2022年 · 第45卷第04期

目的 分析新型冠状病毒Omicron变异株实验室检测方法和临床特征，实现新型冠状病毒变异株快速鉴别和诊断。 方法 应用荧光聚合酶链反应（PCR）法对长沙市第一医院2021年12月16日至2022年1月5日境外输入的80例核酸检测者进行新型冠状病毒核酸和突变基因检测，同时做全基因组测序验证，并收集其中鉴定为Omicron突变类型的22份样本患者的临床特征数据。 结果 荧光PCR法检出Omicron变异株的特异度达100%（58/58），阳性预测值达100%（21/21），敏感度为95.5%（21/22），阴性预测值为98.3%（58/59）。测序验证发现Omicron变异株病毒基因组约存在45~50个核苷酸突变位点，S基因上约存在25~30个氨基酸突变位点。临床资料显示临床分型以轻型（59.1%，13/22）为主，无重型和危重型，临床分型与年龄呈正相关（ρ=0.698，P<0.001），临床分型与基础疾病呈正相关（ρ=0.636，P<0.001）。 结论 Omicron感染者临床分型以轻型为主，年龄和基础疾病与临床分型呈正相关，早期可有AST/ALT升高。通过荧光PCR检测技术可实现对新型冠状病毒Omicron变异株的快速筛查。

糖基化是蛋白质翻译后修饰的重要形式之一，糖蛋白的糖链在细胞识别、细胞间信号传递、细胞迁移、增殖及分化中均具有重要作用，唾液酸化、岩藻糖基化及糖链分支程度与肿瘤、自身免疫性疾病等发生发展密切相关，聚糖和异常糖基化糖蛋白为疾病发生发展提供了新型生物标志物和干预靶标，并已经成为临床诊断与治疗的研究热点。

蛋白质糖基化修饰的变化与癌症和其他疾病密切相关，也成为挖掘肿瘤等疾病诊疗标志物的有效手段。定量技术的精准是揭示糖组奥秘的关键前提，糖链疾病标志物的筛选和验证离不开对临床大样本的研究，因此糖组学研究和应用技术应简便、快速、高通量、准确和实用。本文对一些常用糖组分析技术特点及其在糖链标志物中的应用研究进行了简要论述，重点阐述了基于基质辅助激光解吸离子化飞行时间质谱的高通量精准糖组定量方法的特点、进展和应用。

血小板表面具有丰富的糖萼，血小板糖基化在生理止血机制中发挥重要作用，调节血小板与受体蛋白相互作用，并通过自身糖代谢系统动态重塑表面糖基化。血小板糖基化还参与了血小板衰老与清除，调节血小板数量；同时血小板糖基化异常与原发性免疫性血小板减少症、冠心病以及相关疾病密切相关，是潜在的抗血小板治疗靶点。

糖基化修饰是免疫球蛋白G（IgG）结构和功能的一部分，唾液酸位于IgG N-糖链的最末端，通过调节IgG与可结晶片段γ受体及补体的结合而调控IgG抗炎和促炎活性，与自身免疫疾病的发生发展及转归密切相关，在疾病诊断、监测及治疗领域都显示出了巨大潜能，有望成为自身免疫疾病新型标志物和治疗靶点。

原发性肝癌是我国第4位常见恶性肿瘤及第2位肿瘤致死病因，研发新型生物标志物应用于肝癌患者的早诊早治对于提高生存率十分重要。目前临床上常见的肿瘤标志物大多是糖蛋白质，组学技术对于探索糖蛋白质在肝癌中的临床诊断价值具有重要作用。本文基于肿瘤临床诊断中的糖蛋白质标志物，分析了其诊断方法、问题与挑战；介绍针对糖蛋白质研究的相关技术，包括高通量组学和单一糖蛋白质检测方法，以及基于这些技术发现肝癌潜在的糖蛋白质标志物；并且展望糖蛋白质在肝癌临床诊断中的潜力与应用价值。

晚期糖基化终末产物（AGE）在体内的浓度及蓄积速度与糖代谢性疾病高度相关，因此AGE的临床检测对该类疾病的早期诊断及疾病预后评估具有重要意义。然而由于其结构复杂、糖基化位点多样以及现有检测方法的局限性，尚缺乏可广泛用于临床的检测方法。该文从AGE的结构与分类、临床检测价值等方面，阐述目前各种检测方法的现状，并对各种检测方法的不足及面临的挑战进行了展望。

综合医院结核分枝杆菌感染（结核病）的病原学诊断一直是业界焦点。编写组专家对综合医院结核分枝杆菌感染（结核病）的微生物学检查进行了讨论，撰写了专家共识，并对一些关键问题给出了推荐。本文包括涂片、培养、药敏试验等技术内容，希望能为临床处置、实验室工作提供合理、实用的帮助。

真空采血管质量直接影响临床检验结果，对真空采血管进行性能评估是保证其质量的重要措施。为确保真空采血管满足临床检验要求，中华医学会检验医学分会组织专家制定了该共识，着重阐述了真空采血管性能评估的必要性、评估原则、评估内容和评估方法，旨在为医学实验室提供真空采血管性能评估标准和技术细则，进一步提升我国实验室检验质量。

目的 建立检测唾液酸化胎球蛋白A（Sia-fetuin A）的凝集素-酶联免疫吸附试验方法（lectin-ELISA），探讨其在原发性肝细胞癌（HCC）中的诊断价值。 方法 收集2017至2020年于上海东方肝胆外科医院就诊的HCC患者300例，疾病对照160例（包括肝硬化亚组36例、慢性乙型肝炎亚组124例），另同期收集健康体检者100名作为健康对照。根据接骨木凝集素（SNA）可与糖链末端α-2，6-半乳糖的唾液酸结合原理构建lectin-ELISA方法，检测各组血清Sia-fetuin A水平，以450 nm处吸光度值表示。采用logistic回归方法建立多指标联合检测模型，采用受试者工作特征曲线（ROC）评估单项指标及联合检测模型诊断HCC效能。 结果 建立了检测血清Sia-fetuin A的lectin-ELISA实验方法，其线性回归系数为0.978 5，精密度评估及干扰实验均符合临床检测要求。采用该方法检测各组血清Sia-fetuin A水平，HCC组、疾病对照组和健康对照组分别为1.362±0.310、1.199±0.370、1.086±0.420，3组之间依次降低。Sia-fetuin A、AFP和二者联合检测模型鉴别诊断HCC的曲线下面积分别为0.790、0.809和0.860，诊断模型敏感度79.3%（238/300），特异度95.0%（247/260）。HCC组300例患者中138例（46%）患者血清AFP为阴性（<20 μg/L），其血清Sia-fetuin A水平为1.364±0.305。将疾病对照组与健康对照组合并为非患癌组，其血清Sia-fetuin A水平为1.146±0.381。AFP阴性HCC患者血清Sia-fetuin A水平高于非患癌患者（t=6.134，P<0.001）。Sia-fetuin A与联合诊断模型诊断AFP阴性HCC的曲线下面积分别为0.776、0.919，联合诊断模型敏感度93.4%（129/138），特异度77.3%（201/260）。 结论 血清Sia-fetuin A及其联合检测模型可为AFP阴性HCC患者提供新的辅助诊断指标。

目的 分析血清IgG N-糖链与胃癌Lauren分型的相关性。 方法 对2017—2018年于复旦大学中山医院进行治疗的17例弥漫型和21例肠型胃癌患者进行回顾性分析。汇总并统计一般资料和临床特征。采用超高效液相色谱法定量检测血清免疫球蛋白G（IgG）N-糖链含量，比较血清IgG N-糖链在肠型与弥漫型胃癌之间的差异，并采用Logistic回归分析评估血清IgG N-糖链与Lauren分型的相关性。 结果 IgG N-糖链分析包括27个直接检测到的糖链和4个糖链衍生性状。H为己糖，N为乙酰葡萄糖胺，F为岩藻糖，S为唾液酸。不同化疗方案之间的IgG N-糖链差异均无统计学意义。与肠型胃癌患者相比，弥漫型胃癌患者血清中H3N3F1（t=3.785，P=0.001）、H3N4（t=3.919，P=0.002）、H3N4F1（t=2.770，P=0.005）、H3N5F1（t=2.888，P=0.010）较少；H4N4F1（6）（t=‒3.488，P<0.001）、H5N4F1（t=‒3.401，P=0.003）、H5N5F1（t=‒2.303，P=0.023）、H5N4F1S1（t=‒3.068，P=0.008）较多。H3N3F1（OR：1.20，P=0.008）、H3N4（OR：1.32，P=0.005）、H3N4F1（OR：1.13，P=0.017）、H3N5F1（OR：1.78，P=0.015）、H4N4F1（6）（OR：0.43，P=0.008）、H5N4F1（OR：0.74，P=0.008）、H5N5F1（OR：0.32，P=0.036）、H5N4F1S1（OR：0.48，P=0.009）与Lauren分型显著相关。唾液酸化（t=‒2.717，P=0.012）和半乳糖化（t=‒3.400，P=0.001）的IgG N-糖链在肠型胃癌患者血清中较少。半乳糖化（OR：0.87，P=0.007）和唾液酸化（OR：0.62，P=0.015）与Lauren分型显著相关。 结论 部分IgG N-糖链与胃癌Lauren分型具有显著相关性，可作为辅助Lauren分型的潜在生物标志物。

目的 探讨非高发区人群血浆EB病毒（EBV）DNA检测对鼻咽癌筛查的价值及临床应用。 方法 回顾性分析2015年11月至2020年7月就诊于四川省肿瘤医院的1 153例初治鼻咽癌和244例性别年龄相匹配的健康正常人血浆EBV DNA检测结果。用实时荧光定量PCR法检测EBV DNA。分别以400拷贝/ml为临界值判断（≥400拷贝/ml判定为阳性）和优化临界值方法（将有S型扩增者均判定为阳性）统计EBV DNA阳性率。比较不同临床分期、TNM分期的患者血浆中EBV DNA拷贝数分布特征，采用受试者工作特征（ROC）曲线分析2种临界值判定方法对鼻咽癌的诊断价值。 结果 初治鼻咽癌组血浆EBV DNA明显高于正常对照组（P<0.001）；鼻咽癌不同TNM分期患者血浆EBV DNA水平比较，差异有统计学意义（P<0.001）。2种临界值判定方法均显示，TNM及临床分期越晚，EBV DNA阳性率有升高趋势（P均<0.001）。以400拷贝/ml作为临界值，血浆EBV DNA对鼻咽癌诊断的敏感度为40.9%，特异度为100%，曲线下面积为0.704（95%CI 0.676~0.733，P<0.001）。使用优化临界值方法，敏感度增加至82.0%，特异度为99.2%，曲线下面积为0.910（95%CI 0.894~0.924，P<0.001）。 结论 在鼻咽癌非高发区，血浆EBV DNA以400拷贝/ml为检出下限，鼻咽癌诊断的敏感度仅为40.9%，可考虑优化核酸提取方法，从检测技术上落实临界值的优化，在保证诊断特异度的基础上提高诊断的敏感度。

目的 建立尿液细胞颗粒计数候选参考测量程序，并应用于全自动尿液有形成分分析仪的多中心性能评估。 方法 方法学建立。依据尿液细胞颗粒计数人工镜检方法和国际实验血液学学会发布的尿液颗粒计数参考方法，建立了基于未离心尿液细胞颗粒计数的候选参考测量程序。4家三甲医院检验科，每家3位经过培训的技师应用该程序，分别检测同1份标本，每份标本重复计数5次，得到尿液细胞颗粒计数的定量结果。4家医院分别使用建立的候选参考测量程序和全自动尿液有形成分分析仪检测本单位2020年9月至2021年1月尿液标本40~60份，对建立的参考测量程序进行应用评估，并对全自动尿液分析仪细胞计数结果的准确性和一致性进行性能评估。 结果 每家医院3位技师采用候选参考测量程序获得的检测结果变异系数符合要求（红细胞≤6.98%，白细胞≤6.99%，上皮细胞≤13.94%）。全自动尿液有形成分分析仪性能评估结果显示红细胞、白细胞、上皮细胞检测结果正确度符合要求（偏倚≤4.98%），与参考测量程序的检测结果一致性良好（R2≥0.989）。 结论 成功建立了尿液细胞颗粒计数候选参考测量程序，精密度和准确性符合要求；应用该程序对全自动尿液有形成分分析仪进行了多中心性能评估，准确性和一致性良好。

目的 研究磁珠法、离心柱法及一步法对新型冠状病毒（2019-nCoV）核酸提取效率的差异。 方法 2021年3月5日，在南京大学医学院附属泰康仙林鼓楼医院核酸采样室采集本科室员工咽拭子标本10份，将阳性质控品混入其中，作为模拟阳性标本。用磁珠法、离心柱法及一步法分别提取模拟阳性样本及其稀释样本RNA、人源性标本及其稀释样本RNA，用微量紫外分光光度计测量核酸的纯度（A260/A280比值）及浓度，并进行荧光定量PCR扩增实验，比较其循环阈值（CT）和提取效率。用3种方法提取模拟弱阳性标本，比较其扩增后的CT值差异。服从正态分布的计量资料以x¯±s表示，组间比较采用t检验，多组间比较采用单因素方差分析。 结果 磁珠法、离心柱法、一步法提取的2019-nCoV核酸均能扩增出阳性结果。磁珠法与一步法提取的RNA扩增CT值差异无统计学意义（t=‒0.995，P=0.376）。离心柱法提取的RNA较另外2种方法提取的RNA扩增后CT值小，离心柱法、磁珠法、一步法提取的模拟阳性样本扩增后ORF1ab基因的CT值分别为29.28±0.06、30.82±0.14、29.79±0.01，差异有统计学意义（F=11.196，P=0.041）；E基因的CT值分别为28.52±0.40、27.33±0.78、27.38±0.13，差异有统计学意义（F=3.407，P=0.169）；N基因的CT值分别为28.61±1.02、27.24±0.20、27.25±0.47，差异有统计学意义（F=2.880，P=0.020）；离心柱法、磁珠法、一步法提取的人源性标本扩增后人源基因CT值分别为19.68±0.36、20.14±0.06和20.58±0.49，差异有统计学意义（F=4.904，P=0.048）。人源性标本稀释2倍即对扩增人源基因CT值有影响，未稀释标本较稀释2倍标本CT值较小，相差2.95±0.22，差异有统计学意义（t=‒3.025，P=0.039）。一步法、磁珠法、离心柱法提取时间分别为（15.00±1.50）、（20.00±1.50）和（40.00±5.5）min，差异有统计学意义（F=688，P=0.027）。 结论 磁珠法、离心柱法及一步法均可用于2019-nCoV核酸提取，离心柱法提取效率较磁珠法及一步法高。

分析临床1例脑梗死患者体温达38.4 ℃时外周静脉血及导管血检出的长孢洛德酵母菌的生物学特性，观察科玛嘉念珠菌显色平板的菌落形态和醋酸钠培养基上子囊孢子的产生情况，利用Vitek 2 compact、基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）、测序分析分别进行鉴定，并进行药敏试验研究，以提高实验室对该菌的鉴定水平。药敏试验结果显示此例分离株对多种抗真菌药物的MIC值较低。临床给予拔除中心静脉置管，并使用抗真菌药物治疗至最后一次血培养阳性后2周，用药期间多次复查血培养均为阴性，患者无发热，各项感染指标基本降至正常，可供临床参考。

乙型肝炎病毒（HBV）前-S/S区基因可编码产生外膜大蛋白、中蛋白及小蛋白，不同蛋白表达水平及其构成比对于HBV感染的诊断、治疗及转归均具有一定影响。厘清外膜大蛋白、中蛋白及小蛋白作为血清标志物的作用，探明其在HBV感染诊治中的价值具有重要意义。本文就HBV 3种外膜蛋白的表达情况、检测方法及临床意义作一综述。

系统性红斑狼疮（SLE）是一种以产生大量自身抗体为特征并累及多器官多系统的自身免疫性疾病。巨噬细胞的极化不平衡及异常活化与SLE的发生和发展密切相关，其中M1型巨噬细胞在SLE的发病机制中发挥了促炎作用。SLE患者免疫微环境的改变促进巨噬细胞发生代谢重编程，其糖代谢、脂代谢及氨基酸代谢等发生改变，导致中间代谢产物积累，后者作为炎症信号分子加重炎症反应，引起一系列并发症。因此，充分了解SLE中巨噬细胞的代谢过程有助于阐述SLE的发病机制以及为靶向巨噬细胞治疗奠定基础。

艰难拟梭菌是一种普遍存在于人体肠道中的条件致病菌。当机体在各种诱因下出现菌群失调时，艰难拟梭菌可通过释放其特有的毒素而诱发肠道炎症反应，使患者出现从单纯的腹泻到致命的感染性休克等多种轻重不等的临床症状。近几年，我国多地陆续从患者的粪便样本中检测到BI/NAP1/027型艰难拟梭菌。该型菌株能产生更高水平的毒素和更难杀灭的芽孢，一旦暴发传播，将给全球公共卫生安全带来巨大的威胁和挑战。结合目前国内外已有的研究成果和病例报道，对BI/NAP1/027型高产毒艰难拟梭菌的流行病学特征、毒力与致病机制、分子诊断技术和治疗方式等进行归纳总结，并展望了领域内未来的研究热点和努力方向，并为日后更深入地解析其致病机制和更科学地拟定其防治方案提供了理论依据。

pks基因岛是编码非核糖体肽合成酶（NRPS）、聚酮合成酶（PKS）和NRPS/PKS杂合酶的基因组岛。pks基因岛主要存在于肠杆菌科细菌中，最常存在于B2群大肠埃希菌中，并常与其他毒力因子共存。pks+大肠埃希菌能合成基因毒素colibactin，诱导细胞中的DNA双链断裂和染色体不稳定，导致细胞衰老或死亡。因此，pks+大肠埃希菌与结直肠肿瘤、脑膜炎、败血症等疾病的发生密切相关。流行病学研究也证实了pks+大肠埃希菌与多种疾病相关。除了基因毒性外，pks+大肠埃希菌也具有抗炎、镇痛和抗菌等积极作用。因此，pks+大肠埃希菌具有复杂的生物学作用。然而，pks+大肠埃希菌致病机制仍未完全清晰。本文描述了pks基因岛的概况及其在肠杆菌科细菌中的流行情况，并对pks+大肠埃希菌的生物学作用进行了概述，以期为进一步研究提供参考。

重组酶聚合酶扩增（RPA）技术是一种新型核酸恒温扩增检测技术。该技术可以在37~42 ℃条件下实现待测靶标的快速检测。它具有反应灵敏度高、特异性强、对仪器依赖程度低且可整合多种检测模式等优点，特别适用于基层和现场即时检测。本文从RPA技术的基础理论和实验要点出发概述了开展该项研究需要注意的要点，综述了RPA技术在医学检验领域的应用现状和相关问题，并展望了其未来发展的广泛前景。

多重核酸检测技术具有可同时检测多个靶标、高通量、低成本等优势，满足大规模筛查、定量等检测需求。多重聚合酶链反应广泛应用于病原体、甲基化DNA和突变基因检测以及单核苷酸多态性分型；重组聚合酶扩增、环介导等温扩增等等温扩增技术在即时检测领域有很好的前景；基于规律间隔成簇短回文重复序列（CRISPR）/CRISPR相关蛋白（Cas）系统的多重核酸检测技术因其高灵敏度、高特异性成为新的研究热点；而宏基因测序在新发病原体突变监测和肿瘤学研究等领域发挥主导作用。本文对各种多核酸检测技术的临床应用现状及未来发展方向进行论述。