2021年 · 第44卷第04期

肠道感染是我国儿童常见的感染性疾病之一，以腹泻为主要临床症状。了解我国儿童肠道感染病原学特征和对病原体进行快速精准的鉴定，在疾病的早期治疗和预防中至关重要。我国临床病原微生物的检测技术正在经历着从显微镜检到宏基因组测序的变革时代。

呼吸道感染是严重威胁儿童生命健康的最常见的感染性疾病。及时进行呼吸道感染病原体检测有助于精准诊断，减少抗菌药物不合理应用，是控制儿童呼吸道感染最佳临床管理的重要策略。近年来，除传统的染色镜检、培养和抗原检测技术以外，PCR技术、呼吸道症候群检测和宏基因组二代测序技术等亦已用于儿童呼吸道感染病原学诊断，展现出良好的应用前景。本文将对儿童呼吸道感染病原体检测常用样本及检测技术的应用进行论述，以期提高儿童呼吸道感染病原学诊断效率。

儿童肠道微生态菌群多样性低、个体差异大，更易造成耐药菌定植与感染。因此，全面快速精准检测肠道微生态失调状态，对于预防和治疗肠道感染，以及合理使用抗菌药物都具有重要意义。传统肠道病原体检测方法精确度差，抑或通量小。发展中的多组学技术可精准高通量检测已知和未知病原体，并可全面评估肠道微生态状态，在儿童肠道感染相关检测中的应用将日益广泛。

新型冠状病毒作为新发传染性疾病病原体，2020年初至今在世界各地广泛流行。儿童作为一类特殊群体，在 COVID-19的流行病学、诊疗、疗效监测、预后，以及病毒检测方法学、感染和炎症标志物等方面与成人有着异同。本文主要从流行特征及病原学检测特点两个层面着手，分析儿童新型冠状病毒疾病的特点，为其诊治提供一定的依据。

目的 探讨广州地区就诊患儿粪便分离金黄色葡萄球菌毒素基因的分布状况和临床诊断及各分子分型的关系。 方法 收集2018年8至11月广州市妇女儿童医疗中心3所院区就诊儿童2 059份非重复粪便标本所分离的412株金黄色葡萄球菌，采集相关临床信息。提取菌株DNA后用PCR的方法检测相关的毒素基因，其中包括葡萄球菌肠毒素（SE）基因（sea、seb、sec、sed、see）以及杀白细胞毒素基因（pvl），采用多位点序列分型（MLST）的方法对菌株进行分子分型，最后采用χ²检验对数据进行比较。 结果 从所分离的412株金黄色葡萄球菌中检测到256株（256/412，62.1%）至少含有1种肠毒素基因，携带率较高的依次为sec（125/412，30.3%）、seb（98/412，23.8%）和sea（66/412，16.0%），并且金黄色葡萄球菌pvl基因的携带率为18.7%（77/412）。其中分离自胃肠炎患者粪便的金黄色葡萄球菌sea基因检出率（58/319，18.2%）明显高于非胃肠炎组（8/93，8.6%）（χ²=4.912，P=0.027），而在住院肺炎患者粪便中的金黄色葡萄球菌pvl基因检出率（8/21，38.1%）高于非肺炎组（6/47，12.8%）（χ²=4.252，P=0.039）。并且金黄色葡萄球菌的毒素基因与特定的ST型密切相关，82.4%（28/34）的ST6携带sea基因，所有的ST338和ST59均携带seb基因，96%（48/50）的ST45携带sec基因，ST338的pvl基因携带率高达5/5。 结论 ST6型金黄色葡萄球菌产生的SEA毒素可能与儿童患者胃肠炎诊断呈密切相关。PVL毒力基因在社区获得性肺炎住院患儿金黄色葡萄球菌中的携带率高于非肺炎组，且与CC59克隆群密切相关。

目的 了解儿童脑脊液培养常见菌及其体外耐药性，为其结果解读和临床经验性治疗提供参考。 方法 查询实验室信息系统，回顾分析浙江大学医学院附属儿童医院2007至2019年所有脑脊液的培养结果，并通过电子病历系统追溯患儿的临床特点。 结果 共分离到菌株1 312株（细菌1 294株，真菌18株），致病菌497株（37.9%，497/1 312），其中革兰阳性菌288株（57.9%），革兰阴性菌200株（40.3%），真菌9株（1.8%），前5位细菌为大肠埃希菌（20.5%，102/497）、肺炎链球菌（12.9%，64/497）、无乳链球菌（10.5%，52/497）、屎肠球菌（6.6%，33/497）和金黄色葡萄球菌（5.6%，28/497），研究年限内致病菌的分离率有逐年增高趋势（χ²=34.84，P<0.001）。除肺炎链球菌感染者主要为1岁以上儿童外（76.6%，49/64），其他4种菌主要见于1岁以下婴儿［大肠埃希菌（95.1%，97/102）、无乳链球菌（98.1%，51/52）、屎肠球菌（81.8%，27/33）和金黄色葡萄球菌（71.4%，20/28）］。815株（62.1%，815/1 312）为污染菌，以凝固酶阴性葡萄球菌（680株）、微球菌（50株）、棒状杆菌（28株）和屎肠球菌［23株，占屎肠球菌总数的41.1%（23/56）］为主，污染菌分离率在夏秋季较高，研究年限内其污染菌分离率逐年下降趋势明显（χ²=13.26，P<0.001）。 结论 儿童脑脊液培养致病菌以大肠埃希菌、肺炎链球菌、无乳链球菌、屎肠球菌和金黄色葡萄球菌为主，而凝固酶阴性葡萄球菌、微球菌、棒状杆菌、屎肠球菌是脑脊液培养常见污染菌，临床医师应结合菌种类型和临床特点分析脑脊液培养的意义。

目的 分析天津市儿童医院急性呼吸道感染的住院患儿中腺病毒和博卡病毒感染的流行病学特征及分子分型。 方法 收集2019年3月至2020年2月天津市儿童医院1 171份急性呼吸道感染患儿鼻咽抽吸物，用腺病毒和博卡病毒感染特异性引物进行PCR扩增，对阳性扩增产物进行核苷酸序列测定，将腺病毒和博卡病毒所测序列在GenBank中进行比对，同时用MEGA7.0.26对腺病毒进行分子分型以及系统进化树分析。对不同年龄段（<6个月、6~11个月、12~23个月、24~35个月、36~47个月、≥48个月）及季节的腺病毒和博卡病毒阳性检出率进行比较分析。 结果 1 171份标本中分别检出腺病毒30株［阳性率2.56%（30/1 171）］和博卡病毒84株［阳性率7.17%（84/1 171）］。不同年龄段腺病毒和博卡病毒阳性检出率分别在1.02%（4/392）~6.61%（8/121）和4.09%（7/171）~11.45%（26/227）。各年龄段腺病毒和博卡病毒的阳性检出率差异有统计学意义（χ²=12.862，P=0.025；χ²=14.178，P=0.015）。冬季是腺病毒感染的高峰期，阳性率为5.54%（15/271）；秋季和冬季博卡病毒感染的高峰期，阳性率分别为12.00%（36/300）和12.55%（34/271），高于其他两季（χ²=43.753，P<0.05）。不同季节呼吸道腺病毒和博卡病毒阳性检出率差异有统计学意义（χ²=13.287，P=0.004；χ²=43.753，P<0.05）。29株腺病毒序列分别为HAdV-B亚群的HAdV-3、7血清型和HAdV-C亚群的HAdV-1、2、5血清型。 结论 腺病毒和博卡病毒在小儿呼吸道感染中起重要作用，且与季节、患儿年龄等因素密切相关，应该引起临床重视。

目的 研究2016与2019年成人致泻性大肠埃希菌（DEC）食源性腹泻临床特征与耐药性，了解北京市强化食品卫生安全措施前后DEC流行病学变迁。 方法 分别收集2016和2019年就诊于北京同仁医院肠道门诊食源性成人腹泻患者1 926例和1 482例，共计3 408例。患者信息录入“肠道预警系统”，便标本分离培养，菌落行基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI-TOF）鉴定。大肠埃希菌采用多重荧光定量PCR对5种致病型进行分型。药物敏感性试验根据2019美国临床与实验室标准化协会标准判读。分类资料采用χ²检验或者Fisher精确检验进行统计分析。 结果 3 408份标本共检出DEC 581株，肠产毒性大肠埃希菌（ETEC）占53.36%（310/581），未检出肠出血性大肠埃希菌（EHEC）。2016年DEC检出率为14.54%（280/1 926），肠聚集性大肠埃希菌（EAEC）占DEC检出率的18.21%（51/280），ETEC占71.79%（173/280）。2019年DEC检出率为20.31%（301/1 482），EAEC占DEC检出率的41.23%（116/301），ETEC占48.93%（137/301）。与2016年比较，2019年EAEC检出率增高（χ²=29.26，P<0.001），其次为肠致病性大肠埃希菌（χ²=9.37，P=0.002），而ETEC检出率下降（χ²=15.43，P<0.001）。与其他致病型相比，EAEC易引起恶心（χ²=32.72，P<0.001），感染肠侵袭性大肠埃希菌（EIEC）的患者便标本易观察到红细胞（χ²=16.44，P=0.001）和白细胞（χ²=26.82，P<0.001）。EIEC对氨苄西林、氨苄西林/舒巴坦及庆大霉素耐药率分别为80.95%（17/21）、66.67%（14/21）和57.14%（12/21）。2019年出现3株耐碳青霉烯类抗菌药物的EAEC，其中2株厄他培南及亚胺培南均耐药，1株仅厄他培南耐药。全基因测序显示存在多种耐药机制，以耐药结节性细胞分化家族外排泵、青霉素结合位点突变及产新德里金属β内酰胺酶5（NDM-5）为主。 结论 成人食源性腹泻患者DEC检出率高，以ETEC为主。与2016年相比，2019年ETEC下降，EAEC检出率显著升高，并于2019年分离到耐碳青霉烯类抗菌药物的致泻性大肠埃希菌菌株，其生物学特征及流行病学变迁应引起临床重视。

目的 了解鼻病毒在天津地区急性呼吸道感染患儿中的检测情况、基因的遗传进化特征、流行趋势和临床特征，为临床诊疗提供理论依据。 方法 收集2017年7月至2019年12月在天津市儿童医院住院的急性呼吸道感染患儿的鼻咽抽吸物标本2 945份，采用聚合酶链反应的方法筛选出鼻病毒阳性样本，VP4/VP2序列分析分型。将所获得的序列与已知的鼻病毒基因序列进行比对分析，并收集整理相关临床病例资料。采用SPSS 19.0比较不同季节和分型鼻病毒的检出结果。 结果 住院患儿鼻病毒阳性检出率为8.15%（240/2 945），其中74.78%（86/115）被诊断为肺炎，40.83%（98/240）存在与其他常见病原菌混合感染；鼻病毒感染率冬季较低（4.14%，29/700），春秋季较高，分别为11.00%（66/660）和9.29%（81/872）；分型以A型（50.00%，78/156）、C型（41.67%，65/156）居多，且10、11月检出率占C型阳性病例的46.15%（30/65）；鼻病毒A型检出的主要分型依次为A12（11.54%，9/78），A49（6.41%，5/78），A22、A101、A66（均为5.13%，4/78）等；C型检出分型依次为C2（20.00%，13/65），C22（9.23%，6/65），C26、C43、C54、C53（均为4.62%，3/65）等；鼻病毒A型感染发热症状较C型常见（χ²=5.411，P<0.05）。 结论 婴幼儿鼻病毒感染率高，有明显的季节流行趋势，常与其他病原菌混合感染，具有遗传多样性。

目的 探究疑似病毒性脑炎患儿肠道病毒（EV）、疱疹病毒（HHV）检测阳性率。 方法 收集湖南省儿童医院2017年8月至2019年12月365份疑似病毒性脑炎患儿脑脊液、血清、痰、大便、尿标本于-80 ℃冻存，采用一步法巢式逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）检测EV，采用实时荧光定量PCR法（qPCR）检测HHV，分析这两类病毒在临床疑似病毒性脑炎患儿中的感染率。其中132例患儿确诊为EV脑炎或HHV脑炎，比较分析病毒在各种标本中的检出时间。 结果 365例疑似病毒性脑炎患儿中20.5%（75/365）的患儿诊断为EV脑炎，15.6%（57/365）患儿诊断为HHV脑炎。75例EV脑炎患儿以埃可病毒6型（echo 6）感染为主，占52.0%（39/75）；其次为EV71感染（30.7%，23/75），echo11（6.7%，5/75），柯萨奇病毒A组6型（CA6，4%，3/75）及echo30、echo9、echo4、柯萨奇病毒B组1型（CB1）、脊髓灰质炎病毒各1例（1.3%，1/75）。57例HHV脑炎主要以人疱疹病毒6型（HHV6）感染最多见，占35.1% （20/57）。其次为巨细胞病毒（CMV，31.6%，18/57），EB病毒（12.3%，7/57），单纯疱疹病毒1型（HSV1，10.5%，6/57），单纯疱疹病毒2型（HSV2，8.8%，5/57），水痘带状疱疹病毒（1.8%，1/57）。患儿入院后病毒在脑脊液中的检出时间明显早于血清，脑脊液在发病后2~7 d可检出病毒，血清为7~26 d。 结论 采用一步法巢式RT-PCR技术及实时荧光qPCR技术检测脑脊液病毒核酸极大程度提高了不明原因脑炎患儿病原体的检出率。肠道病毒Echo 6、EV71、疱疹病毒HHV6、CMV是导致本院病毒性脑炎的最主要的病原体，临床可根据发病时间合理选择标本类型进行测定。

目的 初步建立纳米孔16S测序技术检测下呼吸道感染细菌性病原的流程和方法，并评估其可行性。 方法 收集北京医院呼吸与危重症医学科2019年7月至2020年9月就诊的33例下呼吸道感染患者的支气管肺泡灌洗液标本，进行纳米孔16S测序。采用χ²检验对16S测序结果和细菌培养结果进行统计分析，比较病原检出率以及病原种类，对纳米孔测序在病原体检测的应用进行评估。 结果 33例患者的16S测序病原检出率高于传统的细菌培养［75.8%（25/33），45.5%（15/33），χ²=5.140，P<0.05］。25份纳米孔16S测序阳性样本中，共检测出16种病原体，主要包括副流感嗜血杆菌、流感嗜血杆菌、肺炎链球菌、嗜麦芽窄食单胞菌、鲍曼不动杆菌、琼氏不动杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、粪肠球菌、鹑鸡肠球菌、纹带棒状杆菌、副胞内分枝杆菌、黏质沙雷菌、Insuavis无色杆菌、默氏枸橼酸杆菌以及肺炎支原体，多于临床培养检测的6种病原体，包括副流感嗜血杆菌、鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌和嗜麦芽窄食单胞菌（χ²=7.949，P<0.05）。纳米孔16S测序比对至种水平的序列占属水平的80.0%（60.0%，86.0%），与细菌培养结果的一致率为33.3%（11/33）。 结论 本研究建立的纳米孔16S扩增子测序流程能够从下呼吸道感染患者的支气管肺泡灌洗液中快速鉴定细菌性病原。纳米孔16S扩增子测序病原检出率高，检出病原种类多于细菌培养，且可以将多数细菌鉴定至种水平。该技术是一种非常有潜力的平台，具有广阔的应用前景。

目的 基于微滴式数字PCR（ddRCR）技术建立EGFR-T790M突变检测方法，并对该方法进行系统性优化及评估。 方法 针对T790M突变，设计相关的探针引物，建立ddPCR反应体系，确立最佳退火温度并进行基本的性能验证。于2019年1至10月在山东第一医科大学附属肿瘤医院收集了72例NSCLC患者的循环游离DNA（cfDNA）样本并进行临床验证，利用Kappa检验分析与伯乐ddPCR产品的一致性。 结果 建立并优化ddPCR反应体系，线性评估示R2>0.99，空白检测限为突变微滴数目≥2，特异性良好，灵敏度分析示突变检测下限可达到0.05%，重复性及批间精密度变异系数（CV）<20%，准确度相对偏差在±10%范围内。对72例NSCLC患者的cfDNA样本进行验证，与伯乐ddPCR产品的一致性为91.67%（66/72，Kappa=0.749；P<0.001）。 结论 应用ddPCR成功建立非小细胞肺癌EGFR-T790M突变检测方法。

目的 评价血清分离胶促凝管法和HB&L微生物培养体系两种MALDI-TOF-MS预处理方法的鉴定率，为临床快速准确鉴定血流感染病原菌提供新思路。 方法 收集2020年1—12月北京解放军总医院第六医学中心实验室常规方法鉴定的149份血培养报警后单一细菌感染的阳性样本，分别采用分离胶促凝管法和HB&L微生物培养体系预处理后，并且以传统方法结果为标准，直接MALDI-TOF MS细菌鉴定，比较两种方法的鉴定率。 结果 在149份血培养阳性样本中，革兰阴性（G-）菌占47.0%（70/149）、革兰阳性（G+）菌占53.0%（79/149）。对G-菌种水平鉴定率，血清分离胶促凝管法为78.6%（55/70），HB&L微生物培养体系为91.4%（64/70），差异有统计学意义（P=0.033）；对G+菌种水平鉴定率，二者分别为73.4%（58/79）和87.3%（69/79），差异有统计学意义（P=0.028）。在3.000~2.300分值段，G-菌鉴定率血清分离胶促凝管法和HB&L微生物培养体系分别为22.9%（16/70）和38.6%（27/70），差异有统计学意义（P=0.044）；G+菌鉴定率两种方法分别为19.0%（15/79）和34.2%（27/79），差异有统计学意义（P=0.031）。 结论 HB&L微生物培养体系种水平鉴定率要高于血清分离胶促凝管法，经过预处理直接MALDI-TOF MS鉴定血培养阳性样本病原菌有一定临床应用价值。

抗磷脂综合征（APS）是以血栓形成为病理基础的自身免疫性疾病，同时有抗磷脂抗体谱（aPLs）的持续阳性。aPLs是诊断APS的关键。目前临床应用的抗磷脂抗体主要包括抗心磷脂抗体（aCL）、抗β2糖蛋白Ⅰ抗体（aβ2GPI）和狼疮抗凝物（LA）。但在临床实践中发现目前仅基于这3种aPLs的APS的实验室诊断标准存在较多缺陷，不能满足临床需求。本文通过总结近年来抗磷脂抗体谱的研究与发展，对IgA型抗体谱、抗β2GPI结构域I抗体等非分类标准抗体在临床应用中的价值进行综述。

宫颈癌严重威胁女性健康，早期诊断有利于提高患者的生存率。现有的宫颈癌筛查方法的检出率不是很稳定，也尚无可靠的无创性指标来预测宫颈癌的复发，转移及预后。本文通过检索宫颈癌相关诊断预后指标，共筛选纳入20篇相关文献，证实液体活检有望替代和补充现有的筛选和血液检测方法。循环核苷酸是液体活体检测中其中的一个重要组成部分，包括循环游离DNA（cfDNA）及循环游离RNA（cfRNA），其中cfRNA是肿瘤生物标记物的潜在丰富来源，特别是在宫颈癌的早期诊断中具有独到的特异性及巨大的潜在价值。

质谱流式技术是近来年发明的一门新兴技术，它利用金属同位素标签替代荧光标签，并利用质谱对标签进行定量，通过结合质谱和流式细胞技术，可以同时对单细胞进行超多参数、无需补偿的测量，大大增强了评估复杂细胞系统和过程的能力，弥补了荧光流式的不足。其高通量、高灵敏度和高稳定性的特点尤其适合于免疫、肿瘤、血液、药物和遗传学等学科的研究中。