2004年 · 第27卷第01期

自20世纪80年代开始至今的20余年间,临床检验专业飞速发展,学科建设空前活跃,检验学科已经从医学检验向检验医学方向发展,成为一门独立的学科,对疾病的诊断、治疗、预防及发病机理的探讨等诸方面发挥了很大的作用,医院检验科的建设已成为衡量医院水平的重要指标之一。

抗生素耐药性问题已成为全球关注的焦点.我国是世界上滥用抗生素最为严重的国家之一,耐药菌引起的医院感染人数,已占到住院感染患者总人数的30%左右.临床分离的一些细菌如大肠埃希菌对环丙沙星耐药性已居世界首位。

目的 检测细胞外钙离子(Ca2+)浓度对高剪切力诱导血小板聚集的影响,并测定高剪切力活化血小板时血小板内Ca2+浓度的变化,探讨Ca2+在剪切力活化血小板中的作用.方法用锥板黏度计施加高剪切力作用,以荧光抗体CD61 PerCP标记血小板,流式细胞术(FCM)测定血小板聚集率.以荧光染料Fluo-3 AM标记血小板,FCM测定高剪切力作用后血小板内Ca2+浓度;并测定二磷酸腺苷(ADP)对高剪切力作用下Ca2+反应的影响.结果洗涤全血标本或加入钙离子螯合剂乙二醇四乙酸(EGTA),造成细胞外低钙或无钙环境,高剪切力诱导的血小板聚集率由59.6%±5.1%下降到很低水平,而加入外源性Ca2+在一定程度上增强这种聚集.全血标本受到高剪切力作用,血小板内Ca2+浓度发生明显的升高;增加细胞外Ca2+浓度能增强这种反应,降低细胞外Ca2+浓度或阻断血小板膜糖蛋白GPⅠb/Ⅸ与血浆血管假性血友病因子(vWF)之间的相互作用,使血小板Ca2+反应消失,而阻断GPⅡb/Ⅲa与血浆vWF之间的相互作用则无明显影响.低浓度的ADP与高剪切力对血小板钙离子反应有协同作用.结论细胞外Ca2+是高剪切力诱导血小板聚集的必需条件,血小板内Ca2+反应可能是剪切力活化血小板时信息传递的重要物质基础。

目的 探讨乙型肝炎病毒前C信号肽酶裂解位点变异后乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)表达的改变.方法以聚合酶链反应结合限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法筛检前C信号肽酶裂解位点变异的病例,经PCR扩增出编码HBeAg的前C/C区基因并克隆于EB病毒真核表达载体(EBO),以脂质体介导方法将变异株与野株分别转染HepG2细胞,利用SEAP报告系统监测转染效率,用酶联免疫吸附方法(ELISA)和免疫印迹(Western blot)方法检测转染不同病毒株的细胞外和细胞内HBeAg的量.结果转染野株的细胞培养上清经ELISA方法可检测到HBeAg阳性;而转染变异株的细胞培养上清中HBeAg为阴性.培养细胞内部以Western blot方法检测发现野株可表达三种蛋白,即HBeAg(分子量17 000)和两种HBeAg前体(22 000和25 000),而变异株只能检测到两种HBeAg前体,且变异株的HBeAg前体密度带明显比野株强.结论乙型肝炎病毒前C信号肽酶裂解位点变异后可能影响HBeAg的翻译后加工,导致大量的HBeAg前体在细胞中蓄积,这可能导致HBV感染者血清HBeAg阴性。

目的 用定量Taqman技术检测人端粒酶逆转录酶(hTERT)信使核糖核酸(mRNA)以及在肿瘤细胞中表达的意义.方法在Trizol提取总RNA后,将mRNA逆转录成互补脱氧核糖核酸,用Taqman技术定量检测hTERT mRNA,并与经典逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法比较.结果急性髓细胞白血病患者hTERT mRNA表达水平为(52.9～7.3)×104拷贝/μl,平均3.5×103拷贝/μl,其阳性率(90.3%)高于健康体检者(5.6%,χ2=29.9,P<0.05),但与经典RT-PCR检出阳性率比较, 差异无显著意义(χ2=1.3,P>0.05).Taqman技术灵敏度为1.5～3拷贝/μl,特异性为100%;在(50～5)×108拷贝/μl之间有良好的线性关系,相关系数为100%;50和5 000 拷贝/μl的标本的内变异系数(CV)1.7%和2.0%,日间CV则分别为3.7%和2.9%.结论 Taqman技术是一种快速有效、灵敏度高、特异性良好的定量检测hTERT mRNA的方法。

目的 探讨肝移植术后急性排斥反应患者干扰素γ(IFN-γ),白细胞介素4(IL-4)和转化生长因子β(TGF-β)的变化与相关性.方法急性排斥组与非排斥组按常规方法分离外周血单个核细胞,并用佛波脂、离子酶素和莫能酶素进行刺激.然后,采用双色流式细胞术分析移植后受者白细胞分化抗原(CD)4+T细胞中IFN-γ+、IL-4+和TGF-β+细胞的百分率,并观察CD4/ CD8比值的变化.结果肝移植术后非排斥组外周血CD4+T细胞中IFN-γ+、IL-4+和TGF-β+细胞因子在第7天分别为(7.8±1.4)%、(1.5±0.6)%和(0.9±0.5)%,第14天分别为(6.8±1.6)%、(1.8±0.8)%和(1.0±0.6)%,第28天分别为(7.0±2.0)%、(2.0±1.1)%和(1.1±0.6)%,各组间差异无显著意义(P>0.05).移植后急性排斥组外周血CD4+T细胞中IFN-γ+,IL-4+和TGF-β+细胞因子分别为(9.2±1.5)%、(2.1±0.6)%和(1.5±0.5)%,与非排斥组相比,急排组IFN-γ高表达(P<0.05),而各组间IL-4 和TGF-β水平差异无显著意义(P>0.05).结论 Th1细胞因子的高表达与肝移植后急性排斥反应密切相关。

目的 探讨聚合酶链反应荧光偏振技术(PCR-FP)检测乙型肝炎病毒(HBV)DNA的临床应用价值.方法将PCR扩增得到的HBV DNA特定片段,与荧光素标记探针和PCR产物中的一条DNA链杂交,形成特异杂交体,用荧光偏振光检测仪检测特异杂交体,最终判断HBV DNA是否存在.并对对102份乙型肝炎患者和30份非乙型肝炎患者血清进行检测结果比较.结果PCR-FP检测HBV DNA的最低检测限为1×101拷贝,在40份乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎e抗体(HBeAg)和抗乙型肝炎核心抗原(抗HBc)均阳性患者血清标本中检出HBV DNA阳性率为100%;33份HBsAg、抗乙型肝炎e抗体(抗Hbe)和抗HBc均阳性患者血清HBV DNA阳性率为81.8%;29份HBsAg和抗HBc阳性患者血清HBV DNA阳性率为72.4%;14份乙型肝炎患者和30份非乙型肝炎患者血清均为阴性.方法的灵敏性和特异性分别为86%和100%.结论PCR-FP操作简单、灵敏、特异,适用于临床HBV基因检测。

苯丙酮尿症(PKU)是常染色体隐性遗传病,因苯丙氨酸羟化酶(PAH)基因突变致酶活性降低或丧失而造成高苯丙氨酸血症和智力低下.为进一步提高PKU产前基因诊断率,我们用s聚合酶链反应-变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)对PCR短串联重复序列(PCR-STR)连锁分析,对家系的PAH基因的相对突变热点区域外显子6(e6)、e7和e12作突变检测,以探讨其在PKU产前基因诊断的应用价值。

目的 探讨限制性内切酶分析法在柯萨奇B组病毒B1～B6型检测及分型中的应用.方法利用GCG软件对柯萨奇B1～B6型病毒cDNA全序列进行了限制性内切酶酶切位点的分析.结果共114种限制性内切酶在柯萨奇B1～B6型病毒cDNA中分布有不同数量的酶切位点.经过比较和分析,得到了它们的一个共同cDNA片段,在这个cDNA片段中,B1～B6型病毒各自具有特异性的核苷酸序列(特异的限制性内切酶位点),对柯萨奇B组病毒6个已知型别标准毒株进行了成功的分型和检测.结论本方法有效地解决了在柯萨奇B组病毒检定以往方法中所存在的非特异性问题,可以对柯萨奇B组病毒进行准确的检定和型别鉴定。

目的 探讨毛细管电泳定量分析在体外培养的大鼠腹腔巨噬细胞中5-脂氧合酶(5-LO)信使核糖核酸(mRNA)表达.方法分离大鼠腹腔巨噬细胞进行培养一定时间,用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)观察5-LO mRNA表达的变化,并用毛细管电泳进行定量.结果 100 bp DNA marker和RT-PCR产物在筛分介质为1.8% 羟丙基甲基纤维素-100溶液的毛细管电泳中能获很好的分离.毛细管电泳定量分析表明,体外培养72 h对5-LO mRNA表达量没有明显的影响,进一步培养到第120 h,5-LO mRNA的表达量下降了约80%.结论 RT-PCR产物可以用毛细管电泳直接分离定量.5-LO mRNA可以在体外培养的大鼠腹腔巨噬细胞中稳定表达72 h。

神经生长因子(NGF)可促进神经元存活、生长发育与分化,对早老性痴呆[1]、帕金森病[2]和外周神经疾病[3]等的治疗有重要作用.本研究应用Pichia pastoris酵母对扩增出的人β-NGF基因进行蛋白表达并进行免疫活性分析.

临床检验工作与许多其他技术工作一样,经历了手工操作、半自动化、自动化和信息化阶段,高技术的应用和检验医学的发展对实验室工作人员素质不断提出新的要求.进入21世纪后,国内许多临床实验室在硬件水平上已达到接近国际水平,医疗市场的需求和临床实验室的快速现代化,给临床实验室的管理者提出了新的课题,即如何科学地进行临床实验室管理,才能使我们跟上时代发展的步伐,充分发挥现代化临床实验室应有的工作效率。

哮喘(asthma)是一种由多种因素引起的以可逆性气道阻塞、气道高反应性和气道炎症为特征的免疫变态反应性疾病.随着工业水平的提高,哮喘的发病也逐年增加.全世界有1.5～2.0亿人罹患哮喘病, 每年死于哮喘病的人达18万多.全球哮喘病人造成的经济负担,超过了结核病、艾滋病病毒感染和艾滋病(HIV/AIDS)造成的经济负担的总和[1].哮喘的防治成为人们关心的话题。

患者女,57岁,尿毒症,血型:A、CCDEe,既往4次妊娠,2次同种异体肾移植,多次输血.2003年5月29日在山西省第二人民医院肾移植中心透析治疗,输洗涤红细胞2 u无不良反应。

患者男,43岁,维吾尔族,"A"型,有输血史,于2003年5月15日到新疆阿克苏地区第一人民医院住院,住院后患者Hb为70g/L,故申请输血,因医院没有要求Rh阴性血,故血站供给"A"型Rh阳性全血,后经医院检验科聚凝胺介质配血,主侧管呈强阳性反应,次侧管为阴性反应,故申请血站进行交叉配合实验,经血型、血清学试验检测发现患者为Du型输血致产生抗-D抗体引起配血不合。

患儿男,2个月,广东省佛山市南海区人,2002年12月7日因发热 38.5～39.2 ℃,腹泻,纳差,面色苍白贫血貌入院.体格检查:全身皮肤黏膜苍白 ,无黄染及出血点,肝右肋下5 cm,质Ⅱ度,脾左肋下6 cm,质Ⅱ度,无中枢神经症状.化验检查:白细胞(WBC)9.2×109/L,红细胞(RBC)2.44×1012/L,血红蛋白(Hb)6.5 g/L,血小板(PLT)61×109/L.弓形虫IgM定性和风疹病毒IgM定性均阴性,巨细胞病毒IgG半定量阴性。

马尔尼菲青霉菌主要分布于中国南方地区及东南亚各国,在东南亚引起的临床感染仅次于结核分枝杆菌和新生隐球菌,居第三位,是引起艾滋病(AIDS)患者感染的主要致病菌.该菌常从血液、骨髓以及皮肤活检组织中分离出,我们从1例真菌血症患者的血液及骨髓中分离出1株马尔尼菲青霉菌。

丛玉隆教授是我国著名实验诊断学专家(检验医学专家)和学术(学科)带头人。丛教授1947年出生于北京，1982年毕业于山东医科大学医疗系血液病专业，并获硕士学位。现任解放军总医院临床检验科主任、主任医师、教授、博士研究生导师。并任中华医学会检验医学分会主任委员、《中华检验医学杂志》编辑委员会总编辑、中国国家实验室认可委员会技术委员会医学分委会主任委员、中国医师协会

目的 调查国家细菌耐药性监测网临床常见细菌对各种抗菌药物的耐药性现状.方法药物敏感性试验采用纸片扩散法,耐药性数据分析采用WHONET5软件.结果 2002年国家细菌耐药性监测网8个省、市、自治区的57家三级甲等医院共收集患者首次分离株40 379株;大肠埃希菌、绿脓假单胞菌、肺炎克雷伯菌、金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌是最常见菌;甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌(MRSA)和甲氧西林耐药的凝固酶阴性的葡萄球菌 (MRCNS)对临床常用抗菌药物的耐药率明显高于甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)和甲氧西林敏感的凝固酶阴性葡萄球菌 (MSCNS);屎肠球菌对青霉素、氨苄西林及高浓度庆大霉素和链霉素的耐药率明显高于粪肠球;24.8%的肺炎链球菌对青霉素耐药;肠杆菌科细菌对亚胺培南和美洛培南的耐药率最低;产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌株的检出率分别为18.2%和22.6%;除大肠埃希菌外,环丙沙星和左氧氟沙星对其他肠杆菌科细菌的耐药率均低于30%(0～29.7%);绿脓假单胞菌对亚胺培南和美洛培南的耐药率分别为19.1%和15.2%,而鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗生素较敏感.结论细菌耐药性问题是抗感染治疗的主要威胁,合理使用抗菌药物以降低耐药性和采取有效措施控制其传播是非常重要的。

目的 Rosco纸片扩散法在酵母样真菌药敏试验中的临床应用评价.方法应用Rosco纸片扩散法和美国临床实验室标准化委员会(NCCLS) M27-A大量肉汤稀释法测定临床分离的76株不同酵母样真菌菌株对氟康唑的药敏状况,并以3株标准菌株作质量控制.结果两种方法完全符合率是90.8 % 未出现一种方法测得的敏感或耐药菌株,在用另一种方法检测中为耐药或敏感的严重错误.结论 Rosco纸片扩散法可以代替NCCLS M27-A大量肉汤稀释法在临床推广使用。

中华检验医学杂志第六届编辑委员会第一次工作会议2003年10月10-12在山东威海石岛召开。本届编辑委和特邀编委53位专家出席会议，中华医学会杂志社总编辑燕鸣编审，中华医学会杂志副社长姜永茂编审出席会议，并分别作了“医学期刊的审稿”和“诊断性研究的评价”的专题演讲。本刊总编辑

为加强对血细胞分析仪的溯源及国际参考方法了解,作者主要对血细胞计数分析(红细胞计数、白细胞计数、血小板计数、血红蛋白以及红细胞压积)的国际参考方法建立的过程和及其概要进行了阐述,并对国际参考方法与各实验室目前方法学的溯源性进行了论述.在具体工作流程上,对使用人新鲜血或经过了稳定固化加工的血细胞确立检验结果溯源性方法及其注意事项进行了介绍,同时论述了室间质控和室内质控的重要性。

诊断性试验研究的目的是为临床医生在对疾病进行诊断或对健康状况筛查作出决策的重要依据.诊断性试验研究的内容不仅是指常规意义上的实验室检查,还包括对症状、体征、影像学检查、心电图等多种医学仪器检查的诊断价值进行的评价.它可以验证一项新的诊断措施的价值,也可以对传统的两种诊断方法进行比较,其研究结果将促进准确性、敏感度和特异性高的诊断措施在临床的推广应用,摒弃那些过时的、容易造成假阳性或假阴性结果的诊断措施。

在后基因组时代,基因功能的研究以前所未有的速度快速发展,各种研究基因功能的新技术不断涌现.RNA干扰(RNA interference, RNAi)作为一种新的、强有力的研究工具,在功能基因组学领域具有巨大的应用潜力.所谓RNAi就是利用双链RNA(double-stranded RNA, dsRNA)高效、特异的阻断体内特定基因表达,促使mRNA降解,使细胞表现出特定基因缺失表型的过程,即诱导序列特异的转录后基因沉默(post-transcriptional gene silencing, PTGS)[1]。

参加检验医学专业职称资格考试的应试者都希望获得好成绩,而好成绩的取得关键在于扎实的专业知识、临场应变能力和良好的心理素质,此外还要针对特定的考试知识作一些必要的准备。