2021年 · 第44卷第03期

液体活检技术的类别及性能有了更加广阔的发展。大量研究逐步展现出液体活检生物标志物具有改变肿瘤诊疗模式的巨大潜力。液体活检技术展现出了前所未有的机遇与挑战。当下面临的关键问题是如何将实验室中的技术转化为具有明确临床应用价值的分子诊断产品。

循环肿瘤DNA（ctDNA）在肿瘤药物疗效预测、耐药监测、高危人群筛查、鉴别诊断、微小残余病变监测和预后判断等方面都展现出潜的在应用价值。其中基于ctDNA特定基因突变的标志物已写入部分肿瘤的临床诊疗指南，用于预测肿瘤药物疗效和监测耐药，国内外也有少量批准的伴随诊断试剂用于临床实验室检测。但是，大部分ctDNA相关标志物的临床有效性仍然处于医学研究阶段。实验室自建方法（LDT）的建立和性能确认，也是目前ctDNA临床应用亟需解决的问题。目前的ctDNA临床应用，是机遇和挑战并存的。

人工智能技术发展迅猛，已在多个学科领域实现了突破性进展，人工智能对推动检验医学的进一步发展意义深远，当前，人工智能技术已逐渐渗透到检验科工作的各个流程如检验数据处理、检验数据挖掘及检验科质量控制等，不仅提高了效率，也为临床诊疗提供了重要的信息，检验医师的职能在未来也很可能会进行相应的转型调整。因此，由人工智能来推动下一代检验医学的发展和飞跃是大势所趋，检验医学的未来也定将迎来“人工智能时代”。

液体活检是近年来研究的热点和难点，它能够非侵入性地反映体内肿瘤状态及预后情况。其中，新近兴起的一种标志物——循环肿瘤RNA（ctRNA）能够反映肿瘤来源的遗传信息，为肿瘤早期诊断、靶向药物使用以及预后分析提供有力依据。现阶段已有ctRNA检测试剂盒获准进入临床，例如微小RNA（miRNA）用于肝癌的辅助诊断等，越来越多具有应用前景的ctRNA处于转化应用阶段。尽管ctRNA检测技术的临床应用仍然面临着诸多挑战，但是ctRNA作为液体活检家族的新成员，展示出良好的临床应用价值；发挥作用的相关机制日益明晰，将成为临床迫切需求并值得信赖的诊断工具，为肿瘤临床诊疗带来便利。

目的 评估非特异性检验指标组成的预测模型在胃癌早期诊断中的可行性。 方法 从上海长海医院的电子病案系统数据库中，共纳入2010年1月1日至2019年4月30日的24 615例病例记录，包括10 497例胃癌，5 198例胃癌前疾病， 和8 920名健康体检。通过分层随机抽样，将研究人群分为验证集、训练集和测试集。对所有实验室变量进行数据处理和质量控制后，通过梯度增强决策树、随机森林、支持向量机和人工神经元网络这4种机器学习算法，选择随机森林作为最优机器学习算法和诊断效能分组，使用后向逐步回归法训练数据，构建最佳特征模型采用受试者工作特征（ROC）曲线评价模型的诊断效能。 结果 本研究建立了由22个常规检验项目组成的诊断模型V22， 诊断早期胃癌的ROC曲线下面积（AUC）为0.808，敏感度为85.7%；特异度为91.9%。对癌胚抗原（CEA）阴性胃癌，V22也显示出较高的诊断准确率0.813，AUC为0.801。 结论 V22是一个有临床应用价值的胃癌辅助诊断模型，可以很好的区分早期胃癌和由健康组和癌前疾病组成的对照组，对早期胃癌的检出率优于传统的肿瘤标志物CEA。

目的 探讨联合检测外周血游离Septin9、SDC2、BCAT1基因启动子甲基化对结直肠癌诊断的临床意义。 方法 回顾性分析2019年1月至9月同济大学附属东方医院消化科收治的患者资料，分为结直肠癌组（结肠癌62例，直肠癌59例）、癌前病变组（结直肠腺瘤77例，高级别上皮内瘤变5例）、疾病对照组（结直肠癌与进展期腺瘤阴性但存在其他肠道病变患者61例，非结直肠癌肿瘤患者17例）、健康对照组（94名）。采用荧光PCR法同步检测外周血血浆游离Septin9、SDC2、BCAT1 3种基因甲基化状态，分析联合检测3种基因的阳性率与结直肠临床病理特征的关系，并与癌胚抗原（CEA）阳性率作比较。将结直肠癌组按照临床TNM分期，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期按等级分析计数资料，通过受试者工作特征（ROC）曲线分析检测方法对疾病的诊断效能，比较ROC曲线下面积（AUC）。 结果 结直肠癌组血浆游离Septin9、SDC2、BCAT1基因甲基化联合检测阳性率86%（104/121），癌前病变组阳性率12%（10/82），疾病对照组阳性率4%（3/78）、健康对照组阳性率4%（4/94）。结直肠癌组血浆Septin9、SDC2、BCAT1基因甲基化联合检测阳性率明显高于其他3组（χ2 =237.246，P<0.001）。结直肠癌组中血浆Septin9、SDC2、BCAT1基因甲基化联合检测阳性率高于CEA阳性率（P<0.001）。血浆Septin9、SDC2、BCAT1基因甲基化联合检测在结直肠癌组中Ⅰ~Ⅳ期的阳性率依次分别为73%（16/22）、87%（34/39）、86%（30/35）和96%（24/25），与CEA组相比，血浆Septin9、SDC2、BCAT1基因甲基化联合检测在结直肠癌Ⅰ~Ⅲ期阳性率显著高于CEA（P<0.001），Ⅳ期阳性率与CEA相比差异无统计学意义（P>0.05）。ROC曲线分析Septin9、SDC2、BCAT1基因检测AUC分别为0.857（95%CI 0.810~0.903）、0.819（95%CI 0.768~0.871）、0.862（95%CI 0.816~0.909），3个基因甲基化联合检测AUC为0.889（95%CI 0.846~0.933），再联合血清CEA检测AUC为0.913（95%CI 0.874~0.951）。结肠癌患者不同性别、年龄和癌变部位与Septin9、SDC2、BCAT1基因甲基化联合检测阳性率差异均无统计学意义（P均>0.05）。 结论 联合检测外周血血浆游离Septin9、SDC2、BCAT1基因启动子甲基化有助于结直肠癌早期诊断，对结直肠癌Ⅰ~Ⅲ期阳性率高于CEA，3个基因联合检测提高了诊断效能。

目的 探讨凝血功能相关检测指标在非小细胞肺癌中预后的临床意义，为非小细胞肺癌患者的预后提供参考依据。 方法 回顾性分析首都医科大学附属北京中医医院肿瘤科2014年6月至2017年12月248例非小细胞肺癌患者的临床资料，采用受试者工作特征（ROC）曲线确定D-二聚体（D-D）、纤维蛋白原（FIB）、凝血酶原时间（PT）的阈值，Cox回归模型进行多因素分析，Kaplan-Meier方法进行生存分析。 结果 ROC曲线分析显示，D-D最佳临界值为0.18 mg/L，FIB最佳临界值为4.25 g/L，PT最佳临界值为12.0 s；Cox多因素回归分析发现， D-D（HR=1.197，95%CI 1.100~1.303）、PT（HR=1.111，95%CI 1.049~1.176）及FIB（HR=1.510，95%CI 1.276~1.788）的表达升高是影响非小细胞肺癌预后生存的危险因素（P均<0.001）；Kaplan-Meier生存分析结果表明，D-D、FIB、PT高表达患者的生存期明显低于低表达患者（P均<0.001）。 结论 D-D、PT以及FIB对非小细胞肺癌预后有一定的临床意义，是其预后的独立影响因素。

目的 探讨血清肌酐（Scr）现行参考区间（采用2015年卫生行业标准）和原参考区间（采用第三版临床检验操作规程）的临床应用价值。 方法 收集2019年2月至4月在河北医科大学第一医院就诊的360例年龄在20~79岁（其中20~59岁男性90例，20~59岁女性90例，60~79岁男性90例，60~79岁女性90例）门诊和住院患者作为研究对象。采集研究对象血标本，测定胱抑素C的浓度，结合Scr浓度，以估算的肾小球滤过率（eGFR）结果作为标准进行判断。通过卡方检验对肌酐新旧参考区间判断的结果与eGFR的符合情况进行统计学分析。 结果 在360例20~79岁人群中，血清Scr与eGFR结果的总符合率：现行参考区间83.40%，原参考区间77.00%，前者符合率明显高于后者（P=0.03）。其中214例eGFR异常结果符合率：现行参考区间94.86%，原参考区间41.59%，前者符合率明显高于后者（P<0.01）；146例eGFR正常结果符合率为：现行参考区间74.66%，原参考区间99.32%，后者符合率明显高于前者（P<0.01）。在20~59岁女性人群、20~59岁男性人群和60~79岁女性人群中显示与上述一致的结果；在60~79岁男性人群中，Scr与eGFR判断结果的总符合率：现行参考区间75.56%，原参考区间88.89%，后者符合率明显高于前者（P=0.01）；二者异常结果符合率：现行参考区间57.69%，原参考区间98.08%，后者符合率明显高于前者（P<0.01）；二者正常符合率：现行参考区间100%，原参考区间76.32%，前者符合率明显高于后者（P<0.01）。 结论 现行参考区间对肾小球滤过率下降的筛查能力优于原参考区间，更有利于肾功能轻度下降患者的早期识别。但是在60~79岁男性人群中，现行参考区间的准确性和对肾小球滤过率下降的筛查能力均差于原参考区间。

目的 建立不同胎龄及不同性别早产儿出生后24 h内红细胞参数参考范围。 方法 选取2018年1月1日至2019年12月31日所有于吉林大学白求恩第一医院产科分娩、出生后住入新生儿重症监护病房以及吉林省内其他转诊的早产儿资料进行回顾性分析，根据纳入标准和排除标准筛选，所有早产儿均于出生后24 h内完成桡动脉采血，根据血常规结果，分析统计不同胎龄及不同性别早产儿红细胞参数参考范围。 结果 随胎龄增加，红细胞数、血红蛋白、红细胞压积、平均血红蛋白浓度逐渐升高，红细胞平均体积、平均血红蛋白量逐渐降低（P均<0.05）；34周≤胎龄<37周的早产儿部分红细胞参数具有性别差异，与男婴相比，女婴红细胞数、血红蛋白、红细胞压积、平均红细胞体积较高（P均<0.05）；23周≤胎龄<28周组早产儿红细胞数为2.58×1012~5.45×1012/L，28周≤胎龄<34周组早产儿红细胞数为2.97×1012~5.86×1012/L，34周≤胎龄<37周组中男婴红细胞数为3.38×1012~5.83×1012/L，女婴红细胞数为3.18×1012~5.89×1012/L。不同胎龄、不同性别早产儿红细胞分布宽度差异无统计学意义，为14.8~20.6%。 结论 本研究建立了23周≤胎龄<37周早产儿出生后24 h内红细胞参数参考范围，不同胎龄、不同性别早产儿部分红细胞参数具有差异性。

目的 对一个智力障碍家系进行临床表征及基因变异分析，并探讨其发病的分子机制。 方法 先证者因智力障碍于2019年12月就诊于漯河市中心医院，收集家系4人外周血，采用全外显子测序对先证者和家系成员进行致病基因变异筛查，选取有临床意义的变异位点；采用PCR反应和Sanger测序对变异位点进行验证分析，并结合有关数据库对变异位点进行分析。 结果 全外显子测序结果筛查到ARX基因c.1162A>G（p.Lys388Glu）与该家系患者表型共分离。Sanger测序结果与外显子组测序结果一致，母亲为该变异的携带者。该变异在健康人群中无突变频率报道，且多种生物信息学软件预测为有害突变，结合OMIM数据库表型分析，ARX基因c.1162A>G（p.Lys388Glu）导致的表型与患者表型吻合。 结论 ARX c.1162A>G（p.Lys388Glu）可能是导致该家系患者智力障碍的原因，该变异在国内尚未见报道。

目的 探讨初诊重型再生障碍性贫血（SAA）患者外周血CD8+T细胞信号转导淋巴细胞激活分子家族6（SLAMF6）表达与穿孔素、颗粒酶B的相关性及其临床意义。 方法 收集2016年1月至2019年6月河南省人民医院收治的32例初诊SAA患者的血常规及骨髓象等指标并采集外周血标本进行回顾性分析，采用流式细胞术检测患者初诊时及治疗结束后半年［移植11例，免疫抑制治疗（IST）21例］的标本中CD8+T细胞SLAMF6表达量、穿孔素及颗粒酶B分泌量。采用Pearson法分析临床指标与标本检测结果相关性，并以10名健康人的外周血标本（正常对照组）及13例初诊骨髓增生异常综合征/阵发性睡眠性血红蛋白尿症（MDS/PNH）患者（MDS/PNH组）为对照进行SLAMF6表达量、穿孔素及颗粒酶B分泌量的比较。 结果 （1）初诊时：SAA组SLAMF6表达量为（56.40±6.37）%，明显低于正常组的（84.34±5.81）%和MDS/PNH组的（82.24±4.98）%（P均<0.001）；SAA组穿孔素的表达量为（32.73±8.46）%，高于正常组的（23.75±5.10）%和MDS/PNH组的（26.12±5.53）%（P均<0.05）；SAA组颗粒酶B的表达量为（36.23±7.94）%，高于正常对照组的（21.67±5.05）%和MDS/PNH组的（21.79±5.10）%（P均<0.001）。SAA患者SLAMF6表达量与血红蛋白（r=0.804）、网织红细胞绝对值（r=0.656）、骨髓粒系百分比（r=0.643）、骨髓红系百分比（r=0.622）均呈正相关（P均<0.05），与CD8+T细胞穿孔素（r=-0.792）、颗粒酶B（r=-0.908）均呈负相关（P均<0.001）。（2）治疗后：30例SAA存活患者外周血CD8+T细胞SLAMF6表达量高于治疗前［（79.19±12.69）%比（56.40±6.37）%，P<0.001］，穿孔素、颗粒酶B表达量均低于治疗前（P均<0.05）。11例移植患者CD8+T细胞SLAMF6表达量高于移植前［（86.54±3.75）%比（56.40±7.35）%，P<0.001］，穿孔素、颗粒酶B表达量低于移植前（P均<0.05）。12例IST有效患者CD8+T细胞SLAMF6表达量高于初诊时，其穿孔素、颗粒酶B表达量均低于治疗前（P均<0.05）；7例IST无效患者CD8+T细胞SLAMF6表达量、穿孔素、颗粒酶B表达量与治疗前比较，差异无统计学意义（P均>0.05）。 结论 SLAMF6在初诊SAA患者中低表达，与CD8+T细胞效应因子呈负相关，或作为负性调控因子参与SAA患者CD8+T细胞免疫调控，SLAMF6在造血恢复后明显上调，而治疗无效患者无明显变化，或可作为诊断SAA或评价SAA临床疗效的指标。

目的 系统分析2019新型冠状病毒肺炎（COVID-19）患者的凝血特征。 方法 计算机检索PubMed、Scopus、Web of Science、EMbase、中国知网数据库，搜集报道COVID-19凝血特征相关的文献，检索时限均为2020年1月1日至5月1日。由2名研究员独立筛选文献、提取数据并评价纳入研究的偏倚风险后，采用Stata12.0软件对不同疾病分型COVID-19患者的血小板计数、D-二聚体、凝血酶原时间（PT）、活化的部分凝血活酶时间（APTT）、纤维蛋白原（FIB）进行Meta分析。 结果 共纳入39个回顾性研究，共计6 994例COVID-19患者。Meta分析结果显示：（1）与重症患者相比，轻症患者的血小板计数较高［加权均值差（WMD）=20.11，95%CI 11.53~28.69，P<0.001］，APTT（WMD=1.30，95%CI 0.31~2.30，P=0.01）更长，D-二聚体（WMD=-0.41，95%CI-0.58~-0.24，P<0.001）、FIB（WMD=-0.58，95%CI-0.76~-0.39，P<0.001）较低，凝血酶原时间（PT）（WMD=-0.51，95%CI-0.92~-0.10，P<0.001）更短；危重患者血小板计数较低（WMD=-14.75，95%CI-29.73~-0.23，P=0.044），D-二聚体较高（WMD=1.06，95%CI 0.65~1.47，P<0.001）。（2）与存活组相比，死亡组患者血小板计数较低（WMD=-36.40，95%CI-63.23~-9.58，P=0.008），D-二聚体较高（WMD=6.86，95%CI4.15~9.57，P<0.001），PT（WMD=1.37，95%CI0.73~2.02，P<0.001）更长。 结论 凝血功能紊乱在重症、危重症和死亡的COVID-19患者中较常见。血小板计数、D-二聚体和PT值与病情严重程度相关，可作为住院期间病情恶化的早期预警指标。

反馈实验是实验室内根据指南或与临床协商制定的反馈流程，主动加做的检测项目。反馈实验的应用范围涉及临床检验诊断各亚专业，临床开展中需要有资质的检验医师、完善的信息与财务制度、可依据的临床指南等方面的支撑。积极推广反馈实验，可以促进循证医学证据在临床规范化实践、节省医疗成本、缩短患者诊治时间。

细胞外囊泡（EV）微小RNA（miRNA）是细胞主动分泌或释放的具有脂质双层膜结构包裹的一类非编码小分子RNA，可介导细胞间通讯和信息交流。外周血EV miRNA可作为多种肿瘤诊断、疗效监控、预后评估分子标志物，是肿瘤领域最具潜力和转化应用潜能的液体活检分子指标，全面、系统的EV miRNA临床研究策略是筛选应用价值高的标志物关键。EV miRNA还可通过调节肿瘤微环境代谢、间质上皮转化、血管新生、免疫及耐药等参与肿瘤发生发展，对一些关键EV miRNA研究可为肿瘤早期诊断、伴随诊断、远端转移、放化疗方案选择和生存分析精准诊疗液体活检指标研发及肿瘤靶向生物治疗提供新方向。

细胞外囊泡（EV）具有分布广泛，内容丰富，全面参与调控重要的细胞生理活动等特点。作为肿瘤诊断的新技术，EV的天然优势包括保护其内容物，易于从各种体液中获取，有望真正无创以及高度组织源性等。为了适用于临床检测，诸多EV分离技术如微流控、免疫芯片、纳米流式、声学捕获等技术不断被开发。目前已有EV肿瘤诊断产品已走向临床，但是由于其检测方法和检测平台的差异，目前其临床应用仍然存在技术难点。随着临床证据的不断积累和适用于临床的诊断方法的持续完善，基于EV的液体活检最终能真正走入临床、应用于临床。

前列腺癌最常用的筛查方法是前列腺特异性抗原（PSA）的检测。但多个研究发现PSA筛查前列腺癌的假阳性率和假阴性率均较高，存在PSA检测过度应用的问题。自身抗体在癌症早期出现，伴随肿瘤的发生发展，具有半衰期长、易于检测等优点，已有研究报道自身抗体可用于前列腺癌的诊断，并与前列腺癌患者的Gleason分级、总生存期（OS）等预后指标相关。检索纳入8篇关于单个自身抗体在前列腺癌诊断和预后中作用的研究，大多数报道的单个自身抗体对前列腺癌的诊断性能优于PSA，联合应用可提高诊断效能；有些自身抗体与较差的预后相关。

2019年12月新发现的新型冠状病毒肺炎（COVID-19）已被列为国际公共卫生紧急事件。核酸检测在确诊新型冠状病毒（2019-nCoV）感染中具有不可替代的作用，但由于其对实验室和技术人员要求高、操作繁琐以及存在“漏检”可能等，应联合特异性抗体对疑似患者和密切接触人群实现大规模批量筛查，且抗体的检测可降低医务人员在呼吸道标本采集过程中的暴露风险。