2004年 · 第27卷第12期

伴随着生物医学模式向生物-心理-社会医学模式的转变,自20世纪90年代起,国内医学界乃至公众开始重视一个新的生物医学领域,并逐渐形成一个新的学科--亚健康.传统医学一般将机体分为疾病状态和健康状态,并未充分关注心理、环境及社会因素对机体的影响.我国的中医理论中早在数千年前就曾提出过"未病学"的概念,即机体处在一种潜在的疾病状态或疾病易感状态.<黄帝内经>中曾记载:"圣人不治已病治未病,夫病已成而后药之,乱已成而后治之,譬犹渴而穿井,斗而铸兵,不亦晚乎?",说明我国传统医学对亚健康问题早有认识,并强调了疾病科学预防的重要性.其实在日常生活中,我们常常会感觉自己疲乏无力、消化不良、头昏失眠等等感受;心理上有时会出现情绪低落、反应迟钝、恐惧不安或焦虑烦躁等情况,此时尚不足以出现临床上认为的疾病,如果到医院检查,传统方法一般也不会发现异常.但此时机体的基因表达、生理代谢、神经内分泌、氧化和抗氧化平衡及免疫系统已经出现不平衡和紊乱,机体的这种状态被称为"亚健康"状态。

性病在我国已经成为一个重要的公共卫生问题,全国性病疫情报道数据显示,2003年我国累计报道性病病例数(HIV/AIDS除外)73万[1].自1999年以来,性病发病率居高不下,其发病率在传染病中位居第3位.随着实验医学的发展,性病的防治已经历了从经典性病(4种)、现代性病(8种)到性传播感染疾病(STI)防治模式的转变[2].因此,性传播感染疾病诊断研究应引起高度重视。

奴卡菌属于放线菌属,可引起人的奴卡菌病,如类似肺结核的原发性奴卡菌感染、肺炎,偶可引起脑膜炎、脑脓肿,扩散性腹膜炎和足菌肿(mycetoma).在感染的脓肿和排液中可见到黄色、暗红色或黑色小颗粒.在显微镜下检查可见此小颗粒由分叉的菌丝组成,颗粒周围的菌丝呈棒状;但在痰或脑脊液标本中则见不到此种颗粒,只能见到革兰阳性的分叉或杆状杆菌.经抗酸染色,疑似该菌感染并不困难,但将其鉴定到种则颇困难.如今,与感染人有关的奴卡菌已有10种,仅星形奴卡菌复合群即分为6种,故传统的鉴定方法已不能满足临床需要。

目的 利用孕妇外周血中胎儿细胞进行无创性产前诊断巨细胞病毒宫内感染的新方法.方法 (1)采用显微操作技术从273例孕妇外血中分离单个胎儿有核红细胞.(2)应用多重引物原位合成技术(primed in situ labeling, PRINS)检测76例孕妇外周血HCMV-DNA阳性标本的单个胎儿细胞的SRY基因和HCMV-DNA基因.(3)应用引物延伸预扩增法(primed extension preamplification, PEP)及聚合酶链反应(PCR)检测273例孕妇外周血中单个胎儿细胞的SRY基因和HCMV-DNA基因.结果 (1)应用显微操作技术分选胎儿细胞的分选率为100%.(2)PRINS技术检测SRY基因的敏感性为97.56%(40/41),特异性为100%(35/35).检测HCMV-DNA基因的敏感性为92.68%(38/41),特异性为100%(35/35).(3)PEP及PCR方法检测SRY基因的敏感性为97.39%(149/153),特异性为99.17%(119/120),检测HCMV-DNA基因的敏感性为95.12%(39/41),特异性为100%(232/232).结论应用PRINS技术、PEP方法及PCR技术对孕妇外周血中单个胎儿细胞进行非创伤性产前诊断巨细胞病毒宫内感染是一种敏感性高特异性强的新方法,可能具有广阔的临床应用前景。

目的 连续追踪传染性非典型肺炎[又称严重急性呼吸综合征(SARS)]患者1年,了解其血清SARS病毒特异性IgM、IgG及N蛋白抗体滴度变化;追踪检测未发病者的SARS血清特异性抗体.方法用IFA和双抗原夹心ELISA 方法连续检测SARS患者发病后第7、14、30、60、120、180、210 、270、360天血清特异性抗体滴度.结果间接免疫荧光染色法(IFA)检测14例SARS患者血清特异性IgG抗体在第7天检出,滴度为1/40,120 d达高峰平均滴度1/1 120,180 d开始下降平均滴度1/274,210 d平均滴度1/163,1年后平均滴度维持在1/71.特异性抗体IgM滴度第7天均为阴性,14 d检出平均滴度为1/32,30 d检出达高峰, 60 d滴度开始下降1/86,120 d后大部分患者IgM滴度消失.N蛋白抗体7d检出平均滴度为1/57,120d达高峰平均滴度1/319, 210 d后N蛋白抗体平均滴度1/187,270 d平均滴度1/134, 1年后平均滴度1/84,高于IgG抗体水平.与患者密切接触的10名亲属(包括2名儿童),检测血清中SARS特异性抗体,IgM、 IgG抗体及N蛋白抗体全部为阴性.结论观察14例家庭聚集患者血清SARS 病毒特异性IgG、IgM抗体,1年后仍维持在一定水平,可为疫苗的研制提供指导.10名密切接触者血清中未检出SARS病毒特异性抗体。

目的 探讨用免疫固定电泳法检测IgD和IgE单克隆免疫球蛋白,在筛选罕见IgE型多发性骨髓瘤(MM)中的应用价值.方法通过检测血清IgD和IgE单克隆免疫球蛋白,从148例MM病人中,筛出只有轻链而不出现IgGAM重链的25份血清样本,用抗游离轻链的单克隆抗体及抗IgD、抗IgE单克隆抗体再进行免疫固定电泳检测.结果 25例MM病人中有1例为IgE-κ单克隆免疫球蛋白阳性,24例呈游离轻链阳性(κ型7例、λ型17例);在17例λ型游离轻链病人中有3例抗λ轻链(游离和结合)病人血清样本呈双克隆带状,用抗IgD单克隆抗体检测证实,有IgD-λ单克隆免疫球蛋白并伴有游离轻链λ.结论采用免疫固定电泳对MM病人血清进行IgG、IgA、IgM和轻链的检测后,用固定免疫技术对只有轻链而不出现IgGAM重链的样本,进行抗游离轻链、抗IgD和抗IgE单克隆抗体分型检测,成功地筛出1例罕见的IgE-K型MM,提高了对该病的检测水平。

目的 探讨系统性红斑狼疮 (SLE)患者血清中巨噬细胞来源的趋化因子(MDC)及基质金属蛋白酶9(MMP-9)水平与疾病活动程度的关系与意义.方法用双抗体夹心酶联免疫吸附试验检测和比较分析36例SLE患者和30名健康人血清MDC及MMP-9的水平.结果 SLE患者组血清MDC和MMP-9水平(451±77 ng/L,109±113 μg/L)比健康对照组(606±24 ng/L,352±155 μg/L)明显降低(均P<0.001);经糖皮质激素治疗后血清MDC及MMP-9浓度升高(P<0.001和P<0.05). 活动期SLE血清MDC和MMP-9水平低于非活动期 (P<0.001和P<0.05);肾脏损害组均明显低于非肾脏损害组(P<0.001和P<0.05).而血清MDC水平在关节炎组明显低于非关节炎组(P<0.001),但MMP-9水平差异无显著意义 (P>0.05). 结论 MDC和MMP-9可能参与SLE的发病机制,二者的血清水平可作为反映SLE活动程度、肾脏损害以疾病进展与改善的指标。

2003年传染性非典型肺炎在全世界几十个国家和地区暴发流行,世界卫生组织根据其发病特征于2003年4月16日正式命名为严重急性呼吸综合征(Severe Acute Respiratory Syndrome,简称SARS).由SARS冠状病毒(SARS-associated coronavirus,简称SARS-CoV)引起的此次传染性非典型肺炎发病后,病情发展较急,部分病人病情较重[1],临床上大致符合病毒感染的病情变化.我们检测了95例SARS患者体内不同时期SARS病毒抗体,探讨病毒抗体在患者体内出现的规律,现报道如下。

大肠癌是我国的一种常见恶性肿瘤,其发病率呈不断上升趋势[1].近年来,已有多种血清标志物用于大肠癌诊断.但由于敏感性和/或特异度较低,单项标志物诊断准确性不高,因此,如何提高多种标志物联合检测的诊断率就显得非常重要.本研究应用人工神经网络(ANN)建立八种血清标志物诊断模型,以提高大肠癌血清学诊断的效率,并验证其在临床应用的价值。

聚合酶链反应(PCR)技术已广泛应用于疾病诊断[1],但由于临床标本复杂,常出现非特异性扩增条带或电泳拖尾现象,给结果的判定带来困难.为了探讨更加敏感、特异的流行性乙型脑炎病毒(JEV,乙脑)及黄热病病毒(YF)快速检测方法,我们分别设计了黄热及乙脑病毒的特异性包被探针及检测探针,建立了快速检测YF及乙脑病毒的微孔杂交(PCR-ELISA)方法。

甲氧西林耐药溶血葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus haemolyticus, MRSH)是目前临床常见的重要凝固酶阴性葡萄球菌,常呈多重耐药.特别是MRSH的流行,如得不到及时控制,病死率高.因此早期发现MRSH感染的流行极为重要.本研究采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术对我院临床分离的MRSH做同源性分析,为溶血葡萄球菌感染的防治提供基础。

烧伤患者天然免疫屏障遭破坏,抵抗力低下,极易发生感染.随着广谱抗生素及局部抗菌药物在烧伤病房的广泛应用,烧伤感染菌的菌种发生一定的变化,耐药性不断增强,这些数据对烧伤感染的防治和抗生素的选择有很重要的作用.故对我院1997～2002年烧伤中心分离细菌的主要菌种分布和耐药性的变化进行分析。

肝细胞癌(HCC)患者的免疫功能,尤其是细胞免疫功能与肿瘤的发生密切相关.淋巴细胞亚群的变化与严重感染性疾病和肿瘤的发生发展相关;自然杀伤(NK)细胞可直接杀伤肿瘤和病毒感染的细胞[1],也可分泌细胞因子调节其他免疫细胞功能.本研究检测HCC患者外周血淋巴细胞亚群及白细胞介素2(IL-2)、NK细胞活性,以了解患者体内免疫功能状态,为临床诊断和治疗提供依据。

目的 评价INNO-LiPA乙型肝炎病毒基因分型的方法,并探讨了基因型与临床疾病的关系.方法随机选取113例慢性HBV感染者外周血采用INNO-LiPA和S基因序列分析两种方法测定HBV基因型.结果 1. INNO-LiPA基因分型法与S基因序列分析法测定的基因型结果比较,符合率82.3%(93/113),误判率3.5%(4/113),B/C型混合感染检出率5.3%(6/113).2. LC组和HCC组C基因型比率高于AsC组,差异有显著性(分别为92.9%比52.8%,X2=7.03,P<0.01和88.9%比52.8%,X2=3.91,P<0.05);LC组C基因型比率高于CHB组,差异有显著性(92.9%比61.1%,X2=5.12,P<0.05).结论 1. INNO-LiPA法是一种较灵敏的快速检测HBV基因型的实验方法,尤其检测混合基因型感染灵敏度高.2. C基因型HBV感染与较重肝病有关。

目的 探讨人多药耐药(MDR1)基因过表达能否提高骨髓造血干/祖细胞对化疗药物的耐受性.方法应用免疫磁性分选系统(miniMACS)体外分离、纯化骨髓CD34+细胞并进行扩增;采用脂质体介导的基因转移方法,将人MDR1基因转染骨髓CD34+细胞,并运用流式细胞术检测基因转导前后造血干/祖细胞中MDR1基因的编码产物-Pl70糖蛋白表达和功能变化.MTT法检测基因转导前后造血干/祖细胞对化疗药物耐受性的改变.结果 MDR1基因转导后48 h骨髓造血干/祖细胞Pl70抗原表达为(23.6±2.34)%,明显高于转导前(11.2±2.2)%(P<0.01).P170的功能活性被Rh-123的摄取和排除试验证实.转基因后细胞表现为典型的多药耐药表型,对P170谱的多种化疗药的耐受性提高了约2～8倍,对非P170谱的顺铂、氨甲喋呤耐受性没有改变. 结论人多药耐药基因能提高骨髓造血干/祖细胞对多种化疗药物的耐受性,表现为典型的多药耐药表型。

目的 利用 pGEX-4T-2表达系统表达制备重组人B型钠尿肽(BNP)抗原.方法根据NCBI核苷酸数据库编码为gi : 2172639人BNP DNA序列,设计合成编码BNP-32蛋白的DNA,并分别在5′端和3′端设计BamHI及XhoI位点,经两步聚合酶链反应(PCR)、T-A克隆后,亚克隆至 经BamHI及XhoI 酶切的 pGEX-4T-2 载体,把重组质粒转化大肠杆菌DH5α,经IPTG诱导表达, Glutathione sepharose 4B 亲和层析制备GST-BNP.通过DNA测序、融合蛋白的分子量分析和Western-blot来证实GST-BNP质粒及表达的B型钠尿肽(BNP-32)抗原的正确性.结果限制性内切酶和DNA测序结果表明,编码BNP-32的DNA准确插入pGEX-4T-2多克隆位点,成功构建了GST-BNP的表达质粒;诱导表达超声破碎后,GST-BNP蛋白主要存在于上清液中,经亲和层析回收融合蛋白,每升诱导菌可得融合蛋白10.6 mg ;Western-blot证实制备的融合蛋白是人BNP-32.结论通过基因工程技术制备的人BNP抗原,既具有免疫原性又具有反应原性,能很好地解决酶免分析中的基本要素抗原(被检测物)和相应的抗体。

目的 克隆表达重组人I型丙氨酸氨基转移酶(ALT1)蛋白及制备抗血清,探讨建立ALT1特异性检测方法思路.方法逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增人ALT1 cDNA,插入pGEX-2T,构建原核表达载体pGEX-2T-ALT1,并转入大肠杆菌进行表达.SDS-PAGE,活力测定和活性染色鉴定表达产物.表达产物免疫小鼠所得抗血清对天然ALT1, 重组ALT1及重组ALT2进行Western blot分析.结果重组质粒测序和酶切结果显示ALT1基因已经成功克隆到pGEX-2T载体.SDS-PAGE和活性染色表明所表达蛋白具有天然活性.抗ALT1血清除识别重组ALT1外,还可识别天然蛋白和重组ALT2. 结论重组人ALT1得到高效可溶性表达.用目前方法制备的抗血清特异性不高,如建立ALT1的免疫学检测方法需要采用特异性识别ALT1的抗体,以避免交叉反应引起的假性升高。

基因转染可将目的基因导入靶细胞进行基因功能和基因表达调控的研究 [1].但转染效率的高低受诸多因素的影响,尤其是多种功能相关基因的共转染,更加困难.既往研究发现,人肠上皮细胞株(HIC)不表达内毒素(LPS)相关受体CD14(cluster of differentiation 14)、Toll样受体4(Toll-like receptor4,TLR4)和MD-2 (myeloid differentiation protein-2).为进一步证实这3种LPS相关受体的不表达是否是肠上皮细胞耐受LPS的关键机制,我们用FuGENE 6转染试剂进行CD14、TLR4和MD-2基因共转染人肠上皮细胞的探索。

病毒载体的应用越来越广泛,而我国病毒载体药物也正处于临床试验阶段[1-2],还需对人体和环境安全性密切观察.为研究这类药物在体内扩散和对环境的安全性,需要建立一种灵敏、可靠的检测方法.聚合酶链反应(PCR)技术已应用于临床病原微生物的检测,具有高敏感性、特异性等特点.本研究采用PCR建立了一种快速、简便的重组腺病毒的检测方法,并参考美国FDA检验标准[3],对该方法进行评价。

目的 研究建立竞争酶联免疫吸附试验(竞争ELISA)检测血管抑素的方法,并探讨其临床应用价值.方法以重组人血管抑素作为抗原免疫家兔,制备抗人血管抑素多克隆抗体,建立竞争ELISA 法,并检测61例肿瘤患者和20名正常献血员血浆中血管抑素含量.结果竞争ELISA 法的灵敏度为 5 mg/L ,批内和批间变异分别为2.7%～3.2%和4.9%～5.1%,平均回收率为100.4%.血浆血管抑素含量在20名献血员中为27.22±7.44 mg/L,28例胃癌患者为57.15±29.90 mg/L,6例乳腺癌为67.51±20.88 mg/L,6例肝癌为92.03±18.72 mg/L,11例急性淋巴细胞性白血病为41.72±9.99 mg/L,10例其他肿瘤(2例胆囊癌,3例结肠癌,2例前列腺癌,3例卵巢癌)为78.78±20.44 mg/L ,均显著高于正常人(P<0.05或0.01). 结论建立的竞争ELISA为临床提供了一种简单、灵敏和特异地检测人血管抑素的方法,并可作为肿瘤诊断的一种新检测指标。

传统的结核分枝杆菌(结核菌)培养、鉴别的方法,操作繁琐耗时长,不能满足临床及早诊断及早治疗的需要.我们应用结核菌噬菌体对结核菌复合群进行鉴别,及时为临床的诊断和治疗提供了依据。

2003年12月我院从1例"常见变异性免疫缺陷病继发增殖性脓皮病"儿童鼻组织中分离1株厌氧内氏放线菌(A.naeslundii). 　　患儿男8岁,河北籍学生,因无明显诱因,下颏部出现一米粒大小的脓泡,后逐渐扩展,并波及整个下颏部,融合成增殖性斑块,渗岀液较多,当地诊断为"增殖性脓皮病"给予抗炎治疗后(药物不详)半年后痊愈.留有浅表性斑痕.2003年10月仍无明显诱因,鼻中隔外再次出现一米粒大小脓疱,自觉瘙痒,抓后破溃,有渗液,逐渐增大,融合成增殖斑块,迅速扩大至右鼻孔周围。

2004年2月从尿道分泌物涂片美蓝染色检查中检出粒细胞内大量蓝色杆菌.经细菌培养鉴定为库什棒状杆菌(C*kutscheri). 　　患者,男,37岁,职业,农民,因尿道口流脓来本院检查.主诉无婚外性交史,因发现阴茎奇痒,曾自行用约3%盐水清洗龟头,而后出现尿道口流脓。

杨振华教授是我国著名检验医学(实验诊断学)专家和临床化学专家,主任医师、教授、硕士研究生导师.杨教授1935年生,上海籍,1956年毕业于中国医科大学医疗系.曾先后任卫生部北京医院检验科主任、卫生部临床检验中心主任、中华医学会检验分会主任委员、<中华检验医学杂志>编辑委员会总编辑、卫生部国家标准委员会临床实验室标准委员会主任委员等职.现任中国临床检验标准化委员会主任委员、中华医学会检验医学分会名誉主任委员、<中华检验医学杂志>编辑委员会名誉总编辑、中华医院管理学会临床实验室管理专业委员会名誉主任委员、卫生部临床检验中心教授、主任医师等职。

中国医科大学附属第一医院实验诊断学学科成立于1996年.随着科学技术的发展和多学科技术的广泛渗透,目前已包括临床检验室、生化免疫综合检验室、细菌室、血液骨髓室、急诊检验室和艾滋病研究室6个部门,并于1998年获临床检验诊断学专业硕士研究生学位授予权.2003年获博士研究生学位授予权;2003年7月成立中国医科大学检验医学系.其中艾滋病研究室于1997年通过卫生部验收批准为全国医院系统首家艾滋病确认实验室,2003年受辽宁省科技厅委托成立了辽宁省艾滋病研究所.该学科的建设及发展,与优秀进取的学术带头人、严谨务实的科研工作、国际先进水平的工作环境、合理的人才梯队息息相关。

风湿病学作为一门新兴学科,在我国起步较晚,近年来得到了迅猛发展.风湿病的实验室检查作为临床辅助诊断手段,对于疾病的早期诊断与鉴别诊断,了解病情的发生发展、治疗效果,以及判断预后均有重要的价值和意义.随着基础医学研究的深入,高新技术在检验领域中的广泛应用,风湿病实验室检查日益成为风湿病学中不可或缺的一部分,发挥着越来越重要的作用。

RNA病毒如丙型肝炎病毒(HCV)、人免疫缺陷病毒(HIV)、严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARS-CoV)等的核酸检测对于感染的早期诊断和抗病毒治疗疗效的动态观察具有重要价值.自1983年发明聚合酶链反应(PCR)技术以来,出现了基因扩增的概念.目前多采用核酸扩增技术(NAT)检测病毒RNA,最常用的是逆转录(RT)-PCR方法.核酸扩增检测想得到可靠的结果,必须使用质控品进行严格的质量控制,而对病毒进行定量测定,通常还须有病毒RNA标准品.目前RNA病毒扩增检测的质控品和标准品分为两大类,一是裸露的RNA片段,二是内含特定RNA的病毒样颗粒或称之为带盔甲的RNA(armored RNA)。

检验科在医院的定位是基础科室,过去称之为辅助科室,又是临床不能离开的科室,也是医院内经常发生矛盾的科室,如何使检验科与临床科室密切协调,互相理解,互相支持,化解科室之间可能出现的矛盾或误解呢?我们尝试了加强与临床科交流的做法,经过几年的实践,密切了临床科室与检验科的交流与联系,使检验与临床得到最佳结合。

由国际人类蛋白质组组织(human proteome organzation,HUPO)、中国人类蛋白质组组织(CNHUPO)、中华人民共和国科学技术部、北京市人民政府、国家自然科学基金委员会、中国人民解放军总后勤部、中国外国专家局、国家生物医药分析中心(CNCBA)、北京市科学技术委员会(BMCST)和北京市药物生物技术中心(BPBC)共同举办的第三届国际人类蛋白质组大会,于2004年10月25日～27日在中国北京国际会议中心举行.两位诺贝尔奖获得者--Lee Hartwell博士和Koichi Tanaka 博士、中国科学院院士谈家桢教授、中国科学院院士邹承鲁教授、中国科学院院士陈竺教授、中国科学院院士贺福初教授、Samir Hanash博士、Christian Brechot博士、Leroy Hood博士和Mattias Mann博士等约120名国内外知名专家学者及2 000多位蛋白质组学及其相关领域享有盛名的国内外科学家出席了这次盛会。

高效毛细管电泳(high performance capillary electrophoresis,HPCE)是在传统电泳基础上继现代高效液相色谱技术之后发展起来的一种新型高效分离技术.由于它具有无法比拟的高效和快速性,因而受到越来越多科学家们的青睞。

《中华检验医学杂志》2004年第1期45页刊登的招钜泉等报道，“婴儿感染黑热病一例”一文。作者在广东佛山市发现1例黑热病患儿。笔者仔细阅读了该文及所附彩色图片，认为该病例诊断甚为可疑，现提出与作者商榷。

卫生部临床检验标准化委员会分子生物学专家委员会于10月22日，在京召开“临床检验标准化委员会分子生物学工作会议”，十几名委员和厂家的专家学者出席了会议。会议的主题是：临床检验标准化委员会“十一．五”分子生物学技术标准规划。