2004年 · 第27卷第04期

多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)发病率占血液系统肿瘤的10%,全身恶性肿瘤的1%.其骨髓瘤细胞(myeloma cell,MC)浸润骨骼和软组织,产生M蛋白,引起骨骼破坏、贫血、肾功能损害、反复感染等.本病多见于中老年,男性多于女性。

目的 利用分子信标杂交和毛细管电泳理论,建立一种新的基因突变检测方法,应用于疾病的基因诊断.探讨白细胞介素(IL)-13外显子4单核苷酸多态性(SNP)A2044G与中国北方人群哮喘易感性的相关关系. 方法扩增32例有明显支气管哮喘家族史的患者和20名健康对照者的IL-13exon 4,所得PCR产物与分子信标杂交,利用毛细管电泳检测杂交产物,并进行序列测定.结果分子信标和毛细管电泳,联合检测支气管哮喘患者IL-13exon 4第2 044位基因型,为A的频率是31.2%,为G是68.8%,与测序结果相同.经统计学分析,支气管哮喘患者与健康对照者的等位基因频率差异具有显著意义(χ2=2.43,P＜0.01).结论分子信标毛细管电泳联合技术高效、特异、灵敏,可对PCR产物进行分析,适用于碱基突变的检测.IL-13+2044位A/G多态性与支气管哮喘的发病密切相关。

目的 探讨组织相容性抗原(HLA)-肽四聚体流式细胞技术检测乙型肝炎病毒特异性CD++T细胞的临床应用价值.方法采用HLA-A2分子胞外段与乙型肝炎病毒(HBV)核心表位肽core 18-27结合的HLA-肽四聚体(Tetramer),设计流式细胞技术检测乙肝患者外周血中针对该肽段的特异性CD++T细胞数量,以占总计数CD++细胞数的百分比表示.结果 11例HLA-A2+的急性乙肝患者外周血特异性CD++T细胞为0.02%～2.04%,中位数为0.20% ,16例HLA-A2+的慢乙肝患者为<0.01%～0.65%,中位数为0.05% ,二组之间差有显著性(P<0.01).15例HLA-A2+正常对照组、13例HLA-A2-急性乙肝对照组和19例HLA-A2-慢性乙肝对照组的特异性的CD++T细胞均不超过0.02% .结论 HLA-肽四聚体流式细胞技术能在体外直接检测HBV特异性的CD++T细胞数量,其水平一定程度上反映了特异性CTL应答状况,且与乙肝的不同临床转归有关。

目的 了解前S1蛋白(PreS1)与乙型肝炎病毒(HBV)复制的关系,及诊断乙型肝炎的价值.方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法对3243例携带乙型肝炎不同病毒标志物的慢性乙型肝炎患者血清进行PreS1测定并与HBV DNA做对比分析.检测58例急性发病的经肝活检病理诊断为慢性乙型肝炎患者的血清,分析其不同病程的PreS1,HBeAg和HBV DNA三者间的关系.根据肝活检病理的肝组织炎症情况分为G1～G4级,对49例PreS1和HBV DNA阳性病例进行分析比较.检测39例不同病程急性乙型肝炎患者血清,分析PreS1和HBV DNA与丙氨酸氨基转移酶(ALT)间的关系.结果乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg) 、乙型肝炎病毒核心抗体(HBcAb)阳性组与PreS1和HBV DNA符合率分别为86%和88%,P>0.05,不同病程慢性乙型肝炎患者血清PreS1、HBeAg和HBV DNA检出率高度符合. HBsAg 抗HBe 抗HBc阳性组与PreS1和HBV DNA符合率分别为36%和35%,说明部分HBeAg阴性患者仍有病毒复制.不同病程急性乙型肝炎患者血清PreS1和HBV DNA与ALT之间的关系,PreS1与ALT相比符合率高,P>0.05.HBV DNA与ALT相比符合率较低,P<0.01.病理肝组织G1～G4炎症分级与PreS1和HBV DNA高度吻合.结论 PreS1能够敏感地反映乙型肝炎病毒的复制情况,尤其可以反映HBeAg阴性的乙型肝炎患者是否有病毒复制.在急性乙型肝炎患者中,PreS1先于HBV DNA阴转,提示疾病的预后良好。

目的 探讨恢复期传染性非典型肺炎(SARS)的淋巴细胞及其亚群的变化,为评价SARS患者细胞免疫功能的恢复提供新的依据.方法采用多色流式细胞术结合血液分析仪测定102例SARS患者临床病愈出院后2个月内其外周血淋巴细胞及其亚群的表达情况.结果 86.3%和92.2%的恢复期患者其白细胞和淋巴细胞绝对计数恢复正常;63.7%患者T细胞计数恢复正常,在T细胞中,T8细胞较T4回升显著,分别为96.1%和49.0%;100%患者NK细胞绝对计数恢复到正常范围甚至高于正常;这些指标较急性期患者均有显著升高;B细胞绝对计数较急性期更为降低; 26.5%患者上述各种指标均恢复正常. 结论部分SARS患者其淋巴细胞及其亚群在临床病愈后短期内可恢复正常,T8细胞和NK细胞计数较T4细胞恢复快。

目的 探讨氧化型低密度脂蛋白自身抗体(oxLDL-Ab)、高敏C-反应蛋白(hs-CRP)与冠心病之间的关系以及oxLDL-Ab与hs-CRP之间的相关性. 方法对61例确诊的冠心病患者、116例高血压病患者和123名健康对照进行血清oxLDL- IgG、IgM和hs-CRP水平进行检测,并作相关性分析.结果冠心病患者oxLDL-IgG 21.48 (17.58～29.01)U/L、oxLDL-IgM 4.71(3.88～7.06)U/L和hs-CRP 3.27(1.32～6.80)mg/L均显著高于高血压组15.93(11.12～22.26)U/L、2.54(1.17～5.05)U/L、0.79(0.42～1.87)mg/L和健康对照组11.12 (4.70～16.57)U/L、1.61(0.60～3.03)U/L、0.74(0.48～1.50)mg/L,P均<0.001,而hs-CRP在高血压病组和健康对照组之间差异无显著意义,P>0.05.在这3组中均未发现oxLDL-Ab与hs-CRP之间有相关性. 结论 oxLDL-Ab与hs-CRP在冠心病患者中显著升高且无明显相关性,提示二者在冠状动脉硬化进程中可能各自起着重要的作用。

目的 为了检测A组轮状病毒VP7的基因型,建立一步多重逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)同步检测A组轮状病毒G基因型技术.方法在参照文献并分析A组轮状病毒VP7基因的基础上,选取了一个共用的下游引物RVG9和6个A组轮状病毒G基因型G1、G2、G3、G4、G8和G9的特异性上游引物,利用多重RT-PCR技术对标准株和样品进行检测.结果进行一轮RT-PCR,即可至少同时检出5种不同标准株混合物中的各个基因型.对纯化的A组轮状病毒标准株RNA O265进行系列稀释后,其检测灵敏度可达1PFU.经对A组轮状病毒阳性的60份样本进行检测,其中G3有51例、G2有4例,G1与G3混合感染3例,另外尚有2例不能分型. 结论本研究建立的一步多重RT-PCR技术对A组轮状病毒基因型研究将为临床诊断和实验研究提供一种快速、灵敏和特异的检测手段。

多器官功能不全综合征(MODS)为同时或相继发生2个以上器官功能不全或衰竭.可溶性白细胞分化抗原14(sCD14)是存在于人和动物血液和体液中的游离内毒素(LPS)缺陷受体,在严重创伤MODS引发全身炎症反应中,LPS和sCD14均明显升高[1]。

随着心外科和体外循环技术的提高,体外循环心脏术后脑损伤的发生率有所减少,但总的发生率仍高达50%～70%[1].在临床工作中术后脑损伤的早期诊断、早期治疗及其对治疗效果的准确评价十分重要.许多研究已证实,S100B蛋白是目前反映脑组织损伤的最特异性的生化标志物[2,3]。

目的 比较研究转移性肝癌细胞系中蛋白质表达谱的改变,筛查在转移中起重要作用的关键蛋白质分子.方法用双向电泳(2-DE)及液相色谱-电喷雾-串联质谱(LC-ESI-MS/MS)对3种不同转移潜能人肝癌细胞系Hep3B、MHCC97L、MHCC97H的差异蛋白质组进行分析. 结果 Hep3B、MHCC9TL和MHCC9TH分别平均检测到976±112个蛋白点(n=3)、1092±40个蛋白点(n=3),和888±15个蛋白点(n=3),以其中MHCC97L图谱为参考胶,Hep3B、MHCC9TL和MHCC9TH分别与其匹配的平均匹配点数为637±37个(n=3)、771±16个(n=2)和589±51个(n=3),平均匹配率分别为65.7 %,72.1%,66.2%.不同胶间蛋白质斑点的位置偏差[等电聚焦(IEF)]方向为(2.95± 0.95)mm,聚丙烯酰胺凝胶电泳方向为(2.87±0.88)mm.Hep3B、MHCC97L、MHCC97H中有359个蛋白质点匹配.与Hep3B比,MHCC97L有103个点未匹配,相差10倍以上的上调点和下调点分别为57个和49个;MHCC97H有113个点未匹配,相差10倍以上的上调点有47个,相差10倍以上的下调点有52个.质谱可鉴定出S100A4,S100A6,S100A11,Annexin1等26种胶内差异蛋白质.结论与不转移肝癌细胞相比,转移性肝癌细胞有明显的差异性蛋白表达谱.推测肝癌侵袭转移性与细胞内多种差异蛋白相关。

目的 探索单细胞扩增前引物延伸法(PEP)全基因组扩增,后续多重巢式聚合酶链反应(MN-PCR) 同步扩增人类白细胞抗原(HLA)-A、B和DR基因位点检测技术,进行配型预选研究的价值.方法采用PEP-MN-PCR方法测定单个淋巴细胞和单个胚胎细胞的HLA-A、B和DR基因型.结果 PEP-MN-PCR对单个淋巴细胞的扩增率、扩增准确率、假阴性率和假阳性率分别为91.7%、95.7%、3.0%和1.7%,而单个胚胎细胞则分别为97.7%、97.5%、2.3%和2.6%,两种细胞检测结果比较差异均无显著性意义(P>0.05).结论单细胞PEP-MN-PCR检测HLA多基因位点有较高的扩增效率和扩增准确率,具有应用于植入前胚胎遗传学分析,筛选HLA匹配胚胎,提供脐血造血干细胞移植治疗同胞疾病的应用价值。

风疹病毒(RV)感染孕妇,可导致死产、流产或胎儿畸形等先天性风疹综合征(CRS)[1].因此,及时准确快捷的诊断RV具有重要意义.卵黄免疫球蛋白IgY)具有不与类风湿因子结合,不激活补体系统等特点[2,3],可作为诊断试剂替代哺乳动物血清IgG,提高诊断的准确性和特异性。

许多分子生物学方法已经成功地应用于细菌感染调查,虽然大多技术能产生满意的结果,但分辨率﹑可重复性和速度尚待提高.本研究建立的BOX-PCR,用于检测肺炎链球菌时,其特异性高、重复性好且操作简便,为肺炎链球菌的流行病学调查提供了一个切实可行的方法。

目的 探讨利用质量控制和室间质量评价来证实常规检验符合规定性能准则的方法.方法室间质量评价准则是分析的"总误差"要求,需要将其转化为提供规定分析质量保证水平所必须的允许不精密度、允许不准确度和质量控制(质控规则和质控测定值个数)的操作过程规范.结果通过把具有规定概率的统计质量控制应用于检测过程,常规检验将取得期望的质量要求.结论分析质量保证检验的这种应用是通过过程计划和质量控制来保证检验质量的一种定量方法。

为探讨大肠埃希菌O157:H7菌体抗原基因检测芯片的制备方法,为进一步研制O157:H7诊断芯片奠定基础。

血细胞分析仪检测血标本时,除给出细胞数外,还提供相应的细胞体积分布图.根据仪器检测的原理不同,可将血细胞分布图形分为直方图和散射图.直方图是血细胞分析仪用电阻抗原理对血细胞进行检测,以细胞体积为横坐标,细胞的相对数量为纵坐标,表示某一种细胞数量分布情况,可反映细胞体积大小异质性。

2003年4月,我院从1例拇指骨髓炎患者的脓液和组织标本中分别分离出恶臭假单胞菌和人型结核分枝杆菌,报告如下。

朱忠勇教授是我国著名实验诊断学专家和学术(学科)带头人,江苏省泰兴籍,1927年生.朱教授1945年参加新四军,曾在新四军一师苏中军区卫生学校学习,后又在军区卫生部化验训练班学医学检验。

王学谦 <中华检验医学杂志>编辑委员会委员,1948年生,河北籍.现任河北医学院生物化学专业硕士研究生导师,南开大学博士研究生导师,天津医科大学硕士研究生导师、教授、研究员;天津市天津医院院长、天津市骨科研究所所长。

禽流感是由禽流感病毒引起的一种人、禽共患的急性传染病.主要发生在鸡、鸭等禽类,一旦发生疫情,将给养禽业和社会经济带来巨大损失。

20世纪50年代,以DNA双螺旋结构的提出为标志,生命科学进入了分子生物学时代,对遗传信息载体DNA进行了全方位的研究.至2002年人类DNA框架基本明确,意味单个基因开发工作告一段落。

近几个月世界上连续报导禽流行性感冒病毒(avian influenza virus,简称禽流感病毒AIV)感染人的病例,某些亚型的高致病力毒株感染后有较高的病死率.世界卫生组织(WHO)随时发布最新流行信息,全球都在关注该病流行趋势[1-3]。

1981年,De Bold发现心房钠尿肽(Atrial natriuretic pepetide,ANP)后,Maekawa等[1]于1988年首先从猪脑中分离出了钠尿肽家族的第二个成员,称为B型钠尿肽(B-type natriuretic peptide,BNP),又称脑钠素或脑钠肽(brain natriuretic peptide),随后于1989年克隆出了人BNP(hBNP)。

肠球菌已成为医院感染的重要病原.从70年代首次报道肠球菌高耐庆大霉素开始,肠球菌对庆大霉素等氨基糖苷类药物的高水平耐药不断增加,如希腊在1993～1994年粪肠球菌和屎肠球菌对庆大霉素高水平耐药(HLGR)发生率20%左右,1996～1997年则分别达到43.7%和26.3%;北京四家医院1997～2001年临床分离肠球菌耐药性的分析结果显示粪肠球菌和屎肠球菌HLGR发生率高达47.4%和64.9%[1],屎肠球菌的耐药率明显高于粪肠球菌[2]。

最近，由中国科学院和教育部高等学校蛋白质组学研究院召开的“SELDI专利技术国际研讨会”表明，蛋白指纹图谱技术(surfaced enhanced laser desorption／ionization，SELDI)，也称飞行时间质谱技术，在我国已应用于临床诊断，并取得较好的应用前景。