2004年 · 第27卷第03期

临床实验室走到今天已面临着非常严峻的挑战.这挑战一方面来自于我国财政、社会乃至个人所面临的巨大医疗开支压力,以及随之而来的医疗卫生改革和医疗保险引入的冲击, 这一挑战要求我们的实验室必须尽一切可能紧缩开支,降低成本,使医疗资源更趋集中;另一方面,挑战来自于人们对医疗保健的要求,随着生活质量的不断改善,实验室面临着持续增长的样本压力和巨大的工作负荷,这一挑战要求我们的实验室必须想尽一切方法加快检测速度,增强检测能力,扩大检测范围.因而,实验室自动化问题也就自然而然地进入了临床实验室现代化管理的议题之中。

近十年来,由于广谱抗生素的大量引进和广泛应用,致真菌感染的比例明显增高[1～3],同时由于诊断治疗相对落后,而因由真菌感染引起的疾病其死亡率也相当高,故加强控制真菌感染的检验即显得十分必要。

目的 建立一种快速、简便、高灵敏测定血清铁的新方法.方法在非离子型表面活性剂聚氧乙烯月桂醚(Brij-35)及聚氧乙烯异辛基苯基醚(TritonX-100)存在下,用水溶性试剂2-(5-硝基-2-吡啶偶氮)-5-[N-正丙基-N-(3-磺酸丙基)氨基]苯酚(简称Nitro-PAPS)作显色剂直接光度法测定血清铁.结果该方法测定血清铁,显色络合物最大吸收波长为590 nm,线性范围达107.4 μmol/L,表观摩尔吸光系数为1.03×105L/(mol/cm).回收率为97.9%～102.2%,批内变异系数(CV) 为2.4%～3.5%,批间变异系数(CV) 为2.9%～3.7%,与亚铁嗪分光光度法比较相关良好, Y＝0.992X +0.12,r=0.9883,P>0.05.85名健康成年人血清铁含量为(11.2～28.4) μmol/L (±2s).结论该法血清用量少,不必去蛋白,具有操作快速、简便、结果灵敏可靠等优点,适用于血清铁的手工测定和自动分析。

目的 探讨变性高效液相色谱法(DHPLC)在耳聋基因筛查中的应用价值.方法应用DHPLC检测6个家系的48名个体,然后进行直接测序.结果 6个家系中A,B,C,E,F家系有间隙连接蛋白2(GJB2)耳聋基因的变化,F家系表现为235delC突变,B家系表现为235delC和232G→A杂合性突变.79G→A(V27I)、341A→G (E114G)杂合性改变分别为19例和16例;纯合性改变分别为10例和6例.2种方法的检测结果均为阳性者30例,均为阴性者10例;DHPLC阳性,测序阴性1例;DHPLC阴性,测序阳性2例.DHPLC方法的敏感性为95%,特异性为91%.结论 DHPLC是一种高效、经济、简便、灵敏的耳聋基因筛查技术。

目的 了解内蒙古地区苯丙酮尿症(PKU)病人苯丙氨酸羟化酶(PAH)基因突变类型和频率.方法采用聚合酶链反应(PCR)扩增,单链构象多态性分析(SSCP)、DNA直接测序的方法,对内蒙古地区22个PKU家系PAH基因外显子3、5、6、7、10、11、12,进行检测分析.结果检出10种苯丙氨酸羟化酶基因的点突变.R243Q(8/44)、R252Q(1/44)、R261Q(1/44)、G239D(1/44)、IVS7nt(2)(1/44)、Y204C(5/44)、Y356X(6/44)、R413P(1/44)、R111X(1/44)、Y161S(1/44),经检索国际PAH基因突变数据统计库,确认G239D(G→A)为首次发现的新突变. 结论 R243Q、Y356X、Y204C是内蒙地区人群中PAH基因的主要突变位点.以Y356X的突变率明显高于、R413P低于北方人群为特征。

目的 利用Taqman技术,建立荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)技术,对前列腺癌病人外周血中前列腺特异性抗原基因(PSAmRNA)进行定量检测.方法在PSA基因的外显子2和3之间设计一对引物和一条Taqman探针;优化反应体系的条件,以不同LNCaP细胞含量为标准品和其循环阈值(Ct值)制作标准曲线,检测外周血中PSAmRNA含量;对本方法进行方法学评价及初步临床应用评价.结果成功建立了FQ-RT-PCR检测PSAmRNA技术,本方法最低检测限为每毫升全血5个LNCap细胞,线性范围为5～108细胞/ml, 批内和批间变异系数分别为9.5%～14.3% 和 15.2%～20.1%,扩增产物克隆和测序分析显示本扩增片段为PSAmRNA序列的特异性片段.初步临床研究显示,10例经ECT,检查证实骨转移的前列腺癌患者的外周血均检到PSAmRNA, 其含量变化为8～104细胞/ml,健康男性、女性各5名外周血中PSAmRNA含量均小于本法最低检测限.结论荧光定量逆转录聚合酶链反应检测PSAmRNA具有灵敏、特异、简便、结果数据化等特点, 该方法可为前列腺癌微转移诊断、预后判断、指导治疗等奠定良好基础,同时也为其他肿瘤患者外周血中肿瘤细胞检测提供了方法学启示。

目的 观察分析传染性非典型肺炎(SARS)患者血细胞形态学变化.方法 220例临床确诊的SARS患者(包括死亡病例)、20例细菌性肺炎和20例病毒性肺炎患者外周血涂片,经瑞氏染色后,用普通光学显微镜观察其细胞形态.结果 SARS患者血细胞形态发生了明显的变化,其中167例患者中性粒细胞细胞核表面出现鼓槌样结构,156例的患者中性粒细胞质中非特异性颗粒粗大,121例的患者中性粒细胞出现空泡变性.其他肺炎患者血细胞未见上述形态学的改变.结论中性粒细胞核鼓槌样形成可能与SARS病程有关。

目的 探讨5′-核苷酸酶(5′-NT)在肝胆疾病与骨骼疾病诊断与鉴别诊断中的应用.方法利用速率法测定对照组30例和各类疾病组共78例的5′-NT和碱性磷酸酶(ALP)值.结果对照组、胆道梗塞性黄疸、肝硬化、胆结石、肝炎、肝癌、骨病组5′-NT平均值分别为:3.27、17.84、9.60、14.10、10.45、21.45、4.47 IU/L,肝胆疾病组的5′-NT值显著高于骨病组及对照组(P<0.05).诊断肝胆疾病100%,敏感性91%,特异性100%,可信度91.67%.结论 5′-NT是诊断肝胆疾病的特异性指标,与ALP联合应用可鉴别诊断肝胆疾病与骨骼疾病。

目的 探讨淋巴细胞总数(TLC)与CD4阳性(CD4 +)T淋巴细胞数的相关性,以及TLC在监测艾滋病病毒(HIV)感染者疾病进展和高效抗逆转录病毒治疗(HAART)疗效中的作用.方法采用Spearman秩和相关回顾性分析我国75例HIV感染者TLC和CD4 +T淋巴细胞数相关性.根据灵敏度、特异度,阳性预测值和阴性预测值,估计预测CD4<200/mm3和CD4<350/mm3的TLC的临界值.结果我国HIV感染者的TLC和CD4 +T淋巴细胞数显著相关(r=0.664,P<0.001).定期随访HIV感染者TLC的变化值(△TLC)和CD4 +T淋巴细胞数的变化值(△CD4)相关(r=0.433,P<0.001).13例接受HAART治疗的HIV感染者的TLC和CD4 +T淋巴细胞数相关(r=0.533,P<0.001).治疗后△TLC和△CD4相关(r=0.521, P<0.001).用TLC<1 500/mm3预测CD4<200/mm3灵敏度为78%,特异度为85%,阳性预测值为66%,阴性预测值为91%;用TLC<1 800/mm3预测CD4<350/mm3灵敏度为72%,特异度为75%,阳性预测值为79%,阴性预测值为66%.结论在条件有限的地区,可以用TLC来预测CD4 +T淋巴细胞数,监测HIV感染者疾病的进展,粗略判断HAART的疗效。

A组链球菌(GAS)M分型多达80多个血清型,由于M分型血清难以制备,目前大部分GAS分型仍以T分型作为辅助分型的方法,因为每个T分型相对应于数个特定的M分型,因而结合OF分型可以初步判断GAS的M分型状况.我们在1993～1994年对包括重庆市、湖北省、吉林省和广东省4个省市的小学生进行GAS调查研究。

骨髓有核细胞的数量是判断骨髓增生程度的重要指标.但到目前为止还没有一种直接计数这些细胞的方法[1].为了给临床提供更准确、可靠,可进行前后结果方法的动态比较,我们选用乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)抗凝骨髓,然后对骨髓有核细胞进行直接定量计数,并与其他3种方法进行比较。

S100B蛋白是近年较受关注的一种反映神经胶质细胞损伤有特异性的蛋白质.在以往研究中,多将S100B蛋白与神经元特异性烯醇化酶(NSE)进行比较,用于反映神经损伤.但尚无用于颅内动脉瘤夹闭术围术期S100B蛋白与脑损伤关系的研究.为此,我们选择动脉瘤围术期患者,检测了脑脊液和血清S100B,以探讨S100B蛋白与脑损伤之间的关系。

目的 检测难治性癫痫鼠脑细胞信号转导相关基因的表达,探讨难治性癫痫的发病机理.方法建立难治性癫痫和非难治性癫痫大鼠模型,抽提两者脑组织的RNA,分别逆转录合成荧光分子掺入的cDNA做探针;将含有4 096条人类基因PCR产物制成基因芯片,芯片杂交和严格洗片后,用ScanArray3000荧光扫描仪扫描芯片荧光信号图像,利用计算机分析难治性和非难治性癫痫鼠脑差异表达的基因.结果在4 096种基因中,难治性和非难治性癫痫鼠脑组织间存在明显差异表达的基因364条,其中与细胞信号转导相关的基因有29 条,上调的有10 条,下调的有19 条.结论微矩阵基因芯片在筛选难治性癫痫相关基因的改变时,具有快速、高通量、高灵敏度等特点,细胞信号转导的障碍在难治性癫痫发病中起一定的作用。

目的 探讨慢性苯中毒时未成熟网织红细胞指数(IRF)的变化规律.方法复制慢性苯中毒引起再生障碍性贫血小鼠模型.对照组(A组)32只小鼠,分为4小组,每小组8只,于小鼠背侧皮下单纯注射玉米油2 ml/kg,每周3次,按注射次数不同分为A1组(15次)、A2组(18次)、A3组(21次)、A4组(24次)4个不同的注射次数组;实验组(B组)32只小鼠,同样分为4小组,每小组8只,注射用等量玉米油稀释的2ml/kg苯,方法同对照组,分别为B1、B2、B3、B4组.采用Beckman-Coulter Gen.S全自动血细胞分析仪,测定各组IRF、网织红细胞百分比(Ret%)、平均网织红细胞体积(MRV),以及白细胞计数(WBC)、血小板计数(PLT)、红细胞计数(RBC)和血红蛋白含量(Hgb),并将注射次数相同的实验组与对照组进行比较分析.结果实验组"苯+玉米油"注射15次时,WBC、MRV已明显低于对照组(分别为t=4.10,P<0.01和t=2.19,P=0.046);注射18次时,IRF和Plt也同时明显低于对照组(t值分别为2.98和3.22,P均<0.01);注射21次时,Ret%轻度下降(t=2.19,P=0.046),IRF已极度下降(t=4.23,P<0.001),RBC和Hgb也都呈不同程度下降(分别为t=8.26,P<0.001和t=3.14,P<0.01);注射24次时,各参数均显著低于对照组(P<0.01或P<0.001).实验组和对照组(共64例)IRF与MRV有较好的相关性(r=0.561 8,P<0.01).结论慢性苯中毒引起再生障碍性贫血时IRF和MRV降低比其他红系指标早,IRF和MRV的检测作为了解骨髓红系受抑制状态的新型指标,具有一定的使用价值。

国外学者通过对血清和尿液中曲霉菌半乳甘露聚糖(galactomannan ,GM)抗原的检测,发现其对侵袭性曲霉病(IA)的早期诊断有较重要价值[1,2].我们建立了IA兔模型,采用酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测感染后动物血清中GM的含量,通过与传统的血培养比较,评价ELISA检测GM在诊断IA中的价值。

肠侵袭性大肠埃希菌(EIEC)生物学特性酷似志贺菌,传统的主要鉴定依据是细菌生化反应特征和血清型,并用动物实验确证其毒力.但细菌血清型结果并不足以鉴定EIEC[1],而Sereny实验需饲养实验动物,应用不便.检测与菌株侵袭力有关的基因则是鉴定EIEC侵袭力的简便方法[2]。

目的 建立基因芯片快速检测人白细胞抗原A19(HLA-A19)分型方法.方法利用基因芯片技术,根据HLA-A位点不同基因亚型的独特序列设计探针,制成分型芯片;待检测样品经聚合酶链反应(PCR)标记上荧光之后,与芯片进行杂交,根据杂交产生的荧光信号值,分析确定样品A位点的基因亚型.对120份移植供受者的HLA-A基因分型,并对11份样品作基因测序.结果仅用2.5 h,HLA-A19基因分型芯片可准确分辨出A19抗原9大类(A2901、A29XX、A3001、A3006、A30XX、A31、A32、A34和A74).结论 HLA-A19组基因芯片分型方法,分辨率高、特异性强、重复性好、操作简便、结果直观,适于临床应用。

目前,树突状细胞(dendritic cell,DC)在免疫调节中的作用广受关注.将完整肿瘤细胞直接和DC融合得到的肿瘤细胞DC融合瘤苗,不但可表达肿瘤抗原,还可表达共刺激分子,使肿瘤抗原得以有效呈递[1]。

目的 研究荧光强度分析法检测抗核抗体(ANA)的质量控制方法和质量控制标准及,并探讨其应用价值.方法平行检测质控品36次,分析其荧光强度值(±2s)和变异系数(CV%);以质控品荧光强度值在±2s范围内为质量控制标准,在3种荧光显微镜条件(激发光和采图曝光时间不同)下检测1 000份ANA阳性血清的荧光强度,并进行对比分析.同一质控标准下分别用血清稀释法和荧光强度分析法检测3 000份ANA阳性病人血清,比较两种方法的符合率,评估该质控方法的可靠性.结果质控品的荧光强度值和CV分别为106.6±9.7和4.6%.在此质控标准下,1 000份ANA阳性血清在3种荧光显微镜情况下的荧光强度值的差异无显著性(P>0.05);3 000份ANA阳性标本,用两种方法检测的总符合率为99.4%,其中均质斑点型为99.8%(998/1 000)、均质型为99.5%(995/1 000)、斑点型为99.0%(990/1 000).结论用定值的质控品控制各个实验室的ANA检测结果,可以排除因荧光显微镜等实验条件的差异所导致的误差,使实验室间ANA结果准确可靠,具有可比性,因而可整体提高ANA检测质量。

目前,我国大中型医院同一实验室使用不同厂家或型号的血细胞分析仪已较普遍.血细胞分析仪室内质控方法多采用Levey-Jennings质控法,判断失控的界限为"±3s",个别实验室采用经典的Westgard多规则控制方法(N=2).这些方法带有极大的盲目性,没有考虑测定方法本身的性能特征(方法的准确度、精密度、允许总误差等),对许多测定项目未能做到真正的控制,致使在同一实验室内同一标本用不同仪器分析,测定结果的准确性和可比性不能保证.为此,我们利用功效函数图[1,2]法,对本室3台血细胞分析仪各项目质控方法进行选择与比较。

尼曼-匹克病(niemann-pick disease ,NPD)又称鞘磷脂沉积病(Sphingomyelin Lipidosis)是具有高度表型异质性的疾病,为常染色体隐性遗传[1].NPD的酶缺陷可能是神经鞘磷脂酶的遗传密码改变,突变基因使合成了结构异常的肽链一级结构[2].我院诊断了首例NPD。

传统的血细胞检查完全采用手工方法,不仅操作繁琐费时,而且由于多种原因,计数结果的准确性和精密度难以保证.1958年,库尔特采用电阻率变化与电子技术相结合的方法,发明了性能比较稳定的电阻抗法血细胞计数仪,开创了血细胞分析的新纪元。

本研究通过对解脲脲原体(UU)的14个标准血清型的聚合酶链反应-单链构象的多态性(PCR-SSCP)电泳分析,直接鉴定UU生物群和基因型。

近年来,运用基因扩增技术对病毒进行定性或定量检测已取得了巨大进步,尤其是定量检测技术的发展,使得临床能够更加有效地监测患者治疗效果、是否有耐药性发生等病情,并可依据病毒荷载量的变化合理地解释病情的变化[1-3]。

在缺血性心脏病的诊断中,除了病历、身体检查和心电图以外,生化标记物的测量一直是一个重要的评估指标,在很长一段时间内,乳酸脱氢酶(LHD)、肌酸激酶(CK)和肌酸激酶同I酶(CK-MB)承担这个角色,尤其是CK-MB,一度被认为是判断心肌损伤和诊断心肌梗死的金标准[1]。

目的 探讨Murex丙型肝炎病毒(HCV)血清分型试验的可靠性与实用性.方法采用Murex HCV 1～6血清分型试剂,ELISA技术检测针对HCV非结构区(NS4区)的特异性抗体,对44例抗-HCV阳性的HCV感染者血清标本进行HCV血清分型,并比较与基因分型结果的符合程度.结果 44例中有35例(79.5%)获得血清学分型结果,其中1型27例(77.1%),2型7例(20.0%),1+2型1例(2.9%).血清型与基因型符合率为96.8%.结论 Murex HCV血清学分型试验结果可靠,简便易行,具有一定的临床应用价值。

2004年初,某些亚洲国家陆续报告了人禽流感病毒感染而发病的病例.核病病死率高,传播途径欠明确,临床实验室检测缺乏经验,应引起我们重视。

陶其敏教授是我国著名实验诊断学专家和肝病学专家，1931年生，江苏苏州籍。1956年毕业于山东大学医学院医疗系，毕业后分配到北京大学(原北京医科大学)人民医院工作。曾任北京大学人民医院肝病研究所所长、中华医学会检验学会主任委员、《中华检验医学杂志》第四届编辑委员会总编辑。现任北京大学人民医院肝病研究所教授、博士研究生导师和博

2003年春季爆发流行的非典型性肺炎给实验室工作人员敲响了警钟，但遗憾的是直至今日，临床实验室生物安全防护问题仍未能得到足够的重视。

血细胞分析(血红蛋白测定、红细胞计数、白细胞计数、红细胞比积、血小板计数等)是临床最常用的实验室检测指标,其结果的准确性直接影响对患者的诊断和治疗.根据国际血液学标准化委员会(international council for standardization in haematology, ICSH)颁布文件的要求,血细胞分析的检测结果只有直接或间接地溯源至参考方法,才能保证结果的准确性和不同实验室检测结果的可比性,但由于血细胞分析检测系统配套校准物的价格高、进口入关手续的办理较难、效期短且难以及时获得等特点,使校准物的使用难以得到推广。