对MRSA的抗菌作用。 方法 本研究遵循了随机对照试验的设计原则。收集中南大学湘雅二医院2021年9至11月临床分离的MRSA 10株，采用微量肉汤稀释法测定lycosin-Ⅰ体外抗MRSA的最低抑菌浓度（MIC）、最小杀菌浓度（MBC）和杀菌动力学试验；采用微量肉汤棋盘式稀释法检测lycosin-Ⅰ与青霉素、红霉素、左氧氟沙星、庆大霉素、利福平、米诺环素、万古霉素及利奈唑胺共8种常见抗菌药物的体外联合抑菌效果。 结果 lycosin-Ⅰ体外抗MRSA的MIC范围为4~8 mg/L，MIC50和MIC90分别为4和8 mg/L；MBC范围为4~8 mg/L，其比值MBC/MIC为1~2；杀菌动力学试验结果显示，lycosin-Ⅰ浓度为1/2 MIC或MIC时，MRSA临床分离株和标准菌株均在短时间存活菌数下降而后出现恢复繁殖的现象，而浓度为2 MIC或4 MIC时存活细菌载量则呈现逐渐减少直至杀灭的趋势。lycosin-Ⅰ与庆大霉素体外联用时以协同作用为主而与其他抗菌药物联用主要表现为相加作用。此外，lycosin-Ⅰ与抗菌药物体外联用后可显著降低抗菌药物的MIC50和MIC90。 结论 lycosin-Ⅰ在体外对MRSA具有较好的抑菌和杀菌活性且杀菌快速、彻底，同时与其他抗菌药物体外联合抗MRSA时，能起到协同或相加作用。

目的 机器学习是人工智能的一个重要分支及支撑技术，本研究拟比较基于基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）技术的4种肺炎克雷伯菌对亚胺培南药物敏感性机器学习预测模型的诊断效能。 方法 回顾性研究。收集2019年1月至2020年12月天津市海河医院检验科微生物室临床标本中分离的684株肺炎克雷伯菌的MALDI-TOF MS质谱峰和亚胺培南药敏数据，从中按照简单随机方法选取亚胺培南敏感株和耐药株各70株的质谱峰数据作为训练集，以及敏感株和耐药株各30株建立测试集模型，对上述200份标本的质谱峰数据经归一化处理后进行正交偏最小二乘判别分析（OPLS-DA）后，再分别通过最小绝对值选择与收缩算子（LASSO）、逻辑回归（LR）、支持向量机（SVM）和神经网络（NN）算法建立训练集数据模型，通过网格搜索算法和10折交叉验证选取最好的训练集和测试集模型曲线下面积（AUC）和混淆矩阵，通过测试集混淆矩阵验证预测模型的正确率。 结果 OPLS-DA分析的R²Y和Q²分别为0.546 3和0.017 8，最优的LASSO、LR、SVM和NN算法训练集和测试集的AUC分别为1.000 0和0.858 1、1.000 0和0.820 1、0.940 8和 0.756 1、1.000 0和0.697 2，训练集模型对耐药预测准确率分别为99%（69/70）、100%（70/70）、91%（64/70）和100%（70/70），药物敏感预测准确率分别为100%（70/70）、100%（70/70）、90%（63/70）和100%（70/70），正确率分别为99%（139/140）、100%（140/140）、91%（127/140）和100%（140/140），经测试集验证分别对耐药预测准确率为93%（28/30）、87%（26/30）、60%（18/30）和60%（18/30），药物敏感预测准确率分别为100%（30/30）、80%（24/30）、93%（28/30）和67%（20/30），正确率分别为97%（58/60）、83%（50/60）、77%（46/60）和63%（38/60）。 结论 LASSO算法建立的肺炎克雷伯菌对亚胺培南药物敏感性预测模型具有较高的诊断效能，具有潜在的临床辅助决策支持能力。

目的 探究Y染色体丢失（LOY）在多发性骨髓瘤（MM）患者中的风险分层及预后意义。 方法 回顾性分析2018年1月至2020年1月复旦大学附属中山医院收治的193例男性初诊MM患者的临床资料，根据初诊染色体核型结果分成正常核型组（178例）与伴LOY核型组（15例）。采用秩和检验、2×2列联表卡方检验和独立样本t检验比较2组间肝肾功能、免疫组化和细胞遗传学等实验室检查结果、治疗疗效及生存预后等情况，通过生存分析及Cox回归探究LOY的临床预后。 结果 初诊男性MM患者LOY的发生率为8%（15/178）。伴LOY组的修订的国际分期系统（R-ISS）Ⅲ期患者比例（8/15）高于正常核型组（40/178）（χ2=7.052，P<0.01），且发生1q21扩增的比例（10/13）高于正常核型组（77/162）（χ2=4.159，P<0.05）。正常核型组在完成第4周期化疗后达到完全缓解（CR）/严格意义的完全缓解（sCR）的比例（63/171）高于伴LOY组（1/15）（χ2=5.564，P<0.05），发生疾病进展（PD）的比例（16/171）也低于伴LOY组（4/15）（χ2=4.306，P<0.05）。伴LOY组MM患者的2年无进展生存期（PFS）较正常核型组短（Z=‒3.201，P<0.01）。单因素生存分析结果显示，肌酐≥93 μmol/L、β2微球蛋白（β2-MG）≥4.0 mg/L、血清游离轻链比值（sFLC）<0.06、骨髓浆细胞（BMPC）比例≥30%、R-ISS Ⅲ期、化疗4周期后未达CR/sCR及伴LOY、1q21扩增、P53缺失和t（4；14）遗传学异常的初诊MM患者PFS缩短（P均<0.05）；Cox回归分析显示，肌酐≥93 μmol/L（HR=4.460，95%CI 1.615~12.314，P=0.004）、sFLC<0.06（HR=2.873，95%CI 1.206~6.849，P=0.017）、化疗4周期后未达CR/sCR（HR=3.522，95%CI 1.437~8.634，P=0.006）及伴LOY（HR=3.485，95%CI 1.473~8.249，P=0.006）为影响初诊MM患者PFS的独立危险因素。 结论 LOY对初治MM患者的疗效与预后有重要的临床意义，是不良预后的独立危险因素，或可成为新型的临床评估指标。

采用单克隆抗体血清试管凝集法对该患者ABO血型及Rh抗原表型进行鉴定，同时采用基因测序对Rh抗原缺失情况进行确认。Rh分型盐水法该患者抗D为阳性，抗-E、-C、-c、-e均阴性。抗体筛查盐水法Ⅰ~Ⅲ号细胞均为阴性，凝聚胺和抗人球蛋白实验均阳性，抗体鉴定1~16号谱细胞均阳性，自身为阴性，直接抗球蛋白实验阴性。RhC/E基因测序结果显示，9~10号外显子正常，1~8号外显子缺失。患者因RhC/E基因1~8号外显子缺失，导致该患者Rh抗原E/e、C/c表达的缺失，而患者经过第1次随机配合性输血之后，产生了针对E/e、C/c的抗体，导致其第2次输注红细胞类产品时主侧配型不合，无法输注，针对此类情况，一是建立RhC/E基因缺失稀有血型库；二是在第一次输血时，应尽量输注少量RH抗原红细胞；三是开展储存式自体输血。

近年来，碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌临床分离率不断增加，导致多黏菌素成为治疗多重耐药肺炎克雷伯菌感染的重要防线，但随着多黏菌素的使用增多，其耐药率也逐渐升高。肺炎克雷伯菌多黏菌素耐药机制多种多样，以外膜修饰脂多糖为主。参与这一过程的基因除位于染色体上的双组份系统phoPQ、pmrAB、crrAB及负性调控跨膜蛋白mgrB基因外，质粒携带的移动性多黏菌素耐药基因mcr也能介导外膜修饰。其中，mgrB基因变异对多黏菌素耐药起关键作用。本文主要阐述肺炎克雷伯菌多黏菌素耐药机制，以更好遏制肺炎克雷伯菌多黏菌素耐药发生。

重组聚合酶等温扩增（RPA）技术是新开发的具有高灵敏度、高特异性的等温扩增技术，将RPA与侧流层析试纸条检测（LFS）技术相结合，可快速鉴别目的基因。迄今为止，RPA-LFS技术已广泛运用于医药、食品、植物学等领域。本文将对RPA-LFS技术在病原微生物中的诊断进行综述，为实现病原微生物的即时诊断提供参考。

促炎细胞因子选择性诱导受体细胞的特定信号以调控宿主应答，其异常释放导致的免疫稳态失衡与多种疾病的发生发展密切相关。细胞因子特异检测对疾病诊断和疗效监测具有重要的临床意义。核酸适配体是一种高选择性和高亲和力与目标分子结合的单链寡核苷酸，在炎症性疾病特异标志物检测新方法开发中备受关注。本文综述了近年来电化学和光学适配传感器在检测肿瘤坏死因子α、白细胞介素6、转化生长因子β、干扰素γ和白细胞介素8方面的研究进展；这不仅有助于读者全面了解核酸适配体在炎症关键细胞因子检测中的临床应用潜力及面临的挑战，也可为基于适配体的多细胞因子即时检测传感器的研制及炎症相关疾病诊断新策略的开发提供有意义的参考。

新型冠状病毒引起的新型冠状病毒感染（COVID-19）在全球范围广泛流行，对人类健康和世界经济造成了严重影响。新型冠状病毒是单股正链RNA病毒，可由复制转录复合物的不连续转录产生亚基因组RNA。这种不连续转录由转录调控序列调控，通过切换基因组RNA上的模板产生。目前检测亚基因组RNA的方法主要有二代测序技术、纳米孔测序技术、逆转录液滴数字聚合酶链反应和逆转录实时定量聚合酶链反应技术等。病毒进入感染细胞进行复制时才会产生亚基因组RNA，因此亚基因组RNA是较好的反映病毒复制的标志物。