2007年 · 第30卷第03期

介绍临床生化检验参考方法的作用、特性和目前生化检验参考方法的主要分析原理,为参考方法建立和应用工作提供参考.参考方法是参考系统的关键组成部分,是临床检验标准化的重要基础.参考方法需具有明确的、符合特定要求的测量不确定度,因而需基于可靠测量原理.对于有机小分子生化检验项目,其参考方法一般基于仪器分析原理,其中的同位素稀释质谱(ID/MS)原理在理论上最为可靠,是目前国际上所主要采用的参考方法分析原理.但ID/MS分析成本高,其他仪器分析原理可能也将在临床检验标准化中发挥重要作用。

电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)是20世纪80年代发展起来的分析测试技术,它以独特的接口将电感耦合等离子体的高温电离特性与四极杆质谱仪的灵敏快速扫描特性相结合,近年来已成为痕量、超痕量无机成分及同位素分析公认的可靠分析技术.该技术具有检出限低、动态线性范围宽、谱线简单、分析精密度高、分析速度快、可提供同位素信息以及可同时测定多种元素等特征,已广泛应用于地质、环境、生物、医学、冶金和化工等多种研究领域[1]。

蛋白酶激活受体(protease activated receptors,或proteinase activated receptors,PARs)是1991年后陆续发现的G蛋白偶联受体(GPCRs)家族中的4个新成员.PARs的表达几乎遍及所有涉及过敏反应的细胞,现将PARs在过敏反应中的作用特点等综述如下。

四川大学华西医院实验医学科是于2002年底在医院的统一规划下整和了全院的临床检测实验室后成立的临床检测中心,下设8个临床检测专业实验室及一个前处理组.为了对实验医学科的工作实行标准化质量管理,提升临床检测的服务质量并建立科学的临床实验室质量管理体系,在医院领导全方位的大力支撑与美国中华医学基金会(china medical board,CMB)"临床实验室认可"课题的资助下,于2003年初在全科启动了美国病理学家学会(college of american pathologist,CAP)的实验室认可计划(laboratory accreditation program,LAP)。

目的 观察血液透析和腹膜透析患者血浆总肉毒碱(TC)和游离肉毒碱(FC)的水平.方法 200名正常对照组标本来自本院健康体检人群,受检病例为本院肾脏内科患者;TC和FC采用循环酶法测定,在日立7170全自动生化分析仪上测定.结果 200名正常对照组TC(56.52±9.61)μmol/L,FC(46.60±8.23)μmol/L;37例血液透析患者透析前TC(41.47±13.22)μmol/L,FC(24.58±8.91)μmol/L;与正常对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01);118例腹膜透析患者TC(40.59±9.94)μmol/L,FC(25.52±7.45)μmol/L;与正常对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01).血透患者透析后TC(14.62±5.32)μmol/L,比透析前下降(64.70±5.95)%,FC(8.62±3.01)μmol/L,比透析前下降(63.84±9.14)%,且TC与FC的水平与透析程呈负相关(r=-0.68,-0.73);118例腹膜透析患者TC与FC的水平与透程无关(P＞0.05).11例血液透析患者静脉给予左旋卡尼汀1 g,透析后TC(70.31±36.18)μmol/L,FC(35.53±19.25)μmol/L,与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 血液透析和腹膜透析患者普遍存在肉毒碱缺乏,血液透析患者随着透析程的延长,缺乏越严重.静脉给予左旋卡尼汀可有效纠正血液透析患者循环肉毒碱的下降。

目的 评价血小板相关抗体IgG(PAIgG)初筛能否提高单克隆抗体特异性俘获血小板抗原(MAIPA)技术对免疫性血小板减少性紫癜(ITP)诊断的敏感性.方法 用酶联免疫吸附竞争法检测PAIgG,改良MAIPA技术检测抗血小板GPⅡb/Ⅲa、GP Ⅰb/Ⅸ特异性抗体;190例血小板减少症患者同时行PAIgG及MAIPA检测,其中132例为ITP患者;采用Kappa检验进行两种诊断试验的一致性分析.结果 单做PAIgG及PAIgG与MAIPA并联诊断ITP的敏感度分别为85.6%和90.2%,较单做MAIPA(53.0%)分别提高32.6%与37.2%;特异度分别为29.3%和24.1%,较单做MAIPA(81.0%)则分别下降51.7%与56.9%;PAIgG与MAIPA串联诊断ITP的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为48.5%、86.2%、88.9%和42.4%,均与单做MAIPA相当.ITP与非免疫性血小板减少症患者PAIgG与MAIPA测定结果之间的Kappa值分别为0.129与0.012,即两种试验对ITP及非免疫性血小板减少症诊断的一致性均较差.结论 PAIgG检测不能作为MAIPA的过筛试验。

目的 分析线粒体DNA A1555G(mitochondrial DNA A1555G,mtDNA A1555G)在中国人非综合征型耳聋(NSHI)患者中的突变率及突变性质.方法 用PCR-限制性内切酶切分析(-RFLP)和PCR产物直接测序法对325例中国人NSHI患者、50名健康体检者的血样进行mtDNAA1555G突变检测及测序分析.结果 325例NSHI患者mtDNA A1555G突变率为14.5%(47/325),47例mtDNA A1555G突变中28例为均质性突变,19例为异质性突变;50名健康体检者均未发现同样突变.结论 NSHI患者mtDNA A1555G突变率较高,并为均质性和异质性两种突变,这对进一步研究中国人耳聋相关基因突变与临床表型的关系奠定了基础。

目的 研究人乳头瘤病毒(HPV)11型E7蛋白在原核细胞的表达及其在尖锐湿疣(CA)血清学诊断中的应用价值.方法 用PCR从CA患者组织中扩增HPV11 E7全长基因,构建重组质粒pET32a(+)/HPV11 E7,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导后表达,用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和蛋白质印迹法(WB)分析鉴定;经镍螯合亲和层析胶体(Ni-NTA Agarose)纯化HPV11 E7融合蛋白后作抗原,用间接ELISA法对93例CA患者、43例宫颈癌患者和58名健康对照者血清标本进行IgG抗体检测.结果 HPV11 E7融合蛋白在原核表达系统中呈较高效表达(浓度为40μg/ml).CA组、宫颈癌组和健康对照组血清IgG抗体均值分别为1.545±0.131、0.586±0.155和0.674±0.150,阳性率分别为76.3%(71/93)、11.6%(5/43)和5.2%(3/58);CA组血清IgG抗体均值及阳性率均高于宫颈癌组和对照组(均P＜0.01).结论 HPV11 E7融合蛋白具较强的抗原性,用于CA血清学诊断试剂的研制具有临床应用价值。

目的 探讨诱导痰细胞分类对慢性咳嗽患者病因诊断及气道炎症评价的作用.方法 对335例慢性咳嗽患者,进行诱导痰细胞学分类检测,观察诱导过程的不良反应并同时结合通气功能、支气管激发试验等相关检查进行病因诊断分析.同时选择103名健康人作为对照.结果 322例患者得到明确诊断,其中典型支气管哮喘(TA)84例,嗜酸粒细胞性支气管炎(EB)62例,过敏性咳嗽(AC)42例,咳嗽变异型哮喘(CVA)40例,胃食管反流性咳嗽(GERC)37例,鼻后滴漏综合征(PNDs)32例,其他病因25例,病因未明13例.AC、EB、CVA和TA等过敏性气道炎症患者的痰嗜酸粒细胞比例(0.005,0.052,0.059,0.234)与其他病因和正常对照者(0)比较差异有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05),EB与CVA患者比较差异无统计学意义,但均显著低于TA患者.AC、EB、CVA和GERC患者的痰中性粒细胞比例(0.675,0.675,0.672,0.590)与正常对照者(0.430)比较差异有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05),但不同病因患者间该指标差异无统计学意义.除PNDs外,常见病因导致的慢性咳嗽患者的痰巨噬细胞比例均低于正常对照者,差异有统计学意义(P＜0.01).诱导痰成功率为97.3%,不良反应发生率为25.4%,主要表现为恶心、呕吐、咽干等不适,但反应较轻,大多数能耐受.结论 不同病因慢性咳嗽患者的气道炎症的种类和程度各异,诱导痰细胞分类在慢性咳嗽病因诊断和气道炎症评价中起着重要作用。

目的 比较几种国内市售第4代和第3代HIV检测试剂盒检测HIV早期感染的能力.方法 使用8套BBI公司HIV阳转血清盘(PRB924、930、940、942、943、944、946、948)和2套国家艾滋病参比实验室HIV阳转血清盘(2004XJ727、20505217),分别用1种HIV抗原检测试剂盒、2种第4代HIV检测试剂盒和4种第3代HIV抗体检测试剂盒进行检测,分析它们对HIV早期感染的检出情况.结果 在每套血清盘中,第4代试剂盒都比第3代试剂盒较早检出HIV感染,窗口期平均提前4～8 d,但与抗原检测试剂盒相比要滞后2～4 d.不同品牌试剂盒的检测能力有别.结论 第4代HIV试剂盒可以缩短HIV检测的窗口期,对于诊断早期感染、保证血液安全等具有一定意义。

目的 建立基质金属蛋白酶9(MMP9)的双抗体夹心ELISA检测方法,探讨血清中MMP9在正常人及肝癌患者中的差异.方法 从人肝组织中经过反转录扩增出MMP9基因721～1 156 bp区段,插入到原核表达质粒pQE30中,在大肠埃希菌M15中诱导蛋白表达.以纯化的融合蛋白HIS-MMP9为抗原免疫实验用兔及豚鼠,得到的MMP9抗血清经过纯化后,建立双抗体夹心ELISA法.对227份正常及193份肝癌患者血清中的MMP9进行检测.结果 SDS-PAGE显示所表达的HIS-MMP9融合蛋白相对分子质量约为17 000;以原核表达蛋白为抗原制备的MMP9抗血清可有效地识别重组MMP9和中性粒细胞和HepG2细胞内源性MMP9蛋白;利用建立的MMP9 ELISA检测技术发现肝细胞癌患者血清中MMP9的含量高于正常人群,差异具有统计学意义,P＜0.001.结论 建立的双抗体夹心ELISA方法可用于血清MMP9的检测,为建立以MMP9为检测指标的肝细胞癌患者转移复发筛查方法提供了科学基础。

目的 建立检测患者血清中HBV的x抗原(HBxAg)及其抗体(anti-HBx)的方法,阐明其在慢性肝炎、肝硬化和肝癌患者血清中的临床意义.方法 将HBV的x基因全长克隆至原核表达载体pET30a(+)中,构建pET30a-X原核表达载体,转化入大肠杆菌BL21(DE3)后,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达His-HBx融合蛋白,纯化后将重组蛋白免疫家兔,制备兔抗HBx多克隆抗体.应用纯化后的兔抗HBx多克隆抗体和纯化后的重组蛋白,建立检测血清中HBxAg和anti-HBx的方法.应用建立的ELISA法,分别对慢性乙型肝炎、肝硬化和肝癌患者组及正常对照组血清中HBxAg和anti-HBx进行检测.结果 HBxAg/anti-HBx在慢性乙型肝炎、肝硬化和肝癌患者中的阳性率分别为8.7%/10.4%,17.9%/40.6%,9.8%/34.4%.统计学分析显示,与慢性乙型肝炎相比,肝硬化或肝癌患者血清中anti-HBx的阳性率较高(P＜0.01).结合临床检测的其他HBV血清学指标,发现在anti-HBs阳性病例中,anti-HBx阳性率为5.2%(1/19);而在HBsAg、HBeAg和anti-HBc 3项同时为阳性的病例中,anti-HBx的阳性率为28.9%(39/135),二者相比,差异具有统计学意义(P＜0.05).213名正常对照血清中HBxAg和anti-HBx均为阴性.结论 血清中anti-HBx并非一个保护性抗体,标志HBV的感染和复制,是从慢性乙型肝炎向肝硬化和(或)肝癌发展的血清标志之一。

急性白血病(acute leukemia,AL)是由于不成熟细胞呈克隆性扩张,被阻滞在一定的分化阶段而发生的.多年来,白血病的诊断采用法国、美国、英国(French-AmericanBritish,FAB)协作组以形态学和细胞化学染色检查为基础的方案.由于其方法简便实用,得到了广泛的应用,并为世界各地血液学工作者提供了统一的诊断标准,促进了血液专业成果的交流.近10年来,随着科学技术的发展和对疾病本质认识的深入,加入了免疫学、遗传学及分子生物学技术,WHO经多位专家反复讨论取得了共识,形成了较为完整的白血病形态学、免疫学、细胞遗传学和分子生物学(Morphologic,Immunologic,Cytogenetic,and Molecular biologic,MICM)的分型诊断体系[1].这一分型诊断标准体现了现代科技的发展和应用,我院近2年来,推行了WHO的分型方案,对2004-2005年确诊的307例急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)进行了分析探讨。

目的 探讨结核分枝杆菌抗原(Mtb-Ag)对中性粒细胞自发凋亡的影响.方法 取健康成人外周血分离中性粒细胞,加Mtb-Ag培养24 h,或用核因子κB(NF-κB)抑制剂N-甲苯磺基-L-苯乙胺酰氯甲基酮(TPCK)预处理30 min后,膜联蛋白V(AnnexinV/PI)染色,流式细胞术观察细胞凋亡情况;并用凝胶电泳迁移率变动分析(EMSA)化学发光法检测Mtb-Ag刺激0、1、2、4、6、24h后,中性粒细胞NF-κB的DNA结合活性.结果 加Mtb-Ag(1.125 mg/ml)培养的中性粒细胞凋亡率(32%±3%)与中性粒细胞体外培养24 h后自发凋亡率(55%±6%)相比,明显降低(P＜0.05).Mtb-Ag(1.125 mg/ml)作用中性粒细胞1 h后明显可见NF-κB活化,2 h NF-κB的DNA结合活性达高峰,24h回到静息水平;经TPCK(30 μmol/L)预处理后可阻断Mtb-Ag的抑制凋亡作用.结论 经激活NF-κB介导后,Mtb-Ag对中性粒细胞自发凋亡有抑制作用。

目的 研究儿童患者中对碳青霉烯类抗生素耐药的绿脓假单胞菌产金属酶的基因型.方法 本研究收集了2003年12月至2005年11月我院住院患儿中分离出的对碳青霉烯类抗生素耐药的绿脓假单胞菌59株.使用E试验法检测产金属酶的耐药表型,PCR技术检测编码金属酶的IMP、VIM、SPM和GIM 4种基因型.PCR反应产物进行纯化后,使用双脱氧末端终止法进行DNA测序.将得到的拼接序列与GenBank中Blast进行同源分析,确定其基因亚型.结果 59株对碳青霉烯类抗生素耐药的绿脓假单胞菌中,纸片法检测金属酶表型结果阳性29株,占49.2%.PCR检测金属酶基因型阳性39株,占66.1%,其中IMP型阳性35株,占89.7%,VIM型阳性4株,占10.3%.未检测出SPM和GIM型金属酶.测序结果显示,IMP型测序结果均为产IMP-1亚型金属酶的绿脓假单胞菌.VIM型测序结果均为产VIM-2亚型金属酶的绿脓假单胞菌.结论 儿童患者中对碳青霉烯类抗生素耐药的绿脓假单胞菌,产金属酶率高于成人报道.产生的金属酶同时存在IMP-1和VIM-2两种基因型,其中以IMP-1亚型为主,少部分为VIM-2亚型.产金属酶是儿童患者对碳青霉烯类抗生素耐药的绿脓假单胞菌的重要耐药机制.在儿科进行对碳青霉烯类耐药的绿脓假单胞菌产金属酶的监测十分重要。

目的 研究大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中产质粒型AmpC酶株的比率、酶的基因型及其流行病学状况.方法 收集本院、福建省立医院两家医院2004年9月至2005年3月的67株耐头孢西丁不重复大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌,用酶提取物三维试验检测高产AmpG酶;抽提高产AmpC酶株质粒,用PCR及产物序列分析确定质粒AmpC酶和β内酰胺酶的基因型;质粒转化试验定位耐药基因;ERIC-PCR指纹图确定产酶株间的同源关系.结果 福州两家医院耐头孢西丁菌中产质粒型AmpC酶的发生率,大肠埃希菌分别为16.7%和10.5%,肺炎克雷伯菌则分别为8.0%和0.2株肺炎克雷伯菌产DHA-1型、4株大肠埃希菌产CMY-2型、1株大肠埃希菌产CMY-22型质粒AmpC酶;5株产CMY型AmpC酶的大肠埃希菌还分别同时产CTX-M-14、CTX-M-27、TEM-144和TEM-1型β内酰胺酶.7株菌中,1株肺炎克雷伯菌和3株大肠埃希菌可将头孢西丁耐药性转移给受体菌.7株产酶菌ERIC-PCR指纹图显示,2株肺炎克雷伯菌来自相同克隆,其余菌株来自不同克隆.结论 福州地区发现产DHA-1型AmpC酶肺炎克雷伯菌和产CMY-2型及CMY-22型AmpC酶大肠埃希菌.CMY-22型AmpC酶和TEM-144型β内酰胺酶是国内外首次报道,GenBank登录号为DQ256079和DQ256080。

目的 了解金黄杆菌属β内酰胺酶基因型的分布.方法 采用琼脂稀释法检测43株脑膜炎败血金黄杆菌、16株产吲哚金黄杆菌和10株黏金黄杆菌对15种抗生素的最低抑菌浓度;用三维试验和改良三维试验检测碳青霉烯酶;用2-巯基丙酸协同试验检测金属酶;用6对针对金黄杆菌属的特异性引物扩增金黄杆菌的β内酰胺酶基因并测序.结果 喹诺酮类抗生素的MIC50和MIC90较低,其余的抗生素的MIC值均很高,黏金黄杆菌的MIC值要低于其他两种金黄杆菌.表型筛选试验脑膜炎败血金黄杆菌中共检测到26株产金属酶,阳性率为60.5%,43株全部产超广谱β内酰胺酶,阳性率为100%;产吲哚金黄杆菌和黏金黄杆菌均未检出超广谱β内酰胺酶,产吲哚金黄杆菌检出11株金属酶,阳性率为68.8%;黏金黄杆菌检出6株金属酶,阳性率为60%.脑膜炎败血金黄杆菌检出金属酶基因型Bla-B1、B2、B3、B5、B11共5种,Bla-GOB2、GOB4、GOB6、GOB8共4种;检出超广谱β内酰胺酶CME-1型1种.产吲哚金黄杆菌3株均为IND-1型金属酶基因型.黏金黄杆菌检出6株CGB金属酶基因型.同时发现产吲哚金黄杆菌有8株,黏金黄杆菌有3株没有检测到目前国内外所报道的基因型.结论 金黄杆菌属基因型的研究为临床抗生素的合理应用,降低医院感染以及新型抗生素的开发提供重要的指导意义。

MS2噬菌体是单链正链RNA病毒,为26 nm长的20面体,共有3 569个核苷酸,包含有3个基因,编码成熟酶蛋白、包膜蛋白、复制酶蛋白和裂解蛋白等4种蛋白质分子.噬菌体由180个包膜蛋白单体、一分子成熟酶蛋白和一分子基因组RNA组成.在MS2噬菌体包膜蛋白的研究中发现包膜蛋白与噬菌体复制酶5'端由19个碱基(19 mer)组成的茎环结构RNA序列有特异性相互作用,这种作用可引发噬菌体外壳的组装,同时,将噬菌体基因组RNA包装到包膜内.国外研究人员发现在包装位点后引入非噬菌体基因序列也可以引发包装[1-3].本研究拟利用MS2包膜蛋白与RNA的相互作用来观察RNA序列对包装的影响以及基于两者相互作用构建病毒样颗粒在临床分子检测中的应用。

主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)传统上分为MHC-Ⅰ类、MHC-Ⅱ类和MHC-Ⅲ类,其中MHC-Ⅰ类、MHC-Ⅱ类在移植中比较重要.体内MHC有两种形式:一是以膜抗原形式存在于几乎所有组织细胞表面,二是以可溶形式存在于血清、尿液、精液、乳汁、唾液等多种体液与分泌液中。

系统性红斑狼疮(SLE)是一种涉及多器官的自身免疫性疾病,SLE的发病机制复杂,包括遗传和环境因素[1].EB病毒(EBV)感染是与SLE发病相关的环境因素之一.EBV通过以下几个途径诱发SLE[2]:EBV感染B淋巴细胞后引起B淋巴细胞的增殖,B淋巴细胞中EBV抗原的表达在基因易感人群中诱发SLE;EBV感染的B淋巴细胞成为产生自身抗体的细胞;SLE的自身抗原与EBV的一些蛋白如EBV核抗原1(EBNA-1)、EBV核抗原2(EBNA-2)存在同源性,针对病毒抗原的抗体能与自身抗原发生交叉反应从而诱发SLE.已发现与正常人相比,SLE患者血清中抗EBV-抗体滴度及阳性率显著升高[3],但以往的抗体检测不能反映体内EBV的感染状态.本研究采用欧蒙印迹法检测针对EBV 5种抗原的抗体,该方法能明确反映体内EBV的感染状态,据此分析SLE患者EBV的感染状态以及EBV不同感染状态与疾病活动性的关系。

人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus,hRSV)是引起婴幼儿冬春季下呼吸道感染最常见、最重要的病原体之一[1].根据病毒表面糖蛋白的抗原差异,可分为A、B两型,在我国流行的以A型RSV为主[2].本实验室在建立RSV逆转录(RT)-PCR检测方法的基础上,利用Taqman荧光定量PCR技术,建立了A型RSV荧光定量RT-PCR检测方法,有利于RSV的快速诊断和型别鉴定。

患者,女,48岁."反复发作多关节疼痛1年,伴肿痛半年,加重2周",于2006年10月8日入住本院. 　　患者于1年前无明显诱因出现右足跟疼痛,不伴肿胀,间断发作,可以忍受,无发热等全身症状,未予诊治,2周左右疼痛逐渐自行缓解.半年前患者于劳累后出现双足第一跖趾关节肿痛、伴活动受限,并逐渐出现双足4、5跖趾关节肿痛,自行口服止痛药对症治疗(药名不详),症状减轻,未再继续治疗.2周前患者受凉后出现双手中指近端指间关节疼痛,伴明显肿胀,活动受限,伴晨僵,持续1 h左右,就诊于某中医医院,查类风湿因子(RF)阳性,给予口服汤药及中成药治疗后症状缓解。

临床实验室要获得可靠的测定结果,需要建立一个全面的质量管理体系.在全面质量管理体系中,实验室质量控制(包括室内质量控制和室间质量评价)是一个重要的环节.它控制着自吸取样本至获得测定结果并对结果进行分析的整个测定过程,是保证高质量操作的必要措施,向患者提供报告的所有定量测定项目的实验室必须开展室内质量控制和参加室间质量评价。

鲍曼不动杆菌(A.baumannii,Ab)是医院内感染相关的最常见细菌之一,近年来,该菌对常用抗菌药物的耐药率逐渐上升.为了解我院Ab 临床分离株中β内酰胺酶编码基因存在状况,我们进行了相关基因的检测,现报告如下。

CD34抗原的相对分子质量为105 000～120 000,选择性地表达于早期造血干/祖细胞、小血管内皮细胞和胚胎纤维母细胞表面,该抗原在原始造血中表达最强,随着细胞分化,其表达水平逐渐减弱直至消失,因此一直作为干/祖细胞表面的一种特征性标志而广泛应用于造血干细胞基础研究和临床[1].脐带血中含有丰富的造血干/祖细胞,被认为是极具潜力的继骨髓和外周血后的第3种造血干细胞来源。

耐药结核病的早期快速诊断是结核病控制中亟待解决的关键问题之一.利用基因型检测耐药性包括PCR产物直接测序法,错配PCR法等[1-2].错配PCR技术最早由Newton等于1989年建立并用于人抗胰岛素基因缺陷的检查,目前已广泛应用于基因点突变的检测[3-4].根据PCR引物设计的不同,可将其分为间接错配PCR,即引物与野生型完全互补,以突变株为模板不能扩增得到PCR产物,和直接错配PCR,即引物与特定的点突变完全互补,以野生株为模板不能扩增得到PCR产物.已有用间接错配PCR方法检测结核分枝杆菌利福平耐药的报道[5-6].本研究以检测耐利福平的结核分枝杆菌rpoB基因531位点的点突变为对象,建立了直接错配PCR法,并与间接错配PCR法进行了比较。

目前临床实验室通常只能根据耐药表型综合判断推测产AmpC酶细菌,但其假阳性和假阴性较高.Coudron等[1]提出的改良三维试验法以及分子生物学方法等虽然准确可靠,但过程繁琐复杂,需要时间长,只适合实验室研究,难以在临床常规检测中开展.为此,我们采用乙二胺四乙胺(EDTA)浸润纸片法,具有灵敏度高、特异性强、操作简便的优点。

由中华医学会检验分会(自动生化分析应用专业委员会、糖尿病专业委员会)与《中华检验医学杂志》编辑部共同主办的临床化学分析及糖尿病实验诊断学术会议暨第三届全国自动生化分析仪应用研讨会于2006年11月24日至27日在北京召开.中华医学会检验分会主任委员丛玉隆教授任大会主席,中华医学会检验分会常委兼秘书长、自动生化分析应用专业学组组长郭健研究员、糖尿病专业学组组长潘伯申教授、中华医学会糖尿病分会秘书长季立农教授,《中华检验医学杂志》编辑部史红主任,以及部分检验分会委员、专业学组委员、会议代表、特邀代表、检验仪器及试剂生产厂商代表等共计140余人出席了大会。

刘贵建 《中华检验医学杂志》编审专家.博士研究生,主任检验医师,硕士研究生导师.1963年出生.1987年毕业于原吉林医学院临床检验系,并于首都医科大学获医学硕士学位.现任职于首都医科大学附属北京友谊医院临床检验中心,主任检验医师、副教授,首都医科大学临床检验专业教研室副主任,北京专家库成员.曾在美国VIRGINIA大学做访问学者,并从事肿瘤的细胞生物学及分子生物学相关研究。

目的 建立同位素稀释液相色谱串联质谱(LC/MS/MS)测定血清总胆固醇的方法.方法 血清样品中加入[3,4-13C2]-胆固醇作内标,用氢氧化钠水解血清胆固醇酯为胆固醇,用三氧化铬-硫酸氧化胆固醇为胆甾-4-烯-3,6-二酮,用LC/MS/MS分析胆固醇氧化产物,采用大气压化学电离源,用多反应监测(MRM)模式和选择离子监测(SIR)模式检测,用修正标准曲线法对血清样品进行定量.结果 两种检测模式的峰面积比与胆固醇浓度的线性相关系数均大于0.999 9.MRM模式测定血清总胆固醇的平均批内变异系数(CV)为0.95%(范围0.92%～0.99%),平均总CV为0.86%(0.82%～0.89%);SIR模式平均批内CV为0.64%(0.54%～0.77%),平均总CV为0.69%(0.62%～0.81%).测定国际或国家标准物质结果与靶值的平均偏差在MRM模式下为0.23%(0.14%～1.00%),SIR模式为0.24%(0.07%～1.27%).结论 成功建立了LC/MS/MS测定血清总胆固醇的方法,方法特异、精密、简便,可望用作血清胆固醇测定的参考方法。

目的 建立一种血清孕酮测定候选参考方法.方法 以[3,4-13C2]孕酮为内标,用正己烷提取血清,以羟丙基-β-环糊精水溶液对提取液作净化处理,用七氟丁酸酐对孕酮进行衍生化.用气相色谱分离衍生产物,质谱选择离子监测模式检测孕酮与内标的特定碎片离子,用包括法定量.结果 血清孕酮测定的总变异系数为0.69%～2.12%,平均分析回收率为98.3%～100.1%.分析血清孕酮标准物质,测定结果与靶值的偏差小于1.5%.结论 建立的同位素稀释气相色谱质谱测定血清孕酮的方法,准确、精密,可望作为测定血清孕酮的参考方法。

目的 建立一种新的同位素稀释-气相色谱-质谱(ID/GC/MS)测定人血清总胆固醇的方法.方法 取一定量的血清样品与[3,4-13C2]-胆固醇内标溶液充分混匀,水解并提取溶液中的胆固醇后,用N,O-二-(甲基硅烷)三氟乙酰胺(BSTFA)衍生胆固醇为三甲基硅烷醚;气相色谱-四极杆质谱(GC/MS)选择检测目标离子.检测标准溶液和血清样品的m/z 368和m/z 370的离子强度并积分,校正标准溶液中天然同位素胆固醇对内标的影响,将校正后的胆固醇和内标的m/z 368和m/z370面积比对胆固醇标准溶液浓度做线性回归.用拟合的回归方程定量血清样品胆固醇浓度.结果 建立的ID/GC/MS测定胆固醇的方法平均批内变异系数0.04%～0.81%.分析美国国家标准物质与技术研究所(NIST)2个浓度水平的标准血清SRM1951a,相对偏差分别是0.19%和0.90%.结论 建立的ID/GC/MS测定胆固醇的方法操作简单、精密,可以用做血清胆固醇的准确定量。

目的 建立以对乙酰基苯基磷酸盐(p-acetylphenylphosphace,PAP-PNa2)为底物的一种新的碱性磷酸酶(ALP)的测定方法.方法 在威图半自动生化分析仪上探讨试验条件,建立试验参数.结果 新方法测定产物对乙酰基酚(PAP)的吸收峰为325 nm,ALP的米氏常数(Km)=0.376mmol/L;340 nm PAP的摩尔消光系数为23 390 L·mol-1·cm-1,缓冲液浓度0.438 mol/L,最适pH值10.4,底物浓度5.0 mmol/L,延迟期60s,线性反应期15 min,线性范围为0～1 110 U/L;Hb＜115.62 mg/L时对测定结果无影响;胆红素对测定结果无影响;本法总ALP的参考范围为男:63.1～118.3 U/L,女:52.5～89.0 U/L.结论 此方法重复性好,线性反应期长,干扰因素少,适于自动生化分析。

目的 研究抑制和解离因抗凝剂所致的假性血小板聚集,建立假性血小板减少症患者血小板准确计数方法.方法 对1例罕见的多种抗凝剂依赖假性血小板减少症患者进行追踪试验,观察不同抗凝剂对血小板计数的影响;在EDTA-K2抗凝血内分别加入不同浓度的维生素B6、庆大霉素、氨茶碱、丁胺卡那霉素等抗血小板凝聚剂,在不同的时间段作血小板计数,同时观察血涂片中血小板形态与分布.优选出能确保血小板稳定的抗凝聚剂;并对被优选的抗凝聚剂浓度进行考察.观察取血前和取血后加入抗血小板凝聚剂对血小板聚集的影响.结果 EDTA-K2、肝素、柠檬酸钠、氟化钠等抗凝血在室温4 h内的观察中,血小板数均有不同程度的下降;在各种抗凝血中分别加入4种抗凝集剂后,除丁胺卡那霉素抗凝聚剂能保持血小板数稳定外,其他抗凝聚剂使血小板数随放置时间延长而下降;将丁胺卡那霉素加在各种抗凝血中无论在抽血前还是抽血后15 min内加入,其血小板数在室温4 h内保持相对稳定,而且与丁胺卡那霉素浓度呈正相关并趋于稳定,最佳的丁胺卡那霉素浓度为5 mg/ml血.结论 丁胺卡那霉素可以抑制和解离因多种抗凝剂所致的假性血小板聚集,既可保持血细胞形态稳定利于血细胞分析又可以进行血小板准确计数。

目的 评价MICROTEST 1血沉仪的主要性能指标,探讨其临床应用价值,并建立其参考区间.方法 按要求检测MICROTEST 1的重复性和稳定性,评价红细胞压积(Hct)对MICROTEST 1和Westergren法的影响,比较MICROTEST 1、乙二胺四乙酸(EDTA)-K2和柠檬酸钠抗凝的Westergren法检测ESR的结果差异.1 178份参考值调查样本按性别、年龄分组,对各组数据进行F检验和q检验.根据检验结果确定ESR参考区间调查的分组原则,进行正态性检验.如符合正态性分布,则使用公式(x)+1.645s;如不符合正态性分布,则使用百分位数法计算参考值.结果 MICROTEST 1检测ESR的变异系数(CV)值在2.97%～19.17%之间,样本在室温放置6 h内结果稳定.37例Hct＜0.37的患者样本经MICROTEST 1检测ESR值为(24.7±9.9)mm/1 h;而Westergren法检测结果与其相比较有明显差异(t=6.986,P=0.000),平均差值达15.38 mm/1 h.应用Fabry的校正公式校正后,得到的差值为1.30,两者比较差异无统计学意义(t=1.597,P＞0.05).122例样本(Hct＞0.37)经两种方法检测,差异无统计学意义(t=0.942,P=0.188),并取得了很好的相关性(Y=0.99X-0.18,r=0.987).用传统的柠檬酸钠抗凝的Westergren法检测,结果与MICROTEST 1比较相关性较好(Y=0.86X+1.27,r=0.906),但差异有统计学意义(t=3.174,P=0.001),显示有明显差异.男性60岁以下组ESR参考区间为32.5 mm/1 h,60岁以上组为41.7 mm/1 h;女性50岁以下组为34.03mm/1 h,50岁以上组为43.2 mm/1 h.结论 MICROTEST1检测结果与Westergren法有较好的相关性.MICROTEST 1检测ESR所需样本量少,分析速度快,重复性、稳定性好,不受环境温度、Hct等因素的影响,适宜于规模较大的检验科或其他临床实验室应用.ESR参考值受年龄影响较大,在建立参考值时应充分考虑年龄、仪器等因素的影响。

《临床实验室定量测定室内质量控制指南》（GB／T20568-2006）标准是参照美国临床和实验室标准研究院（CLSI）同类推荐标准C24-A2、并结合我国情况做适当修改后提出，适用于开展临床检验服务的医疗卫生机构的临床实验室的定量测定项目。标准的宗旨在于规范临床实验室定量测定项目的室内质量控制工作，内容着重在临床实验室定量测定室内质量控制的目的、计划、分析区间、质控品、质量控制应用、室内质量控制数据实验室间比对，为临床实验室的定量测定项目的室内质量控制工作提供依据。本标准由中华人民共和国卫生部提出，中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局和中国国家标准化管理委员会发布（2006-09-01发布，2007-02-01实施），标准起草单位为卫生部临床检验中心，由卫生部委托卫生部临床检验中心负责解释。《临床实验室定量测定室内质量控制指南》包括：

答：ISO于2003年2月正式发布了ISO15189：2003《医学实验室-质量和能力的通用要求》，该标准陆续被世界各认可机构转换为认可准则，并接受据此对医学实验室质量和能力认可的申请。我国于2004年7月1日发布并实施了基于IS015189：2003的CNAL／AC23：2004《医学实验室质量和能力认可准则》（现为CNAS-CL02：2006），并接受医学实验室的认可申请。

答：在CNAS-AR01《实验室和检查机构认可规则》3．2中给出认可条件的定义是：申请人为获得认可资格必须满足的全部要求。申请人必须满足的获得认可的条件包括：（1）具有明确的法律地位，具备承担法律责任的能力；（2）符合CNAS颁布的认可准则；（3）遵守CNAS认可规范文件的有关规定，履行相关义务；（4）符合有关法律法规的规定。

答：“Tumor Marker”一词是20世纪70年代末提出并被公认及使用。译为中文应为“肿瘤标志”或“肿瘤标志物”。根据全国科学技术名词审定委员会生物化学及分子生物学委员会对于其他疾病“Marker”的翻译规定，统称为此病的“标志”，因此建议统一称“Tumor Marker”为“肿瘤标志”。

《临床实验室室间质量评价要求》（GB／T 20470-2006）标准参考《美国临床实验室改进修正案’88》（Clinical Laboratory Improvement Amendments 88，ELIA’88）中“H和I亚章-中度和或高度复杂检验实验室参加能力验证（Prr）”中的内容，并结合我国情况做适当修改后提出，适用于开展临床检验服务的医疗卫生机构的临床实验室。标准的宗旨在规范临床实验室室间质量评价工作。内容着重在对临床实验室室间质量评价申请和标本检测，各专业和亚专业室间质量评价计划的一般要求，各专业和亚专业室间质量评价计划的具体要求。本标准由中华人民共和国卫生部提出，中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局和中国国家标准化管理委员会发布（2006-09-01发布，2007-02-01实施），

答：申请认可的实验室必须能够承担法律责任，可依法从事所申请认可范围内的相关活动，这是基本条件。根据我国相关法规（如《医疗机构管理条例》和《医疗机构管理条例实施细则》）及CNAS-CL02《医学实验室质量和能力认可准则》4．1．1的要求，实验室需提交其或其母体组织的有效的医疗机构执业许可和被许可的检测活动范围的证明。对于不属于医疗机构的实验室，须提供由工商行政管理部门颁发的企业法人营业执照证明或由国家事业单位管理部门颁发的事业单位法人证明；此外，还需提供国家主管部门批准的可以从事人体材料检测及相应的检测活动范围的证明。

答：中国合格评定国家认可制度已经融人国际认可互认体系，并在国际认可互认体系中有着中重要的地位，发挥着重要的作用。原中国认证机构国家认可委员会（CNAB）为国际认可论坛（IAF）、太平洋认可合作组织（PAC）正式成员并分别签署了IAFMLA（多边互认协议）和PACMLA，原中国实验室国家认可委员会（CNAL）是国际实验室认可合作组织（ILAC）和亚太实验室认可合作组织（APLAC）正式成员并签署了ILACMRA（多边互认协议）和APLACMRA。

答：中国合格评定国家认可委员会（CNAS）是根据《中华人民共和国认证认可条例》的规定，由国家认证认可监督管理委员会批准设立并授权的国家认可机构，统一负责对认证机构、实验室和检查机构等相关机构的认可工作。CNAS于2006年3月31日正式成立，是在原中国认证机构国家认可委员会（CNAB）和原中国实验室国家认可委员会（CNAL）基础上整合而成的。