2004年 · 第27卷第11期

细菌耐药性出现和蔓延无疑在很大程度上是对抗感染治疗的最大挑战.为控制耐药性的发展,监测病原微生物对抗生素的敏感性和耐药性就成为临床微生物的重要任务[1].在过去的10年间,国内在细菌耐药性方面开展了大量的研究和监测工作,取得了很大的成绩,但依然存在问题.因此,阐明细菌耐药性监测中的质量控制的若干问题,对于保证监测数据的准确性、可靠性是至关重要的环节。

目的 研究从妊娠滋养细胞肿瘤患者外周血中检出肿瘤细胞的方法.方法具有β-hCG-mRNA表达特征的绒癌细胞株(JAR细胞)掺入正常人外周血中,用荧光定量逆转录-聚合酶链反应检测其中β-hCG-mRNA,推测JAR细胞的量;采集治疗前的妊娠滋养细胞肿瘤患者外周血,定量检测其中的β-hCG-mRNA,以推测滋养细胞的含量.结果当10 ml外周血中含有102以上JAR细胞时可检测到其中的β-hCG-mRNA;9例滋养细胞肿瘤中有4例的外周血中检测到β-hCG-mRNA表达.推算肿瘤细胞量为104～107个/10ml外周血.结论荧光定量RT-PCR法测定β-hCG-mRNA是检测、推算外周血中滋养细胞肿瘤细胞的有用方法之一;部分妊娠滋养细胞肿瘤患者外周血中可检测到肿瘤细胞。

目的 评价检测P53蛋白的克隆酶均相免疫分析方法的可行性.方法通过基因重组技术构建β-半乳糖苷酶亚单位EA、ED及ED-P53融合蛋白的原核表达质粒,建立克隆酶均相免疫技术,测定胃癌、非胃癌和正常对照组血清、粪便P53蛋白含量, 并与酶联免疫吸附试验(ELISA)比较.结果 31例胃癌患者的血清、粪便P53蛋白阳性率高于39例非胃癌患者和17名健康献血员(均P<0.01).11例胃癌患者血清P53和免疫组化均阳性,且免疫复合物均以P53-IgG形式存在,对5例胃癌血清动态观察表明,术后1周P53蛋白仍阳性,术后1个月显著下降,并在术后3个月消失.检测10份不同浓度的样本, 表明克隆酶均相免疫法与ELISA具有较好的相关性.结论建立的克隆酶均相免疫技术可用于P53蛋白的测定,P53蛋白可作为判断胃癌预后的一项辅助诊断指标。

目的 探讨瘦素与围绝经期妇女肥胖及脂类代谢的关系.方法分别测量了72例围绝经期妇女(研究组)血清瘦素(leptin)、胰岛素(INS)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、载脂蛋白A1(apoA1)、载脂蛋白B(apoB)、垂体促性腺激素(LH、FSH)雌二醇(E2)、睾酮(T)、孕酮(P)垂体泌乳激素(PRL)值及体重、身高,与50名正常育龄妇女(对照组)进行对照分析.结果围绝经期肥胖组、非肥胖组瘦素、胰岛素水平增高与对照组比较差异有显著意义(P< 0.01).肥胖组LDL- C 4.94 mmol/L、TG 2.1mmol/L、apoB 0.865 g/L与非肥胖组及对照组比较差异有显著意义(P< 0.01).研究组内LH、FSH、E2、T值,差异均无显著意义(P> 0.05),但与对照组相比差异有显著意义(P< 0.01).相关分析显示:围绝经妇女瘦素与BMI、胰岛素、 LDL-C、TG、apoB高度相关(r= 0.762, P= 0.000 2; r= 0.382, P= 0.0 1,r=0.430,P=0.002; r= 0.545, P=0.000 2; r= 0.454, P=0.000 2),且LDL-C与apoB同步升高呈相关(r=0.796,P=0.000 2).围绝经期瘦素水平与HDL-C、apoA1分析未见有相关(r=-0.222 ～ 0.190, P＞ 0.05).结论围绝经期瘦素水平与脂类代谢异常相关,肥胖、瘦素增高围绝经期妇女更应重视脂类代谢异常。

目的 探讨C-反应蛋白(CRP)水平在不同类型急性脑梗死(ACI)患者血清中的变化规律及其临床意义.方法采用酶联免疫吸附法(ELISA法)对我院100例住院患者(发病1周内)进行CRP水平的测定,其中大动脉粥样硬化脑梗死(LAA)组24例、小动脉闭塞性脑梗死(SAO)组27例、心源性栓塞性脑梗死(CE)组2例、其他病因明确性脑梗死(OC)组34例、不明病因性脑梗死(UE)组13例,并进行对照分析.结果以CO中毒为主要危险因素组,其CRP阳性率最高(本实验中为100%),CRP水平亦为最高,其次为冠心病组,高血压与糖尿病组间对比,无论是从阳性率,还是从CRP水平方面,均无明显差异.结论血清CRP可能在ACI患者的发生、发展中起一定作用,且其水平随卒中类型的不同而变化。

目的 评价Microtest 1 自动血沉仪检测红细胞沉降率(ESR)的可靠性.方法随机抽取门诊就诊患者50人,分别应用Microtest 1 自动血沉仪及魏氏法同时检测ESR,对数据进行统计分析及比较;健康体检者男女各50人,应用Microtest 1 自动血沉仪检测ESR,统计健康人参考范围.结果 Microtest 1 自动血沉仪与魏氏法检测ESR的回归方程为Y= 0.959 X+ 0.433,r = 0.965,重复性好;检测ESR的参考范围为男性为(4.5±3.6)mm/h,女性为(8.6±5.1)mm/h,两组间有显著差异. 结论 Microtest 1 自动血沉仪检测ESR与魏氏法相比较具有良好的相关性,是一种检测ESR的快速、准确、可靠的新方法。

目的 提高带某些限制酶切位点聚合酶链反应(PCR)扩增产物克隆入表达载体的效率.方法将带Hind Ⅲ酶切位点的PCR扩增产物与T载体连接,转化BL21-DE3 E.Coli,提取质粒后,用Hind Ⅲ酶切,电泳分离并提取纯化的目的片段.然后,与经过相同的限制性酶酶切的表达载体pNCCL1连接. 结果经T载体克隆酶切构建的内含严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARS-CoV)核酸的病毒样颗粒表达载体,方法简单快速,每次均可获得成功.而采用直接酶切扩增产物的构建方法,未获得成功构建的表达载体.结论 T载体克隆可用于对直接酶切效果不好(如Hind Ⅲ)的PCR扩增片段的表达载体的连接构建,方法简便高效。

目的 探讨人脑皮质中分离培养神经干细胞并鉴定其增殖及分化潜能.方法采用包含碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和表皮细胞生长因子(EGF)的无血清培养和单细胞克隆技术,从30周自愿水囊引产人胎脑皮质中分离出神经干细胞, 并进行培养、传代、分化观察,应用免疫组织化学染色对培养的细胞及其分化的细胞进行鉴定.结果从30周人胎脑皮质中成功分离出具有自我更新和多分化潜能的神经干细胞,在无血清培养时细胞呈悬浮状态生长,形成神经球,该细胞具有连续克隆能力,可传代培养,表达神经巢蛋白抗原(Nestin);在含血清培养时诱导神经干细胞分化,分化后的细胞表达神经元细胞和胶质细胞的特异性抗原.结论神经干细胞的存活和分裂有赖于EGF和bFGF的共同作用;30周人胎脑皮质仍能培养出具有自我复制和分化潜能的神经干细胞。

目的 对青岛地区31株汉坦病毒分离株M区基因序列测定及基因分型研究,为疫苗接种提供依据.方法从64例肾综合征出血热(HFRS)患者发热期血清标本中提取RNA,应用套式逆转录聚合酶链反应扩增汉坦病毒基因组M片段,G1基因区克隆并测定核苷酸序列和部分共享氨基酸序列,且对测定结果应用DNA Star和Prosis软件进行分析.结果 64份标本中测出汉滩型(HTN)6份,占9%;汉城型(SEO)25份,占39%;总阳性率48%.SEO型汉坦病毒间核苷酸序列的差异相对较小,其基因的离散度为0.3%～8.9%.HTN型汉坦病毒变异率较高,基因的离散度为2.6%～11.2%.结论 SEO型汉坦病毒基因型相对保守,而HTN型变异率较高;M区段可编码一个具有稳定的保守抗原表位。

目的 研究免疫磁珠和荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测胃癌患者外周血癌细胞的应用价值.方法将不同浓度的人胃腺癌细胞系MGC-803细胞加入到健康人血中,经淋巴细胞分离液收集单核细胞后,等分4份.其中1份直接用于提取RNA(方法Ⅰ)、其他分别用阴性磁珠(方法Ⅱ)、阳性磁珠(方法Ⅲ)及联用阴性和阳性磁珠(方法Ⅳ)富集癌细胞.然后,以癌胚抗原(CEA)mRNA作为分子标志物进行荧光定量RT-PCR检测其相对拷贝数;并检测45例胃癌、30例胃溃疡患者和30名健康人外周血CEA mRNA. 结果方法Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ测得的CEA mRNA相对拷贝数与癌细胞数间有良好的相关性(方法Ⅱ和ⅢP<0.05;方法ⅣP<0.01),尤以Ⅳ方法为佳,可检测出每毫升血中含有的1个胃癌细胞.Ⅰ～Ⅳ方法检测胃癌患者阳性率分别为42.22%、53.33%、51.11%和64.44%;方法Ⅳ与方法Ⅰ比较,差异有显著意义(P<0.05).用方法Ⅳ检测30例胃溃疡患者均为阴性,而其他3种方法检出2例阳性;30名健康人中4种方法均未检出扩增产物. 结论免疫磁珠与荧光定量RT-PCR法可提高胃癌患者外周血CEA mRNA的检出率。

由于人们对海洋资源越来越关注,因此有必要对海洋中优势菌的致病能力进行研究.本研究通过建立小鼠感染模型,探讨沿海某地海水中霍利斯弧菌毒力的强弱,以及对伤口感染的能力。

炎症在不稳定心绞痛(UA)和心内膜下心肌梗死(SEMI)发病过程中的起着重要作用[1].冠状动脉斑的破裂以及叠加形成的血栓是不稳定心绞痛发病的最重要的机理之一[2],UA患者的冠状动脉里有炎症发生[3]。

多重耐药质粒的演变与抗菌药物耐药决定子特定位点的整合子有关.根据整合酶的不同有4类整合子,临床分离株中最常见1类整合子.本研究是检测多重耐药不动杆菌分离株中1类、2类整合子的情况,以调查不动杆菌的分子流行病学。

结果的回报时间(TAT)与准确性和精密度对于评估医院服务质量和效率同样重要[1,2].临床医生不仅要求准确可靠的实验结果,同时又要求能够尽快的得到检验报告,以便及时制定诊断治疗策略.为此,实验室应建立全面的质量管理体系,把好每一环节的质量和时间.我室于2003年2月搬迁进入新的实验室,工作内容发生了变化,分析仪器及信息系统有很大的更新,特别是使用了标本的条形码系统管理.在新的工作状态下,本实验室多次调整工作流程,努力在保证检验质量的前提下缩短TAT。

着色芽生菌病(chromoblastomycosis)是由暗色孢科中的一组致病性着色真菌感染引起的一种深部真菌病.我院于2003年9月发现了一例裴氏着色芽生菌(fonsecaea pedrosoi)引起的皮肤着色芽生菌病,在我市地区属首例。

患者女,62岁,自2003年9月25日以来因尿路感染和肺部感染,曾用氨苄西林、左氧氟沙星、哌拉西林/他唑巴坦等抗菌药物治疗.患者因肺部感染于2003年10月31日～11月8日期间共送6 份下呼吸道痰标本做细菌培养和药敏试验。

我室应用全自动血培养仪(BACTEC9120,美国BD公司产品)树脂需氧瓶,从血液和骨髓中分离出7株羊布杆菌。

2003年12月,我们从一例高热患者的血液中分离出克氏库克菌(kocuria kristinae),该菌实属少见.

无创性技术(non-invasive technology),又称无创性实验诊断学(non-invasive diagnostics)或无创性临床实验室检测(non-invasive clinical laboratory testing),是指结合多种方法和原理对机体血液/体液成分进行检测,而不引起机体损伤和疼痛便可得到所需的实验结果,是最近诞生于实验医学领域中的热点学科[1].由于其既无需检测试剂又无需穿刺而获取检测标本(如血液),因而日益受到人们重视.业内权威人士将无创性实验诊断技术视为21世纪可对传统实验医学起巨大影响,并可改变现有实验医学运作模式的八大技术之一[1,2]。

由中华医学会中华检验医学杂志编辑委员会和国家细菌耐药性监测中心共同主办的"首届全国细菌耐药监测与临床专题学术会议",2004年4月7～8日在四川省成都市召开。

潘柏申 《中华检验医学杂志》编辑委员会委员,1953年生,上海籍.现任上海医科大学附属中山医院检验科主任、研究员、硕士研究生导师.潘柏申研究员1982年毕业于上海医科大学医学系,同年任上海医科大学附属中山医院住院医师;1987年开始从事检验医学工作,1988年任检验科副主任。

重庆医科大学临床检验诊断学学科是1983年经国家教育委员会批准设置的本科专业,1986和1990年先后获得临床检验诊断学硕士研究生及博士研究生学位授权点。

目的 了解我国部分医院重症监护病房(ICU)的细菌耐药状况,并与非ICU相比较,观察两者的不同之处.方法菌株来自2000～2001年中国细菌耐药监测研究.采用琼脂二倍稀释法测定抗菌药物对临床分离菌的最低抑菌浓度(MIC),并根据美国国家临床实验标准委员会(NCCLS 2001)指定的指导原则,判定细菌耐药率.结果在参加本次监测研究的全国9座城市13家医院的34个病房中,有7个ICU.在总共收集的2 554株菌中,590株来自ICU.其中社区获得性感染(CAI)致病菌196株,院内获得性感染(HAI)致病菌262株(另132株由于资料不全不能作CAI或HAI判断,未进入计算),两者之比为1∶ 1.34,而非ICU分离致病菌中CAI和HAI分别为1350株和243株(另371株因同样原因未进入计算),两者之比为1∶ 0.18.ICU的主要致病菌依次为:铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、鲍曼不动杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌和嗜麦芽窄食单胞菌.在主要的临床分离致病菌中,ICU与非ICU分离的鲍曼不动杆菌耐药率经t检验具有非常显著差异(P<0.001);对于铜绿假单胞菌,两者耐药率具有显著差异(P<0.05).对于阴沟肠杆菌,所测药物对ICU分离菌的MIC50值是非ICU分离菌8～256倍.ICU与非ICU MRSA检出率分别为66.0%和29.8%;来自ICU的金葡菌耐药率与非ICU比较具有非常显著差异(P<0.001).结论在ICU,院内感染的比例明显高于非ICU,并且ICU的主要致病菌中,铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌和金黄色葡萄球菌的耐药率明显高于非ICU。

目的 比较莫西沙星与其他12种抗菌药物对临床常见致病菌的体外抗菌活性.方法采用琼脂稀释法测定对411株临床分离菌株的最低抑菌浓度. 结果金黄色葡萄球菌(MRSA)和肺炎链球菌(包括PISP和PRSP)对万古霉素的敏感性最高,敏感率为95.8%～100%,对莫西沙星、加替沙星的敏感性较高,对大环内酯类药物则比较耐药.流感嗜血杆菌、卡他莫拉菌对莫西沙星、加替沙星等4种氟喹诺酮类和5种头孢菌素类及阿奇霉素比较敏感.肺炎克雷伯菌(包括产ESBL菌株)对莫西沙星等4种氟喹诺酮类和头孢美唑很敏感;非产ESBL菌株对8种抗菌药物均敏感,但产ESBL菌株对第二、三代头孢菌素则显示了较高的耐药率.大肠埃希菌(包括产ESBLs菌株)对氟喹诺酮类敏感率在40%左右,非产ESBL菌株对5种头孢菌素均较敏感,但产ESBL菌株除对头孢美唑敏感外,对其他头孢菌素类耐药率较高.结论莫西沙星与其他12种抗菌药物比较,对革兰阳性菌作用增强,对肺炎克雷伯菌(包括产ESBL菌株)抗菌活性较强,大肠埃希菌对莫西沙星与其他氟喹诺酮类有一定的交叉耐药性。

目的 监测和了解头孢吡肟对临床常见革兰阴性菌体外抗菌活性.方法从1999～2002年收集的临床常见革兰阴性杆菌50 528株(主要为尿液、痰、伤口及其分泌物标本),连续监测4年.药物敏感性试验采用纸片扩散法,WHONET5软件进行结果分析.结果 1999～2002年头孢吡肟对肠杆菌科细菌的敏感性为70.0%～95.2%;对铜绿假单胞菌敏感性为73.9%～77.5%.1999～2002年肠杆菌科细菌临床分离株对头孢噻肟、头孢他啶和头孢吡肟耐药性变迁的比较表明,头孢吡肟耐药率增加幅度低于头孢噻肟、头孢他啶;铜绿假单胞菌对头孢吡肟耐药率增加幅度明显低于哌拉西林、阿米卡星和头孢他啶.结论头孢吡肟对大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、弗劳地枸橼酸杆菌、产气肠杆菌、阴沟肠杆菌、奇异变形杆菌、铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌有较好的体外抗菌活性。

目的 观察和监测重症监护病房常见革兰阴性杆菌对抗菌药物的耐药变化及超广谱β-内酰胺酶(ESBL)菌株的发生率.方法连续监测1998～2003年本院重症监护常见革兰阴性杆菌的耐药状况.用E试验法测定547株革兰阴性杆菌对11种抗菌药物的MIC,并用头孢他啶/头孢他啶+克拉维酸和头孢噻肟/头孢噻肟+克拉维酸E试条检测细菌产ESBL的情况.结果大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、阴沟肠杆菌和嗜麦芽窄食单胞菌是监护病房常见革兰阴性杆菌.亚胺培南对所有受试菌保持最高抗菌活性,细菌总耐药率仅为8.04%,肺炎克雷伯菌完全敏感;阿米卡星、头孢哌酮/舒巴坦、头孢他啶、哌拉西林/他唑巴坦和头孢吡肟有较高抗菌活性,耐药率分别为18.5%、20.7%、20.8%、21.4%和25.6%,其他抗菌药物耐药率在42.2%～51.6%之间.筛选大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌ESBL产生菌41株,检出率分别为48.5%和29.0%,耐药谱分析,酶型可能以CTX-M为主.所有大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌ESBL菌株都对亚胺培南敏感.6年监测结果相比,所测细菌对头孢哌酮/舒巴坦耐药率由1998～2000年的11.2%～16.7%增加至2001～2002年的29.5%～30.5%,以大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和鲍曼不动杆菌较明显.大肠埃希菌对环丙沙星耐药率由1998～1999年的45.2%上升至2000～2002年的72.9%,对其他抗菌药物耐药率变化不大.结论亚胺培南对肠杆菌科细菌(含ESBL产生菌)保持最高敏感性和较强的抗菌活性,而对加酶抑制剂β-内酰胺类抗生素的耐药率逐年升高。

目的 探讨5种氟喹诺酮抗菌药物浓度(MPC)对肺炎链球菌耐药的预防作用,并比较MPC与MIC间的关系,为临床合理用药提供依据.方法首先采用标准琼脂二倍稀释法,测定肺炎链球菌对5种氟喹诺酮药物的MIC值,计算MIC50和MIC90值;采用混菌法,测定MPC值,接种细菌浓度>1010,计算MPC50和MPC90值,并比较MPC/MIC.结果 (1)在5种药物中,莫西沙星的MPC50和MPC90值最低,分别为1 mg/L和2 mg/L,以后依次为加替沙星2 mg/L和4 mg/L、司巴沙星4 mg/L和8 mg/L、左氧沙星8 mg/L和8 mg/L,而环丙沙星最高,为16 mg/L和32 mg/L;(2)测定菌株对莫西沙星、左氧沙星的MPC/MIC范围主要在8～16,对加替沙星、司巴沙星的MPC/MIC范围主要在16～32,对环丙沙星的MPC/MIC范围主要在32～64.结论莫西沙星、加替沙星和左氧沙星这些氟喹诺酮药物中比较新的品种,不仅抗菌谱广,而且MPC值较低,"突变选择窗"范围较窄,这些药物在预防细菌产生耐药突变方面有着明显的优势。

目的 了解6年来广州地区淋球菌对5种抗生素的耐药趋势及产青霉素酶淋球菌(PPNG)和高水平耐四环素淋球菌(TRNG)的流行状况.方法用琼脂稀释法测定最低抑菌浓度(MICs)以及用纸片碘量法检测β-内酰胺酶.结果 719株淋球菌检出PPNG 94株(13.1%)、TRNG 119株(16.6%),6年来,PPNG、 TRNG流行率及环丙沙星耐药率,经μ检验,P<0.01,差异有显著意义.头孢曲松、壮观霉素未发现耐药菌株,壮观霉素抗菌活性最强.结论壮观霉素在临床上可以作为治疗淋病的首选药物,具有良好疗效。

目的 了解医院内感染病例中非发酵革兰阴性杆菌(NFGNB)的分离分布情况及耐药性.方法分析和总结3年来全国医院感染监控网医院报告的NFGNB资料.结果 NFGNB占同期报告医院感染病原体的19.68%,占G-杆菌的42.41%.铜绿假单胞菌、不动杆菌属、嗜麦芽窄食单胞菌分别占NFGNB的46.53%、19.88%、7.35%;3年间,鲍曼不动杆菌由13.27%上升至23.50%、嗜麦芽窄食单胞菌由5.93%上升至8.44%;不同NFGNB耐药性存在明显差异,铜绿假单胞菌对亚胺培南、头孢他啶、头孢哌酮,不动杆菌对亚胺培南、环丙沙星及嗜麦芽窄食单胞菌对SMZ、环丙沙星、头孢哌酮耐药性均较低.结论 NFGNB是医院感染主要病原菌之一,特别是铜绿假单胞菌、不动杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌。

细菌耐药性监测对掌握细菌耐药动向,指导临床合理使用抗菌药物具有重要意义.通过分析2003年湖北地区耐药性监测数据,阐明县级医院、三级医院常见分离菌对临床常用抗菌药物的耐药现状,为不同级别医院临床合理使用抗菌药物提供参考。

随着计算机技术的进步,药物敏感试验结果的收集,保存和处理也越来越多地依赖于计算机软件.WHONET软件就是这样一种软件,它能将各个实验室的数据文件采用通用的编码和文件格式,有利于各临床实验室分析、监控和处理当地的耐药性监测资料并把这些信息整合到全国或者全球的耐药性监测数据文件中[1],促进资源的共享,这是目前世界卫生组织推荐用于细菌耐药性监测的软件,能够满足美国临床实验室标准化委员会制定有关软件的要求[2]。

由中国抗癌协会肿瘤标志专业委员会、中华医学会微生物与免疫学分会、国际肿瘤标志委员会和国际抗癌联盟共同主办的"2004亚太地区国际肿瘤生物学和医学暨第21届国际肿瘤标志物学术会议"于2004年8月21～25日在中国西安隆重召开。

膀胱癌是一种十分容易复发的恶性肿瘤,治疗后需严密随访.目前膀胱镜检查及可疑病变处活检仍是膀胱癌诊断和随访的金标准[1]。

细菌内毒素(endotoxin),即脂多糖(lipopolysaccharide),是革兰阴性菌的主要致病因子.机体感染革兰阴性菌后会出现炎症,发热等病理反应,严重的内毒素血症可导致感染性休克,多器官功能衰竭甚至死亡。

脑脊液(CSF)常规检查适用于门急诊筛检疾病,但用于CNS疾病的鉴别诊断则灵敏度和特异性常欠不足.目前,CSF生化和免疫学检验已出现许多新项目,有些临床意义较肯定(如肌酸激酶、乳酸脱氢酶、腺苷脱氨酶、C-反应蛋白等),但更多新项目还有待循证医学证据和合理的临床解释才可能推广应用。