2020年 · 第43卷第10期

液相色谱串联质谱技术具有高灵敏度、高特异性和高通量的特性，近年来在临床类固醇类激素、维生素、代谢小分子定量检测、药物浓度监测以及参考方法/参考物质研制等方面有快速的发展和应用，但其在临床中广泛应用仍存在一些挑战。

罕见出血疾病（RBD）是指一种或多种凝血因子缺陷引起的单基因遗传性疾病，包括纤维蛋白原（Fg）、凝血酶原、凝血因子Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ、Ⅺ和Ⅷ的缺陷等。由于RBD极低的流行率以及由此导致的随机对照研究的缺乏，其精准的诊断治疗给临床医生带来极大的挑战。面对其临床表型和实验室特点的异质性，更需要加强临床与实验室的沟通合作，实现综合管理。

在临床疾病的诊疗中，静脉血标本的检测发挥着不可替代的作用。然而，不合格的静脉血标本会在疾病诊断、医院运营等方面造成不良后果。对此，该共识从影响静脉血标本质量因素及应对措施、不合格静脉血标本管理建议、静脉血标本分析前质量指标、不合格静脉血标本的记录及分析方法、静脉血标本质量管理中的新技术5个方面进行阐述，旨在针对静脉血标本制定明确的质量控制指标，进一步完善评价系统，并明确静脉血标本在采集、储存、运输、检测等环节中的改进措施。

多黏菌素类、替加环素和头孢他啶/阿维巴坦是目前多重耐药和泛耐药革兰阴性菌等感染的治疗选择，业界对其敏感性检测方法操作的标准化、折点和结果的判读、报告等有困惑。中国医疗保健国际交流促进会临床微生物与感染分会、中华医学会检验医学分会临床微生物学组、中华医学会微生物学与免疫学分会临床微生物学组组织专家对上述问题进行了讨论并撰写了专家共识，对一些关键问题给出了推荐意见和处理方法，希望能为临床处置、实验室工作提供合理、实用的帮助。

目的 探讨新型冠状病毒肺炎（COVID-19）患者入院时检验指标预测病情严重程度的价值。 方法 采用回顾性研究收集2020年1月27日至2月20日福建援鄂医疗队在武汉市金银潭医院工作期间经管的83例COVID-19确诊患者为研究对象，83例患者，男性54例，女性29例，年龄63（56~70）岁。并根据病情严重程度分为普通型、重型、危重型组，回顾性分析患者入院时的白细胞（WBC）、淋巴细胞（LYM）、乳酸脱氢酶（LDH）、白细胞介素-6（IL-6）、降钙素原（PCT）、血清铁蛋白（SF）、红细胞沉降率（ESR）、超敏C反应蛋白（hs-CRP）、D-二聚体（D-D）等指标，并采用Logistic回归分析各指标对危重型的预测价值。 结果 入院时普通型、重型、危重型组WBC（×109/L）分别为7.10±3.88、7.73±3.77、9.07±5.61（F=1.315，P=0.274），IL-6（μg/L）分别为11.76（9.42~15.18）、11.93（10.15~15.63）、11.24（8.06~13.75）（Z=0.591，P=0.744）， D-D（mg/L）分别为0.70（0.48~1.12）、1.67（1.07~7.14）、1.96（0.71~8.18）（Z=3.363，P=0.186）；入院时普通型、重型、危重型组LYM（×109/L）分别为1.10±0.33、0.80±0.35、0.66±0.32（F=11.415，P<0.001），SF（μg/L）分别为470.83±283.43、835.66±819.43、1341.15±949.54（F=7.98，P=0.001），ESR（mm/1 h）分别为30.76±15.70、42.55±22.51、51.04±25.09（F=5.181，P=0.008），LDH（U/L）分别为314.71±105.46、325.69±109.85、444.03±181.07（F=7.17，P=0.001），hs-CRP（μg/L）分别为16（7.20~19.90）、31.00（20.00~87.60）、80.50（33.70~113.00）（Z=12.185，P=0.002），PCT值（μg/L）分别为0.025（0.02~0.05）、0.05（0.02~0.13）、0.09（0.05~0.39）（Z=9.694，P=0.008）。普通型组LYM值高于重型和危重型组，危重型和重型组hs-CRP值高于普通型组，而危重型组SF、ESR、LDH和PCT高于重型和普通型组（P均<0.05）。 结论 入院时WBC、LYM、ESR、LDH等指标有助于判断COVID-19病情严重程度，IL-6水平虽有增高但对判断病情严重程度可能无意义。

目的 分析拉萨地区不同民族表观健康人群的同型半胱氨酸（HCY）水平及其影响因素，初步建立参考区间。 方法 参考区间建立。分析西藏自治区人民医院2018年1月至12月820名表观健康体检人群血清HCY（μmol/L）水平，将全部人群按照民族、性别、年龄、季节分组，使用一般线性模型分析民族、性别、年龄、季节组别中血清HCY水平的差异。依据CLSI C28文件，使用Nested ANOVA和Z检验分析并确定临床应用中是否需要分组建立参考区间。 结果 经一般线性模型分析民族、年龄、性别对血清HCY存在显著影响，其中藏族HCY水平高于汉族（P<0.001）；男性HCY水平高于女性（P<0.001）；50岁以上人群HCY水平高于50岁以下人群（P=0.01），血清HCY水平在季节分布上差异无统计学意义（P=0.22）。Nested ANOVA和Z检验确定临床应用中需要依据民族和性别建立拉萨地区HCY的参考区间。其中，藏族男性的HCY参考区间为<22.41 μmol/L，藏族女性HCY的参考区间为<18.41 μmol/L。 结论 拉萨地区表观健康人群血清HCY水平在不同民族、性别、年龄人群中略有差异，本研究成功建立了西藏地区藏族男性和藏族女性的HCY参考区间。

目的 建立凝血酶原时间（PT）、活化部分凝血活酶时间（APTT）、纤维蛋白原（Fbg）、凝血酶时间（TT）的凝固曲线波形分析（CWA）参数CT、|Min1|、|Min2|、|Max2|的参考区间并分析其在凝血因子缺乏患者中的变化。 方法 通过具有CWA功能的全自动凝血分析仪测定125名表观健康人的标本，建立凝血4项CWA参数CT、|Min1|、|Min2|、|Max2|的参考区间。25例凝血因子缺乏者的标本用于分析凝血4项CWA各参数在疾病中的变化。 结果 PT的|Min1|（dT/dt）、|Min2|（d2T/dt2）、|Max2|（d2T/dt2）的参考范围分别为3.14±1.22、0.56±0.22和0.50±0.18；APTT的|Min1|（dT/dt）、|Min2|（d2T/dt2）、|Max2|（d2T/dt2）的参考范围分别为4.75±1.71、0.78±0.29和0.65±0.28；Fbg的CT（s）、|Min1|（dT/dt）、|Max2|（d2T/dt2）的参考范围分别为 7.01±1.96、1.22±0.51和0.15±0.11；TT的|Min1|（dT/dt）、|Min2|（d2T/dt2）、|Max2|（d2T/dt2）的参考范围分别为0.95±0.32、0.14±0.05和0.07±0.03。凝血因子Ⅴ缺乏患者CWA参数明显减低，|Min2|、|Max2|在凝血因子Ⅶ活性为0.42时明显低于健康人。凝血因子Ⅷ缺乏患者CWA参数随着凝血因子Ⅴ、Ⅷ活性减低明显减低。 结论 凝血4项CWA参数的参考区间有助于凝血因子缺乏患者的临床判断。

目的 研究血管性血友病因子抗原（vWF：Ag）含量和D-二聚体预测接受抗凝治疗的非瓣膜性心房颤动（NVAF）患者血栓风险的性能。 方法 收集2017年3月至2019年3月间就诊的NVAF患者256例，其中男152例，女104例，年龄（57.9±20.4）岁；根据随访期内终点事件情况，将患者分为无事件组227例，血栓事件组29例。选择同期健康体检者作为对照组共50名，其中男30名，女20名，年龄（45.0±5.3）岁。用血液凝固仪测定血浆vWF：Ag水平，采用荧光免疫分析仪测定血浆D-二聚体水平。任意两组间数据比对采用Mann-WhitneyU检验，多组间数据比对采用Kruskal-Wallis H检验，用Logistic回归对分类资料做多元相关性分析获得优势比（OR）；用受试者工作特征（ROC）曲线评价vWF：Ag和D-二聚体预测血栓事件的性能；用Kaplan-Meier曲线进行生存分析；用Cox比例风险回归模型获得风险比（HR）。 结果 对照组的vWF：Ag和D-二聚体为103%（86%~131%）和249（90~522）μg/L，患者组为234%（102%~623%）和744（100~3 352）μg/L；在患者组中，无事件组为225%（102%~623%）和650（100~3 281）μg/L，血栓事件组为333%（210%~494%）和1 325（487~3352）μg/L；患者组的vWF：Ag和D-二聚体高于与健康对照组（P均<0.001），无事件组高于健康对照组（P均<0.001），血栓事件组高于无事件组（P均<0.001）。NVAF患者血浆vWF：Ag和D-二聚体水平均高于与对照组（P均<0.001）。无事件组患者的血浆vWF：Ag和D-二聚体水平高于健康对照组，差异有统计学意义（P均<0.001）；血栓事件组患者的血浆vWF：Ag和D-二聚体水平均高于无事件组，差异有统计学意义（P均<0.001）。ROC显示，vWF：Ag预测NVAF患者3个月内血栓事件的临界值为229%时，曲线下面积为0.839（95%CI：0.784~0.894）；D-二聚体的临界值为588 μg/L时，曲线下面积为0.803（95%CI：0.745~0.861）；vWF：Ag联合D-二聚体，曲线下面积为0.868（95%CI：0.826~0.909）。Logistic回归分析显示，NVAF患者血浆vWF：Ag水平与年龄（OR=10.240，95%CI 2.773~37.820）、慢性心力衰竭（OR=34.779，95%CI 8.010~151.019）、高血压（OR=0.068，95%CI 0.023~0.198）和2型糖尿病（OR=6.618，95%CI 2.469~17.734）有显著相关性（P<0.001），与血管疾病（OR=4.801，95%CI 1.204~19.145）有显著相关性（P=0.026）；血浆D-二聚体水平与慢性心力衰竭（OR=0.146，95%CI 0.036~0.588）、服药依从性（OR=0.114，95%CI 0.016~0.832）有显著相关性（P值分别为0.007和0.032）。生存分析显示，血浆vWF：Ag、D-二聚体或vWF：Ag联合D-二聚体评估时，血浆水平高于临界值的患者在3个月内的血栓事件累积概率显著增高（Log-rank χ2分别为11.394、17.895和32.825，P均<0.001）。Cox比例回归模型显示，vWF：Ag和D-二聚体均不能独立预测抗凝治疗期间的血栓事件（HR分别为0.866和0.834，P值分别为0.253和0.152），但两项指标联合应用可显著改善预测性能（HR=0.780，P=0.048）。 结论 NVAF患者血浆vWF：Ag和D-二聚体水平变化与多种临床病理因素相关，并与患者3个月内的血栓风险密切相关，联合应用可为临床预测病情提供有效依据。

目的 对血液分析15项43条自动审核规则进行应用1年后的周期性验证，分析应用适宜性并进行完善。 方法 2019年8月1日至2020年1月31日我院528 010份血常规检验结果，分析自动审核通过率与拦截率；随机选取其中触及自动审核规则结果拦截标本300份（共触及自动审核规则1 012项次）及未触及自动审核规则结果放行标本300份共600份标本进行显微镜镜检，同时关注标本异常性状及不可接受差值（Delta check），计算假阴性率、假阳性率、真阴性率、真阳性率及自动审核通过正确率，并与自动审核规则建立时的二期验证进行率的比较。计算528 010份标本中触及Delta check 规则的54 716份标本的假阴性率、假阳性率、真阴性率、真阳性率，并与自动审核规则建立时的二期验证进行率的比较。率的计算以显微镜镜检结果为金标准，率的比较以P<0.05为结果有显著性差异。对触及的1 012项次自动审核规则逐项分析假阳性及真阳性；并对其中触及原始细胞规则的108份标本按拦截条件逐条分析假阳性及真阳性。分别统计528 010份标本及其中193 750份门诊标本的平均TAT、中位TAT，并统计528 010份标本TAT中<30 、30~60、>60 min 报告的百分比。分析评价规则应用适宜性，判断其是否达到最佳性能，能否满足临床与实验室需求；结合AUTO15优化完善自动审核设计流程、审核规则及应用流程。 结果 自动审核通过率为63.06%（332 971/528 010），拦截率为36.94%（195 039/528 010），假阴性率1.00%（6/600），假阳性率12.67%（76/600），真阴性率49%（294/600），真阳性率37.33%（224/600），通过正确率为98%（294/300）。周期性验证组的自动审核通过率、真阴性率、真阳性率及通过正确率高于二期验证组，假阴性率及假阳性率低于二期验证组；Delta check周期性验证组假阴性率、真阳性率低于二期验证组，假阳性率、真阴性率高于二期验证组，比较结果有显著性差异。528 010份血常规标本平均TAT 25 min；193 750份门诊血常规标本平均TAT 23 min。528 010份血常规标本TAT<30、 30~60、>60 min分别为83.30%（439 819/528 010）、8.00%（42 250/528 010）、8.70%（45 941/528 010）。 结论 自动审核规则应用1年后的周期性验证结果显示，本室在用的15项43条自动审核规则能够保证血液分析检验结果的准确及工作效能，具有较好的应用适宜性。

目的 探讨中性粒细胞/淋巴细胞（NLR）、红细胞分布宽度（RDW）、血小板/淋巴细胞（PLR）、血小板平均体积（MPV）、血小板压积（PCT）和血小板分布宽度（PDW）与大动脉炎（TA）疾病活动性的关系。 方法 回顾性分析2017年1月至2019年6月安贞医院86例TA患者（TA组），同时从北京安贞医院健康体检中心选取年龄和性别与TA相匹配的健康对照者85名（对照组）。所有对象静脉采血，用电阻抗法检测中性粒细胞/淋巴细胞（NLR）、红细胞分布宽度（RDW）、血小板/淋巴细胞（PLR）、血小板平均体积（MPV）、血小板压积（PCT）和血小板分布宽度（PDW）。根据美国国立研究院（NIH）评分及印度TA临床活动性评分（ITAS2010）判断TA活动性。对TA组和对照组间的临床资料进行比较，采用Spearman相关分析评价全血细胞计数指标与ESR和高敏C反应蛋白（hs-CRP）的关系，采用受试者工作特征（ROC）曲线确定判断TA疾病活动性的界值。 结果 TA患者组的NLR、RDW和PDW均高于对照组［分别为3.00（1.78~3.48）比1.76（1.34~2.01）、14.10（13.00~14.83）比13.08（12.50~13.35）和13.65（11.20~16.00）比12.24（11.20~13.20），P均<0.000 1］，TA患者组的MPV和PCT均低于对照组［分别为10.06±1.11比10.44±0.83和0.25（0.20~0.28）比0.27（0.23~0.31），P值分别为0.011和0.014］。TA患者活动期的RDW和PCT均高于非活动期［分别为14.61（13.38~15.48）比13.81（12.88~14.33）和0.27±0.07比0.23±0.06，P值分别为0.007和0.008］。TA患者活动期的PCT与ESR呈正相关（r=0.33，P=0.002）。RDW判断TA疾病活动性的最佳界值为14.150（敏感度为55.0%，特异度为100.0%，ROC曲线下面积为0.802）；PCT判断TA疾病活动性的最佳界值为0.245（敏感度为66.7%，特异度为92.3%，ROC曲线下面积为0.84）；PLR判断TA疾病活动性的最佳界值为131.257（敏感度为71.7%，特异度为76.9%，ROC曲线下面积为0.714）。 结论 RDW和PCT可能有助于判断TA疾病活动性，而全血细胞计数中的其他指标与TA疾病活动性关系不密切。

目的 探讨国际协作的新生儿筛查数据平台Region 4 Stork（R4S）系统联合切值法分析应用于新生儿极长链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症（VLCADD）串联质谱筛查的可行性。 方法 回顾性分析2013年10月至2018年7月浙江省新生儿疾病筛查中心2 040 072名新生儿应用串联质谱技术筛查的数据，使用R4S系统对其中依据传统切值法判别疑似VLCADD阳性的910例样本原始数据进一步分析，以临床诊断及ACADL基因检测结果为依据，统计比较两者的筛查效率。 结果 切值法判读的疑似VLCADD阳性910例数据经R4S系统进一步分析后，阳性判读减至238例（含9例确诊阳性），确诊患儿ACADL基因测序共发现16种不同变异。假阳性率由0.44‰（901/2 040 072）降至0.11‰（229/2 040 072），阳性预测值由0.99%（9/910）增至3.78%（9/238），筛查特异度由99.96%（2 039 162/2 040 063）增至99.99%（2 039 834/2 040 063）。切值法单独应用与联合R4S系统分析两者阳性率有统计学差异（χ²=393.5，P<0.05）。 结论 R4S系统联合切值法应用于串联质谱VLCADD新生儿筛查可显著提高筛查性能，降低假阳性率，具有一定的临床应用价值。

目的 建立一种基于同位素稀释液相色谱串联质谱法（ID-LC/MS/MS）检测血清糖化白蛋白（GA）的准确定量方法。 方法 本研究在日本临床化学学会（JSCC）推荐的ID-LC/MS方法上进行优化，采用阴离子交换色谱柱提纯白蛋白（Alb），使用重量法准确称量提纯标本、赖氨酸（Lys）和糖化赖氨酸（DOF-Lys）的标准溶液及两种的混合内标，将Alb酸水解为氨基酸，检测Lys和DOF-Lys从而定值GA。根据C62-A文件对建立的方法进行方法学评价并与常规方法进行比对研究。 结果 蛋白电泳鉴定标本Alb纯度结果为100%。Lys和DOF-Lys线性标准曲线R2范围分别为0.997 8~0.999 9、0.999 4~1.000 0。血清GA测定的批内、批间和总的变异系数（CV）分别为0.69%~1.97%、1.13%~2.33%、1.37%~2.54%。正确度评价中三个浓度参考物质测定结果与认定值偏差分别为-2.56%、-1.87%、-2.94%。Lys和DOF-Lys的基质效应分别为89.92%、109.98%，携带污染率分别为-1.13%、-3.27%。Lys的检测限和定量限分别为0.075、0.248 nmol/g，DOF-Lys的检测限和定量限分别为0.007、0.024 nmol/g。方法 的相对扩展不确定度为1.60%~2.03%。与常规方法的拟合回归曲线R2为0.970 7。 结论 建立了一种基于ID-LC/MS/MS法检测血清GA的方法，方法学评价准确可靠，有望作为血清GA检测的候选参考方法。

目的 建立一种基于ICP-MS技术的全血铁、铜同时检测的候选参考方法。 方法 验证性研究。选取钴（Co）作为内标元素，采用称量法配制标准溶液及全血标本，对全血标本进行电热板消解并稀释，通过ICP-MS在同位素分析模式下测量57Fe/59Co、 63Cu/59Co同位素比值，采用包括法定量。通过测定EQA质控品和有证标准物质，验证本方法的精密度、加标回收率和正确度，并通过方法比对进一步验证方法的性能。 结果 本法全血铁的检出限为0.136 mg/kg，定量限为0.454 mg/kg。全血铜的检出限为0.008 mg/kg，定量限为0.027 mg/kg。本方法标准曲线浓度范围为铜：0.83~3.33 mg/kg，铁：167~667 mg/kg，该范围内线性良好（R2>0.999 90），方法的精密度良好，总CV范围：铁：0.42%~0.68%；铜：0.14%~0.94%。 方法 加标回收率均在100%左右，其范围：铁均值（99.69%~100.07%）；铜均值（99.26%~100.51%）。 结论 成功建立了一种基于ICP-MS技术的全血铁、铜同时测定的候选参考方法，该方法相比传统参考方法简便、快速，精密度与加标回收率良好。

目的 建立基于MALDI-TOF MS技术的临床微生物鉴定仪快速鉴定高毒力ST17亚型B组链球菌（GBS）的分类模型。 方法 回顾性研究。选取2015年至2018年全国多中心新生儿侵袭感染GBS菌235株，采用45株ST17菌和50株非ST17菌（20株ST19、15株ST12和15株ST10）主要ST亚型作为建模组，余下40株ST17、16株ST10、17株ST12和17株ST19为验证组，其他少见ST亚型菌50株视为模型分类观察组。以Bruker质谱仪采集菌株质谱图，通过ClinProTools 3.0软件用遗传算法（GA）进行建模、验证和差异肽峰筛选。 结果 ST17-GA法分类模型对建模菌株谱图识别率为99.4%，交叉验证值为96.9%。10个差异肽峰中，两个主要肽峰m/z 2 956和m/z 5 912权重均>1，而其他8个肽峰权重均<0.5。以90株主要ST亚型菌验证，仅1株ST17型菌被错判为非ST17，余下89株ST17与非ST17菌模型判断均正确，ST17型分类模型的诊断效能达98.9%，敏感度、特异度分别为97.5%、100%，阳性和阴性预测值分别为100%和98.0%。模型对其他50株少见ST型菌分类显示，21株（42.0%）被误判为ST17亚型。 结论 成功建立高毒力ST17型GBS菌的MALDI-TOF MS快速鉴定模型，并显示较好的诊断效能。

电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）技术具有灵敏度高、线性范围宽、稳定性好、操作简单等优势，在多元素定量分析、同位素分析、形态分析等领域发挥着重要作用。通过ICP-MS技术可以准确、同步测定人体不同类型样本中的微量元素及有毒元素，这对于临床相关疾病的诊断治疗具有重要意义，其与激光烧蚀、色谱等进样和分离技术的联用使其应用范围更为广泛。

糖尿病肾脏病是（DKD）是糖尿病严重的肾脏并发症，是导致终末期肾脏疾病（ESRD）的主要原因，早期诊断和治疗至关重要。质谱分析法可以检测DKD患者的血液、尿液、组织等标本的生物标志物，已成为研究热点，在早期诊断、致病机制研究、疾病治疗效果及预后评价等方面具有重要意义。

核仁小RNA（snoRNA）是一类长度约为60~300个核苷酸的非编码RNA，主要指导核糖体RNA的甲基化和假尿苷化，参与核糖体的成熟和转录后修饰。典型的snoRNA分为C/D 盒（C/D box）和H/ACA 盒（H/ACA box）两种主要类型。越来越多的证据证明，snoRNA可影响细胞多种生物学行为，与肿瘤形成密切相关。异常的snoRNA通过激活或抑制癌症相关信号通路、靶向作用于p53蛋白，以及调控细胞的自我更新潜能，从而导致肿瘤发生。本文就snoRNA的基本结构及其在恶性肿瘤中的作用机制进行阐述，以期为寻找有效肿瘤治疗靶点和评估患者预后提供新思路。