2020年 · 第43卷第08期

中性粒细胞胞外诱捕网（NET）是中性粒细胞经过感染或其他因素的刺激后产生的由胞外DNA骨架，组蛋白以及中性粒细胞弹性蛋白酶，髓过氧化物酶等组成的网状结构。在脓毒症，癌症等疾病中，NET有明显促进血栓形成的作用。NET还与免疫性血栓形成密切相关。NET主要通过黏附血小板、激活Ⅻ因子、抑制组织因子途径抑制物（TFPI）的活性等在促进血栓形成中发挥着重要作用。最新的研究发现NET与补体的相互作用也促进了血栓的形成。

静脉血栓栓塞症（VTE）是一种是由遗传和环境暴露相互作用引起的复杂多因素疾病，遗传因素包括凝血抑制因子基因功能丧失（LOF）、促凝因子基因功能获得（GOF）、纤溶系统基因功能异常和间接促凝的基因变异或表观遗传学改变。VTE的遗传模式包括孟德尔遗传和基于基因多态性VTE易感。对于疑似遗传相关VTE患者，如考虑为已知突变或多态性可选择针对有限变异位点的检测技术，如考虑为未知变异位点或单基因病可选择NGS，同时可利用多基因遗传风险评分（PRS）或表观遗传学生物标志物对VTE复发风险做动态监测。

目前我国新冠肺炎疫情防控形势逐步向好，但是境外输入防控形势依然严峻。由于传染源不明、传播途径难以彻底切断以及易感人群众多等因素，决定了新冠肺炎疫情可能长时间存在。因此，预防控制工作将是长期艰巨的任务，需要坚持应急处置和常态化防控相结合的原则，统筹推进疫情防控和经济社会发展。回顾过去，这次疫情防控中暴露出了我国医院检验科在公共卫生救治体系中的职责定位不明、临床实验室硬件建设薄弱、专家介入滞后等问题，本文反思了医院检验科在本次抗疫活动中存在的问题，并对此提出了一些建议，以期完善疫情后国家公共卫生体系建设下的检验科的建设。

加强医疗机构发热门诊临床实验室的建设，提高其检测、筛查、预警和防控能力。在发热门诊临床实验室建设过程中，医学检验科应做好资源储备，根据临床诊疗和疫情防控需求合理开展检验项目，应充分考虑到特定发热情势下的特殊检验需求及疫情防控常态化要求。按照临床需求、合理布局、平战结合、规范管理、确保质量和安全的原则，通过与北京医学会检验医学分会、北京市临床检验中心、北京市医学检验质量控制和改进中心及相关领域专家沟通，采用发放调查问卷、征求建议等方式，从组织管理、检验项目、基础设施、仪器设备、信息系统、岗位设置、人力资源配置、质量控制与监测、物资储备及管理、职业健康等方面入手，就医疗机构发热门诊临床实验室能力建设达成共识，以提升医疗机构发热门诊临床实验室哨点监测作用。

目的 比较7种国产新型冠状病毒（2019-nCoV）核酸检测试剂盒的一致性和检出能力，为临床实验室选择检测方法和新型冠状病毒肺炎的诊断提供参考依据。 方法 收集深圳市罗湖区人民医院2020年1月29日至2月5日2019-nCoV感染确诊患者核酸检测阳性和疑似患者核酸检测阴性的咽拭子标本各10例，采用7种试剂盒（编号a~g）分别进行核酸检测，评价7种试剂盒临床标本检测结果的一致性；选取1份阳性标本核酸用无RNA酶水梯度稀释得到5个浓度梯度盘（浓度1~浓度5），比较不同品牌试剂盒的阳性检出率及批内重复性。 结果 6种试剂盒检测20例临床标本的阴性和阳性符合率均为100%，仅1种试剂盒的阳性符合率为8/10，阴性符合率10/10；批内重复性显示7种试剂盒在浓度1水平重复检测病毒载量CV值均<5%；在浓度1~浓度3梯度区间，开放阅读框（ORF）1ab基因的检出能力比较显示b、d、f低于a、c、e、g，试剂盒e和g最高（14/15），a试剂盒对N基因检出能力可达15/15，优于其余5种试剂盒。ORF1ab和N基因检出能力综合分析显示d试剂盒检出能力最低（ORF1ab：40%；N：53%），a、b、c、e、f这5种试剂盒检出能力无明显差异。 结论 7种试剂盒对病毒载量较高的阳性标本检测的准确度和重复性无明显差异，检测性能良好；但部分试剂盒对弱阳性标本的检出能力欠佳，建议弱阳性标本应至少采取两个厂家的试剂盒复核检验，以保障结果的准确性。

目的 对前期建立的尿液常规智能审核规则（含复检规则和人工审核规则，简称智能规则）进行多中心大样本的验证及改进研究，以提高智能规则的临床适用性。 方法 智能规则的验证与改进，共收集2019年3月至9月浙江大学医学院附属第一医院、空军军医大学西京医院、烟台毓璜顶医院、苏州大学附属第三医院、四川省人民医院以及中南大学湘雅三医院等6家医院门诊或住院患者尿液标本31 456份，其中3 105份标本以镜检结果及人工审核为参考用于智能规则的验证与调整，28 351份标本以100%人工审核为参考用于改进后的智能规则临床适用性的验证。 结果 原发布智能规则中的人工审核规则存在8.59%（202/2 352）的无效审核率以及8.84%（208/2 352）的无效拦截率，复检规则的假阴性率和复检率与前期结果相似。依据大数据深度分析结果和8家医院（含中国医学科学院肿瘤医院、中国医学科学院北京协和医院）技术骨干的讨论，增加了1条复检规则和4条人工审核规则、删除了2条人工审核规则，并对人工审核标准进行了统一，形成了改进后的智能规则。其中，复检规则的假阳性率、假阴性率（漏诊率）及复检率没有明显变化，分别为14.72%（457/3 105）、4.06%（126/3 105）及24.73%（768/3 105）；人工审核规则的无效审核率、无效拦截率均降到0；智能规则的人工审核率、自动审核通过率分别为50.89%（1 580/3 105）、49.11%（1 525/3 105）。智能规则的大样本验证结果与之相一致。 结论 多中心大样本验证显示改进后的智能规则具有良好的临床适用性。

目的 建立多中心凝血检验结果的自动审核规则，在保证检验质量的同时减轻人工审核及复检工作负荷，缩短周转时间（TAT）时间。 方法 收集来自14家医院检验科2019年12月至2020年3月期间凝血标本共14 394份：规则建立组11 230份（含Delta check 1 182份），规则验证组3 164份（含Delta check 487份）；临床试应用77 269份。应用Sysmex CS系列全自动凝血分析仪检测凝血酶时间（TT）、凝血酶原时间（PT）、国际标准化比值（INR）、活化部分凝血活酶时间（APTT）、纤维蛋白原（FBG）、D-二聚体（DD）、血浆纤维蛋白（原）降解产物（FDP）同时将临床信息、仪器参数、检测结果、临床诊断、抗凝药物使用和HCT、TG、TBIL、DBIL等相关信息汇总；根据历史数据从小到大排序后累积第2.5和97.5百分位数，根据临床建议、危急值、特殊用药史和相关指南确定自动审核拦截条件及限值；进行一期和二期验证，分别计算阳性符合率、阴性符合率、假阴性、假阳性、自动审核通过率、通过正确率（与人工审核一致率）和TAT时间。 结果 （1）自动审核规则33条，涉及TT、PT/INR、APTT、FBG、DD、FDP、Delta check、反应曲线及性状异常；（2）规则建立组自动审核通过率为68.42% （7 684/11 230），假阴性为0（0/11 230），与人工审核一致率为98.51%（11 063/11 230），其中阳性符合率为30.09%（3 379/11 230），阴性符合率为68.42%（7 684/11 230）；规则验证组自动审核通过率为60.37%（1 910/3 164），假阴性为0（0/11 230），与人工审核一致率为97.79%（3 094/3 164），其中阳性符合率为37.42%（1 184/3 164），阴性符合率为60.37%（1 910/3 164）；（3）自动审核规则试应用，77 269份凝血检测标本，检验结果报告平均TAT缩短分别为8.5~83.1 min。 结论 本研究建立了凝血检验结果自动审核规则33条，验证显示能够在保证检验准确性的同时缩短TAT，提高凝血检验效率。

目的 评估血管性血友病因子（vWF）GPIb活性/抗原比值对血栓性血小板减少性紫癜（TTP）急性期的诊断价值。 方法 前瞻性纳入2018年1月至2019年12月入院的93例同时存在血小板计数<50×109/L和溶血表现的疑诊TTP患者，检测ADAMTS13活性，vWF:GPIb活性及vWF抗原，以ADAMTS13活性测定结果作为TTP确诊依据，记录患者PLASMIC临床评分及最终临床诊断。 结果 22例患者确诊为TTP，ADAMTS13活性的中位数及四分位间距为1.0%（0~7.4%），71例非TTP患者主要诊断为溶血尿毒综合征（HUS）、重症感染、恶性肿瘤、结缔组织病等。TTP患者vWF:GPIb活性、抗原及两者比值均低于非TTP患者（P<0.05），vWF:GPIb活性/抗原比值<0.75对TTP诊断效力最高（敏感度和特异度分别为81.8%、95.2%）。在PLASMIC临床评分判断为TTP高可能性的患者中，vWF:GPIb活性/抗原比值<0.75者有88.9%最终确诊为TTP，比值≥0.75者有15.4%最终确诊为TTP。 结论 当ADAMTS13活性结果不能及时获得时，基于自动化检测的vWF:GPIb活性/抗原比值有助于疑诊TTP患者的快速鉴别和风险分层。

目的 对发色底物法测定凝血因子Ⅷ（FⅧ）活性进行方法学建立以及临床应用评价。 方法 选取2018年1月至2019年5月于上海交通大学医学院附属瑞金医院确诊的血友病A患者40例，获得性血友病A患者20例，狼疮抗凝物质阳性患者26例和表观健康者60名，根据美国临床和实验室标准协会（CLSI）相关文件要求，分别对该检测方法的准确度、不精密度、检测下限、线性范围、携带污染率、参考范围、可报告范围等指标进行验证，并与FⅧ活性检测（一期凝固法）进行方法学比较。同时对发色底物法在获得性血友病A和狼疮抗凝物质阳性患者标本的临床应用进行评估。 结果 两个水平的定值质控品的检测结果均在厂商提供的定值范围内（偏倚为3.93%~6.79%）。批内不精密度变异系数（CV）为1.86%~2.06%（均≤5%），日间不精密度CV为4.83%~6.90%（均≤15%）。灵敏度CV为11.23%（<20%）。试剂盒提供的参考范围（60.00%~168.00%）适用于本实验室。最大稀释度为1∶16。线性范围为5.00%~193.50%（a=1.024 3，R2=1.000）。临床可报告范围为0.50%~387.00%。携带污染率为0.04%。与FⅧ活性检测（一期凝固法）结果一致性高（R2=0.961）。FⅧ抑制物滴度检测结果与一期凝固法结果一致性高（R2=0.973）。狼疮抗凝物质阳性伴FⅧ活性（一期凝固法）降低患者的FⅧ∶C结果与一期凝固法结果间的差异有统计学意义（t=9.232，P<0.05）。 结论 FⅧ活性检测（发色底物法）试剂盒具有优越的检测性能，各方面均呈现出良好的结果，可用于FⅧ活性水平测定，且临床应用范围更广，干扰因素更少。

目的 比较三种统计学方法在间接法建立参考区间中的实用价值。 方法 方法学评价。调取2017年1月至2019年12月在北京大学第一医院门诊进行产前检查的妊娠期妇女凝血指标，共收集32 401例孕妇数据，其中早孕组11 151例，中孕组4 872例，晚孕组16 378例。对凝血酶原时间（PT）、活化部分凝血活酶时间（APTT）、凝血酶时间（TT）、纤维蛋白原（FIB）、D-二聚体（D-D）和纤维蛋白（原）降解产物（FDP）的检测结果进行分析，判断各孕龄组内是否需要根据年龄进行参考区间分组。PT和APTT在三个孕期均需要根据年龄进行分组，FIB和TT在晚孕期、D-D在早孕期需要根据年龄分组。采用非参数法、Hoffmann法和Q-Q图法计算各指标的参考区间。于2019年10月至2020年1月在北京大学第一医院妇儿门诊招募健康孕妇42例作为参考人群，验证建立的参考区间并比较参考人群检测结果在3种方法计算得出的参考区间外的百分比。 结果 35岁以下早孕期PT、APTT、FIB、TT的参考范围分别为（10.44~13.11）s、（25.29~35.88）s、（2.61~4.64）g/L和（11.53~15.58）s6项指标水平随孕期进展产生显著差异，PT和APTT在3个孕期内均需要根据年龄进行分组，FIB和TT在晚孕期、D-D在早孕期需要根据年龄分组。数据量较大时，Hoffmann法所建立的参考区间和非参数法较接近，Q-Q图法建立的参考区间略宽于Hoffmann法。数据量较小时，应用Hoffmann法和Q-Q图法计算的参考区间更为可靠。应用Hoffmann法计算的。 结论 妊娠期凝血功能指标需要根据孕期及年龄分组，基于Hoffmann法的间接法可以作为直接法的替代方法。

目的 对一个遗传性异常纤维蛋白原血症家系进行表型和基因型分析，并探讨其发病的分子机制。 方法 家系分析。采集先证者家系成员（3代7人）的外周血进行常规出凝血检查，用凝血酶凝固法（Clauss法）和免疫比浊法分别检测纤维蛋白原（Fg）的活性（Fg︰C）和抗原水平（Fg︰Ag），用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测血浆Fg三条肽链的相对分子量。对Fg的FGA、FGB和FGG基因的所有外显子及其侧翼序列进行PCR扩增并测序分析。采用纤维蛋白原凝固率测定、纤维蛋白聚集曲线和扫描电镜观察纤维蛋白凝块等方法，研究其致病机制。 结果 先证者活化部分凝血活酶时间（APTT）正常，凝血酶原时间（PT）、凝血酶时间（TT）和爬虫酶时间（RT）延长；Fg︰Ag（1.6 g/L）轻度降低，Fg︰C（0.7 g/L）明显降低。其父亲和祖母APTT和PT正常，TT和RT延长；Fg︰Ag（分别为2.0 g/L和2.2 g/L）正常，Fg︰C（分别为1.0 g/L和1.1 g/L）明显降低。家系其他成员各项凝血指标均正常。先证者FGG基因第6外显子存在A4774G杂合碱基置换，导致Fg γ链Gln195Arg杂合错义突变；其父亲和祖母亦为Gln195Arg杂合子。Western blot检测结果显示，先证者及其父亲、祖母血浆Fg均无异常条带出现。先证者血浆的Fg凝固率为49.3%，健康对照者为98.9%；凝血酶或爬虫酶诱导的聚集曲线严重受损；与健康对照者相比，先证者纤维蛋白凝块的纤丝直径增大（P<0.001），纤丝密度减小、排列稀疏。 结论 Fg γ链Gln195Arg杂合错义突变导致Fg功能受损，是引起该家系遗传性异常纤维蛋白原血症的原因，该突变尚未见报道。

即时检验（POCT）是检验医学发展的新领域，是在患者医疗现场因实施医疗措施所需而进行的即时检验。随着长期抗凝处理的患者人群扩大、促纤溶药物和抗血小板药物的应用、血栓及出血性疾病的快速筛选需求增加，血凝学的即时快速检验已经受到人们的关注和重视。大量研究表明，现场血凝学检测快速、简便，能提供较可靠准确的过筛数据，并大大减少完成试验所需的周转时间（TAT），可适用于临床大量需要监测血凝学异常及抗栓、溶栓治疗的场景。

驱动基因突变是非小细胞肺癌的主要致病因素之一，靶向治疗正是针对驱动基因突变，不同的突变类型对靶向药物的敏感性不同，根据基因的变异情况选择靶向药物至关重要。当前可用于指导非小细胞肺癌靶向治疗的目标基因越来越多，可用于检测相关基因的方法与试剂也越来越多，临床上需要精准选择合适的检测靶点与方法。本文根据国家药品管理监督局批准的相关基因检测试剂，就非小细胞肺癌靶向治疗相关突变基因靶点及检测试剂进行综述，为临床选择适宜的检测方法与试剂提供参考，从而更好地为非小细胞肺癌患者靶向治疗提供精准伴随诊断。