2008年 · 第31卷第08期

实验室诊断方法对丙型肝炎病毒(HCV)感染的确认和治疗的监测起着关键作用.自从1989年HCV被鉴定至今的近20年间,随着分子生物学检测技术的发展,HCV的实验室诊断也取得了长足进步,但同时也有很多问题需要研究和解决.HCV抗体检测操作简便,耗时少,但对处于窗口期的标本容易漏检,且不能判别是活动性感染还是感染已被清除.HCV RNA检测有较高的敏感度和特异度,定量检测还可以用于抗病毒治疗监测;国际上,RNA检测的发展趋势为全自动化.目前RNA检测亟待解决的两个问题是标准化和高成本问题.近5年HCV抗原检测和抗原抗体联合检测试剂盒也已问世,但其敏感度尚不及RNA的检测.HCV基因分型主要基于核酸杂交或直接测序原理,均有相应的商品化试剂盒,但高成本限制了其在临床实验室的广泛应用。

抗病毒治疗是慢性乙型肝炎的最关键的治疗.HBV的突变与HBV耐药密切相关.免疫选择和药物治疗对于耐药的产生具有显著的影响.基于PCR的检测技术是监测HBV耐药的主要技术.定期规律的HBV DNA病毒载量的检测是监测HBV耐药的主要技术手段.拉米夫定联合阿德福韦酯治疗拉米夫定耐药的患者,疗效优于单用阿德福韦酯的治疗策略。

戊型肝炎与甲型肝炎相似,是一种经肠道传播的自限性疾病.戊型肝炎病毒(HEV)是引起戊型肝炎的病原体.HEV主要通过粪-口途径传播.HEV主要分为4个基因型,1和2型主要在人群中传播,可引起流行和散发的戊型肝炎;3和4型可在人群与动物之间传播,是人畜共患性疾病,主要引起散发性的戊型肝炎.HEV是一种直径为27～34 nm的无包膜单股正链RNA病毒,基因组全长约7 500 bp,其5'端和3'端各含有一个非编码区,在5'和3'非编码区之间含有3个开放读码框架(ORF),依次为ORF1、ORF2和ORF3,ORF1编码病毒复制所需要的酶类,ORF2编码衣壳蛋白,可诱导机体产生保护性免疫反应;ORF3功能尚不清楚,但含有可被患者血清抗体识别的抗原表位[1-3]。

由中华医学会中华检验医学杂志编辑委员会主办、中国医科大学第一附属医院承办的首届中国病毒性肝炎和艾滋病实验室诊断与临床高峰论坛于2008年3月28-29日在沈阳辽宁大厦召开.来自全国各地的特邀代表、检验仪器及试剂生产厂商代表150余人出席了本次论坛.开幕式由卫生部临床检验中心主任申子瑜教授主持,中华医学会检验分会主任委员、中华医学杂志总编辑丛玉隆教授致开幕辞,中华医学会杂志社袁桂清副社长出席了会议并作了重要讲话。

目的 建立一种新的基于焦磷酸测序技术的HBV前C区/基本核心启动子(pre-C/BCP)突变的检测方法,并验证该方法的准确性、重复性、可靠性及进行初步临床检测.方法 通过对基因库中100个HBV基因序列的比对分析,设计出专用的pre-C/BCP焦磷酸测序的PCR扩增引物及测序引物,并以标准质粒作为标准品建立其相应的检测方法.通过对标准质粒及PCR扩增产物、经Sanger测序的HBV血清及基因芯片检测结果分析,以验证本检测方法检测的标本的特异度及本方法的检测可靠性.最后对60例HBV临床血清标本进行了初步的检测.结果 本研究成功地建立了pre-C/BCP突变热点的焦磷酸测序方法.其检测结果与pre-C/BCP质粒,Sanger测序法的检测结果符合率达100%(Kappa=1.0),基因芯片检测结果的诊断符合率为91.7%.同一批血清标本的重复率达97.8%,阳性PCR产物测序的重复率100%.充分证明了本方法的准确性、重复性、可靠性.初步批量化检测60份临床标本结果表明,本方法能一次批量检出包括pre-C/BCP的单一、多位点的突变,并发现了一例少见的BCP T1758C突变.结论 本实验所建立的pre-C/BCP突变热点的焦磷酸测序方法是一种可一次性检测HBV pre-C/BCP多位点突变的高通量的检测方法。

目的 研究慢性乙型肝炎(CHB)肝活检组织CCL20的表达与病理分级分期的关系,探讨CCL20在慢性HBV感染中的作用及意义.方法 通过内参照竞争逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)对处于正常状态和慢性感染状态的肝细胞系的CC120 mRNA进行定量检测,观察CCL20的表达差异.定量检测正常肝脏和CHB活检组织的CC120水平,结合肝脏组织学积分研究其相关性.结果 在体外细胞系水平上,HBV未感染肝细胞HepG2的CCL20表达量为(2.65±0.02)pg/106细胞,而HBV持续感染肝细胞HepG2.2.15的CC120表达量为(1.22±0.04)pg/106细胞(t=39.66,P<0.01);PMA刺激CCL20表达的增加但不改变CCL20在二类细胞之间的表达格局.在HBV慢性感染状态下肝活检组织的CCL20的表达(3.54±0.65)pg/20 mg显著低于其在正常肝组织中的平均表达量(8.74±0.56)pg/20 mg(t=30.09,P<0.01),且与肝脏的组织学积分相关(r=0.675,P=0.023).结论 HBV慢性感染状态下CCL20的表达下调,CCL20的表达与CHB患者肝脏组织学积分相关。

目的 确定中国澳门地区产超广谱B内酰胺酶(ESBLs)的大肠埃希菌的ESBLs基因型,并与沈阳地区产ESBLs的大肠埃希菌的ESBLs基因型进行比较.方法 分别收集澳门与沈阳地区分离的大肠埃希菌209株、150株.按美国临床和实验室标准协会(CLSI)2006年所定标准确定ESBLs表型,并对ESBLs表型阳性的菌株测试其等电点(pI)值,根据pI值范围设计引物,对其进行PCR扩增,扩增产物测序,测序结果与GenBank比对,确定ESBLs的基因型.结果 (1)澳门与沈阳地区产ESBLs大肠埃希菌阳性检出率分别为30.1%(62/209)、54.O%(81/150).(2)57株(90.5%)澳门产ESBLs的大肠埃希菌基因型为CTX-M,以CTX-M-14为主、占76.2%,并同时发现CTX-M-9、CTX-M-22、CTX-M-27、CTX-M-15、CTX-M-24型,分别占4.8%、3.2%、1.6%、1.6%、3.2%;6株未分型.(3)74株(91.4%)沈阳地区产ESBLs的大肠埃希菌基因型为CTX-M,以CTX-M-14为主、占65.4%,发现CTX-M-3、CTX.M-24、CTX-M-22、CTX-M-15、CTX-M-9、CTX-M-28型,分别占13.6%、4.9%、2.5%、2.5%、1.2%、1.2%;7株未分型.结论 澳门产ESBLs大肠埃希菌基因型为CTX-M型,以CTX-M-14为主,同时存在CTX-M-15、CTX-M-22、CTX-M-24、CTX-M-9、CTX-M-27型,基因型与沈阳地区菌株基本相同,未发现CTX-M-3、CTX-M-28型.沈阳地区菌株未发现CTX-M-27型。

目的 了解分离于镇江地区的铜绿假单胞菌对13种常用抗生素的耐药率;明确Ⅰ类整合子基因盒结构及其在耐药基因播散中的作用.方法 采用K-B纸片法检测71株铜绿假单胞菌的耐药率;煮沸法提取71株铜绿假单胞菌基因组DNA;PCR扩增Ⅰ类整合子基因,并通过测序分析其所携带耐药基因盒.结果 71株铜绿假单胞菌对临床常用的13种抗生素的耐药率在18.3%～77.5%不等;Ⅰ类整合子检出率为38%,包括aadB、aac(6')-Ⅱ、PSE-Ⅰ、dfrA17和aadA5 5种基因盒,其中最常见者为dfrA17和aadA5.Ⅰ类整合子阳性菌株对哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、头孢曲松、头孢吡肟、头孢他啶、庆大霉素、阿米卡星、妥布霉素、左氧氟沙星、环丙沙星等10种抗生素的耐药率明显高于整合子阴性菌株.结论 不同铜绿假单胞菌临床株对13种常用抗生素的耐药率各不相同,整合子阳性菌株耐药率明显高于整合子阴性菌株,提示Ⅰ类整合子是铜绿假单胞菌多重耐药的重要因素。

目的 监测结核分枝杆菌对一线和二线抗结核药物的耐药性水平,掌握严重耐多药结核病的流行情况.方法 2004年10月至2007年4月期间山东省胸科医院收集的1021株临床菌株,采用绝对浓度法在鸡蛋培养基上检测1 021株菌株对4种一线和5种二线抗结核药物的药物敏感性.结果 结核分枝杆菌复合群989株(96.9%),非结核分枝杆菌32株(3.1%).989株结核分枝杆菌对一线抗结核药物的总体耐药率为32.3%(95%可信区间为28.7%～35.8%),其中耐多药结核菌株107株(10.8%),有20株菌株符合严重耐多药结核的定义标准.严重耐多药结核菌株占所有耐多药结核菌株的18.7%,全部来自复治肺结核患者.结论 结核分枝杆菌对二线抗结核药物耐药性水平较高,严重耐多药结核在复治结核患者中的流行情况严重.研究显示持续开展抗结核药物耐药性的临床实验室监测十分必要。

目的 研究大肠癌患者外周血单个核细胞(PBMC)端粒酶基因表达与临床病理的关系.方法 用实时荧光定量端粒重复扩增法(RTQ-TRAP)检测71例大肠癌和20例良性大肠疾病患者,以及25名健康人PBMC端粒酶基因表达,同时检测大肠癌患者血浆癌胚抗原(CEA)含量.结果 71例大肠癌患者中,50例端粒酶基因表达阳性,阳性率70.4%;20例良性大肠疾病表达阳性1例,阳性率为5.0%,大肠癌组与良性大肠疾病组和健康对照组的PBMC端粒酶基因表达差异有统计学意义(χ2=24.521,P<0.001).大肠癌患者在不同性别(χ2=0.114,P=0.736)、年龄(χ2=0.113,P=0.735)、肿瘤部位(χ2=1.523,P=0.677)、Dukes分期(χ2=2.282,P=0.320)间的端粒酶基因表达差异无统计学意义.71例大肠癌患者PBMC端粒酶基因表达阳性率与CEA阳性率(63.4%)比较,差异无统计学意义(χ2=2.286,P=0.125).结论 RTQ-TRAP是一种快速、准确、定量检测端粒酶基因表达的方法,大肠癌患者PBMC端粒酶活性是一项有效的辅助诊断大肠癌的分子标志。

目的 评估肿瘤型M2-丙酮酸激酶(Tu M2-PK)在乳腺癌诊断与疗效监测中的应用价值.方法 用ELISA检测63例乳腺癌患者、22例乳腺良性疾病患者及40名健康对照者血浆Tu M2-PK水平,并与糖类抗原15-3(CA15-3)、癌胚抗原(CEA)测定结果对比分析.结果 根据受试者工作特征(ROC)曲线分析,Tu M2-PK检测乳腺癌的临界值为14.1 U/ml,敏感度为46.0%,特异度为86.0%,提示其诊断价值高于CA15-3(敏感度为42.8%,特异度为85.4%)和CEA(敏感度为36.5%,特异度为90.0%).乳腺癌患者血浆中TU M2-PK水平(13.3 U/ml)明显高于健康对照(7.2 U/ml,U=408.5,P<0.05)以及乳腺良性疾病患者(11.1 U/ml,U=509.0,P<0.05).乳腺癌患者血浆TUM2-PK水平及敏感度随着肿瘤分期、分级的升高而升高;淋巴结转移患者TU M2-PK水平(23.3 U/ml)显著高于未转移者(10.9 U/ml,U=237.0,P<0.01).TU M2-PK水平与疗效密切相关,病情恶化或出现转移时TU M2-PK升高,在临床治疗有效时又有所下降;而患者病情稳定时,基本维持在同一水平.结论 TU M2-PK测定可提高对乳腺癌诊断的敏感度,是乳腺癌患者病情监测、疗效观察及预后判断的有效指标。

目的 探讨变性高效液相色谱技术(DHPLC)在快速诊断β地中海贫血及分型中的应用价值.方法 采用外周血红细胞平均体积(MCV)、红细胞分布宽度(RDW)、红细胞脆性和Hb电泳4项指标相结合的方法筛选地中海贫血可疑标本226份.运用PCR反向斑点杂交技术(PCR-RDB)和DHPLC对226份可疑标本进行基因分型确诊.结果 226份可疑静脉血标本中,经PCR-RDB和DHPLC确诊的β地中海贫血为69份,两种方法检测缺失和突变的基因型别完全一致,占地中海贫血筛查总人数的30.5%.其中CD41/CD42(-TCTT)移码突变37例(54%);IVS-Ⅱ-654(C→T)插入序列突变12例(17%);TATA-28(A→G)转录突变10例(15%);CD17(A→T)无义突变5例(7%);CD71/CD72(+A)移码突变5例(7%).结论 DHPLC可快速、高效和准确地对β地中海贫血进行基因分型诊断。

目的 建立骨髓基质细胞(BMSC)固紫B盐细胞化学染色法,并评估其临床应用价值.方法 将传代培养的BMSC、骨髓、胸腔积液及腹腔积液标本制成涂片,行固紫B盐染色,观察细胞的着色情况及阳性BMSC形态特征,计数和比较再生障碍性贫血组(AA)、增生性贫血组与健康对照组骨髓标本的BMSC数;并以健康对照组BMSC数的下限值作为AA的诊断界点,随机双盲法评估该方法的诊断价值,计算敏感度、特异度、阳性似然比及阴性似然比.结果 BMSC胞质染成紫红色,胞核不着色,其他细胞(粒、红、巨三系,单核、巨噬细胞,淋巴细胞,浆细胞,间皮细胞等)均不染色;AA组BMSC计数为(1.07±0.29)个,增生性贫血组为(2.26±0.37)个,健康对照组为(1.58±0.33)个,AA组BMSC计数明显低于增生性贫血组和健康对照组(q值分别为24.29、8.83,P均<0.01),健康对照组低于增生性贫血组(q=16.41,P<0.01);本法诊断AA的敏感度、特异度、阳性似然比、阴性似然比分别为90%、93%、12.86、0.11.结论 固紫B盐染色方法操作简便,特异性强,对骨髓的增生程度评价及贫血的鉴别诊断具有较高的诊断价值。

目的 探讨流式微球分析术(CBA)检测输卵管炎性不孕症患者炎性细胞因子的临床意义.方法 用CBA法检测并分析40例输卵管炎性不孕患者和40名健康妇女血液中T淋巴细胞亚群、炎性细胞因子谱,并比较分析其中30例患者血清与腹腔积液炎性细胞因子谱的差异.结果 输卵管炎性不孕症患者T辅助(Th)细胞(CD3+CD4+)比健康组明显减少(t=2.1236,P<0.05),T抑制(Ts)细胞(CD3+CD8+)明显增多(f=2.4369,P<0.05),Th/T.比值显著性降低(t=2.8392,P<0.01).血清IL-8(t=4.9302,P<0.01)、IL-1B(t=5.5449,P<0.01)、IL-6(t=3.4975,P<0.01)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α,t=5.6623,P<0.01)等炎性细胞因子,在输卵管炎性不孕症患者中都显著高于健康妇女;炎症抑制因子IL-10(t=5.3428,P<0.01)和IL-12(t=5.9847,P<0.01)也显著性升高.30例输卵管炎性不孕症患者血清与腹腔积液检测结果比较,显示除IL-10外,血液标本中IL-8(t=2.2113,P<0.05)、IL-1β(t=2.9756,P<0.01)、IL-6(t=2.3298,P<0.05)、TNF-α(t=3.2895,P<0.05)、IL-12(t=3.3281,P<0.05)均高于腹腔积液标本.结论 输卵管炎性不孕症患者存在炎性细胞因子网络的系统性紊乱;CBA能够高通量、高灵敏度地检测炎性细胞因子失调状况。

目的 为进一步探讨HCV核心蛋白(CORE)在HCV致病机制中的作用,观察基因1b型不同截短片段CORE在瞬时转染HepG2细胞中亚细胞器的分布状况.方法 将含有增强型绿荧光蛋白(EGFP)的3个基因1b型不同准种HCV和同一准种5个不同截短片段的CORE融合蛋白真核表达质粒pEGFF-CORE,瞬时转染HepG2细胞,用荧光显微镜及激光共聚焦观察它们在亚细胞的分布状况.结果 基因1b型不同准种CORE的N端1～172氨基酸(腿)主要表达于胞质,含有N端越长表达于胞质内越多,而N端1～58 aa主要表达于核内,而59～126 aa及127～172 aa胞质和核内均有表达.结论 不同区段CORE在细胞内亚细胞器的表达部位不同,与其在致病机制中功能的发挥可能存在一定的关系。

目的 构建针对人的增殖诱导配体(a proliferation-inducing ligand,APRIL)基因的短发夹RNA(small hairpin RNA,shRNA)慢病毒表达载体,并在感染293T细胞后检测病毒滴度及适合的感染复数(multiplicity of infection,MOI)值.方法 以人APRIL基因为靶点,筛选出3条shRNA靶序列:shAPRIL1210、shAPRIL1754、shAPRIL1604;各自合成靶序列的Oligo DNA,退火形成双链DNA后分别与经酶切的pGEL-GFP载体连接,构建3个慢病毒表达载体LV-shAPRIL1210、LV-shAPRIL1754、LV-shAPRIL1604;将连接产物分别转化到DH5α感受态细胞,经PCR及DNA测序鉴定.再用LV-shAPRIL与包装质粒pHelper 1.0、pHelper 2.0共转染293T细胞,包装产生慢病毒,以293T细胞绿色荧光蛋白的表达水平确定病毒滴度及适合的MOI值.结果 PCR和测序结果与构建的3个慢病毒载体LV-shAPRIL1210、LV-shAPRIL1754、LV-shAPRIL1604的预期结果一致,经包装产生的慢病毒滴度分别为5×107、6×107、4×107转导单位(TU)/ml;适合高效感染的MOI值为5.结论 成功构建人APRIL基因3个慢病毒表达载体LV-shAPRIL,为后继的在相关靶细胞中诱导特异性的APRIL基因沉默奠定基础。

目的 为观察甲氨蝶呤(MTX)对映体诱导肺癌A549细胞株耐药后叶酰聚谷氨酸合成酶(folylpolyglutamate synthetase,FPGS)含量变化,建立一种用毛细管电泳免疫-激光诱导荧光术(CEIA-LIF)测定FPGS的方法,以便为深入探讨肿瘤耐药机制提供新的实验手段.方法 实验分别选用耐药浓度为25 μmol/L的L-(+)-MTX和D-(-)-MTX肺癌A549耐药细胞株,以MTX敏感的细胞株作对照,培养获取上述3株细胞,并粗提取FIGS做CEIA-LIF和免疫印迹(WB)实验;用异硫氰酸荧光素(FITC)标记FPGS抗体,与提取的FPGS进行免疫反应;然后采用CEIA-LIF,根据不同分子量蛋白具有不同的迁移时间,分离检测标记蛋白,检测L广(+)-MTX和D-(-)-MTX作用耐药前后3株肺癌A549细胞株中FPGS表达含量;同时用WB作对照,以评价CEIA-LIF的特异性和FPGs定量的准确性.结果 CEIA-LIF分离标记FPGS抗体与免疫复合物的分离时间分别为7.1、8.9 min,分离度(R)=4.5,在10 min内即完成蛋白的分离和检测.经WB鉴定3株细胞液氮冻融裂解后离心提取液中组分与FPGS抗体无非特异性条带出现.CEIA-LIF测定敏感细胞株的检测下限为0.68 mg/μl细胞;而其检测25 μmol/L L(+)-MTX和25 μmol/L D-(-)-MTX诱导耐药细胞中FPGS的表达含量分别为对照组敏感细胞的46.59%和48.36%.结论 本研究建立的CEIA-LIF检测FPGS法具有高效快速的特点,且具与WB类似的特异性;同时提高了检测的敏感度.L-(+)-MTX和D-(-)-MTX诱导耐药后细胞株中FPGS表达含量较敏感细胞株明显减少,证明MTX耐药细胞株FPGS表达含量受损。

目的 探讨膀胱移行细胞癌组织中A激酶锚定蛋白12(A-kinase anchoring protein12,AKAP12)基因mRNA表达水平和基因启动子区CpG岛甲基化程度及其与临床病理参数之间的关系.方法用荧光定量逆转录PCR(FQ-RT-PCR)和甲基化特异性PCR(MSP)检测30份膀胱移行细胞癌组织及其癌旁组织中AKAP12基因mRNA的表达水平及其启动子区CpG岛甲基化状态.并用亚硫酸盐修饰后PCR产物进行克隆测序.结果在30份膀胱移行细胞癌患者组织标本中,AKAP12在癌组织中表达下调比率为73.3%(22/30),在病理Ⅱ和Ⅲ级膀胱移行细胞癌中下调比率明显高于Ⅰ级(P=0.02).MSP检测结果显示,膀胱移行细胞癌甲基化比率为53.3%(16/30),且与膀胱移行细胞癌TNM分期(r=0.52,Pn=0.03)和病理分级(r=0.61,Pn=0.01)有明显的相关性.结论AKAP12基因启动子区出现的异常甲基化可导致其在膀胱移行细胞癌中的表达沉默,且与膀胱移行细胞癌的发生有关。

目的 构建人精子特异性乳酸脱氢酶(hLDH-CA)的原核表达载体,在大肠杆菌中进行表达,将重组hLDH-CA应用于抗精子抗体(ASA)的检测.方法 以人睾丸TripIEx cDNA文库为模板,PCR扩增hLDH-CA编码序列.PCR产物经Hind Ⅲ-Xho I酶切后,克隆至表达载体pET-28a(+)中,在E.coli BL21(DE3)中诱导His-Tag融合的重组蛋白表达.用免疫印迹、酶活性测定等方法鉴定表达产物.以纯化的重组hLDH-CA为基质,建立检测ASA的ELISA方法.结果 构建了hLDH-C4原核表达载体pET-28a(+).hLDHC.在IPTG的诱导下,重组菌可高效表达相对分子质量35 000的产物,与预期大小相符.免疫印迹显示,重组蛋白可被抗His-Tag单克隆抗体和兔抗人LDH-C4抗体识别.重组菌在IPTG诱导后,其裂菌液的乳酸脱氢酶活性是诱导前的11.2倍.用基于hLDH-C4抗原的间接ELISA法,在一组不育症患者中检测血清抗hLDH-CA抗体,阳性率达30.51%.结论 成功地克隆了hLDH-C4编码序列,并在E.coli BL21(DE3)中获得高效的表达,重组hLDH-C4在ASA检测中得到初步应用。

宫颈癌为女性最常见的癌症之一,我国宫颈癌的发病率和死亡率占全世界的1/3,且有年轻化的趋势[1-2].大量研究显示,持续的高危型人乳头瘤病毒(humarl papillornavims,HPV)是宫颈癌及癌前病变发生的必要条件.据国际宫颈癌生物学研究(IBSCC)机构报道,宫颈癌组织中HPV DNA的检出率高达93%[3].因此,将HPV DNA检测纳入宫颈癌及癌前病变筛查势在必行.目前使用最多的是美国Digene公司的2代杂交捕获分析(hybrid capture 2,HC2),也是美国食品和药品管理局(FDA)惟一批准用于临床的非放射性HPVDNA检测技术,具有较高的敏感度和特异度[4],但此检测试剂昂贵,完全依赖进口,在经济欠发达地区很难推广.实时荧光定量PCR检测(FQ-PCR)是最敏感的核酸扩增技术,可在较短时间内获得非常准确的结果,检测HPV的成本明显低于HC2分析.本研究通过比较HC2和FQ-PCR法检测HPV DNA结果,评价FQ-PCR的临床应用价值。

目的 研究人体静脉血样采集管的不同内表面状态对血小板活化的影响.方法 用聚环氧烷-聚二甲基硅氧烷共聚物(L722)、硅烷偶联剂对塑料管(PET)和玻璃管制膜,对L722玻璃管、L722 PET管、玻璃管、PET管、硅烷偶联剂制膜玻璃管及聚丙烯管(PP)内表面进行接触角分析.用上述材料的血样采集管采集血液标本并在室温下滚动混匀孵育110～60 min.用流式细胞术(FCM)检测血小板激活标志物CD62p.结果 不同材质及表面处理血液采集管的内表面的接触角大小在一定程度上反映了血小板活化率,但并不呈线性关系.PET管经L722表面改性后表达CD62p阳性的活化血小板百分率由(37.4±14.8)%下降到(21.9±12.4)%.玻璃管对表达CD62p阳性的活化血小板百分率为(54.5±18.6)%,明显大于PET管.玻璃管制膜后对血小板的激活明显减少,用硅烷偶联剂制膜的玻璃管表达CD62p阳性的活化血小板百分率为(28.3±8.2)%,明显低于L722制膜玻璃管.用PET作为基体材料经过L722表面处理后对血小板活化明显低于L722制膜的玻璃管的(41.5 ±15.9)%和用硅烷偶联剂制膜的玻璃管的(22.0±12.8)%.不同管对血小板活化时间进程显示:60 min L722 PET管和聚丙烯管的血小板活化与30 min的结果差异无统计学意义.结论 不同材质及表面处理血液盛装管所导致的不同表面能状态对血小板活化的影响有明显差异,硅油表面处理能有效改善血液采集管的血液相容性.FCM检测CD62p是评价血液收集管材料介导的血小板活化的灵敏指标,对建立血液盛装材料表面处理模型及筛选临床应用材料具有重要意义。

目的 调查国内临床实验室使用的6个系列进口配套γ谷氨酰转移酶(GGT)检测系统测定结果的精密度和正确度,为实验室酶学测定确定具有准确性的目标系统提供依据.方法 国内两家候选酶学参考实验室使用国际临床化学和检验医学联合会(IFCC)推荐的GGT参考测量方法,为5个活性浓度水平的新鲜冰冻混合人血清确定靶值,实验人员用基于厂家配套校准品等方式校准的6个厂家配套检测系统对血清样本进行检测,每个厂家均由独立分布于5个实验室的5台仪器组成(其中1个厂家为2台),各台仪器于实验前由各厂家工程师进行了一次日常维护.收集检测数据,统计同一厂家检测系统、不同厂家检测系统间检测结果的精密度,及各厂家检测系统测定结果均值与参考方法靶值的偏倚.结果 6个厂家(A、B、C、D、E、F)配套测定系统间5个水平检测结果的差异为16.1%～35.4%;不同检测系统间5个水平样本测定结果的变异系数(CV)为5.3%～8.8%;同厂家配套检测系统间5个水平样本测定结果CV分别为A:2.17%～5.07%、B:4.21%～10.98%、C:0.52%～2.38%、D:1.35%～2.59%、E:0.23%～1.54%、F:1.83%～2.38%.各厂家测定系统检测结果均值与靶值的偏倚分别为A:0.43%～8.41%、B:-1.49%～-13.04%、C:11.2%-17.73%、D.0.19%～4.62%、E:-0.30%～-2.63%、F:-0.46%～7.90%.调查显示:有2个厂家结果在本次调查的浓度范围内偏倚均小于1/4美国<临床实验室改进法案修正案>(CLIA'88)规定的允许总误差(TAE);有2个厂家结果在特定浓度范围内偏倚可满足1/4 TAE;有2个厂家结果的偏倚在大多数情况下近于或大于1/2 TAE.调查同时显示:在高、低浓度水平,有半数以上调查厂家结果的偏倚大于1/4 TAE.结论 不同厂家配套检测系统间结果的均值存在明显差异,其结果的可比性明显劣于同一厂家检测系统间的可比性;厂家应进一步保证其检测系统经参考方法校正,并应注重对检测系统测定线性的校正。

2008年5月12日,四川省汶川发生8级地震,我院接受了大量地震灾区伤员.在收治的患者中有1例高度怀疑气性坏疽的患者,结合临床特征和实验室病原学检测,确诊是由产气荚膜梭菌引起双小腿气性坏疽,现报告如下。

诺罗病毒(Norovirus)是引起急性非细菌性胃肠炎的主要病原微生物,约有60%～80%的人类胃肠炎的暴发流行是由于诺罗病毒引起[1-2].它在世界范围内导致不同年龄段的人群发病.诺罗病毒具有很强的传播性,可以通过粪口传播、也可以通过人与人直接接触传播、还可以通过飞沫传播.特别是在人口密集的区域导致暴发流行,例如:在老年公寓、幼儿园、医院、学校、餐馆、游轮、军营等.近几年医院内发生诺罗病毒感染呈现上升趋势[2-3].诺罗病毒感染的病程发展很快,患者在24 h内出现呕吐、腹泻、恶心、低热等临床症状,并于数日内痊愈.由于诺罗病毒在外界环境中非常稳定,是接触性传播,很小剂量即可使人发病,因此诺罗病毒很容易流行,并且很难得到控制.诺罗病毒是小、单链RNA病毒,属于杯状病毒.分为不同的基因组,导致人类腹泻的主要是G Ⅰ和GⅡ基因组,最近的研究显示G Ⅰ、GⅡ基因组至少又分别被分为14、17基因型[4].我国的主要流行株是GⅡ基因组[5-6]。

武汉大学人民医院的李艳博士等在E-选择素S128R基因多态性与冠心病的相关性研究中发现E-选择素SR基因型是冠心病的遗传易感因素。

北京大学第一医院血液科朱平教授课题组的刘静博士,对强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)一家系成员的血清蛋白质组学研究发现,结合珠蛋白前体蛋白与强直性脊柱炎发病相关。

答:随着实时荧光定量PCR成为检测基因表达谱的高通量、高精度的方法,基因表达分析在生物学研究中得到广泛应用.采用稳定的内参基因对反应进行标准化可以增加该方法的敏感度、重复性和动态范围,理想的内参基因在所研究的组织、细胞和实验条件下均恒定表达.管家基因是维持细胞最低限度功能不可少的基因,在所有类型细胞中都表达,是广泛应用的内参基因.但是,很多研究表明管家基因在不同组织、细胞以及不同条件下表达量并非永远恒定,甚至差别很大,至今尚未发现在所有条件下均恒定表达的管家基因.因此,对特定基因表达研究中候选管家基因的表达稳定性进行评价,筛选出最为稳定的管家基因作为内参基因,对保证研究结果的真实、可靠至关重要。

患者男,36岁.因不育于2001年5月就诊. 　　患者结婚11年,夫妻性生活每周2～3次.其妻,35岁,月经周期规律.曾怀孕8次,胚胎均约在怀孕8～10周停止发育,B超监测未见胚芽,而自然流产.体检:身高175 cm.男性体态:第二性征发育好,阴茎大小正常,双侧睾丸及附睾无触痛,无结节,未见明显精索静脉曲张。

自1968年shore和Shore[1]用聚丙烯酰胺琼脂凝胶电泳法(polyacrylamide gel electrophoresis)从人高密度脂蛋白(HDL)中分离纯化得到载脂蛋白(apoliprotein/apoprotein,Apo)以来,随着对Apo的生理、生化、病理及分子生物学研究的迅速发展与深入,Apo的基础与临床研究在脂类学(lipidology)中占有很重要的地位。

由中山大学达安基因股份有限公司（股票代码002030）与中国高新投资集团公司共同出资筹建的高新达安健康投资有限公司，以达安医学检测中心为核心产业，本着“一流的管理、一流的人才、一流的技术、一流的服务、一流的质量”的宗旨和“人无我有，人有我好，人好我廉”的经营理念，致力构建网络式医疗检测服务模式，打造高质量的中国医学独立实验室，