2004年 · 第27卷第02期

随着现代信息技术和医学生物学,特别是医学分子生物学的发展,医学微生物学检验技术近年来也获得了长足的进步,并逐渐成为指导临床感染诊断和治疗的重要依据.然而,目前我国的医学微生物学检验事业远未达到令人满意的程度,还有许多问题需要我们去思考、研究和解决,需要我们医学微生物学科和临床医学的同道们通力合作共同奋斗。

1994年Zhang等[1]首次发现瘦素是肥胖基因(ob基因)的蛋白质产物,以后发现瘦素与促进生殖功能、保护骨质疏松、防止高血压及某些激素代谢性疾病等有关[2-4]。

荧光定量聚合酶链式反应(FQ-PCR)技术灵敏度高,速度快[1,2],已被临床广泛应用.然而,尽管该方法采用尿嘧啶糖基酶(UNG)等防交叉污染措施,但由于进行核酸提取时,用的是非封闭式人工操作,很难实现真正意义上的零污染(避免假阳性)。

肝细胞生长因子(HGF)在肝硬化和肝肿瘤发生、发展和转移均起着重要作用[1-3].我们采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测肝细胞癌(HCC)、肝硬化(LC)和慢性肝炎(CH)患者血清中的HGF水平,并对其与HCC、LC和CH的关系进行评价。

瘦素是脂肪细胞肥胖基因的产物,其可阻止脂质在非脂肪组织处沉积.本研究通过放射免疫学方法检测脂肪肝患者血清瘦素水平的变化,探讨瘦素与脂肪肝的关系。

目的 研究幽门螺杆菌(HP)感染胃黏膜病变中细胞表面分子(CD44V6)、p16基因及细胞核增殖抗原(PCNA)的表达及相互关系.方法 114例病人经胃镜及病理证实的不同胃黏膜病变标本,应用免疫组化染色法检测CD44V6、p16基因及PCNA基因的表达.HP感染由快速脲酶试验结合Warthin-Starry银染色确定.结果各组胃黏膜病变中HP阳性的病人与HP阴性的病人相比较,HP阳性的病人p16基因表达显著低于HP阴性的病人(P<0.01);CD44V6表达HP阳性的病人显著高于阴性的病人(P<0.01);HP 阳性的病人PCNA-LI%表达显著高于HP阴性的病人(P<0.05).HP感染的胃黏膜病变中p16基因表达与CD44V6表达呈负相关(rs=-0.697 1,P<0.01);p16基因表达与PCNA表达呈负相关(rs=-0.607 5,P<0.01);CD44V6表达与PCNA表达呈正相关(rs=0.479 9,P<0.01).结论 CD44V6、PCNA、p16基因在胃黏膜病变、癌前病变向胃癌转化中起了非常重要作用.HP感染直接或间接的促进了CD44V6、PCNA的表达,并抑制了p16基因的表达.HP感染患者3种基因之间存在一定相关性。

目的 探讨血清中肝细胞生长因子(HGF)与系统性红斑狼疮(SLE)活动程度的关系和意义.方法采用双抗体夹心酶联免疫吸附测定法,检测30名健康人和36例SLE患者血清HGF水平,并分析其与SLE活动性变化关系.结果 SLE患者血清HGF水平(1 433.3±154.0 ng/L)明显高于正常对照组[(1 142.1±78.8 )ng/L,P<0.001];糖皮质激素治疗后血清HGF水平(1 101.1±100.20 )ng/L与治疗前(1 212.1±102.5)ng/L相比,差异有显著性意义(P<0.05); SLE患者活动期血清HGF(1 501.3±201.8)ng/L高于非活动期[(1 311.7±231.2) ng/L,P<0.05];非蛋白尿组(1 535.0±233.20) ng/L明显高于蛋白尿组[( 1 253.2±104.6 )ng/L ,P<0.001]; 关节炎组(1 512.3±238.1)ng/L明显高于非关节炎组[(1 293.4±71.8)ng/mL, P<0.01].结论 HGF可能与SLE的发病相关,血清HGF可作为反映SLE活动程度、肾脏损害及疾病进展或改善的一项指标。

目的 比较重组蛋白与合成肽抗原建立的酶联免疫吸附试验(ELISA)在戊型肝炎实验室诊断中的应用价值.方法选择戊型肝炎病毒第二开放读码框架(ORF2),分别采用重组蛋白及合成肽抗原,建立酶联免疫吸附试验(ELISA),同时检测97份戊型肝炎急性期患者,47份甲、乙、丙、丁、庚型肝炎患者及120份健康献血者的血清抗-HEV.结果重组蛋白ELISA、合成肽ELISA与Genelabs重组抗原ELISA试剂盒检测结果的总符合率分别为96.9%和92%;重组蛋白ELISA与合成肽ELISA的一致率为91%;合成肽ELISA对重组蛋白ELISA的灵敏度为90%,特异度为100%.结论戊型肝炎病毒相同表位的重组蛋白和合成肽抗原用于抗-HEV ELISA检测有较好的一致性。

目的 探讨血清中抗氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)抗体、抗β2糖蛋白I(β2GPI)抗体及抗内皮细胞抗体(AECA)3种自身抗体与动脉粥样硬化的关系.方法分别用酶联免疫吸附法(ELISA)和间接免疫荧光法(IIF)检测118例冠状动脉硬化性心脏病患者及44名健康对照者血清中3种自身抗体水平.结果冠心病组血清抗ox-LDL 抗体阳性率为32.20%,明显高于健康对照组阳性率6.82% (P=0.001);抗β2GPI抗体阳性率为31.36%,其健康对照组阳性率为11.36%(P=0.009); 血清抗内皮细胞抗体阳性率冠心病组为38.14%,健康对照组为13.64%(P=0.002).在血脂正常的冠心病组中抗ox-LDL和抗β2GPI抗体阳性率也高于健康对照组.结论血清中上述3种自身抗体阳性率与动脉粥样硬化密切相关,抗ox-LDL和抗β2GPI抗体阳性率与血脂无明显相关性,自身免疫反应是动脉粥样硬化的一种可能的发病机制。

目的 改进甲基化特异性聚合酶链反应(MSP),采用半巢式MSP检测胃癌组织p16基因启动子区CpG岛的甲基化状态.方法用亚硫酸氢盐修饰被测DNA后,采用半巢式MSP(引物分别为MS,M1A和MS,M2A),分析了60例胃癌组织及相应正常组织中p16基因的甲基化状态.结果单独用MSP,胃癌组织中p16基因甲基化的发生率为80%.采用半巢式MSP,甲基化发生率为86.7%,比单独采用MSP提高了几个百分点,并提示胃癌病例的p16基因启动子区存在甲基化发生的不同模式.结论半巢式MSP能够有效地提高灵敏度和减少假阳性.同时,免疫组化的结果也说明了p16基因异常甲基化与胃癌组织P16蛋白的表达密切相关。

目的 介绍巢式甲基化特异性聚合酶链反应(nMSP)法,探讨了最佳PCR扩增条件,并用该法分析新鲜癌组织、石蜡包埋组织及肿瘤患者血清中p16基因启动子的甲基化状态.方法将基因组DNA变性成为单链,用亚硫酸氢盐修饰单链DNA,将所有未甲基化的胞嘧啶被转变为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶则不变.设计针对甲基化和非甲基化等位基因特异引物,进行巢式聚合酶链反应扩增,最后经凝胶电泳检测目的片段.结果在3种类型的标本中都检测出了p16基因启动子甲基化.用甲基化特异性聚合酶链反应法(MSP)和nMSP法分别检测34例非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清,p16基因启动子甲基化阳性率分别为53%(18/34)和74%(25/34), nMSP法具有更高的灵敏度.结论筑巢式甲基化特异性聚合酶链反应是一种灵敏度高、特异性强的甲基化检测方法,可广泛应用于不同类型标本基因启动子甲基化分析。

目的 对重组的刚地弓形虫RH株主要表面抗原1(SAG1)原核表达载体SAG1/pET-32c, 在大肠杆菌中诱导表达产物进行亲和纯化β免疫反应性检测评价.方法接种含SAG1/pET-32c的BL21单菌落至LB肉汤中,1∶ 100稀释转种后用1 mmol/L 终浓度的IPTG诱导表达,表达产物用Ni2+螯合柱亲和纯化,并用免疫印迹技术对纯化的融合蛋白进行免疫反应性检测,用重组融合蛋白对弓形虫病52份阳性和40份阴性血清进行初步检测. 结果 SAG1/pET-32c在原核系统中,经诱导表达出约37 000大小的融合蛋白,并以包涵体的形式存在;通过Ni2+亲和柱纯化可获得SAG1重组融合蛋白.免疫印迹试验表明,重组SAG1融合蛋白能被弓形虫阳性血清特异性的识别.初步检测表明,阳性和阴性符合率分别为81%(42/52)和95%(38/40).结论 SAG1在原核系统获得高效表达,亲和纯化的rSAG1具有较强的免疫反应性,对弓形虫病的免疫诊断具有潜在应用价值,也为人用或兽用的弓形虫病免疫诊断试剂盒研制奠定了基础。

由于一种细菌可同时产生多种β内酰胺酶,因此为了避免多种β内酰胺酶的相互干扰,我们应用肉汤稀释法[1]对产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)的4株肺炎克雷伯菌(Kpn)的TEM型编码基因进行了原核表达。

我们采用2-巯基丙酸(2-mercaptopropionic acid,2-MPA)和头孢他啶(CAZ)双纸片琼脂扩散协同试验检测细菌金属β内酰胺酶,并与EDTA协同试验进行比较。

我们于2003年6月从一肺部患者的痰液标本中,分离出一株豚鼠气单胞菌,药物敏感试验表现为多重耐药性,产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)。

糖化血红蛋白作为糖代谢长期监测指标日益受到临床的重视,目前实验室最常用的测定方法有离子交换树脂微柱法、免疫法、电泳法以及亲和色谱微柱法.我们对1例合并遗传性持续性胎儿血红蛋白增多症(HPFH)的糖尿病患者进行糖化血红蛋白检测时,发现一些问题,讨论如下。

目的 了解北京市三级医院临床实验室基本情况及存在的普遍问题,为进一步规范临床实验室管理和提高临床检验质量提供依据.方法根据"北京市临床实验室管理办法"规定,拟定了"人员资格"、"仪器、试剂"、"室内质控"、"室间质评"等8方面30多项内容,由专家组进行现场调查,逐一记录每个调查项目存在的问题,以满意、缺陷或不满意给出评价,并反馈给被检查单位.结果检验科存在的主要问题有SOP文件不规范、IQC记录、失控记录不完整等7项, 在所调查30多项中,存在的不足主要是在缺陷级别上.其他临床实验室存在的问题含上述7项,尚包括"设备校准"及"室间质评"方面的6项,有缺陷级别问题外,还有许多问题为不满意级别.结论在对临床实验室管理的基本要求方面,实验室间有所差异,今后检验科应在质量意识的强化及质量体系完善方面下功夫,其他临床实验室还需从加强基本培训及基本质量保证措施的建立方面做起.调查分析提出了从实际出发,进行"分类分级"培训和指导等合理设想。

[编者按] 根据卫生部指示,中华医学会检验医学分会成立了<临床检验操作规范>编写组.<临床微生物学检验操作规范>是该规范的一部分。

贫血的诊断主要依靠检查外周血的血红蛋白(Hb)、红细胞数(RBC)和红细胞比积(Hct).贫血的形态学分类需要借助红细胞三个平均值等参数.网织红细胞计数是每个贫血病人必须检查的项目,它对于鉴别贫血的基本性质有重要意义.直方图的观察分析,血涂片红细胞形态、大小等特征的观察对贫血的鉴别诊断有重要参考价值.对于缺铁性贫血、巨幼细胞贫血和溶血性贫血,必要的生化检查是必不可少的.溶血性贫血又是一大类贫血,病因很多,需要按照一定的程序进行检查.骨髓检查必须掌握临床适应证。

质量管理是临床实验室管理的核心,是实验室生存发展的前提,特别是2002年我国出台的<关于民事诉讼证据的若干规定>中明确指出"举证倒置",这对提高临床实验室质量管理提出了更高的要求.实验室检查是临床诊疗工作中一个基本环节,其工作质量要靠临床医护人员和检验人员共同努力来保证.广大医护人员有必要了解临床实验室的工作程序,并与检验医师与技术人员一起,加强检验与临床交流与合作,共同建立完善的临床实验室全面质量管理体系。

叶应妩教授是我国检验医学事业的奠基人之一，著名实验诊断学专家(检验医学专家)和学术(学科)带头人。现为卫生部临床检验中心顾问、教授、博士研究生导师、中华医学会检验医学分会名誉主任委员、中华检验医学杂志编辑委员会顾问；曾任《中华医学检验杂志》(2000年更名为《中华检验医学杂志》)首任总编辑。

目的 了解广州地区对红霉素耐药的肺炎链球菌中ermB及mefE基因分布,比较ermB基因与mefE基因对红霉素耐药的肺炎链球菌的耐药性.方法用克林霉素纸片法检测199株对红霉素耐药的肺炎链球菌,并用浓度梯度法检测其耐药性.结果 199株对红霉素耐药的肺炎链球菌中,ermB、mef E基因介导的耐药率分别为70.9%(141/199)和29.1%(58/199).141株ermB基因介导对红霉素耐药的肺炎链球菌,对青霉素(MIC50 0.19μg/ml、MIC90 1.5μg/ml)、阿莫西林/克拉维酸(MIC50 0.19μg/ml、MIC90 1.0μg /ml)、头孢曲松(MIC50 0.19μg/ml、MIC90 0.75μg/ml)、头孢呋辛(MIC50 0.38μg/ml、MIC90 2.0μg/ml)、头孢克洛(MIC50 2.0μg/ml、MIC90 32.0μg/ml)的不敏感率分别为58.2%、0.7%、21.3%、46.1%和51.1%. 58株mefE基因介导对红霉素耐药的肺炎链球菌,对青霉素(MIC50 0.5μg/ml、MIC90 1.5μg/ml)、阿莫西林/克拉维酸(MIC50 0.38μg/ml、MIC90 1.0μg/ml)、头孢曲松(MIC50 0.38μg/ml、MIC90 0.75μg/ml)、头孢呋辛(MIC50 1.0μg/ml、MIC90 3.0μg/ml)、头孢克洛(MIC50 6.0μg/ml、MIC90 48.0μg/ml)的不敏感率分别为67.2%、0、19.0%、58.6%和62.1%. 结论广州地区对红霉素耐药的肺炎链球菌,其耐药机制以ermB基因介导为主;ermB基因介导的红霉素耐药水平高于mefE基因介导的耐药性。

目的 研究2000～2002年上海地区患儿呼吸道流感嗜血杆菌、肺炎链球菌及卡他莫拉菌感染情况,肺炎链球菌的血清分型,3种致病菌对抗菌药物的耐药情况.方法细菌的生化鉴定采用API鉴定系统,肺炎链球菌血清分型采用荚膜肿胀试验,β内酰胺酶测定采用头孢硝噻酚试验,抗生素敏感试验采用浓度梯度扩散法及琼脂扩散法.结果流感嗜血杆菌持续3年位居呼吸道致病菌首位,对氨苄西林素耐药率接近20%.卡他莫拉菌及肺炎链球菌分离率呈增加趋势,其中17.2%流感嗜血杆菌及95.1%卡他莫拉菌β内酰胺酶阳性.72.7%β内酰胺酶阳性卡他莫拉菌对氨苄西林耐药.检测到11种肺炎链球菌血清型,19F及23F为主要血清型,青霉素耐药菌株(PRSP)占4.2%.结论流感嗜血杆菌、卡他莫拉菌及肺炎链球菌已成为上海地区患儿呼吸道主要院外感染致病菌.流感嗜血杆菌、肺炎链球菌感染对青霉素类抗生素已产生不同程度的耐药,19F、 23F是本地区肺炎链球菌主要血清型。

结核病在许多国家出现回升的一个主要原因是细菌耐药性问题,随着联合药物治疗的使用,又出现了耐多药结核分枝杆菌(结核菌),使许多结核病,难以治疗,增加了死亡率[1]。

利福平(RFP)是结核化疗方案中的一个关键药物,它的应用可明显缩短结核病的疗程.因此,创建快速、简便的检测方法一直是基础研究中的一个重要课题.突变受阻性扩增系统(amplification refractory mutation system,ARMS)[1]是一种可以检测任何已知点突变或小基因片段缺失的扩增技术,简便、可靠、无同位素污染.我们选择与结核分枝杆菌(结核菌)RFP耐药相关的rpoB基因中突变频率最高的3种突变形式:531 TCG→TTG,526 CAC→TAC,516 GAC→GTC来设计ARMS特异性突变引物,ARMS-聚合酶链反应(PCR)扩增后结合微孔板探针杂交酶免疫技术(EIA)加以检测其扩增产物,进而推断其RFP耐药与否。