2022年 · 第45卷第06期

感染性疾病的发生和进展涉及病原体和宿主的免疫反应这两个方面。目前基于病原体的检验是感染性疾病诊断的金标准和最常用的方法。免疫系统的功能是识别和消除入侵的病原体，基于宿主反应的检验已成为传统的基于病原体检验的有效辅助手段，具有提高诊断准确性和效率的潜力。基于宿主的检验与基于病原体的检验的联合应用是一个值得探索的新领域。

儿童中枢神经系统病毒感染有较高的致残、致死率，严重威胁儿童生命健康。鉴于脑脊液中的病原体载量较低和传统检测技术的限制等原因，早期的病原学诊断不够理想。随着多重聚合酶链反应、数字聚合酶链反应、病原体核酸即时检验、宏基因组高通量测序等技术的发展，越来越多的病毒学诊断技术走进临床实验室。本文就儿童中枢神经系统病毒感染的实验室诊断现状及未来的发展方向进行论述。

近年来儿童过敏性疾病的快速增长，临床应采用适当的诊断策略，确定其免疫机制和致病过敏原，以有效治疗和预防过敏性疾病。在此过程中实验室诊断起到至关重要的作用。目前儿童过敏性疾病的实验室诊断主要分为体内试验及体外试验。体内试验主要包含皮肤测试和过敏原激发试验，激发试验是确诊过敏性疾病的“金标准”。体外试验主要包括过敏原特异性免疫球蛋白E（IgE）、辅助型T细胞2（Th2）相关细胞因子和肥大细胞活动标志物等，这些试验可明确机体的过敏状态及其免疫机制，对过敏性疾病的有效治疗，如避免接触过敏原、过敏原特异性免疫治疗和抗IgE治疗等有重要价值。

目的 分析门诊流感样疾病患儿呼吸道病毒感染情况及流行病学特征，为本地区流感样疾病患儿的防治提供依据。 方法 采集2021年7月至2022年3月因流感样疾病在浙江大学医学院附属儿童医院发热门诊就诊患儿的鼻咽拭子标本，采用逆转录聚合酶链反应法（RT-PCR）对6种呼吸道病毒核酸进行检测。收集患儿一般信息（性别和年龄），按性别和年龄（0~<6个月、6~<12个月、1~<3岁、3~<6岁和≥6岁）分组，采用χ²检验对各组间进行统计学分析，探究呼吸道病毒流行规律。 结果 1 609例流感样疾病患儿标本共检出呼吸道病毒739例（45.9%，739/1 609），其中单纯感染检出651例（40.5%，651/1 609），多重感染检出88例（5.5%，88/1 609）。呼吸道合胞病毒（RSV）检出率居首位，为18.6%（300/1 609），其次是乙型流感病毒（FluB）为11.9%（192/1 609）、腺病毒（ADV）为8.3%（134/1 609）、副流感病毒3型（PIV-3）为7.6%（123/1 609）、副流感病毒1型（PIV-1）为4.9%（79/1 609）、甲型流感病毒（FluA）为0.4%（6/1 609）。多重感染形式为双重或三重感染，双重感染81例（92.0%，81/88），最常见是ADV+RSV（22.7%，20/88），三重感染7例（8.0%，7/88）。各年龄组间病毒检出率差异有统计学意义（χ²=17.078，P=0.002），以3~<6岁组病毒检出率最高（49.7%，286/575）。单一病毒感染检出中，FluB以≥6岁组患儿检出率最高（26.6%，98/369），RSV 和PIV-1以3~<6岁组患儿检出率最高（20.0%，115/575；5.9%，34/575）；每月病毒总检出率从7月26.8%（37/138）升至次年1月63.0%（58/92），2月和3月下降至46.1%（106/230）和26.8%（37/138）。RSV在8—11月检出率最高，FluB在12月至次年3月检出率最高，ADV在12月和次年1月检出率上升，PIV-3在10—12月检出率上升；PIV-1检出率无明显波动，FluA散在检出。 结论 流感样疾病患儿呼吸道病毒感染以RSV为主，大多数呼吸道病毒以单纯感染形式存在，多重感染以双重感染多见。FluB、RSV 和PIV-1感染呈现一定的年龄分布特征，尤其在3岁以上的患儿感染率更高。呼吸道病毒感染流行特征呈现出夏季到秋冬季逐渐流行达到高峰，春季转而流行下降的特征。RSV在秋季相对流行，FluB在冬春季流行，ADV和PIV-3在冬季不同程度流行，PIV-1则持续低水平流行，FluA未呈现流行特征。

目的 通过一项多中心研究，在全国多个地区招募参考个体，建立中国3 d至6岁儿童外周血降钙素原（PCT）的生物参考区间。 方法 于2020年10月至2021年5月，在全国11个省市的18家医院中招募3 d至6岁表观健康儿童和无特定疾病儿童3 353例，分为3~28 d、29 d~1岁、1~3岁、4~6岁4个年龄组，收集其血清，使用罗氏Cobas e601电化学发光分析仪和诺尔曼NRM411-S7化学发光分析仪对其PCT进行测定，并采集末梢全血，使用诺尔曼NRM411-S7化学发光分析仪测定其末梢血PCT，剔除离群值后通过Man-Whitney U检验和Kruskal-Wallis检验分析性别、年龄和标本类型间差异，不同的分组分别取右侧单侧95%可信区间作为其生物参考区间。 结果 参考人群的外周血PCT水平未检出性别差异，各年龄段的末梢全血与血清PCT水平差异有统计学意义（P<0.01），3~28 d年龄组与其他年龄组间差异有统计学意义。罗氏系统血清PCT 参考区间为：3~28 d，<0.23 μg/L，29 d~6岁，<0.11 μg/L。诺尔曼系统血清PCT 参考区间为：3~28 d，<0.21 μg/L；29 d~1岁，<0.09 μg/L；1~6岁，<0.10 μg/L；末梢全血PCT 参考区间为：3~28 d，<0.26 μg/L；29 d~6岁，<0.15 μg/L。 结论 末梢全血PCT水平分布，静脉血清和末梢全血间均存在有显著性差异；不同年龄组的儿童，尤其是28 d以下组，与其他年龄组之间的PCT水平分布也有显著性差异，故需分别建立其生物参考区间；另外考虑到儿童是高度异质性的群体，不同实验室引用该参考区间前应进行必要的验证。

目的 评估血常规在不同感染类型中的表达差异，以及4种炎症指标C反应蛋白（CRP）、降钙素原（PT）、铁蛋白（SF）、和乳酸脱氢酶（LDH）在细菌性和支原体性肺炎中的诊断价值及在重症病例的预警价值。 方法 收集2018年5月至2019年12月于首都儿科研究所附属儿童医院呼吸内科就诊患儿共627例，包括细菌性肺炎176例；支原体性肺炎275例，病毒性感染176例；正常对照180例；其中支原体肺炎组根据灌洗液RNA结果阴阳性分为轻症组（151例）和重症组（124例）。所有患者入院首日完成血常规检测，细菌组和支原体组患者完成4种炎症指标的测定。不同感染组间血常规结果的差异，以及各炎症指标在细菌组和支原体轻症、重症组间的差异采用Kruskal-Wallis检验分析，利用ROC曲线分析各炎症指标在不同感染组之间的预测价值。 结果 血常规结果白细胞计数、中性粒细胞、淋巴细胞和单核细胞百分比在细菌性肺炎、支原体性肺炎、病毒性感染和正常对照组间的差异均有统计学意义（P<0.05）。4种炎症指标在细菌组、支原体轻症和重症组的差异均有统计学意义（P<0.05）。采用ROC曲线分析CRP、PCT、LDH、SF和白细胞计数5个指标在支原体轻症组和重症组的诊断价值，除白细胞外，其余指标P<0.05［CRP：曲线下面积（AUC）0.799；PCT：AUC 0.579；LDH：AUC 0.651；SF：AUC 0.854］。其中CRP和SF的AUC值较高，诊断临界点处的敏感度和特异度均较高，诊断价值较大（CRP：诊断临界点 12.55 mg/L，敏感度0.719，特异度0.755；SF：诊断临界点 176.02 μg/L，敏感度0.765，特异度0.960）。采用ROC曲线分析PCT、白细胞和中性粒细胞百分比对细菌感染和支原体感染的诊断价值，P值均<0.05（PCT：AUC 0.658；白细胞：AUC 0.804；中性粒细胞：AUC 0.630）。白细胞计数是最优的鉴别指标（诊断临界点 9.585×109/L，敏感度0.778，特异度0.698），PCT在诊断临界点0.55 μg/L处的敏感度较高，但特异度稍低（诊断临界点 0.55 μg/L，敏感度0.862，特异度0.366）。 结论 PCT和白细胞计数可作为鉴别细菌和支原体感染的优选炎症指标，CRP、LDH、PCT和SF均可作为评估支原体重症感染的预警指标。

目的 分析儿童血液感染（BSI）金黄色葡萄球菌（SA）分离株的分子特征、毒力基因及耐药性，以进一步了解血流感染患儿分离SA的分子流行病学特征。 方法 收集2016—2021年上海市儿童医院临床血流感染患者的53株SA，采用仪器法和纸片法检测细菌药物敏感性，采用聚合酶链反应技术检测SA的32种毒力基因；并进行多位点序列分型、葡萄球菌蛋白A（spa）分型及耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）菌株的葡萄球菌盒式染色体（SCCmec）分型。计数资料采用χ²检验或Fisher确切检验进行统计学分析。 结果 53株SA菌株中，MRSA分离率达50.94%（27/53），ST398-t034-SCCmecⅤ（6/27，22.22%）和ST59-t437-SCCmecⅣ（4/27，14.81%）是MRSA分离株最常见的克隆型；甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌（MSSA）分离率达49.06%（26/53），以ST22-t309（3/26，11.54%）和ST7-t091/t1685（各2/26，7.69%）为流行分型。53株SA均携带≥6个毒力基因，33株菌株（62.26%）携带≥10个毒力基因，其中18株MSSA（69.23%）和15株MRSA（55.56%），pvl基因在MSSA的携带率高于MRSA（12/26，33.33%比6/27，22.22%；χ²=3.382，P=0.065），sasX仅在MRSA中检出（4/53，7.55%）。53株SA对青霉素、红霉素和克林霉素耐药率分别为98.11%、49.06%和41.51%，MRSA对常用抗菌药物的耐药率普遍高于MSSA。 结论 儿童血流感染MRSA分离率较高，ST398-t034和ST59-t437是其最常见的克隆型。儿童BSI-SA毒力基因携带率较高，毒力基因pvl在MSSA中的携带率高于MRSA，sasX仅在MRSA中检出。儿童BSI-SA的耐药现状及毒力基因特征应引起临床重视。

目的 建立儿童干扰素刺激基因（ISG）表达检测方法，确立参考值范围，初步探讨其临床应用价值。 方法 纳入2017年11月至2021年9月就诊于北京协和医院儿科的Ⅰ型干扰素病患者作为疾病组，同时纳入健康儿童作为对照组。疾病组共纳入18例患儿，其中男性8例，女性10例，共采集血液样本25份，首次检测的中位年龄为8.5岁。对照组共纳入28名健康儿童，年龄1~18岁，中位年龄10.5岁，其中男性15名，女性13名。分别提取疾病组和对照组外周血总RNA并逆转录为互补DNA（cDNA）。以β肌动蛋白基因（β-Actin）和鸟氨酸脱羧酶抗酶基因（OAZ）为内参，采用实时荧光定量聚合酶链反应（qPCR）检测干扰素诱导的四肽重复蛋白1基因（IFIT1）、干扰素α诱导蛋白27基因（IFI27）、干扰素诱导蛋白44样基因（IFI44L）、干扰素刺激基因15（ISG15）、唾液酸结合的免疫球蛋白样凝集素1基因（SIGLEC1）、含有S-腺苷甲硫氨酸结构域2基因（RSAD2）的相对表达量，以6个ISG的中值为干扰素评分（IS）。去除正常对照中表达明显异常的样本，将其他样本的cDNA混合作为参照，重新检测各样本并计算IS，将大于对照x¯+2s的IS结果判断为异常。用独立样本t检验或Mann-Whitney U检验比较组内和组间IS的差异。 结果 对照组IS均值为1.046，标准差0.755，IS截断值为2.556。18例Ⅰ型干扰素病患者组IS异常的有15例（15/18），IS均值为27.010。与对照组相比，干扰素疾病患者组IS明显升高（t=4.247，P=0.000 1）。该检测方法的准确度为91.30%（42/46），精密度为7.47%（0.084/1.124），敏感度为15/18，特异度为96.43%（27/28）。 结论 本研究通过ISG表达的检测并计算IS，为临床筛查以及动态监测Ⅰ型干扰素疾病变化提供了新的可靠的手段。

目的 分析经细菌培养及实时荧光聚合酶链反应（RT-PCR）检测确诊的百日咳病例临床特征，探讨2种实验方法在百日咳诊断中的临床应用价值。 方法 收集河北省儿童医院于2019年4月至2020年1月送检的165例百日咳疑似患儿的双侧鼻咽拭子标本和临床信息，对其鼻咽拭子进行百日咳鲍特菌培养及RT-PCR检测，采用χ²检验对以上2种检测方法确诊的百日咳病例进行统计学分析。 结果 以临床诊断为标准，细菌培养和RT-PCR诊断百日咳的敏感度分别为61.70%（58/94）和86.17%（81/94），特异度分别为92.96%（66/71）和71.83%（51/71）。RT-PCR在各个年龄段、季节和不同咳嗽病程患儿中的检出率均高于细菌培养。分别经细菌培养和RT-PCR检测确诊的百日咳患儿其年龄、季节和咳嗽病程分布基本相似，均以≤3月龄最多，夏秋季呈现高发趋势，患儿咳嗽病程大多位于15~21 d。不同年龄段之间的培养阳性率差异有统计学意义（χ²=11.929，P=0.036）：>3岁患儿的细菌培养阳性率最高，为51.85%（14/27），其次为≤3月龄48.72%（19/39），>6~12月龄患儿阳性率最低15.00%（3/20）。不同咳嗽病程患儿间的培养阳性率也具有统计学意义（χ²=9.841，P=0.020）：咳嗽病程位于15~21 d的患儿细菌培养阳性率最高，达到了49.23%（32/65），8~14 d次之为43.59%（17/39），咳嗽病程≤7 d的患儿培养阳性率最低，为22.86%（8/35）。 结论 细菌培养与RT-PCR检测百日咳相比，其敏感度较低、特异度较高。这2种检测方法各具优势和局限性，各级医疗机构应对不同的实验室检测方法进行综合分析，二者结合，方能有效地提高诊断价值及诊断水平。

目的 探索将微流控芯片用于遗传性耳聋基因热点突变的分型检测。 方法 将专门设计加工的微流控芯片与KASP扩增整合，借助激光共聚焦荧光扫描仪实现遗传性耳聋常见4个相关基因的23个热点突变分型检测，采集276例（听障组：成都市2019年出生并诊断为听力损失的131例新生儿；对照组：成都市2020年出生且听力筛查结果为双耳通过的145例新生儿）新生儿的足跟血斑样品验证其结果准确性和临床应用可行性。 结果 微流控芯片通过聚类分析对全部质控品均实现准确分型，其最低检测限可达1 mg/L。276例新生儿血斑样品的微流控芯片分型结果全部通过复核确认。听障组131例新生儿，检出66例阳性携带者，阳性携带率50.4%；对照组145例新生儿，检出40例阳性携带者，阳性携带率27.6%。其中携带率最高的突变热点为GJB2基因c.109G>A，在听障组和对照组中阳性携带率分别为46.6%（61/131）和23.4%（34/145）。 结论 微流控芯片可用于遗传性耳聋相关热点突变的分型检测，具有准确性高、防污染能力强、操作简单、用时短等优势，能更好地满足新生儿耳聋基因筛查等遗传性耳聋基因检测需求。

目的 深入调研全国二级及三级医院急诊检验现状和发展需求。 方法 2021年2月1日至3月1日，采用网络问卷调研方法，调研全国31个省、直辖市、自治区的二级及三级医院。调研内容涉及急诊检验的场地、人员与设备配置、开展的检测项目、检测周转时间（TAT）、试剂耗材管理、分析前质量管理、信息化管理、危急值管理、生物安全等各个方面。 结果 本次调研共收集到2 187份调研问卷，剔除部分不合格问卷，得到有效问卷1 503份，其中二级医院755份，三级医院748份。29.41%（220/748）的三级医院日均急诊患者量超过300人次，而76.69%（579/755）的二级医院日均急诊患者量不足100人次；24.47%（183/748）的三级医院日均急诊检验测试量超过5 000个，93.51%（706/755）的二级医院日均急诊测试量不足2 000个；在设置有独立急诊检验单元的医院中，68.79%（238/346）的三级医院急诊检验单元面积在100 m2以下；总计56.02%（842/1 503）的医院急诊检验无固定工作人员；8.65%（130/1 503）的医院急诊检验生化免疫设备无加急通道；8.38%（126/1 503）的医院急诊检验无试剂耗材出入库记录；24.62%（370/1 503）的医院急诊检验未定期进行不合格标本统计工作；58.62%（881/1 503）的医院急诊检验未设置急诊检验标本的优先级；48.64%（731/1 503）的医院急诊检验没有监测标本全流程的功能；7.32%（110/1 503）的医院急诊检验未就危急值相关问题与临床进行沟通；50.23%（755/1 503）的急诊检验参研者表示目前实验室不存在生物安全风险。 结论 调研较客观地呈现了我国急诊检验现状和发展需求，也反映出在临床沟通、场地和人员配置、急诊标本分级、试剂耗材管理、信息化建设、生物安全管理等方面尚有很多需重点改进的流程或理念，应得到管理者较广泛的关注。

目的 从分子层面分析石家庄新型冠状病毒的流行病学特征，揭示此次传播链的源头，为新型冠状病毒肺炎疫情防控提供科学依据。 方法 收集2021年1月2—8日来自石家庄市第五医院170例新型冠状病毒感染者共计404份新型冠状病毒核酸阳性样本，采用多重聚合酶链反应靶向测序技术对样本进行深度测序获得病毒一致性序列。采用PANGOLIN分类系统对170个毒株序列进行分析，采用T-test对数据进行统计学分析。 结果 在404份新型冠状病毒核酸阳性样本中，356份获得病毒的全长基因组序列（>95%，100×测序深度），剔除重复取样，得到170株全基因组序列，所有样本均属于B.1.1分支。病毒突变数18~22个，大部分突变不改变氨基酸信息。根据基因组突变个数和种类，所有毒株分为48个亚型，其中2个毒株占主导（分别为66株和31株）。 结论 本研究中所有新型冠状病毒肺炎患者来自单一源头的境外输入性病例，病毒在社区隐匿传播了一段时间，并且在传播的过程中发生了变异。

目的 明确铁载体毒力基因entB对碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌（CRKP）毒力的影响。 方法 从昆明医科大学第一附属医院收集到的30株CRKP菌株中筛选出CRKP-27作为实验菌株，规律间隔成簇短回文重复序列（CRISPR）-Cas9基因敲除技术构建entB基因缺失株ΔentB、回补株C-ΔentB，并通过PCR验证敲除及回补是否成功。观察CRKP-27、ΔentB、C-ΔentB菌株的菌落形态并进行拉丝试验，初步了解entB对CRKP菌落形态和毒力表型的影响。绘制菌株生长曲线，测定entB对CRKP菌株生长的影响。铬天青S（CAS）检测液对菌株产铁载体能力进行定量检测。建立小鼠腹腔感染模型，观察小鼠生存率直观了解entB基因对CRKP毒力的影响。计量资料均采用平均数±标准差表示，服从正态分布的数据采用方差分析进行组间比较，不服从正态分布的数据采用Kruskal-Wallis秩和检验。小鼠生存分析用Log-Rank检验进行比较。P<0.05表示差异具有统计学意义。 结果 PCR结果显示缺失株和回补株构建成功。entB基因对CRKP的菌落形态、荚膜和毒力表型无明显影响。ΔentB组的生长速度明显快于CRKP-27组（P=0.008）和C-ΔentB组（P=0.001），说明entB基因削弱了CRKP菌株的生长能力。entB组与CRKP-27组（P=0.001）和C-ΔentB组（P=0.001）相比铁载体产量明显下降，分别下降11.739 3%和11.964 2%，说明entB基因显著增加了CRKP产铁载体能力。动物实验中，与CRKP-27组（P=0.023）和C-ΔentB组（P=0.024）相比，ΔentB组小鼠生存率明显增高，说明entB基因增加了CRKP菌株的毒力。 结论 铁载体毒力基因entB明显减弱了菌株的生长能力，但使CRKP产铁载体能力、毒力明显增强。

细胞外囊泡（EV）是包含蛋白质、脂质、核酸的膜结构囊泡。病毒感染细胞产生的EV，参与感染细胞和未感染细胞之间的通讯。人巨细胞病毒（HCMV）感染细胞产生的EV通过胞间传递，既可促进HCMV的传播和感染、逃避宿主免疫应答，又可激活机体免疫应答抗HCMV感染。深入研究HCMV感染细胞产生EV的机制及其成分变化，将为HCMV感染的诊断和防治提供新思路。目前相关研究已取得一些成果，但还不够深入。未来EV分离和鉴定技术的进步及经济成本的降低将有助于研究的广泛开展和应用。