2021年 · 第44卷第02期

成簇规律间隔短回文重复序列（CRISPR）/CRISPR相关蛋白（Cas）系统，作为原核生物的适应性免疫防御系统，近年来已经被开发成为一种高效的分子诊断工具，其特异、灵敏、快速、便捷等优势使得其在分子诊断领域，尤其是在感染性疾病的诊断上有着极佳的发展前景。本文旨在对CRISPR/Cas系统在感染性疾病诊断的应用现状、优势和局限以及未来的研究方向做一介绍和探讨。

检验大数据涉及全身各系统并随着疾病的变化而变化，纵横交错，导致目前我们还没有突破检验结果综合分析的瓶颈。借助人工智能，通过检验大数据处理，根据疾病特点对检验数据结果进行全面的综合分析，通过模拟、延伸和扩展将检验数据与疾病的诊断、鉴别诊断、治疗效果评价和预后判断联系起来，产生具有最高水平的智能分析，突破人脑对巨大数据同时多规则处理的记忆容量限制，汇集众多专家的经验积累，帮助我们快速完成分析，实现检验大数据的综合判断，将为突破数据报告瓶颈，助力检验医学从数据报告向诊断报告飞跃，开创检验医学未来具有重要意义。

抗菌药物敏感性试验（AST）是一种体外定性或定量测定抗菌药物抑制或杀灭细菌能力的实验。随着耐药病原体的增多和耐药机制的变异，传统药敏试验逐渐无法满足临床快速诊治的需求，因此基于待测病原体表型、基因型及其他耐药机制的药敏快检技术正在不断发展。本文论述了AST快速检测技术的发展现状及存在的问题，所有新技术对临床诊治指南的指导意义均应进行多方面评估和规范化。

病原微生物导致的感染严重威胁人类公共卫生。便携式病原微生物分子诊断技术能够快速准确地检出病原体，在提高基层医疗机构和现场检疫方面发挥重要作用。本文概览了便携式病原微生物分子诊断的技术和产品要求，重点介绍了国内外已上市或正在上市的便携式病原微生物分子诊断仪器特性和应用领域，存在的缺陷及应用展望。随着技术的发展和持续优化，便携式病原微生物分子诊断仪器在保证高性能的同时，提高质量控制并控制成本，将有利于更广泛的应用。

A族β-溶血性链球菌（酿脓链球菌，GAS）对β-内酰胺类抗菌药物敏感。美国临床实验室标准化研究所始终未设定GAS对β-内酰胺类抗菌药物的中介和耐药的折点，并且推荐β-内酰胺类抗菌药物作为治疗GAS感染的一线药物。然而，却有不少报道中出现GAS对β-内酰胺类抗菌药物的中介率、耐药率，且大多来自国内研究和国内主要耐药监测网。回顾国内外GAS对β-内酰胺类抗菌药物所谓“中介”或“耐药”的报道，发现存在诸多疑问，如这些菌株并非真正的“耐药”，而是否真对β-内酰胺类抗菌药物不敏感，而青霉素敏感性降低菌株是否携带青霉素结合蛋白2X突变基因，这些疑问均未得到确切证实。通过本文，以期广大临床医生、药学和微生物学工作者关注GAS及其耐药问题。

宏基因组高通量测序技术通过对临床样本中微生物和宿主核酸的测序分析，可以无偏倚地检测多种病原微生物，正在逐渐应用于临床感染性疾病病原检测，然而业界对该技术的临床适应证、实验流程、质量管理、性能验证和报告解读等方面仍有困惑。中华医学会检验医学分会临床微生物学组、中华医学会微生物学与免疫学分会临床微生物学组、中国医疗保健国际交流促进会临床微生物与感染分会组织专家对上述问题进行了讨论并撰写了专家共识，对一些关键问题给出了推荐意见和处理方法，希望有益于业界的良性互动，促进该技术规范和发展，为临床抗感染诊治提供帮助。

目的 探讨硫氯酚与庆大霉素联用对粪肠球菌的抗菌活性。 方法 11株粪肠球菌临床菌株于2018年1月至2019年12月收集自中南大学湘雅三医院住院患者，通过微量肉汤稀释法检测硫氯酚及庆大霉素对粪肠球菌的抗菌活性；通过微量棋盘稀释法检测硫氯酚与庆大霉素的联用效果；最后，选取亚抑菌浓度的硫氯酚及与庆大霉素分别单独及联合处理48 h后观察其持续抗菌效果。多组间计量资料比较采用单因素方差分析，多组中两两比较采用Tukey或Dunnett检验。 结果 硫氯酚对粪肠球菌的最低抑菌浓度和最低杀菌浓度分别为2~4 mg/L和4~8 mg/L。硫氯酚与庆大霉素联用具有协同抑菌作用，其协同抑菌指数为0.313~0.375。硫氯酚与庆大霉素联用48 h能持续抑制粪肠球菌的增殖（P<0.01）。硫氯酚能协同庆大霉素抑制粪肠球菌生物膜的形成及分散24 h已形成的生物膜（P<0.05）。 结论 硫氯酚与庆大霉素联用对粪肠球菌具有协同抑制作用，且抑菌效果可持续48 h以上。

目的 通过大样本流感样病例检测，明确抗原检测与核酸检测两种方法联合应用原则，从而快速明确流感诊断，控制流感暴发，减少资源浪费。 方法 采集2019年1月至2020年1月北京同仁医院发热门诊的4 622份流感样病例咽拭子标本，其中流感季3 230份，非流感季1 392份，采用快速抗原法和实时荧光逆转录聚合酶链反应（qPCR）两种方法对其进行流感病毒检测。不一致结果采用第二种核酸检测试剂进行比对。比较快速抗原法对于不同年龄敏感度与特异度的差异，以及不同亚型、不同病毒载量的检出差异。 结果 甲型流感病毒快速抗原法的敏感度为33.7%（577/1 710），特异度为93.5%（2 723/2 912），与qPCR的一致率为71.4%（3 300/4 622）。在流感季，甲型流感病毒快速抗原法阳性预测值及阴性预测值分别为84.1%（570/678）和57.4%（1 464/2 552）。在非流感季，其阳性预测值及阴性预测分别为8.0%（7/88）和96.5%（1 259/1 304）。甲型流感病毒快速抗原法与乙型流感病毒存在交叉反应，为2.3% （18/766）。儿童的敏感度比成人高［56.7%（164/289）比29.1%（413/1 421）］。快速抗原法对于不同流感亚型（H1N1和H3N2）的检出率差异无统计学意义（χ2=0.131，P=0.718），其敏感度随循环阈值（Ct值）增大而降低。 结论 甲型流感病毒快速抗原法阳性结果可确诊。在流感季，甲型流感病毒抗原阴性应进行核酸检测，而非流感季阴性结果可排除感染。快速抗原法对儿童的敏感度比成人高，敏感度与Ct值呈负相关。

目的 分析本地常见变应原分布特征，为合理防治变应性鼻炎提供依据。 方法 利用间接酶联免疫冷光分析技术，对2018年7月至2019年9月间在武汉大学人民医院进行变应原特异性免疫球蛋白E（sIgE）筛查的1 190例变应性鼻炎患者进行血清学检测，其中，男性708例，女性482例。按年龄将受试患者分为0~6岁、7~17岁、18~50岁、51~80岁组。采用SPSS 23.0分析受试者年龄、性别以及季节等因素对变应原分布特征的影响。 结果 最常见的变应原是粉尘螨阳性率为86.89%（1 034/1 190）。受试者中变应原组合数量以2种最为常见（46.47%，553/1 190）。男性和女性人群最常见的变应原均为粉尘螨（男性86.86%，615/708；女性86.93%，419/482）。但男性猫毛、德国蟑螂、牛奶检测的阳性率高于女性（P<0.05）。尘螨类变应原均在7~17岁组中阳性率最高，花粉类变应原在18~50岁组及51~80岁组中阳性率高于其他年龄组， 差异有统计学意义（P<0.05）。春季尘螨类变应原阳性率要高于夏季，猫毛阳性率在秋季最低，牧草阳性率在春季最高，而豚草阳性率在秋季最高。鸡蛋白、牛奶、蟹阳性率也存在季节差异，差异有统计学意义（P<0.05）。 结论 武汉地区变应性鼻炎患者最常见变应原为粉尘螨，且尘螨类变应原在不同年龄组及不同季节均存在明显差异。花粉类及食物类变应原阳性率存在季节差异，提示吸入性及食物性变应原对武汉地区变应性鼻炎患者诊疗及预防过敏具有重要价值。

目的 探讨4种不同的新型冠状病毒（2019-nCoV）特异性免疫球蛋白M（IgM）和免疫球蛋白G（IgG）抗体检测试剂盒在2019-nCoV感染临床诊断中的应用。 方法 招募164例新型冠状病毒肺炎（COVID-19）患者和132例同期初步排除2019-nCoV感染的疑似患者以及100名健康对照，收集临床资料和血清样本，采用3种全自动化学发光免疫分析法试剂盒（A、B和C1试剂盒，来自不同产家）和1种胶体金法试剂盒（C2试剂盒，和C1来自同一产家）进行2019-nCoV特异性IgM和IgG抗体的检测。 结果 A和C1试剂盒相比，对确诊病例血清IgM抗体阳性检出率分别是88.41%（61/69）和98.55%（68/69）（χ²=4.279，P<0.05）。对疑似病例血清IgM抗体阳性检出率分别是8.08%（8/99）和1.01%（1/99）（χ²=4.190，P<0.05），IgG抗体阳性检出率分别是10.10%（10/99）和1.01%（1/99）（χ²=6.160，P<0.05）。对健康对照血清IgM抗体阳性检出率分别是11.00%（11/100）和0（0/100）（χ²=9.620，P<0.05）。2种试剂盒IgM抗体检测结果有显著相关性（r=0.618，P<0.05），IgG抗体检测结果也有显著相关性（r=0.850，P<0.05）。C1和C2试剂盒相比，在确诊病例和健康对照血清中IgM和IgG抗体阳性检出率差异均没有统计学意义。A和B试剂盒相比，对确诊病例血清IgM抗体阳性检出率分别是82.00%（41/50）和54.00%（27/50）（χ²=9.007，P<0.05），2种试剂盒IgM抗体检测结果有显著相关性（r=0.654，P<0.05），IgG抗体检测结果也有显著相关性（r=0.770，P<0.05）。 结论 血清学特异性抗体检测时间短，生物安全性更高，可作为核酸检测的重要补充在临床上广泛应用。不同厂家的试剂盒检测效果存在一定程度上的差异，特别是针对不同靶抗原的试剂更是如此，但是都已经达到免疫学检测试剂的基本要求。

目的 分析结肠癌全基因组DNA差异甲基化位点（DMS）及差异甲基化基因（DMG）水平，寻找结肠癌相关甲基化基因。 方法 在山东大学齐鲁医院结肠癌组织标本库中，随机数表法抽取5份结肠癌组织和配对癌旁组织，采用甲基化修饰依赖性内切酶测序法（Methyl-Rad）进行全基因组DNA甲基化测序，Edge R方法筛选DMS，并比较基因组不同功能元件上DMS的分布，对DMS绘制组间甲基化水平差异热图；进一步筛选DMG，对DMG进行Gene Ontology （GO）和Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes （KEGG）功能富集分析。同时，下载肿瘤基因组图谱（TCGA）数据库RNA测序数据分析差异表达RNA，将DMG和差异表达RNA共分析获得潜在的结肠癌相关甲基化基因，并采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）和焦磷酸测序方法在30对结肠癌和癌旁组织中进行结肠癌相关甲基化基因的双向验证。基因的表达量和甲基化水平在结肠癌肿瘤组织和癌旁组织的差异采用配对样本的秩和检验进行统计学分析。 结果 共筛选出132 999个 CCGG和8 487个CCWGG DMS，其中CCGG和CCWGG的DMS主要分布在内含子区，比例分别为50.47%（67 127/132 999）和48.79%（4 141/8 487）。共发现1 359个CCGG和1 052个CCWGG DMG，对DMG进行GO和KEGG功能富集分析。DMG和差异表达RNA共分析发现113个结肠癌相关基因，其中14个基因在结肠癌组织中呈高甲基化且低表达，99个基因呈低甲基化且高表达。RT-qPCR和焦磷酸测序实验证实MAFA-AS1和MS4A18在结肠癌组织中呈高甲基化且低表达，而SMAD1-AS2、ARHGEF3-AS1和LOC440084则呈低甲基化且高表达，与测序结果一致（P<0.05）。 结论 DNA甲基化为结肠癌提供了潜在的生物标志物，并为结肠癌发生发展的分子机制提供了新的思路。

分析1例怀疑由抗-Dib抗体引起的新生儿溶血病（HDFN）。患儿出生两天，诊断为贫血，高胆红素血症。患儿父母均为O型，RhD阳性，排除ABO、RhD溶血。患儿母亲抗体鉴定实验结果怀疑为抗-Dib抗体引起的HDFN，由于市面上缺乏检测Dib抗原的试剂，导致抗-Dib抗体引起的HDFN不易被发现，使用序列特异引物引导的PCR反应及聚合酶链反应-直接测序法检测患儿及父母Dia、Dib抗原。结果显示该患儿血型为Di（a+b+），患儿母亲血型为Di（a+b-），患儿父亲血型为Di（a-b+），该患儿所患HDFN为罕见抗体抗-Dib抗体所致。

补体系统在肿瘤的发生、发展过程中发挥了重要且复杂的作用。补体系统中的多种蛋白质，如C1q、C1r、C1s、各种调节蛋白、补体受体蛋白的改变会影响肿瘤细胞的生物学功能。补体系统不仅参与肿瘤细胞的杀伤和监视作用，也参与促进肿瘤发生的过程，补体调节蛋白如CD35、CD46、CD55和CD97可抑制补体的细胞溶解作用，逃避免疫监视。对肿瘤补体系统的深入研究有助于认识肿瘤发生、发展的分子免疫机制，为开发肿瘤恶性转化的生物标志物和肿瘤免疫治疗阻断性靶点的研究提供理论依据。

CD155（PVR/Necl-5）是一种细胞黏附分子，在肿瘤进展中发挥重要作用。CD155通过调节肿瘤相关信号通路，影响细胞增殖、迁移侵袭及黏附；或与免疫细胞上的DNAX辅助分子-1、T细胞免疫球蛋白和ITIM结构域和CD96相互作用，影响T细胞及自然杀伤细胞功能。在多种类型肿瘤细胞上均检测到CD155表达上调，且与患者预后不良密切相关，可作为预测肿瘤患者生存的生物标志物。CD155及其相应受体有望成为免疫疗法的新型靶点，在肿瘤治疗领域具有极大潜力。本文将从CD155基本结构、生物学功能及其与肿瘤诊断、预后和免疫治疗等方面对CD155研究进展作一综述。

随着生物医学技术的迅速发展和抗核抗体（ANA）检测的临床推广应用，ANA的实验室检测新技术不断涌现，如间接免疫荧光法（IIF）检测ANA的自动化技术、其他免疫学技术检测ANA及其特异性自身抗体等。上述进展对ANA的实验室检测及其规范应用带来新的机遇和挑战。

外泌体是由活细胞主动分泌的一种纳米级囊泡，内含蛋白质、核酸等生物活性物质，参与细胞间通讯，在肿瘤微环境调节、免疫识别、炎症反应等众多生理病理过程中发挥重要作用。作为一种运输载体，外泌体广泛存在于生物流体中，但由于其粒径小、内含物丰度低，能否获得高质量的外泌体成为后续研究成败的关键。虽然外泌体分离、纯化和鉴定方法日趋发展，但仍未达到成熟水平。本文就外泌体分离和纯化方法的研究进行综述，并比较不同方法的优缺点、适用范围及应用前景，以期为外泌体研究提供参考。

近年来，随着抗菌药物的滥用，全球范围内的多重耐药菌逐年增加。对细菌进化规律的探究可能是解决这一问题的关键。高通量测序，又称为下一代测序（NGS），可以合理利用细菌全基因组所蕴含的强大信息，在细菌进化规律的探索中展现出前所未有的分辨能力。本文主要就NGS的概述及其在细菌进化分析方面的研究与进展进行简要综述。

肺炎的病原学诊断极易误诊和漏诊，是临床和实验室的共同关注点。本文拟对成人社区获得性肺炎、医院获得性肺炎、免疫受损患者肺炎的病原学检查、病原谱、注意事项、报告等进行综述。