2008年 · 第31卷第09期

本文对近年来有关糖化血红蛋白的相关文献、国际标准进行分析、综述,阐述了明确糖化血红蛋白的基本概念、测定方法以及目前临床检验现状及量值溯源.国际上已建立糖化血红蛋白检测的参考系统并实现量值溯源到国际单位制(SI).我国糖化血红蛋白检测还处于起步阶段,无论是工作人员的认知程度还是检测工作都应逐步加强。

目的 探讨Ⅰ型钙黏蛋白(cadherin 1,CDH1)基因甲基化及其功能蛋白表达与肺癌的相关性.方法 分别提取基因组DNA、总RNA和总蛋白,用半定量荧光甲基化特异PCR(MSP)、巢式逆转录PCR(nRT-PCR)和免疫印迹法(WB)检测30例肺癌患者的癌、癌旁和远癌肺组织及5例肺良性疾病对照肺组织中CDH1甲基化、mRNA相对表达和上皮钙黏蛋白(E-cadherin,E-cad)表达情况,并对部分表达阴性标本用免疫组化法进行验证.结果 半定量荧光MSP检测CDH1启动子甲基化相对比值,癌组织为0.13%～450.67%、中位数33.61%,癌旁组织为0.00%～177.02%、中位数18.04%,远癌组织为0.00%～51.68%、中位数13.69%.经配对秩和检验分析癌与癌旁组织和远癌组织中CDH1甲基化程度差异有统计学意义(Z分别为-2.355和-3.527,P分别为＜0.05和＜0.01).nRT-PCR检测CDH1 mRNA表达的相对比值,癌组织为1.33±0.48,癌旁组织为1.61±0.55,远癌组织为1.93±0.45、肺良性疾病对照肺组织为2.09±0.09,经方差分析,癌与癌旁和远癌组织的差异有统计学意义(F=9.081,P＜0.01).WB结果显示,癌组织E-cad阳性率为36.7%(11/30)、癌旁组织为70.0%(21/30)、远癌组织为96.7%(29/30),经确切概率法分析癌与癌旁和远癌组织的差异有统计学意义(X2分别为6.70、24.30和7.68,P均＜0.01).而肺良性疾病对照肺组织阳性率为100%(5/5).结论 肺癌患者癌组织CDH1启动子发生甲基化后,可抑制该基因的转录,进而影响E-cad蛋白的表达,CDH1异常甲基化与肺癌的发生有相关性。

目的 评价分析抗瓜氨酸化波形蛋白(MCV)抗体、抗葡萄糖-6-磷酸异构酶(GPI)抗体等5项指标在类风湿关节炎(RA)患者血清中的表达与疾病的相关性及应用价值.方法 收集150例BA、32例SLE、30例强直性脊柱炎(OA)、20例骨关节炎(AS)、20例干燥综合征(SS)、20例结缔组织病(CTD)患者和40名健康人血清标本.采用ELISA分析血清中抗MCV、抗GPI和抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体水平,采用间接免疫荧光法检测抗角蛋白(AKA)抗体,采用速率散射比浊法检测类风湿因子(RF)水平.分别计算和比较单项标志物诊断RA的效能;选择高敏感度与高特异度抗体联合检测,并计算其与RF联合诊断RA的效能.结果 5种抗体在RA患者组中的阳性率显著高于疾病对照组和健康对照组(X2分别为88.5、76.0、279.2、88.2、94.8,P均＜0.05).除AKA抗体阳性率较低(37.3%)外,其余抗体在RA中的阳性率差异无统计学意义(X2分别为21.9、9.4、20.2、43.2、41.6,P均＞0.05).单项抗体检测中,抗MCV和抗GPI抗体的敏感度最高,分别为78.0%和83.3%,抗CCP抗体的特异度最高,为97.1%,具有高特异度(96.1%)的AKA抗体敏感度最低,仅为49.4%.抗MCV/抗CCP抗体联合检测的敏感度和特异度最高,分别为92.7%和96.9%.RF/抗GPI/抗CCP抗体联合检测的敏感度和特异度为90.7%和96.9%,RF/抗MCV/抗CCP抗体联合检测的敏感度和特异度为94.0%和96.9%.结论 抗MCV和抗GPI抗体诊断RA的敏感度最高;抗CCP抗体的特异度最高,AKA抗体虽然具有较高的特异度,但敏感度最低,联合检测可弥补单项抗体检测造成的RA漏诊,RW抗GPI/抗CCP抗体和RE/抗MCV/抗CCP抗体的组合模式可同时提高诊断RA的敏感度和特异度。

目的 探讨小细胞肺癌(SCLG)患者血清中组织多肽特异性抗原(TPS)、神经元特异烯醇化酶(NSE)、癌抗原125(CA125)和癌胚抗原(CEA)水平,对SCLC临床诊断、病情监测的临床意义.方法 用ELISA法检测271例SCLC和80例肺良性疾病患者及224名健康对照者血清TPS水平;同时用电化学发光法检测血清NSE、CA125和CEA水平;并用约登指数和受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析4项肿瘤标志及其各项肿瘤标志联合检测SCLC患者的效能.结果 SCLC组的TPS、NSE、CA125和CEA血清水平明显高于肺良性疾病组和健康对照组(Z均＞1.90,P均＜0.01);广泛期SCLC患者的血清TPS和NSE明显高于局限期患者(Z分别为2.69、2.27,P分别为0.009、0.02).治疗后不同预后患者的TPS和NSE浓度差异有统计学意义(Z分别为4.06、3.11,P分别为0.001、0.007).多指标联合检测时,以TPS+NSE组合的敏感度最高(86.7%),其特异度、阳性预测值(PPV)和阴性预测值(NPV)分别为75.0%、81.0%和82.2%.结论 血清TPS、NSE、CA125和CEA均可作为SCLC的诊断指标,以TPS+NSE联合检测的临床价值最好。

目的 研究肾移植患者外周血人巨细胞病毒(HCMV)特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL)的频率及其γ干扰素(IFN-γ)分泌功能,以期探讨HCMV活化感染的免疫学机制.方法 选取HCMV血清学阳性的HLA-A*0201肾移植患者和健康对照者,将其分为3组:存在HCMV活化感染的肾移植组(9例)、无HCMV活化感染的肾移植组(29例)和健康对照组(54名);运用HLA-A2-NLVPMVATV-五聚体检测外周血中总的HCMV NLVPMVATV特异性CTL,同时以NLVPMVATV体外刺激PBMC,检测IFN-γ分泌性CTL.结果 在健康对照组、元HCMV活化感染的肾移植组和存在HCMV活化感染组中,HCMV特异性CTL频率中位数分别为1.19%(0～19.42%)、1.20%(0～18.40%)和3.2%(0.51%～18.90%),差异无统计学意义(H=5.34,P＞0.05);IFN-γ分泌细胞频率中位数分别为0.72%(0～0.70%),0.47%(0～5.61%)和0.67%(0.07%～4.00%),差异无统计学意义(H=0.58,P＞0.05),但HCMV特异性CTL中IFN-γ分泌细胞的比例分别为(60.18±19.16)%,(39.19±17.22)%和(20.02±13.26)%,组间比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 肾移植组外周血中HCMV NLVPMVATV特异性CTL频率较健康对照组并无降低,但其分泌IFN-γ的比例降低,出现HCMV活化感染组IFN-γ分泌CTL比例降低更为明显.HCMV特异性CTL的IFN-γ分泌功能受损可能是造成肾移植患者HCMV活化感染的因素之一。

地中海贫血(简称地贫)因首发于地中海沿岸国家而得名,在我国长江以南地区多见.广西和广东人群中α地贫携带率达14.95%和8.30%[1].目前对本病尚无有效的根治措施,通过在育龄人群中进行产前诊断是惟一有效的预防措施.本研究对10 000名(5 000对)农村新婚夫妇开展地贫筛查及筛查后的监测管理,现将筛查结果报道如下。

鲍曼不动杆菌是医院感染的重要病原菌,尤其在免疫力低下或人住重症监护病房患者,鲍曼不动杆菌的分离率逐年上升.由于自然界中鲍曼不动杆菌的广泛存在及其复杂的耐药机制,导致部分医院鲍曼不动杆菌院内感染的流行[1],给临床治疗带来极大困难。

胆固醇酯转运蛋白(CETP)是脂质转运/脂多糖结合蛋白家族中的一种,在胆固醇逆向转运中起关键作用,胆固醇逆向转运是将胆固醇从外周组织经血液运输至肝脏,CETP可促进胆固醇酯(CE)从高密度脂蛋白(HDL)的合成部位转移至乳糜颗粒(CM)、极低密度脂蛋白(VLDL)和低密度脂蛋白(LDL),而将LDL、VLDL中的甘油三酯(TG)转运至HDL中,CETP还可将富含TG的脂蛋白中的磷脂转运至HDL,CE通过LDL受体相关蛋白和肝脏中的受体进入肝脏清除。

肿瘤诱导淋巴管生成是许多肿瘤生长及肿瘤转移的关键.由于缺乏特异的淋巴内皮细胞标志物,肿瘤诱导淋巴管生成及在肿瘤转移中的作用未被充分认识.podoplanin是一种膜性黏蛋白,可特异性表达在淋巴管内皮.在podoplanin敲除的动物模型中,已经证实podoplanin缺失可导致淋巴管生成受损和淋巴水肿[1,2]。

目的 研究质粒介导的喹喏酮类的耐药基因qnr和aac(6')-Ib-cr在我国肠杆菌科临床株中的分布状况.方法 从全国9家教学医院收集的421株非重复的4种肠杆菌科细菌[大肠埃希菌(eco)、肺炎克雷伯菌(kpm)、阴沟肠杆菌(ecl)、弗劳地柠檬酸杆菌(cfr)]中,按环丙沙星(CW)≥0.25μg/ml、头孢噻肟(CTX)≥2.0μg/ml、头孢曲松(cno)≥2.0μg/ml的条件筛选出197株,其中cfr30株,ecl 35株,eco 77株,kpm 55株.采用PCR检测筛选菌株的qnrA、qnrB、qnrS和aac(6')-IB质粒介导耐药基因;并以内切酶BtsCI酶切消化aac(6')-Ib PCR阳性产物以确定aac(6')-Ib-cr.接合试验确定喹诺酮耐药的可转移性;用琼脂稀释法测定接合子及其供体菌和受体菌对环丙沙星及其他抗菌药的MIC值.结果 在197株筛选出的肠杆菌科细菌中,qnr共检出83株,总阳性率为42%(83/197),其中qnrA有17株(9%),qnrB有46株(23%),qnrS有24株(12%);qnrA和qnrB同时阳性有2株,qnrB和qnrs同时阳性有2株.aac(6')-Ib共检出90株(46%),aac(6')-Ib-cr共检出36株(18%).qnr和aac(6')-Ib-cr同时阳性的有18株.在ecl、kpn、cfr、eco中,qnr的阳性率分别为66%、66%、63%、6%,aac(6')-Ib-cr阳性检出率分别为9%、22%、27%、17%.qnr和aac(6')-Ib-cr在所有的4种肠杆菌科细菌中的阳性率分别为20%(83/421)和9%(36/421).质粒接合试验获得了13株接合子,环丙沙星对接合子的MIC范围为0.125～1μg/ml,相差8倍;接合子与受体菌相比,CIP的耐药性提高了16～125倍,左氧氟沙星的耐药性提高了16～31倍.结论 在中国,qnr和aac(6')-Ib-cr相关的质粒介导喹诺酮类耐药性在肠杆菌科临床分离株中分布广泛;qnr和aac(6')-Ib-cr能介导喹诺酮低水平耐药,这可能是我国细菌对喹诺酮类耐药性上升迅速的重要原因。

目的 调查肺炎克雷伯菌临床分离株aac(6')-Ib-cr基因存在情况.方法 收集2006年1月至2007年9月从临床分离的337株非重复的肺炎克雷伯菌.挑选64株对庆大霉素、阿米卡星和妥布霉素任何一种耐药的肺炎克雷伯菌临床分离株进行aac(6')-Ib-cr基因检测,采用PCR法检测aac(6')-Ib和Ⅰ类整合酶基因(intll),通过DNA直接测序确定aac(6')-Ib-cr.抗生素MIC值测定采用琼脂稀释法.ESBLs检测采用双纸片扩散法,通过接合试验检测质粒是否可以发生转移.结果 337株肺炎克雷伯菌临床分离株中,对庆大霉素、阿米卡星和妥布霉素的耐药率分别为19.0%(64/337)、8.3%(28/337)和16.3%(55/337).共有24株细菌经PCR证实aac(6')-Ib基因阳性,经测序证实全部为aac(6')-Ib-cr基因,阳性率为37.5%(24/64).24株aac(6')-Ib-cr基因阳性株中,有13株对环丙沙星耐药(MIC≥2 mg/L)和11株环丙沙星敏感(MIC≤0.25～1.0 mg/L).aac(6')-Ib-cr基因在环丙沙星耐药菌株和环丙沙星敏感菌株中的检出率分别为54.2%(13/24)和27.5%(11/40),经X2检验,差异具有统计学意义(X2=11.056,P＜0.01).24株aac(6')-Ib-cr基因阳性株中,ESBLs和intl1基因的阳性率分别为79.2%(19/24)和91.7%(22/24).13株aac(6')-Ib-cr基因阳性菌株的质粒成功转移至受体菌,以受体菌质粒DNA为模板进行aac(6')-Ib-cr检测,13株受体菌质粒全部为aac(6')-Ib-cr基因和intl基因阳性,全部为ESBLs阳性株.结论 aac(6')-Ib-cr基因广泛存在于肺炎克雷伯菌临床分离株中,aac(6')-Ib-cr可能通过Ⅰ类整合子和ESBL基因同时位于可转移的质粒上造成传播。

目的 分析髓系白血病转基因小鼠模型的免疫表型分型特点.方法 根据小鼠骨髓各系列分化抗原表达特性,结合多色流式细胞术分析5只髓系白血病转基因小鼠和10只BL6健康对照组小鼠的骨髓免疫表型分型特点,并通过细胞周期分析进一步确认细胞增殖情况.结果 白血病转基因小鼠的骨髓细胞中Mac-1+Gr-1+细胞、c-Kit+细胞的表达率分别为(72.6±6.5)%、(20.5±4.8)%,明显高于健康对照组的(52.8±4.8)%、(2.1±0.3)%,差异有统计学意义(t值分别为6.66、12.66,P均＜0.01);而B220+、CD3+、CD41+和Ter119+细胞的表达率分别为(2.7±1.1)%、(1.2±0.3)%、(1.2±0.6)%及(2.8±1.1)%,明显低于健康对照组的(20.2±2.1)%、(6.6±1.3)%、(4.7±1.1)%及(10.6±1.2)%,差异有统计学意义(t值分别为-17.63、-8.69、-6.30、-12.28,P均＜0.01).细胞周期中的S期和G2/M期的表达率分别为(25.7±4.2)%和(21.1±4.2)%,明显高于健康对照组的(11.8±2.1)%和(8.9±1.8)%,差异有统计学意义(t值分别为8.59、7.98,P均＜0.01).结论 髓系白血病小鼠模型的髓系标志Mac-1、Gr-1及造血干祖细胞标志c-Kit的表达明显增高,而B淋巴细胞系标志(B220)、T淋巴细胞系标志(CD3)、巨核细胞系标志(CD41)和红细胞系标志(Ter119)的表达明显受抑。

目的 建立人类慢性粒细胞白血病(CML)细胞系K562细胞在伊马替尼(Imatinib mesylate)处理前、后的DNA损伤模型,探讨伊马替尼对K562细胞的DNA损伤修复功能的影响.方法 用噻唑蓝(MTT)法确定伊马替尼预处理K562细胞的浓度;用免疫印迹法(Western blot)检测伊马替尼处理后K562细胞BCR/ABL的磷酸化状态,以反映BCR-ABL酪氨酸激酶活性受抑制情况;用彗星实验检测不同浓度过氧化氢(H2O2)诱导的K562细胞、伊马替尼预处理K562细胞的DNA损伤模型;用彗星实验对各组细胞在DNA损伤后的修复进行动态观测.结果 MTT实验结果显示,伊马替尼预处理K562细胞的最佳终浓度为1 μmol/L,作用时间24 h;Western blot实验结果显示,该浓度的伊马替尼可有效抑制BCR/ABL融合蛋白第177位酪氨酸激酶磷酸化,密度比为0.100±0.018,与对照组(0.425±0.039)相比,降低了(77.11±5.59)%,差异有统计学意义(t=4.57,P＜0.05);彗星实验确定了各组细胞DNA损伤模型的建立条件,采用10 μmol/L终浓度的H2O2对K562细胞和伊马替尼预处理后K562细胞进行染毒,H2O2作用温度和时间为4℃、10 min.修复结果显示,经伊马替尼预处理的K562细胞修复时间为120 min,与未处理组修复时间60 min相比,前者DNA损伤修复时间明显延长(F=97.79,P＜0.05).结论 本研究建立了伊马替尼处理前、后的白血病K562细胞的DNA损伤模型,BCR/ABL融合蛋白的酪氨酸激酶抑制剂伊马替尼能减弱K562细胞的DNA损伤后修复能力。

目的 研究生长激素释放肽(ghrelin)对胰岛β细胞(NIT-1)增殖的影响,并初步探讨其作用机制.方法 采用不同浓度的ghrelin在不同时间内对NIT-1细胞进行刺激,以噻唑蓝(MTT)法观察ghrelin对NIT-1细胞增殖的影响;采用流式细胞术检测ghrelin对细胞周期的影响;采用免疫印迹法(Western blot)分析细胞外信号调节激酶(ERK1/2)表达水平和ERK1/2磷酸化水平.结果 随着ghrelin浓度的增加和作用时间的延长,发现其有促进NIT-1细胞增殖的作用.ghrelin作用于NIT-1细胞48 h后,改变细胞S期所占比例,ghrelin浓度为0、10-9、10-8、10-7 mol/L时,对应的S期细胞所占比例分别为(34.5±6.5)%、(42.1±7.4)%、(50.6±5.8)%、(71.4±9.4)%.ghrelin处理NIT-1细胞后,ERK1/2出现磷酸化,且磷酸化水平与ghrelin浓度呈剂量-效应关系.结论 ghrelin通过激活丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/ERK1/2途径,影响细胞周期,促进胰岛β细胞增殖。

目的 改进DNA亚硫酸氢盐测序法(bisulfite genomic sequencing,BGS),建立一种简便快速的甲基化标记筛查技术.方法 基因组DNA在亚硫酸氢盐处理、脱盐纯化后直接进入碱性的PCR体系,通过延长预变性时间完成修饰过程,然后进行常规亚硫酸氢盐PCR(bisulfite-PCR,BSP)扩增;首轮扩增产物再用5'端加有高GC标签序列的引物进行2次扩增,达到调整GC含量和直接测序的目的 .同时用传统和改进BGS法检测3T3-L1细胞肿瘤坏死因子α(TNF-α)基因和Hela细胞雄激素受体基因启动子的甲基化情况,以评估改进方案的可行性.并用Alu序列实时定量BSP技术比较传统和改进BGS法的灵敏度.结果 无论是高甲基化还是低甲基化片段,改进的BGS法均可实现BSP产物的直接测序,结果与传统法一致.改进法修饰的DNA转化率达到100%,特异度＞93.75%,灵敏度显著高于传统方法(t=2.978 2,P＜0.05),并有良好的重复性.结论 改进后的BGS方法简单灵敏,可用于甲基化标记的快速筛查。

目的 通过使用Sau-PCR方法分析一起由洋葱伯克霍尔德菌引起的院内感染,为追溯感染源和感染途径提供有效的信息.方法 Sau-PCR首先使用限制性内切酶Sau3AI对基因组DNA进行酶切,获得以GATC序列为黏性末端的酶切产物,然后使用能够识别酶切位点(GATC)的引物对酶切产物进行PCR扩增,最后根据DNA琼脂糖凝胶电泳图谱分析样本之间同源性.结果 11株来自患者的菌株中,除1株以外,其余均表现出100%同源性,采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对样本进行验证,结果与Sau-PCR完全一致.结论 Sau-PCR是一种实用、简便、迅速的DNA指纹图谱分析工具,在对同源性的研究当中具有广阔应用前景。

目的 研究表面等离子体共振(SPR)系统在临床病原微生物的基因芯片检测中的应用.方法 对27份临床样本进行SPR的芯片检测.其中血液阳性标本8份,脓液阳性标本3份,白带阳性标本及生殖道脓液标本9份,活组织检查阳性标本1份,活组织检查阴性标本6份.采用生物信息学方法设计各靶病原体特异的引物和探针,并分别利用PCR技术以及酶标化学发光芯片技术对设计的引物和探针进行验证;制备的SPR响应型基因芯片,结合SPR芯片系统对临床标本进行检测.结果 设计的引物和探针经验证均具有良好的特异性和准确性,能够顺利实施对各靶病原体的有效扩增和对芯片的检测应用;新构建的基因芯片结合SPR芯片系统对临床26份标本的检测结果与临床常规检测结果一致.结论 SPR检测系统具有良好的检测性能,检测方法准确可靠,可应用于对临床病原微生物的芯片检测。

患者男,67岁,农民.主诉双眼渐进性视物不清2年.人院前2年无明显诱因始发双眼视物不清,但无眼红、眼痛、畏光、流泪、视物变形、复视、虹视,亦无头痛、头晕、恶心、呕吐等症,未曾诊治.近年来双眼视物不清渐进性加重,尤其右眼严重而影响生活.遂于2007年4月24日求治本院。

片球菌存在于自然界中,对人类通常无致病性[1-3].2008年3月我室从一尿路感染患者中分离出1株马脲片球菌,现报道如下。

患者女,37岁,农民,因"咳嗽、咳痰4 d,加重伴喘憋1 d余,意识不清2 h"于2007年11月7日入首都医科大学附属北京朝阳医院呼吸监护室.患者人院4 d前,无明显诱因出现咳嗽,咳白色黏痰,无发热、咯血、喘憋、胸痛及盗汗,自觉感冒症状,于当地卫生所就诊,未见明显好转.于人院前1 d自觉咳嗽症状加重,咳黄白黏痰,伴喘憋,夜间为重。

病历摘要 　　患者男,19岁.主诉"劳累后心悸、气促2年,加重4个月"于2008年4月29日入院. 　　患者于2年前出现劳累后心悸、气促,4个月前上述症状加重,且伴有咳嗽、咳痰,色白,偶有血丝,发作时伴大汗、乏力,曾就诊于当地医院,诊断为肺炎,予抗炎治疗,未见明显好转。

细菌名称中文译名来源于细菌命名学术名称,简称学名,是依照国际细菌命名法则,被世界大多数细菌学家所承认的以拉丁文给出的学术名称.细菌名称同其他学科科学名词一样,除非发生分类学变化,应该相对稳定.但在我国学术界却出现细菌学名的中文译名较为混乱的局面.例如大肠埃希氏菌又称大肠埃希菌。

凝血酶激活的纤溶抑制物(thrombin-activatable fibrinolysis inhibitor,TAFI)属于金属羧肽酶家族成员,最初于1989年由Hendriks等首先在血清中发现,Boffa和Koschinsky[1]于1995年发现TAFI被凝血酶激活后具有抑制纤溶酶的活性,且证明它与之前不同命名的血浆羧基肽酶原B、羧基肽酶原U和羧基肽酶原R为同一物质,现已统一命名为TAFI。

实验室检验是结核病最重要的诊断方法.目前结核病诊断的金标准是临床检查结合细菌培养和痰涂片镜检.但是结核分枝杆菌(MTB)培养周期长且阳性率低,对于这些患者的诊断只能借助于临床观察和X线检查。

患者女,32岁,因"婚后4年中自然流产3次"于2007年2月就诊. 　　患者婚后4年,正常夫妇生活,月经规律,未采取任何避孕措施.婚后5个月孕9周时无诱因自然流产,未予重视.婚后1年发现第2次妊娠时自行卧床休息、自服维生素E2周,于妊娠12周时出现阴道少量流血3 d,当地医院B超提示"胚胎停育"行刮宫术,病理报告提示:凝固性坏死,组织及胎盘绒毛退变坏死伴炎细胞浸润。

光谱分析技术是利用化学物质(包括原子、基团、分子及高分子化合物)发射、吸收或散射光谱的特征,确定其性质、结构或含量的技术.它在临床是一类重要的检验技术,应用极为广泛.根据光谱谱系特征的不同,可以把光谱分析分为发射光谱分析、吸收光谱分析和散射光谱分析3大类。