2021年 · 第44卷第06期

血液标志物检测是最为方便、经济适用的疾病筛查和动态监测手段。本文聚焦终末期肝病-肝硬化和肝癌标志物，从临床常用基础检验到新型标志物的发现和转化应用，阐述了肝病标志物的分类、新型标志物研究、转化和诊断模型应用以及肝病标志物及其算法研究中应关注的问题。注重基于模型算法的多个标志物有效联合是实现以原发性肝癌为代表的终末期肝病临床精准诊疗、高危预警并全程精准管理的重要手段。

消化道肿瘤是目前发病率和死亡率较高的恶性肿瘤，早期发现对于改善患者的预后至关重要。循环核糖核酸（RNA），主要包括信使RNA、微小RNA、长链非编码RNA和环状RNA等，在肿瘤发生发展中发挥重要作用，为液体活检提供了一条新的检测途径。本文将重点讨论循环RNA在消化道肿瘤诊断中的应用，旨在推进循环RNA的临床转化。

RNA m6A修饰是表观遗传学领域的最新研究热点。研究表明，RNA m6A修饰与肿瘤的发生、发展、侵袭、转移等密切相关，外周血RNA m6A修饰水平及相关修饰酶变化可为肿瘤诊断、病程监控提供参考依据，有望作为肿瘤精准诊疗最具潜力的新型分子指标。RNA m6A修饰新型检测技术的出现，实现了对m6A修饰进行整体水平、高通量测序和对待测基因特定片段或位点的定量检测。开发新型高通量检测及单基因RNA甲基化编辑技术，对特定基因m6A修饰水平进行检测，可为研究肿瘤精准诊疗新指标提供新的思路。

近年来，分子诊断技术日新月异，伴随而来的分子标志物在肿瘤的预防、诊断、治疗、预后评估、复发监测等中应用研究也越来越多，但各种实验室技术和分子标志物具有各自的优势和局限性，如何选择适宜的实验技术和恰当的血清肿瘤分子标志物是临床实践中的关注热点。

光学比浊法测定血小板聚集率是最经典的血小板功能检测方法。但光学比浊法测定血小板聚集率的影响因素较多，涉及标本采集、转送和保存，抗凝剂及诱导剂的使用，试验仪器和耗材技术指标等诸多因素。为规范光电比浊法检测血小板聚集在临床诊断中的应用，提高临床血栓和出血性疾病的诊疗能力，该共识从质量管理方面对光学比浊法测定血小板聚集率的检验前、中、后过程进行了标准化，以促进光学比浊法检测血小板聚集的规范应用和良性发展。

目的 探究非小细胞肺癌（NSCLC）根治性放化疗后血清外泌体来源的microRNA-4429（miR-4429）水平与预后的关系。 方法 收集NSCLC患者血液标本309例［化疗前（T0），化疗1个周期后（T1）和化疗2个周期后（T2），每时间点各103例］，采用实时荧光定量PCR法检测miR-4429表达水平，分析其与NSCLC根治性放化疗预后的关系。 结果 103例NSCLC患者1年、2年和3年生存率分别为69.90%、45.63%和34.95%。生存组T1-miR-4429和T2-miR-4429表达水平分别为0.66±0.14和0.77±0.11，高于死亡组T1-miR-4429（0.60±0.06）和T2-miR-4429（0.62±0.11），差异均有统计学意义（t=2.269、6.997，P<0.05）。限制性立方样条拟合COX回归分析结果显示T2-miR-4429与NSCLC生存预后呈线性关系。COX回归分析结果显示TNM分期是NSCLC生存预后的独立危险因素（P<0.05），分化程度、靶向治疗和T2-miR-4429均是NSCLC生存预后的独立保护因素（P<0.05）。由TNM分期、分化程度、靶向治疗和T2-miR-4429构建的列线图回归模型的校正曲线与理想曲线重合度较好，C-index为0.713。 结论 T2-miR-4429表达水平高提示NSCLC生存预后不良风险低。由TNM分期、分化程度、靶向治疗和T2-miR-4429构建的列线图回归模型有一定的区分度和精准度，可辅助评价NSCLC生存预后。

目的 评估毛细管电泳在良恶性单克隆球蛋白血症（MG）的诊断及鉴别诊断中的应用价值。 方法 回顾分析青岛大学附属医院2016年1月至2020年6月门诊及住院初诊患者2 445例的毛细管电泳检测结果，通过青岛大学附属医院临床大数据库收集患者的临床诊断等信息。多组间单克隆球蛋白含量差异比较采用Kruskal-Wallis等级秩和检验，通过受试者工作特征（ROC）曲线分析各型单克隆球蛋白的诊断敏感度及特异度，采用约登指数计算截断值。 结果 2 445例初诊患者中，单克隆球蛋白阳性1 183例，其中诊断为恶性MG 944例，未定性的单克隆γ球蛋白血症（MGUS）174例，具有肾脏意义的单克隆球蛋白血症（MGRS） 65例。单克隆球蛋白分型比例由高到低为IgG-κ型、IgG-λ型、IgA-λ型、IgA-κ型、游离λ轻链型、游离κ轻链型、IgM-κ型、双克隆型及IgM-λ型。恶性MG组的IgG、IgA、IgM及游离轻链型（FLC）型单克隆球蛋白含量均高于MGUS组，差异有统计学意义（P<0.01）。恶性MG组与MGRS组比较，IgG及IgA型单克隆球蛋白含量差异有统计学意义（P<0.01）。ROC曲线分析IgG、IgA、IgM及FLC型单克隆球蛋白对恶性MG均有较好的诊断效能（P<0.01），ROC曲线下面积分别为0.947（95%CI 0.926~0.968）、0.930（95%CI 0.895~0.966）、0.844（95%CI 0.722~0.967）和0.865（95%CI 0.781~0.950）。IgG型单克隆球蛋白截断值为14.24 g/L，诊断敏感度及特异度为88.5%和90.1%；IgA型单克隆球蛋白截断值为8.88 g/L，敏感度及特异度为87.9%和81.4%；IgM型单克隆球蛋白截断值为26.93 g/L，敏感度及特异度为64.4%和90.9%；FLC型单克隆球蛋白截断值为7.08 g/L，诊断敏感度85.9%，特异度77.8%。 结论 毛细管电泳免疫分型技术可用于多发性骨髓瘤、非霍奇金淋巴瘤等恶性MG的诊断，也可用于MGUS、MGRS疾病的筛查及追踪；血清单克隆球蛋白水平可有效鉴别良恶性MG。

目的 对3个遗传性多发性骨软骨瘤（HME）家系行致病基因检测，为优生、遗传咨询和产前诊断提供依据。 方法 收集2018年1月至2020年11月就诊于河南省人民医院遗传与产前诊断中心的3个遗传性多发性骨软骨瘤家系，对家系进行详细的病史采集，签署知情同意书后，收集家系成员外周静脉血，对先证者行全外显子组测序（WES），发现可疑致病位点后，采用Sanger测序对家系成员候选致病变异进行验证及家系共分离分析，结合ACMG指南，对突变进行致病性判断。 结果 全外显子组测序分别在3个家系先证者中检出EXT1基因c.1056+2T>C突变、c.369dupA（p.G124fs）突变和EXT2基因c.1171C>T（p.Q391*）突变。共分离验证后发现：3个家系中的患者均存在相应突变，而表型正常的家系成员未检测到突变，符合基因型-表型共分离。结合ACMG指南，上述3种突变可分类为致病性突变。 结论 EXT1基因c.1056+2T>C、c.369dupA突变和EXT2基因c.1171C>T突变是导致3个家系罹患骨软骨瘤的病因。

目的 评价全基因组测序（WGS）技术对耐多药结核病二线注射类抗结核药物耐药性检测的临床应用价值。 方法 利用比例法药敏试验和WGS同时对2013至2017年深圳市慢性病防治中心结核病实验室菌株库保存的172株耐多药结核病（MDR）菌株进行卡那霉素、阿米卡星和卷曲霉素3种二线注射类抗结核药物耐药性检测。以比例法药敏试验为金标准，评价WGS的敏感度、特异度和一致性。两种方法有差异的样本用最低抑菌浓度（MIC）检测法进行比较。采用McNemer检验对两种方法的检出率进行统计分析，P<0.05为差异有统计学意义。 结果 共172株MDR菌株纳入本研究，WGS检测发现了2个突变基因：rrs和eis基因，rrs-A1401G是主要的突变位点，分别占阿米卡星、卡那霉素和卷曲霉素耐药菌株的58.3%、14/18和14/14。WGS预测阿米卡星的敏感度、特异度和一致性分别为14/15、93.6%和68.0%；卡那霉素的敏感度、特异度和一致性分别为15/15、98.1%和90.0%；卷曲霉素的敏感度、特异度和一致性分别为14/15、100%和96.0%。2种方法检测结果不一致的菌株共13株，MIC复检1株为耐药菌株，12株为敏感菌株。阿米卡星检测结果不一致的菌株11株，其中WGS检测结果显示8株发生rrs-514-A/C位点突变，而药敏试验和MIC检测均为敏感。 结论 WGS诊断阿米卡星、卡那霉素和卷曲霉素具有较高的敏感度和特异度，一致性较强，表明WGS技术在实际应用中对MDR菌株二线注射类抗结核药物耐药检测具有较高的真实性，可广泛应用于临床。

目的 评估傅里叶红外光谱技术（FTIR）对临床分离的碳青霉烯耐药大肠埃希菌（CREC）同源性分析的能力。 方法 26株CREC为2018年从来自全国9个省、市（湖南、吉林、浙江、福建、上海、安徽、重庆、云南、河南）的样本中分离，FTIR检测菌株在900~1 200 cm-1区域的红外吸收光谱，使用欧式距离和平均连接聚类方法进行多变量分析；并对菌株进行全基因组测序（WGS）分析单核苷酸多态性（SNP）。 结果 FTIR将26株CREC分为14个红外光谱（IR）型，且相同IR型的菌株均属于同一序列（ST）型。相比WGS对CREC的聚类分析，FTIR的聚类分析结果一致性为92.3%（24/26）。 结论 FTIR对CREC同源性的区分能力具有较高准确性，且操作简便快速，具有良好的临床推广前景。

目的 对杜氏肌营养不良（DMD）基因新发突变家系生育史女性妊娠再发风险的情况进行总结分析，阐明新发突变家系DMD基因突变规律，并探讨此类家系遗传咨询的模式。 方法 收集2013年1月至2017年12月在河南省人民医院就诊DMD家系64例，首先应用多重连接依赖性探针扩增（MLPA）技术对DMD家系患者及其母亲DMD基因79个外显子进行缺失或重复分析，选取患者DMD基因突变而其母亲DMD基因未见突变的新发突变家系纳入本研究，然后利用MLPA技术联合短片段串联重复序列（STR）基因连锁分析对新发突变家系女性再妊娠进行产前诊断。 结果 64个DMD基因新发突变家系均为DMD基因外显子缺失突变家系；共对65例胎儿进行产前诊断，其中性别决定基因（SRY）阴性26例，SRY阳性39例，DMD基因无突变63例，DMD基因外显子缺失突变2例，产后随访与产前诊断结果一致。 结论 DMD基因新发突变家系外显子突变主要表现为外显子的缺失突变，集中在45~55外显子区域，对于新发突变家系，有DMD患者生育史的女性，即使DMD基因外显子未见突变，仍建议其孕期进行DMD产前诊断。

目的 探究茶皂素（TS）对志贺菌感染性肠炎的保护作用及其机制研究。 方法 实验分体外实验和体内实验。体外实验：通过微量肉汤稀释法检测TS对志贺菌的抗菌活性；使用酶标仪检测不同浓度TS作用下菌液的600 nm下的吸光度（A600），绘制生长曲线；通过平板菌落计数检测细菌数。体内实验：将15只小鼠分为对照组、福氏2a志贺菌301株（Sf301）组和TS组，每组5只。Sf301组和TS组连续8 d分别灌胃无菌水或TS，于第3天制备志贺菌感染小鼠模型。用疾病活动指数（DAI）评价小鼠的一般情况。于第8天处死小鼠，测量各组小鼠结肠长度，取结肠组织行HE染色，观察病理学变化；取小鼠盲肠内容物与粪便进行平板计数，检测志贺菌载量；用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测结肠炎症因子的mRNA表达水平。 结果 （1）体外实验：TS的最小抑菌浓度（MIC）为1 024 μg/ml，不同浓度的TS（256、512、1 024 μg/ml）的平板菌落计数、A600依次减小，与对照组比较，差异均有统计学意义（均P<0.05）。（2）体内实验：对照组、TS组小鼠结肠分别为（7.70±0.24）、（7.35±0.41） cm，与Sf301组［（6.13±0.05） cm］比较，差异有统计学意义（P<0.05）。组织病理学结果显示Sf301组结肠上皮细胞脱落，杯状细胞减少，炎性细胞浸润。而TS组结肠黏膜较完整，无炎性细胞浸润。与Sf301组比较，TS组小鼠盲肠内容物细菌载量更低（P<0.05）。TS组的肿瘤坏死因子-α水平低于Sf301组，白细胞介素-10水平高于Sf301组（均P<0.05）。 结论 TS可有效抑制志贺菌，通过减少志贺菌载量和抑制炎症缓解志贺菌感染性肠炎。

目的 建立一种基于人工智能的尿液检验结果解释性报告系统。 方法 收集2008—2018年浙江大学医学院附属第一医院患者2 899 917份、体检710 971份尿检数据，统计每个项目不同结果的频数分布建立大人群分布，再根据数据分布、项目重要性和结果异常程度，建立每个样本的健康指数和各项目的异常等级。收集糖尿病、尿路感染、肾小球肾炎、肾病综合征等疾病数据，按性别、年龄匹配同数量的健康对照组。基于AdaBoost算法的集成学习器建立模型并评估算法性能。用JAVA开发数据展示软件。用199份异常尿液检验结果，人工验证模型的准确性。 结果 每份报告分为正常、异常、疾病、危重4个等级；单个项目结果判断为正常、轻度、中度、重度、极度5个等级并提供大数据的人群分布；基于AdaBoost机器学习模型运用于7种疾病的训练准确度（≥88.3%）、真阳性率（≥80.0%）、曲线下面积（≥0.954）。开发的JAVA软件展示上述结果，并包括病历和结果、历史结果、个性化建议、异常项目科普、在大人群数据中的位置等内容。异常尿液结果可能的疾病相似度，人工验证机器学习模型的准确率为82.41%（164/199）。 结论 本研究建立了智能的结果解释性报告系统，能区分报告异常程度，具有较高疾病预测准确性，可提供个性化的临床决策信息。

随着高通量测序和多组学技术的应用，越来越多的生物标志物被挖掘并用于疾病诊断、风险分层、疗效评估及预后预测的研究中。由于机器学习能处理复杂数据，并通过建立模型等方法较好预测临床疾病变化，因此其在肿瘤标志物的挖掘和应用中具有一定的优势。通过总结近年来常用的机器学习方法，阐述其在标志物挖掘中的应用进展，并总结不同的机器学习方法在标志物挖掘中的优劣。

自新型冠状病毒肺炎（COVID-19）疫情暴发以来，全球都在寻找有效的治疗方法。细胞外囊泡（EV）/外泌体是细胞间通讯的有效载体，研究表明，间充质干细胞源EV/外泌体是对抗急性呼吸窘迫综合征的无细胞治疗的替代选择；此外，EV在COVID-19相关代谢组学、蛋白质组学、复发复阳、深静脉血栓、心肌毒性、液体活检以及生物治疗的研究，都将为COVID-19的诊疗提供新的思路。本文将对EV/外泌体在COVID-19诊治中的潜在价值进行综述。

近年来细菌的耐药问题日益严重，其形成生物膜后更是具有极强的耐药能力，治疗难度极大提高。除屏障作用、微环境改变等理化因素外，生物膜中部分基因调控也特异地提高细菌耐药性。细菌耐药与形成生物膜的能力之间可能存在共同的调控机制。Ⅰ型成簇的规律间隔短回文重复序列（CRISPR）系统能够调节细菌耐药基因的获得和传播，其作用因种属、进化过程、环境压力而异。新近有报道Ⅰ型CRISPR系统影响生物膜的形成，而且参与噬菌体和生物膜的相互作用，有可能成为研究噬菌体治疗的切入点。本文对近年来细菌耐药形势、生物膜耐药新进展，以及Ⅰ型CRISPR系统影响细菌生物膜的形成与耐药的生物学意义进行综述，为防治细菌感染提供新思路。

本文综述了抗菌肽的结构及生物学特性，并围绕膜损伤和非膜损伤相关的抗真菌机制进行阐述，展望了抗菌肽的临床使用前景，为抗菌肽抗真菌机制的深入研究和临床开发应用提供理论依据。