2021年 · 第44卷第12期

流式细胞术（FCM）在临床诊断和免疫功能评价中占据极其重要的位置。近年来随着仪器和抗体、免疫、诊疗技术的进步，FCM的临床应用也越来越广泛。《中华检验医学杂志》组织“流式细胞术在造血和淋巴组织肿瘤治疗中应用”专题报道，多篇文章分别涵盖FCM在急性白血病免疫表型中应用、检测微小残留病、淋巴瘤诊断与随访中的应用、移植后并发症研究中的应用、免疫功能与移植后免疫重建的研究、质量控制等方面，以期促进FCM的规范化和进一步发展。

流式细胞术白血病免疫分型是目前急性白血病诊断与分型的主要方法。2016年修订的《造血与淋巴组织肿瘤分类》对评估急性白血病的诊断手段进行了改进。国内将这些有关急性白血病免疫分型的进展全面、规范化的运用到日常工作中尚存在难点和困惑，亟待剖析和提出解决策略。

流式细胞分析的临床应用日益广泛。由于流式细胞分析强大的用户自定义功能、不同原理的仪器配置差异，加之缺乏标准品等诸多因素，导致结果可比性有待提高。因此，流式细胞分析面临规范化和标准化这一巨大挑战。规范操作过程包括标本染色和离心的规范化、合理选择抗体和组合、标准化仪器检测以及数据分析等将极大促进流式细胞分析的规范化和标准化工作进展。

外泌体是细胞主动向胞外分泌的纳米级双层膜结构囊泡，携带大量生物活性物质，可作为载体在细胞间发挥物质传递和信息交流的作用。近年来，外泌体已成为生物医学研究的前沿热点，在疾病实验室诊断和临床治疗领域显示出广阔的应用前景。但总体来说，大部分外泌体相关研究尚处于实验室研究阶段，其分离富集、技术操作规范和质量控制等方面仍存在许多问题和挑战，同时亟需开展多中心、大样本临床试验，为外泌体真正从实验室走向临床应用提供证据。

流式细胞术是急性白血病系别判断和疾病诊断的重要工具，多种因素导致室间差异大，准确诊断困难。中国中西医结合学会检验医学专业委员会制定的本共识中，精确定义了抗原表达率与表达强度，将免疫标志分为基本标志和可选标志，针对不同疾病提出检测标志和可供选择方案，并对现有诊断标准作出客观评价，数据分析过程注意精确设门、正确选择内对照、准确描述肿瘤细胞的比例和抗原表达，建议报告包括文字描述与彩色图片，最后，本共识强调，作为急性白血病综合诊断的一部分，免疫分型的主要任务是识别不典型病例，找出弱势克隆，作出客观评价。

目的 探讨异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）患者移植回输物中各淋巴细胞亚群细胞数或百分比与移植并发非感染性肺部并发症（NIPC）的相关性。 方法 收集2013年1月至2019年12月河北燕达陆道培医院收治的allo-HSCT后发生NIPC的15岁以下的患儿，采用流式细胞技术检测移植物中各淋巴细胞亚群计数并结合患者回输方案，采用二元Logistic回归分析回输移植物各亚群淋巴细胞（每公斤体重）或百分比与allo-HSCT并发NIPC患者疾病进展的相关性，炎性免疫细胞的聚积与疾病的进展一致。 结果 2 026例接受HSCT治疗的儿童，59例（2.9%）患者出现NIPC，28例（1.4%）进展为相关气漏综合征（ALS）。NIPC进展为ALS组（ALS组）和未进展为ALS组（非ALS组）在患者年龄（P=0.028）、移植前疾病状态（P=0.022）、NIPC发生距离移植时间（P=0.004）差异均有统计学意义。两组患者回输细胞中骨髓自然杀伤细胞样T细胞（NKT-like）占淋巴细胞百分比（P=0.008）、外周干NKT-like细胞占淋巴细胞百分比（P=0.003）、骨髓CD4+CD25+dim T细胞占CD4+T淋巴细胞百分比（P=0.029）、外周干CD4+CD25+dim T细胞占CD4+T淋巴细胞百分比（P=0.036）、骨髓CD4/CD8比值（P=0.004）、外周干CD4/CD8比值（P=0.020）比较，差异均有统计学意义。移植物各淋巴细胞亚群数（每公斤体重）或百分比与疾病进展类型的二元Logistic回归模型中，骨髓NKT-like细胞占淋巴细胞百分比（OR=2.364）、骨髓CD4+/CD8+比值（OR=1.116）及外周干细胞采集物中自然杀伤细胞（NK）占淋巴细胞百分比（OR=1.326）为NIPC进展的危险因素（P均<0.05）。NIPC进展的影响因素分析的ROC曲线下面积为0.918（P<0.001），截断值为0.822，敏感度为0.893，特异度为0.929。 结论 allo-HSCT移植时，移植物高比例的炎性细胞NKT-like细胞、NK细胞水平，及较高的CD4+/CD8+比值与NIPC患者疾病进展相关。移植前检测移植物细胞亚群有利于对移植后GVHD发生进行预判，并对患者重点监护及时对治，为临床预防GVHD发生提供一定依据。

目的 评估流式细胞术（FCM）外周血筛查单克隆B细胞和/或浆细胞（MC B/P）用于诊断EB病毒（EBV）相关移植后淋巴细胞增殖性疾病（PTLD）的初步应用价值。 方法 回顾性分析2018年至2019年在陆道培医院进行异基因造血干细胞移植（allo-SCT）后发热、淋巴结大的481例患者的移植后天数、病毒载量（EBV、人类巨细胞病毒）和FCM MC B/P检测等结果，评估MC B/P诊断PTLD的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值等性能。通过logistic回归分析EBV相关PTLD的临床影响因素。中位随访时间为449（184，700）d。 结果 经临床确诊为PTLD的患者51例。FCM检测外周血MC B/P阳性的患者55例。外周血MC B/P筛查PTLD的敏感度80.39%，特异度96.74%，阳性预测值74.55%，阴性预测值97.65%。淋巴结肿大，年龄、EBV、人类巨细胞病毒，单克隆B细胞以及单克隆浆细胞，在EBV相关PTLD阴性组与阳性组差异有统计学意义（P<0.05）。通过logistic回归分析，单克隆B细胞、单克隆浆细胞和移植后发生PTLD的天数与EBV相关PTLD密切相关（P<0.05，AUC=0.853）。 结论 FCM进行外周血MC B/P筛查对EBV相关PTLD具有良好的诊断性能。单克隆B细胞、单克隆浆细胞和移植后发生PTLD的天数与EBV相关PTLD具有相关性。

目的 观察外周血干细胞移植与非血缘脐带血移植术后免疫重建差异。 方法 将2018年1月至2020年3月期间在中国科学技术大学附属第一医院恶性血液疾病并接受异基因造血干细胞移植患者共300例［年龄18（8，33）岁，男163例，女137例］，其中行脐带血移植255例，外周血干细胞移植45例纳入此次研究。运用多色流式检测非血缘脐带血移植物、外周血干细胞移植物以及患者接受造血干细胞移植后外周血中淋巴细胞各类亚群，比较患者术前2种移植物差异以及这300例患者2种移植术后在第1、2、3、4、6、9、12、18个月的淋巴细胞亚群的比例和绝对计数，并且回顾性分析2种移植类型在18个月内无病生存患者的资料。 结果 移植物中外周血组NKT细胞相对计数高于脐带血组（2.79%>0.24%，P<0.001）。UCBT组辅助性T细胞的百分比高于PBSCT组（20.6%>16.6%，P<0.05），且自半年后绝对计数也高于PBSCT组（624个/μl>373个/μl，P<0.05）。UCBT组的NK1细胞百分比（第3~9个月）和绝对计数（第4~12个月）明显高于PBSCT组（1.7%>0.9%，30个/μl>16个/μl，P<0.05）。NKT细胞在整个监测过程中UCBT组均低于PBSCT组（相对比例和绝对计数）（0.7%<3.3%，4个/μl<28个/μl，P≤0.001）。UCBT组的DNT细胞比例（1年内）和绝对计数（半年内）明显低于PBSCT组（0.6%<5.9%，5个/μl<74个/μl，P<0.05）。 结论 非血缘脐带血移植患者术后的淋巴细胞重建较外周血干细胞移植组快，非血缘脐带血移植术后具有更强的免疫重建能力。

目的 探讨微小残留病（MRD）对移植前疾病状态≥完全缓解2（≥CR2）的急性淋巴细胞白血病（ALL）患者异基因造血干细胞移植（Allo-SCT）预后的影响。 方法 回顾性分析2009年1月至2018年12月在北京大学人民医院接受Allo-SCT、移植前疾病状态≥CR2的ALL患者201例；植前1个月、移植后1、2、3、4、6、9、12个月，移植1年后每3个月用多参数流式细胞仪检测MRD；研究移植前MRD、移植后MRD和移植前后MRD动态变化对预后的影响。 结果 201例患者中位年龄18（10.5，29.5）岁，其中男性126例、女性75例；3年累计复发率（CIR）、非复发相关死亡率（NRM）、无病生存（LFS）和总体生存（OS）分别为34%、16%、50%和56%。移植前MRD（pre-SCT MRD）阳性组患者的3年CIR高于阴性组（47%比26%，P=0.003），3年LFS（40%比55%，P=0.047）和OS（42%比60%，P=0.065）低于阴性组；移植后MRD（post-SCT MRD）阳性组患者的3年CIR高于阴性组（73%比22%，P<0.001），3年LFS（28%比56%，P=0.005）和OS（32%比60%，P=0.040）低于阴性组。多因素分析显示pre-SCT MRD阳性和post-SCT MRD阳性是移植后高CIR（HR=1.823，P=0.018；HR=3.474，P<0.001）、低LFS（HR=1.779，P=0.007；HR=2.185，P=0.001）和OS（HR=1.609，P=0.034；HR=1.970，P=0.001）的独立影响因素。移植前后MRD均阴性组、移植后MRD无上升组和移植后MRD上升组患者的3年CIR分别是17%、42%和82%（P<0.001），3年LFS为61%、44%和18%（P<0.001）和OS为63%、47%和27%（P<0.001）；移植前后MRD动态变化是CIR、LFS和OS的独立影响因素（P值均<0.001）。移植前后MRD动态变化、post-SCT MRD和pre-SCT MRD预测移植后复发的C指数分别为0.669、0.629和0.587。 结论 对于Allo-SCT前疾病状态≥CR2的ALL患者而言，pre-SCT MRD阳性、post-SCT MRD阳性以及移植前后MRD动态变化都负面影响移植预后。

目的 探讨弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）患者的循环外周血中DLBCL细胞数量与髓内瘤细胞负荷、预后相关指标的联系，评价循环DLBCL细胞反映髓内瘤负荷及病情进展的可行性。 方法 回顾性研究。选取2020年6月至2021年2月于郑州大学第一附属医院确诊的DLBCL患者75例，其中男43例，女32例，年龄61（37，85）岁。依据诊疗标准分为初发及复发组53例、部分缓解（PR）组14例和完全缓解（CR）组8例。依据循环DLBCL细胞阳性标准分为循环DLBCL细胞阳性组48例和阴性组27例。筛选本院同期30例非B细胞肿瘤相关疾病的贫血患者为对照组，男16例，女14例，年龄52（30，79）岁。选取健康体检者70例用于方法学优化，男36例，女34例，年龄39（25，57）岁。应用流式细胞术检测各组的骨髓和循环中DLBCL细胞的比例，同时分析循环DLBCL细胞与LDH、β2-MG、LYM、HGB、淋巴瘤B症状、BCL-2、BCL-6、CMYC、PD-L1、年龄、ECOG、aaIPI/IPI评分和Ann分期各预后相关指标的联系。采用独立样本t检验、χ²检验、Kruskal-Wallis H检验、Spearman秩相关、Logistic回归进行统计学分析。 结果 （1）CR组和对照组未检测出骨髓和循环DLBCL细胞；初发及复发组、PR组中循环DLBCL细胞阳性检出率分别为75.47%、57.14%，两组间骨髓和循环DLBCL细胞比例均呈正相关（P值分别为<0.001、0.020）。（2）骨髓和循环DLBCL细胞比例在初发及复发组、PR组、CR组和对照组依次减低（P<0.05），DLBCL细胞比例分别为27.72%（骨髓初发及复发组）、26.92%（循环初发及复发组）、3.23%（骨髓PR组）、1.67%（循环PR组）。（3）与阴性组相比，循环DLBCL细胞阳性组的LDH增高、β2-MG增高、LYM减低、HGB<100 g/L、有淋巴瘤B症状、CMYC表达量≥80%、表达PD-L1、年龄≥60岁，呈现出较高的ECOG、aaIPI/IPI评分和Ann分期（P<0.05）。且年龄≥60岁、有淋巴瘤B症状、表达PD-L1是循环DLBCL细胞阳性的独立危险因素（P<0.05）。 结论 优化流式细胞术前处理条件可提高循环DLBCL细胞的检出率；循环DLBCL细胞可反映DLBCL患者的肿瘤负荷、病情进展及疗效；检测循环DLBCL细胞可以提高患者依从性。

目的 探讨T细胞受体（TCR）可变区亚家族（Vβ 和Vδ）在成熟T细胞淋巴瘤（TCL）中的表达模式特点，以及TCRVβ 和TCRVδ分析在TCL中的诊断价值。 方法 收集江苏省人民医院血液科2011—2020年住院或门诊αβ型TCL 199例，非TCL 398例，采用TCRVβ流式试剂盒检测αβ Τ细胞Vβ亚群的表达，其中185例αβ型TCL和355例非TCL同时进行TCRβ和TCRγ基因重排检测；收集2017—2020年住院或门诊γδTCL患者24例、正常对照10名和反应性γδΤ细胞增多患者15例，采用10色TCRVδ流式染色方案检测γδΤ细胞Vδ亚群的表达，其中24例γδTCL和15例反应性γδΤ细胞增多病例同时进行TCRβ、TCRγ和TCRδ基因重排检测。采用四格表的诊断性试验分析和McNemar检验分析Vβ 和Vδ亚群检测方法与TCR基因扫描方法在检测T细胞恶性克隆性中的诊断效能，采用Kappa检验评价2种方法的一致性。 结果 24种TCRVβ亚家族在αβ型TCL中，91.5%（182/199）的病例呈限制性表达或阴性表达，其中克隆性T淋巴细胞发生率最高的亚家族成员是TCRVβ13.2（12.6%，23/182）和TCRVβ3（8.2%，15/182）；TCRVβ亚家族在99.0%（394/398）的非TCL中未见克隆性表达。TCRVδ亚家族在γδTCL中，100%（24/24）的病例呈Vδ1和Vδ2亚群异常分布模式，其中19例呈Vδ1限制性表达，余5例Vδ1和Vδ2均阴性表达，Vδ1细胞阳性率明显高于Vδ2细胞阳性率（79.9%±10.8%比0.7%±0.3%，P<0.001）；TCRVδ亚家族在25名正常对照和15例反应性γδΤ细胞增多病例中均呈正常分布模式，即Vδ2细胞阳性率明显高于Vδ1细胞阳性率（73.7%±6.7%比15.6%±4.2%，P<0.001）。在诊断TCL效能上，流式细胞术检测TCR可变区亚家族与TCR基因扫描技术的敏感度和特异度差异无统计学意义［敏感度分别为92.4%（206/223）和91.4%（191/209），特异度分别为99.0%（409/413）和95.9%（355/370），P=0.065］，2种诊断方法一致度较高（Kappa=0.809，P<0.001）。 结论 流式细胞术检测TCR可变区亚家族能够快速有效地诊断成熟TCL。

目的 建立一种预测创伤性下肢骨折后深静脉血栓形成（DVT）风险的指标模型。 方法 对2019年5月至12月北京积水潭医院的424例创伤性下肢骨折患者进行巢式病例对照研究。创伤性下肢骨折患者的年龄≥18岁；下肢骨折包括髋部骨折、股骨干骨折、股骨远端骨折、髌骨骨折、胫骨平台骨折、胫腓骨骨干骨折、踝关节骨折和足部骨折。创伤患者在术前行静脉造影检查，424例创伤性下肢骨折患者中，56例在术前诊断为DVT；在非DVT患者中挑选与DVT患者年龄、性别、骨折部位相匹配的对照。检测指标包括常规凝血试验和血栓分子标志物，如D-二聚体、纤溶酶-ɑ2-抗纤溶酶复合物（PIC）、组织型纤溶酶原激活剂-纤溶酶原激活剂抑制物复合物（tPAIC）等，并计算Caprini评分。将DVT患者和非DVT患者的指标进行单因素分析，再利用logistic回归分析，筛选创伤后DVT发生的独立危险因素。应用受试者工作特征（ROC）曲线分析，评估各指标预测创伤后DVT风险的效能。 结果 创伤性下肢骨折后发生DVT患者的tPAIC水平和Caprini评分明显大于非DVT患者（P值分别为0.036和0.016）。D-二聚体、PIC、Caprini评分是创伤性下肢骨折后术前DVT发生的独立危险因素。利用上述3个独立危险因素计算新指标：预测因子 = 0.098×D-二聚体（mg/l FEU）+（-0.564）×PIC（μg/ml）+0.233×Caprini评分。预测因子的ROC曲线下面积最大为0.721。 结论 预测因子，由D-二聚体、PIC和Caprini评分计算而得，可较综合地涵盖创伤性下肢骨折后发生DVT患者和未发生DVT患者之间各类危险因素的变化，能较好地预测创伤性下肢骨折后DVT风险。

目的 观察健康孕妇在妊娠中晚期的胆汁酸谱变化，并建立院内参考区间。 方法 选取2019年7月至2020年8月在浙江省人民医院产科进行产前检查怀有健康单胎的孕妇共298名，分别在中孕期（T2）和晚孕期（T3）采集早晨隔夜空腹静脉血，纳入自身对照研究组，采用液相色谱串联质谱法检测15种胆汁酸（包括胆酸、鹅脱氧胆酸、脱氧胆酸、熊脱氧胆酸、石胆酸及其甘氨酸和牛磺酸结合型）浓度，分析其妊娠中晚期的变化特征并确定其参考区间。15种胆汁酸和总胆汁酸浓度均为偏态分布数据，采用第99百分位数（P99）表示参考区间单侧上限。根据以上数据结果建立本院健康孕妇不同孕期胆酸谱参考区间。 结果 健康孕妇血清甘氨胆酸、牛磺胆酸、甘氨熊脱氧胆酸和石胆酸的水平在T2和T3差异有统计学意义（P<0.05），其他11种胆汁酸亚型在不同孕周间差异无统计学意义（P均>0.05）。不同孕期总胆汁酸、初级或次级胆汁酸、游离或结合型胆汁酸（包括甘氨酸结合型或牛磺酸结合型）水平均保持稳定，且各种胆汁酸在T2和T3呈正相关（P<0.05）。 结论 健康孕妇的初级、次级或游离型、结合型胆汁酸在T2和T3保持稳定，仅少数亚型胆汁酸差异有统计学意义，且甘氨酸结合型与牛磺酸结合型胆汁酸在T3期呈弱相关（P<0.05）。本研究通过液相色谱串联质谱技术定量检测并建立本院亚型胆汁酸的健康孕妇参考区间，为今后的相关疾病研究提供数据支持。

目的 评估光散色法检测脂血标本中血红蛋白（Hb）的能力，探索替代实验室常用的血浆置换法的可行性。 方法 收集福建省立医院2020年7月至2021年7月福建省立医院住院患者血常规标本276份。其中男169例，女107例，年龄16~97岁。其中非脂血标本183份、脂血标本93份。（1）非脂血和脂血标本 Hb低值、中值、高值各1份，检测光散射法精密度和线性。（2）非脂血标本分为Hb低值组、Hb中值组、Hb高值组，分别用光散射法和比色法测Hb，并对两者进行比较。（3）非脂血标本分为Hb低值组、Hb中值组、Hb高值组，分别用不同浓度脂肪乳进行血浆置换，采用MedCalc19.1软件分析Hbc2与Hbc1、Hbo2与Hbc1的偏倚及线性；计算Hbc2与Hbc1偏倚（CV%）、Hbo2与Hbc1偏倚（CV%），应用SPSS 24软件t检验，分析不同浓度甘油三脂对Hb结果偏倚的影响。（4）脂血标本分为HB低值组、Hb中值组、Hb高值组，对光散色法Hb与血浆置换后比色法Hb进行比较。 结果 （1）非脂血和脂血标本光散射法批内精密度在允许范围内（CV<1.5%），线性良好（R2=1.000）。（2）3组非脂血标本光散射法HB与比色法HB偏倚均<3.5%（-0.58±2.34，0.16±1.52，1.15±1.56），在允许总误差范围内；2种方法具有等效性和良好的线性关系（r=0.999）。（3）血浆置换后光散射法（Hbo2）低值组（除4.1 mmol/L）、中值组、高值组各浓度与非脂血比色法（Hbc1）具有等效性，且2种方法具有良好的相关性。光散射法检测结果与脂血浓度无关。（4）3组脂血标本光散射法HB与血浆置换法Hb结果差异无统计学意义（P>0.05），两者具有等效性和良好的相关性（R2=0.968，0.948，0.870）。 结论 光散色法能够有效排除脂血对血红蛋白测定的影响，能替代传统的血浆置换法，具有较高的临床应用价值。

目的 探讨嗜酸性粒细胞在预测COVID-19疾病进程和预后中的临床意义。 方法 回顾性分析2020年1月22日至2月12日在台州市公共卫生中心诊治的115例COVID-19患者，按疾病严重程度分为轻症（n=90）和重症（n=25）。115例患者中位年龄46岁，其中男性65例，女性50例。利用ROC曲线分析嗜酸性粒细胞对COVID-19患者疾病和严重程度诊断的性能；相关性分析首次嗜酸性粒细胞计数与住院时间（LOS）之间的相关性分析。使用GraphPad Prism 5和SPSS 19.0统计软件进行数据分析，连续变量比较 使用Mann-Whitney U检验。 结果 入院时重症患者嗜酸性粒细胞计数低于轻症患者（P<0.001）；重症患者入院1~7 d嗜酸性粒细胞计数保持在正常以下，21~28 d嗜酸性粒细胞上升到正常水平；ROC显示嗜酸性粒细胞对COVID-19严重程度的曲线下面积（AUC）为0.781（95%CI：0.693~0.869）；入院首次嗜酸性粒细胞计数与住院时长呈负相关。 结论 嗜酸性粒细胞减少在COVID-19重症患者辅助诊断上具有重要意义，嗜酸性粒细胞的动态监测有助于预后判断。

微流控芯片以高捕获、高回收、微流可控、易于集成化等特点，在循环肿瘤细胞研究中备受关注。微流控体系分选富集循环肿瘤细胞根据捕获原理主要包括依赖生物亲和标签微流控芯片、依赖物理特性免标签微流控芯片和依赖生物亲和与物理特性集成化法微流控芯片法等。

出血与血栓性疾病与临床各科室密切相关，实验室相关检测在疾病诊断和鉴别诊断、风险评估、寻因和疗效监测等方面发挥着重要作用。凝固曲线波形分析（CWA）作为一种自动化的凝血检测技术，可以提供更多关于血浆样品整个凝血过程的宝贵信息。大量研究表明，CWA在新冠肺炎（COVID-19）患者凝血状态的评估、A型血友病（HA）患者临床表型的判断以及直接口服抗凝药（DOAC）的监测等应用中具有一定价值。在不同的临床场景中对CWA进行深入解读和应用，可以为诊断和治疗出血与血栓性疾病提供更多的实验室信息。